CN106635916B - 东方醋酸菌yzd-09及其应用 - Google Patents

东方醋酸菌yzd-09及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株东方醋酸菌，该东方醋酸菌(Acetobacter orientalis)YZD‑09于2016年10月17日保藏，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏编号为CCTCC NO.M 2016566，保藏地址为中国武汉大学，该东方醋酸菌分离自西藏灵菇。本发明还公开了一种果蔬酵素液的制备方法。本发明还公开了上述方法制备得到的果蔬发酵液或包含所述果蔬发酵液的果蔬饮品。本发明的东方醋酸菌YZD‑09经过严格的实验筛选，证明其具有良好的酒精耐受能力，能够在较高温度下进行发酵活动，对广谱抗生素敏感，产酸能力强，是一株特殊生境来源的醋酸菌，将该菌株用于果蔬酵素的制备，经过酵母菌、醋酸菌和乳酸菌三级发酵工艺，所得的酵素液风味更佳，并且具有更好的抗菌活性。

Description

东方醋酸菌YZD-09及其应用
技术领域
本发明涉及工业微生物领域，特别涉及一株东方醋酸菌YZD-09及其应用。
背景技术
西藏灵菇又称“西藏雪莲”、“天山灵菇”，是源自西藏藏南的林芝地区和新疆天山天池以上海拔山区的特有珍稀菌种，西藏灵菇发酵的天然酸奶富含丰富的营养成分及高浓度的益生菌，是普通酸奶益生菌含量的数十倍，长期食用可增强身体的免疫力。西藏灵菇采用天然微生物自然接种，其菌相构成很复杂，且微生物的分布存在很大的差异，但其中主要是由酵母菌、乳酸菌、醋酸菌等组成的微生物共生体系，而醋酸菌主要分布于西藏灵菇的表层，对于维持西藏灵菇中的微生物共生体系的稳定性具有更加重要的意义。
酵素是以水果、蔬菜、谷物、草本等为原料，经过微生物发酵制备而成的发酵饮品。研究发现，参与酵素发酵的微生物主要有酵母菌、乳酸菌和醋酸菌。目前，市场上的酵素多采用自然发酵法，这种方法制备酵素不仅发酵效率低，且容易污染杂菌，产生的酵素饮品缺乏风味特色。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一株东方醋酸菌YZD-09。
本发明再有一个目的是提供东方醋酸菌在酿醋工业和酵素工业的应用。
本发明另有一个目的是提供一种果蔬酵素液的制备方法。
本发明再有一个目的是提供由上述方法制备得到的果蔬发酵液或包含所述果蔬发酵液的果蔬饮品。
为此，本发明提供的技术方案为：
一株东方醋酸菌，东方醋酸菌(Acetobacter orientalis)YZD-09于2016年10月17日保藏，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏编号为CCTCC NO.M2016566，保藏地址为中国武汉大学，所述东方醋酸菌YZD-09分离自西藏灵菇。
优选的是，所述东方醋酸菌YZD-09在MC培养基上培养时，菌落颜色为淡粉色，菌落小，近似圆形，表面湿润，边缘较整齐，微隆起，有明显的溶钙圈；
该东方醋酸菌YZD-09在MRS培养基上培养时，菌落颜色为淡黄色，菌落小，近似圆形，表面湿润，边缘较整齐，微隆起；
所述东方醋酸菌YZD-09的菌体细胞在扫描电镜下为圆端短杆菌，长度为1.2～1.5μm，宽度为0.6～0.8μm，菌体单个或者成对出现，无芽孢；革兰氏染色阴性，接触酶反应阳性，不液化明胶；
所述东方醋酸菌YZD-09可耐受39℃温度，且其可耐10％(V/V)的乙醇浓度。
如上所述的东方醋酸菌在酿醋工业和酵素工业的应用。
一种果蔬酵素液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、首先取水果和蔬菜灭菌后，打浆，调节果浆pH至3.0～4.5，加入纤维素酶和果胶酶进行酶解得到酶解液；
步骤二、向上述步骤一得到的酶解液中加入25wt％的白砂糖和0.02wt％的酵母菌粉，于温度20～35℃条件下发酵至发酵液中酒精度达到一定浓度，停止发酵；
步骤三、向上述步骤二得到的发酵液中加入活化的东方醋酸菌YZD-09种子液，于温度25～40℃和120r/min搅拌条件下发酵30d；
步骤四、在上述步骤三得到的发酵液中加入0.01wt％的乳酸菌粉，再于温度25～40℃密闭条件下发酵30d；
步骤五、过滤步骤四中得到的发酵液，获取到果蔬酵素液初级产品，之后于温度20～30℃密闭条件下陈酿30天，得到果蔬酵素液。
优选的是，所述的果蔬酵素液的制备方法中，在所述步骤五之后，还包括：
步骤六、将上述步骤五得到的果蔬酵素液经过高温瞬间杀菌后无菌灌装包装成酵素液产品，或将所述果蔬酵素液喷雾干燥成酵素粉产品。
优选的是，所述的果蔬酵素液的制备方法中，所述步骤二中，所述酵母菌粉为市售果酒酵母或马克斯克鲁维酵母菌粉；
所述步骤三中，活化所述东方醋酸菌YZD-09的活化培养基包含：酵母提取物30g/L，葡萄糖20g/L，KH2PO41g/L，MgSO41g/L。
所述步骤四中，所述乳酸菌为植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌中的一种或几种。
优选的是，所述的果蔬酵素液的制备方法中，所述步骤一中，所述纤维素酶占所述果浆的0.05～0.1wt％，所述果胶酶占所述果浆的0.05～0.1wt％，进行所述酶解时，酶解温度为45℃，时间为8小时。
优选的是，所述的果蔬酵素液的制备方法中，所述步骤二中，发酵至发酵液中酒精度达到5％(V/V)时，停止发酵。
优选的是，所述的果蔬酵素液的制备方法中，所述步骤三中，所述东方醋酸菌YZD-09种子液占所述发酵液的6％(V/m)。
由上述任一项所述的方法制备得到的果蔬发酵液或包含所述果蔬发酵液的果蔬饮品。
本发明至少包括以下有益效果：
本发明的东方醋酸菌YZD-09为分离自西藏灵菇的菌种，并且经过严格的实验筛选，证明其具有良好的酒精耐受能力，能够在较高温度下进行发酵活动，对广谱抗生素敏感，产酸能力强，是一株特殊生境来源的醋酸菌，将该菌株用于果蔬酵素的制备，经过酵母菌、醋酸菌和乳酸菌三级发酵工艺，所得的酵素液风味更佳，并且具有更好的抗菌活性。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
本发明提供一株东方醋酸菌，该东方醋酸菌(Acetobacter orientalis)YZD-09于2016年10月17日保藏，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏编号为CCTCCNO.M 2016566，保藏地址为中国武汉大学。所述东方醋酸菌YZD-09分离自西藏灵菇。
所述东方醋酸菌YZD-09在MC培养基上培养时，菌落颜色为淡粉色，菌落小，近似圆形，表面湿润，边缘较整齐，微隆起，有明显的溶钙圈；
该东方醋酸菌YZD-09在MRS培养基上培养时，菌落颜色为淡黄色，菌落小，近似圆形，表面湿润，边缘较整齐，微隆起；
所述东方醋酸菌YZD-09的菌体细胞在扫描电镜下为圆端短杆菌，长度为1.2～1.5μm，宽度为0.6～0.8μm，菌体单个或者成对出现，无芽孢；革兰氏染色阴性，接触酶反应阳性，不液化明胶；
所述东方醋酸菌YZD-09可耐受39℃温度，且其可耐10％(V/V)的乙醇浓度。
本发明还提供所述的东方醋酸菌在酿醋工业和酵素工业的应用。
本发明还提供一种果蔬酵素液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、首先取水果和蔬菜灭菌后，打浆，调节果浆pH至3.0～4.5，加入0.05～0.1wt％的纤维素酶和0.05～0.1wt％的果胶酶进行酶解得到酶解液，酶解温度45℃，时间为8小时；
步骤二、向上述步骤一得到的酶解液中加入25wt％的白砂糖和0.02wt％的酵母菌粉，于温度20～35℃条件下发酵至发酵液中酒精度达到5％(V/V)，停止发酵；
步骤三、向上述步骤二得到的发酵液中加入6％(V/m)的活化的东方醋酸菌YZD-09种子液，于温度25～40℃、120r/min搅拌条件下发酵30d；
步骤四、在上述步骤三得到的发酵液中加入0.01wt％的乳酸菌粉，再于温度25～40℃密闭条件下发酵30d；
步骤五、过滤步骤四中得到的发酵液，获取到果蔬酵素液初级产品，之后于温度20～30℃密闭条件下陈酿30天，得到果蔬酵素液。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述的果蔬酵素液的制备方法中，在所述步骤五之后，还包括：
步骤六、将上述步骤五得到的果蔬酵素液经过高温瞬间杀菌后无菌灌装包装成酵素液产品，或将所述果蔬酵素液喷雾干燥成酵素粉产品。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤二中，所述酵母菌粉为市售果酒酵母或马克斯克鲁维酵母菌粉；
所述步骤三中，活化所述东方醋酸菌YZD-09的活化培养基包含：酵母提取物30g/L，葡萄糖20g/L，KH2PO41g/L，MgSO41g/L。
所述步骤四中，所述乳酸菌为植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌中的一种或几种。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤一中，所述纤维素酶占所述果浆的0.05～0.1wt％，所述果胶酶占所述果浆的0.05～0.1wt％，进行所述酶解时，酶解温度为45℃，时间为8小时。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤二中，发酵至发酵液中酒精度达到5％(V/V)时，停止发酵。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤三中，所述东方醋酸菌YZD-09种子液占所述发酵液的6％(V/m)。
本发明还提供由上述任一项所述的方法制备得到的果蔬发酵液或包含所述果蔬发酵液的果蔬饮品。
实施例一
菌株YZD-09的分离筛选
本发明的一株西藏灵菇来源的东方醋酸菌(Acetobacter orientalis)YZD-09，于2016年10月17日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M2016566。
本发明中东方醋酸菌YZD-09采用的分离筛选方法如下：
步骤一，实验培养基准备：
醋酸菌分离培养基
MC培养基：大豆蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母膏5g，葡萄糖20g，乳糖20g，碳酸钙10g，琼脂15g，中性红0.05g，水1000mL，pH6.0±0.2。
MRS培养基：蛋白胨10g，牛肉膏5g，酵母膏4g，柠檬酸三铵2.0g，葡萄糖20g，吐温801mL，乙酸钠5g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，琼脂15g，水1000mL，pH6.2～6.6。
分离醋酸菌以以上两种培养基为基础培养基，待培养基冷却至60℃左右时，加3％(V/V)无水乙醇。
富集培养基：葡萄糖10g，酵母膏10g，MgSO40.1g，水1000mL，pH自然。
步骤二，取市售西藏灵菇样品，用无菌水润洗三遍，然后接种于巴氏消毒后的新鲜牛奶中，在30℃条件下培养24h后，用无菌滤网过滤出西藏灵菇样品再接种至新鲜的巴氏消毒过的牛奶中，30℃培养24h，如此活化三次后，取最后一次牛奶发酵液1mL，用生理盐水稀释成10-3、10-4、10-5、10-6的稀释液；
步骤三，分别取0.2mL上述步骤二的10-3、10-4、10-5、10-6的稀释液涂布接种于醋酸菌分离培养基上，每个梯度重复三次，置于30℃条件下恒温培养48～72h，观察菌落的形态特征，然后将不同形态的菌落分别进行分离纯化得到不同的单克隆菌株；
步骤四，将上述步骤三得到的单克隆菌株接种至富集培养基中，30℃，180r/min摇瓶培养2d，取20mL含有醋酸菌的富集培养液，于10000r/min转速下离心5min，取上清液5mL，用NaOH溶液调节pH至7.0，加入50g/L的氯化铁溶液4～6滴，摇匀，观察溶液是否变成黄褐色，再加热至沸腾，如出现红褐色沉淀则菌种确定为醋酸菌；
步骤五，将上述步骤四得到的醋酸菌做耐高乙醇筛选。取步骤四中含有醋酸菌的富集培养液，用无菌水依次稀释至10-6，取0.2mL 10-4、10-6稀释液涂布于耐乙醇筛选培养基(葡萄糖10g，酵母膏10g，酵母膏0.1g，碳酸钙20g，琼脂15g，乙醇100mL，水1000mL)上，30℃培养72小时，在筛选平板上产生透明圈的菌落即为可耐10％(V/V)乙醇浓度的菌株。
步骤六，将上述步骤四得到的醋酸菌做耐高温筛选。取步骤四中含有醋酸菌的富集培养液，用无菌水依次稀释至10-6，取0.2mL 10-4、10-6稀释液涂布于富集培养基(葡萄糖10g，酵母膏10g，MgSO40.1g，琼脂15g，水1000mL，pH自然)平板上，39℃培养72小时，在筛选平板上产生透明圈的菌落即为可耐39℃高温的菌株。
经过实验筛选发现菌株YZD-09能够耐受10％乙醇浓度、39℃高温，且在筛选平板上产生的溶钙圈直径最大，用氢氧化钠滴定法测定其产酸量(以乙酸计)达86.3g/L。
将菌株YZD-09进行抗生素敏感度测试。依据各类抗生素作用机制不同，选择了氨苄青霉素、青霉素G、罗红霉素、庆大霉素、氯霉素、链霉素、四环素、林可霉素、卡那霉素等9种常用抗生素。参照美国临床实验室标准化协会公布的琼脂稀释法进行药敏实验。药敏平板中抗生素的终浓度依次为512、256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/mL，以未添加抗生素的平板为对照，每个浓度测量两次。实验结果显示菌株YZD-09对不同种类的抗生素均表现出较好的药敏性，最低敏感浓度均在128μg/mL之内，其中对青霉素G、庆大霉素、氯霉素的最低敏感浓度分别为2、0.5和1μg/mL
实施例二
菌株YZD-09的分类鉴定
本发明中分离筛选到的醋酸菌YZD-09是结合菌株的形态特征、生理生化特征及16S rDNA比对结果进行鉴定。
菌株YZD-09在MC培养基上的菌落颜色为淡粉色，菌落小，近似圆形，表面湿润，边缘较整齐，微隆起，有明显的溶钙圈，其在MRS培养基上的菌落颜色为淡黄色，菌落小，近似圆形，表面湿润，边缘较整齐，微隆起。扫描电镜结果显示，菌株YZD-09的菌体细胞为圆端短杆菌，长度为1.2～1.5μm，宽度为0.6～0.8μm，菌体单个或者成对出现，无芽孢。
对菌株YZD-09进行革兰氏染色，实验结果呈阴性，接触酶反应呈阳性，不液化明胶，在pH9.6的葡萄糖肉汤培养基上不生长，主要的生理生化测试结果见表1，通过实验结果显示，该菌株的生理生化特征基本上符合醋酸杆菌的特征。
表1菌株YZD-09的生理生化测定结果
Figure BDA0001203000950000091
注：“-”表示阴性反应。
用生物试剂盒提取菌株YZD-09的基因组DNA，PCR扩增其16S rDNA片段，经测序，其序列如SEQ ID NO：1所示，将菌株16S rDNA序列输入GenBank数据库，采用Blast进行序列比对，结果显示，与菌株YZD-09的16S rDNA序列相似度高于99％的菌株的基因序列都属于东方醋酸菌属(Acetobacter orientalis)，如表2所示，为此，结合菌株YZD-09的形态特征和生理生化特征，将其鉴定为东方醋酸菌。
表2菌株YZD-09的16S rDNA分析结果
相似菌株 种属 覆盖率 相似度
Acetobacter orientalis strain OS_04 Acetobacter orientalis 100％ 100％
Acetobacter orientalis strain NS_03 Acetobacter orientalis 100％ 100％
Acetobacter orientalis Acetobacter orientalis 100％ 100％
Acetobacter orientalis strain S30-3 Acetobacter orientalis 100％ 100％
Acetobacter orientalis strain B-7SC Acetobacter orientalis 100％ 100％
Acetobacter orientalis strain UFLA FFT43.1 Acetobacter orientalis 100％ 99％
实施例三
东方醋酸菌YZD-09在果蔬酵素发酵中的应用
东方醋酸菌YZD-09在果蔬酵素发酵中的应用包括如下步骤：
步骤一，取葱白200g、大蒜200g、马齿苋500g、平菇500g、包菜500g、柚子1200g、杨桃500g、苹果1600g、梨1600g、西瓜1500g、桃子1700g，将水果蔬菜洗净、表面消毒、风干，柚子去皮，苹果、梨去籽，桃子去核，将经过前处理的果蔬搅碎，果浆调节pH至4.0，加入0.05wt％的纤维素酶和0.1wt％的果胶酶进行酶解，酶解温度45℃，时间为8小时；
步骤二，在上述步骤一得到的酶解液中加入2500g的白砂糖，搅拌溶解，加入2.5g的马克斯克鲁维酵母粉，混匀。30℃条件下发酵，期间每天早晚搅拌原料两次，并每天检测发酵液的酒精度，当第四天酒精度达到5％(V/V)时，停止发酵。
步骤三，东方醋酸菌YZD-09先用活化培养基(酵母提取物30g，葡萄糖20g，KH2PO41g，MgSO41g，自来水1000mL)活化至对数期；再在上述步骤二的果蔬发酵液中加入750mL活化好的醋酸菌种子液，混匀。30℃、120r/min搅拌条件下发酵30d。
步骤四，在上述步骤三得到的发酵液中加入1.4g的混合乳酸菌粉(植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌等比例混合)，混匀。37℃密闭条件下静置发酵30d。
步骤五，将上述经过三级发酵的发酵液用板框过滤机过滤得到果蔬酵素液，酵素液经过调配后于20～30℃密闭条件下陈酿30天，测酵素液的pH值为2.89。
步骤六，将上述步骤五得到的酵素液经过高温瞬间杀菌后无菌灌装包装成酵素液产品，或将酵素液喷雾干燥成酵素粉产品。
自然发酵法制备果蔬酵素液的步骤：
步骤一，取葱白200g、大蒜200g、马齿苋500g、平菇500g、包菜500g、柚子1200g、杨桃500g、苹果1600g、梨1600g、西瓜1500g、桃子1700g，将水果蔬菜洗净、表面消毒、风干，柚子去皮，苹果、梨去籽，桃子去核，将经过前处理的果蔬搅碎，果浆调节pH至4.0，加入0.05wt％的纤维素酶和0.1wt％的果胶酶进行酶解，酶解温度45℃，时间为8小时；
步骤二，在上述步骤一得到的酶解液中加入2500g的白砂糖，搅拌溶解，30℃条件下发酵，期间每天早晚搅拌原料两次，发酵4d后改为30℃、120r/min搅拌条件下发酵30d；最后再37℃密闭条件下静置发酵30d；
步骤三，将上述自然发酵的发酵液用板框过滤机过滤得到果蔬酵素液，酵素液经过调配后于25℃密闭条件下陈酿30天，测酵素液的pH值为3.05；
步骤四，将上述步骤三得到的酵素液经过高温瞬间杀菌。
采用牛津杯法测实施例三两种果蔬发酵液的抗菌活性，所用的指示菌为大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphlococcus aureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)，具体操作步骤如下：
(1)指示菌悬液的制备
将各指示菌活化后接种在细菌斜面培养基上，37℃培养18～24h。用无菌水将菌体洗下，稀释后计算菌落形成单位(cfu)。将菌悬液稀释成1×107cfu/mL，备用。
(2)带菌平板的制备
在直径为9cm的培养皿底部倒一层水琼脂(约10mL)，室温凝固。将1mL上述步骤(1)制备的菌悬液倒入100mL冷却至50℃左右的细菌培养基中，混匀后倒10mL至水琼脂平板上，室温冷却。
(3)加药
取灭菌后的牛津杯水平放置于指示菌平板上，每个平板放置3～5个。实验组加200μL酵素液，阳性对照组加200μL庆大霉素液，阴性对照组加200μL无菌水。37℃培养18～24h。
(4)测量结果
用十字交叉法测量样品对细菌的抑菌圈直径，实验结果如表3所示。
表3两种酵素液对各指示菌的抑制效果
Figure BDA0001203000950000121
注：数值为抑菌圈直径，单位为mm；其中牛津杯的直径为8mm。
由以上实验结果显示，采用三级发酵法制备的酵素液对各指示菌的抑制效果较自然发酵酵素的抑菌效果有明显增强。
实施例四
东方醋酸菌YZD-09在果蔬酵素发酵中的应用
东方醋酸菌YZD-09在果蔬酵素发酵中的应用包括如下步骤：
步骤一，取葱白200g、胡萝卜200g、马齿苋500g、平菇500g、蟹味菇500g、柚子1200g、杨桃500g、苹果1600g、梨1600g、芒果1500g、桃子1700g，将水果蔬菜洗净、表面消毒、风干，柚子去皮，苹果、梨去籽，桃子去核，将经过前处理的果蔬搅碎，果浆调节pH至3.0，加入0.01wt％的纤维素酶和0.05wt％的果胶酶进行酶解，酶解温度45℃，时间为8小时；
步骤二，在上述步骤一得到的酶解液中加入2500g的白砂糖，搅拌溶解，加入2.5g的市售果酒酵母粉，混匀。20℃条件下发酵，期间每天早晚搅拌原料两次，并每天检测发酵液的酒精度，当第四天酒精度达到5％(V/V)时，停止发酵。
步骤三，东方醋酸菌YZD-09先用活化培养基(酵母提取物30g，葡萄糖20g，KH2PO41g，MgSO41g，自来水1000mL)活化至对数期；再在上述步骤二的果蔬发酵液中加入750mL活化好的醋酸菌种子液，混匀。25℃、120r/min搅拌条件下发酵30d。
步骤四，在上述步骤三得到的发酵液中加入1.4g的植物乳杆菌，混匀。25℃密闭条件下静置发酵30d。
步骤五，将上述经过三级发酵的发酵液用板框过滤机过滤得到果蔬酵素液，酵素液经过调配后于20℃密闭条件下陈酿30天，测酵素液的pH值为2.89。
步骤六，将上述步骤五得到的酵素液经过高温瞬间杀菌后无菌灌装包装成酵素液产品，或将酵素液喷雾干燥成酵素粉产品。
实施例五
东方醋酸菌YZD-09在果蔬酵素发酵中的应用
东方醋酸菌YZD-09在果蔬酵素发酵中的应用包括如下步骤：
步骤一，取蓝莓200g、胡萝卜200g、蒲公英500g、平菇500g、蟹味菇500g、柚子1200g、杨桃500g、苹果1600g、梨1600g、芒果1500g、桃子1700g，将水果蔬菜洗净、表面消毒、风干，柚子去皮，苹果、梨去籽，桃子去核，将经过前处理的果蔬搅碎，果浆调节pH至4.5，加入0.075wt％的纤维素酶和0.075wt％的果胶酶进行酶解，酶解温度45℃，时间为8小时；
步骤二，在上述步骤一得到的酶解液中加入2500g的白砂糖，搅拌溶解，加入2.5g的市售果酒酵母粉，混匀。35℃条件下发酵，期间每天早晚搅拌原料两次，并每天检测发酵液的酒精度，当第四天酒精度达到5％(V/V)时，停止发酵。
步骤三，东方醋酸菌YZD-09先用活化培养基(酵母提取物30g，葡萄糖20g，KH2PO41g，MgSO41g，自来水1000mL)活化至对数期；再在上述步骤二的果蔬发酵液中加入750mL活化好的醋酸菌种子液，混匀。40℃、120r/min搅拌条件下发酵30d。
步骤四，在上述步骤三得到的发酵液中加入1.4g的嗜酸乳杆菌，混匀。40℃密闭条件下静置发酵30d。
步骤五，将上述经过三级发酵的发酵液用板框过滤机过滤得到果蔬酵素液，酵素液经过调配后于30℃密闭条件下陈酿30天，测酵素液的pH值为2.98。
步骤六，将上述步骤五得到的酵素液经过高温瞬间杀菌后无菌灌装包装成酵素液产品，或将酵素液喷雾干燥成酵素粉产品。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
SEQUENCE LISTING
<110> 厦门元之道生物科技有限公司
<120> 东方醋酸菌YZD-09及其应用
<130> 2016
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1333
<212> DNA
<213> 东方醋酸菌（Acetobacter orientalis）YZD-09
<400> 1
ttcggcctta gtggcggacg ggtgagtaac gcgtaggaat ctatccatgg gtgggggata 60
actctgggaa actggagcta ataccgcatg atacctgagg gtcaaaggcg caagtcgcct 120
gtggaggagc ctgcgtttga ttagcttgtt ggtggggtaa tggcctacca aggcgatgat 180
caatagctgg tctgagagga tgatcagcca cactgggact gagacacggc ccagactcct 240
acgggaggca gcagtgggga atattggaca atgggggcaa ccctgatcca gcaatgccgc 300
gtgtgtgaag aaggttttcg gattgtaaag cactttcgac ggggacgatg atgacggtac 360
ccgtagaaga agccccggct aacttcgtgc cagcagccgc ggtaatacga agggggctag 420
cgttgctcgg aatgactggg cgtaaagggc gtgtaggcgg tttgtacagt cagatgtgaa 480
atccccgggc ttaacctggg agctgcattt gatacgtgca gactagagtg tgagagaggg 540
ttgtggaatt cccagtgtag aggtgaaatt cgtagatatt gggaagaaca ccggtggcga 600
aggcggcaac ctggctcata actgacgctg aggcgcgaaa gcgtggggag caaacaggat 660
tagataccct ggtagtccac gctgtaaacg atgtgtgcta gatgttgggt aacttagtta 720
ttcagtgtcg cagttaacgc gttaagcaca ccgcctgggg agtacggccg caaggttgaa 780
actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca 840
acgcgcagaa ccttaccagg gcttgtatgg gtaggctgtg tccagagatg ggcatttccc 900
gcaagggacc taccgcacag gtgctgcatg gctgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg 960
ggttaagtcc cgcaacgagc gcaaccccta tctttagttg ccagcatgtt tgggtgggca 1020
ctctagagag actgccggtg acaagccgga ggaaggtggg gatgacgtca agtcctcatg 1080
gcccttatgt cctgggctac acacgtgcta caatggcggt gacagtggga agctagatgg 1140
cgacatcgtg ctgatctcta aaaaccgtct cagttcggat tgtactctgc aactcgagta 1200
catgaaggtg gaatcgctag taatcgcgga tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccggg 1260
ccttgtacac accgcccgtc acaccatggg agttggtttg accttaagcc ggtgagcgaa 1320
cccgcaaggg gcg 1333

Claims (7)

1.一株东方醋酸菌，其特征在于，东方醋酸菌(Acetobacter orientalis)YZD-09于2016年10月17日保藏，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏编号为CCTCCNO.M2016566，保藏地址为中国武汉大学，所述东方醋酸菌分离自西藏灵菇。
2.如权利要求1所述的东方醋酸菌，其特征在于，所述东方醋酸菌YZD-09在MC培养基上培养时，菌落颜色为淡粉色，菌落小，近似圆形，表面湿润，边缘较整齐，微隆起，有明显的溶钙圈；
该东方醋酸菌YZD-09在MRS培养基上培养时，菌落颜色为淡黄色，菌落小，近似圆形，表面湿润，边缘较整齐，微隆起；
所述东方醋酸菌YZD-09的菌体细胞在扫描电镜下为圆端短杆菌，长度为1.2～1.5μm，宽度为0.6～0.8μm，菌体单个或者成对出现，无芽孢；革兰氏染色阴性，接触酶反应阳性，不液化明胶；
所述东方醋酸菌YZD-09可耐受39℃温度，且其可耐10％体积比的乙醇溶液。
3.如权利要求1所述的东方醋酸菌在酿醋工业和酵素工业的应用。
4.一种果蔬酵素液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、首先取水果和蔬菜灭菌后，打浆，调节果浆pH至3.0～4.5，加入纤维素酶和果胶酶进行酶解得到酶解液；
步骤二、向上述步骤一得到的酶解液中加入25wt％的白砂糖和0.02wt％的酵母菌粉，于温度20～35℃条件下发酵至发酵液中酒精度达到一定浓度，停止发酵；
步骤三、向上述步骤二得到的发酵液中加入活化的东方醋酸菌YZD-09种子液，于温度25～40℃和120r/min搅拌条件下发酵30d；
步骤四、在上述步骤三得到的发酵液中加入0.01wt％的乳酸菌粉，再于温度25～40℃密闭条件下发酵30d；
步骤五、过滤步骤四中得到的发酵液，获取到果蔬酵素液初级产品，之后于温度20～30℃密闭条件下陈酿30天，得到果蔬酵素液；
所述步骤二中，发酵至发酵液中酒精的体积比为5％时，停止发酵；
所述步骤三中，所述东方醋酸菌YZD-09种子液占所述发酵液的体积质量比为6％。
5.如权利要求4所述的果蔬酵素液的制备方法，其特征在于，在所述步骤五之后，还包括：
步骤六、将上述步骤五得到的果蔬酵素液经过高温瞬间杀菌后无菌灌装包装成酵素液产品，或将所述果蔬酵素液喷雾干燥成酵素粉产品。
6.如权利要求4所述的果蔬酵素液的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，所述酵母菌粉为市售果酒酵母或马克斯克鲁维酵母菌粉；
所述步骤三中，活化所述东方醋酸菌YZD-09的活化培养基包含：酵母提取物30g/L，葡萄糖20g/L，KH2PO4 1g/L，MgSO4 1g/L；
所述步骤四中，所述乳酸菌为植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌中的一种或几种。
7.如权利要求4所述的果蔬酵素液的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，所述纤维素酶占所述果浆的0.05～0.1wt％，所述果胶酶占所述果浆的0.05～0.1wt％，进行所述酶解时，酶解温度为45℃，时间为8小时。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112322525B (zh) * 2020-10-30 2022-02-22 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种用于纤维素降解的东方醋酸菌及应用
CN113969245B (zh) * 2021-10-25 2022-07-29 爱康食品(青岛)有限公司 一种寿司醋醋酸菌及发酵寿司醋的方法和在寿司中的应用
CN113981030A (zh) * 2021-12-10 2022-01-28 厦门元之道生物科技有限公司 一种酶法联合微生物发酵制备大豆低聚肽的方法及其应用
CN114698760B (zh) * 2022-04-06 2023-09-19 华南理工大学 一种无草酸生物发酵杨桃饮品及其制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104509924A (zh) * 2014-11-07 2015-04-15 西北农林科技大学 发酵剂、制备方法及应用
CN105420143A (zh) * 2015-11-03 2016-03-23 许昌市天源生物科技股份有限公司 一种东方醋杆菌及其生产黄芪多糖的方法
CN105815641A (zh) * 2016-04-11 2016-08-03 厦门元之道生物科技有限公司 一种具有抗肿瘤活性的综合酵素液的制备方法及其用途
CN105901716A (zh) * 2016-04-29 2016-08-31 厦门生之元生物科技有限公司 一种含白藜芦醇的抗氧化酵素及其应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004261176A (ja) * 2003-02-13 2004-09-24 Fujicco Co Ltd ヨーグルト種菌およびそれを用いた発酵飲食品
JP2004261175A (ja) * 2003-02-13 2004-09-24 Fujicco Co Ltd ヨーグルト種菌の頒布セットおよび培養方法ならびにその頒布方法
EP2325295A3 (en) * 2005-09-12 2013-05-29 Vrije Universiteit Brussel Cacao starter cultures and fermentation method
JP2008173065A (ja) * 2007-01-19 2008-07-31 Unitika Ltd アルドン酸の製造方法
KR20160031623A (ko) * 2014-09-12 2016-03-23 주식회사농심 양파 저온농축액을 활용한 양파식초 제조방법
CN105420144B (zh) * 2015-11-03 2019-03-26 许昌市天源生物科技股份有限公司 一种利用东方醋杆菌生产黄芪多糖的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104509924A (zh) * 2014-11-07 2015-04-15 西北农林科技大学 发酵剂、制备方法及应用
CN105420143A (zh) * 2015-11-03 2016-03-23 许昌市天源生物科技股份有限公司 一种东方醋杆菌及其生产黄芪多糖的方法
CN105815641A (zh) * 2016-04-11 2016-08-03 厦门元之道生物科技有限公司 一种具有抗肿瘤活性的综合酵素液的制备方法及其用途
CN105901716A (zh) * 2016-04-29 2016-08-31 厦门生之元生物科技有限公司 一种含白藜芦醇的抗氧化酵素及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
功能性微生物酵素产品的研究进展;赵芳芳等;《食品与发酵工业》;20161231;第42卷(第7期);第283-287页 *
开菲尔粒中醋酸菌的分离鉴定;刘芸等;《福建农业学报》;20120531;第27卷(第5期);第544-549页 *
曹宜等.藏灵菇发酵乳中醋酸菌的分离纯化与鉴定.《福建农业学报》.2012,第27卷(第12期),第1339页摘要、第1340页1.2.1节、第2.1-2.3节和表1. *
藏灵菇发酵乳中醋酸菌的分离纯化与鉴定;曹宜等;《福建农业学报》;20121231;第27卷(第12期);第1339页摘要、第1340页1.2.1节、第2.1-2.3节和表1 *

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