CN104672286A - 从蓝莓叶中富集纯化α-熊果苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于天然有机化学领域,涉及来源于蓝莓叶的α-熊果苷提取、分离方法。本方法先采用高压脉冲电场提取设备对α-熊果苷进行提取,再利用膜设备和大孔吸附树脂进行α-熊果苷的初次纯化,然后用模拟移动床色谱分离技术的方法对α-熊果苷进行分离纯化,得到高纯度的α-熊果苷产品。本发明的优点:1、高压脉冲电场技术可使提取溶剂更好的进入植物细胞内部,实现α-熊果苷的高效率提取;2、采用模拟移动床色谱分离技术进行α-熊果苷的分离和纯化,得到的α-熊果苷产品纯度高。本发明制备的α-熊果苷可广泛应用于保健食品和化妆品等领域。
Description
技术领域
本发明属于天然有机化学领域,涉及一种以大兴安岭野生蓝莓叶为原料制备α-熊果苷的方法。
背景技术
α-熊果苷(α-arbutin)是一种天然活性物质,能有效地抑制皮肤中的生物酪氨酸酶活性,阻断黑色素的形成,加速黑色素的分解与排泄,从而减少皮肤色素沉积,祛除色斑和雀斑,是目前国内外美白化妆品中的主要活性物质。近年来,随着国内化妆品业的发展,为顺应护肤化妆品“回归自然”的潮流,天然活性物质的“绿色美白”也日益盛行,而熊果苷作为无毒无害、美白效果明显的天然活性物质,市场需求量日益扩大。
目前国内外生产α-熊果苷的主要方法是合成法,通过以α糖苷酶为催化剂,催化合成对苯二酚与葡萄糖为α-熊果苷,由于α糖苷酶价格昂贵,所以生产的α-熊果苷成本很高,且采用上述方法制备的α-熊果苷产率不高,给实际推广带来了很大的困难。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从蓝莓叶中富集纯化α-熊果苷的方法。本发明先采用高压脉冲电场提取设备对α-熊果苷进行提取,再利用膜设备和大孔吸附树脂进行α-熊果苷的初次纯化,然后用模拟移动床色谱分离技术的方法对α-熊果苷进行分离纯化,得到高纯度的α-熊果苷产品。
本发明的技术方案是这样实现的,它包括以下步骤:
(1)将蓝莓叶粉碎成蓝莓叶粉,目数在20-40目;
(2)将蓝莓叶粉与溶剂混合均匀后用高压脉冲电场提取器进行提取,收集提取液;
(3)将步骤(2)收集到的提取液浓缩,回收溶剂,得到浓缩物;
(4)向步骤(3)得到的浓缩物中加入去离子水稀释,然后用微滤膜进行预处理后再用超滤膜进行处理,收集过滤液;
(5)将过滤液用大孔吸附树脂进行处理,得到含有α-熊果苷的洗脱液;
(6)将步骤(5)得到的洗脱液进行浓缩,回收溶剂,得到浸膏;
(7)将步骤(6)得到的浸膏用甲醇溶解后过滤,收集过滤液;
(8)采用模拟移动床色谱分离技术从步骤(7)的过滤液中分离纯化α-熊果苷。
本发明较好的技术方案是:所述的步骤(2)中,提取料液比为1∶5~10(w/v),提取溶剂为40~70%的酒精,提取温度为40~44℃,提取时间为60~90min,提取2~3遍,电场强度为11~15kv/cm,脉冲数为13~20;
本发明较好的技术方案是:所述的步骤(3)中,采用真空浓缩,真空度为-0.05~-0.08Mpa,浓缩温度在50~60℃;
本发明较好的技术方案是:所述的步骤(4)中,去离子水的加入量为原料重量的30~50%,微滤膜和超滤膜的材质都选用偏氟乙烯(PVDF),微滤膜孔径为0.1~0.2um,操作压力为0.15MPa,料液温度为20~30℃,超滤膜的孔径为30000~100000Dal,料液温度为25~35℃、超滤压力为0.1~0.30MPa、超滤时间为40~60min;
本发明较好的技术方案是:所述的步骤(5)中,大孔吸附树脂选用D101,过滤液上柱流速为1.5BV/h,水洗液流速为2BV/h,洗脱溶剂为70%的酒精溶液,洗脱流速为2BV/h,洗脱剂用量为6BV;
本发明较好的技术方案是:所述的步骤(6)中,采用真空浓缩,真空度为-0.05~-0.08Mpa,浓缩温度在50~60℃,所得浸膏中水分含量低于5%;
本发明较好的技术方案是:所述的步骤(7)中,滤饼∶甲醇溶液=1∶5~10(w/v),溶解温度范围在55~60℃;
本发明较好的技术方案是:所述的步骤(8)中,采用模拟移动床色谱分离技术从甲醇层中分离纯化紫檀芪,所用的模拟移动床为IV带结构,由4~8根C18色谱柱组成,每个带由1~2根色谱柱串联组成,流动相为甲醇∶水=70∶30,进样液流速为0.1~0.4ml/min,洗脱液流速为1~3ml/min,冲洗液流速为1~3ml/min,切换时间为15~18min,色谱系统操作温度为25~30℃。
具体实施方式
实施例1
将蓝莓叶粉碎成蓝莓叶粉,目数在20-40目;将蓝莓叶粉与溶剂混合均匀后用高压脉冲电场提取器进行提取,提取料液比为1∶5(w/v),提取溶剂为50%的酒精,提取温度为42℃,提取时间为70min,提取3遍,电场强度为15kv/cm,脉冲数为17,收集提取液;将收集到的提取液采用真空减压浓缩,真空度为-0.08Mpa,浓缩温度在50℃,回收溶剂,得到浓缩物;向浓缩物中加入原料重量50%的去离子水将浓缩物稀释,然后用微滤膜进行预处理后再用超滤膜进行处理,微滤膜和超滤膜的材质都选用偏氟乙烯(PVDF),微滤膜孔径为0.1um,操作压力为0.15MPa,料液温度为25℃,超滤膜的孔径为30000Dal,料液温度为25℃、超滤压力为0.30MPa、超滤时间为40,收集过滤液;将过滤液用大孔吸附树脂进行处理,大孔吸附树脂选用D101,过滤液上柱流速为1.5BV/h,水洗液流速为2BV/h,洗脱溶剂为70%的酒精溶液,洗脱流速为2BV/h,洗脱剂用量为6BV,得到含有α-熊果苷的洗脱液;将洗脱液采用真空减压法进行浓缩,真空度为-0.08Mpa,浓缩温度在50℃,回收溶剂,所得浸膏中水分含量低于5%;将得到的浸膏用5倍量(v/w)的甲醇溶解,溶解温度为55℃,然后过滤,收集过滤液;采用模拟移动床色谱分离技术从过滤液中分离纯化α-熊果苷,所用的模拟移动床为IV带结构,由8根C18色谱柱组成,每个带由2根色谱柱串联组成,流动相为甲醇∶水=70∶30,进样液流速为0.2ml/min,洗脱液流速为2ml/min,冲洗液流速为2ml/min,切换时间为16min,色谱系统操作温度为25℃;对得到的含有α-熊果苷的洗脱液进行真空减压浓缩,得到纯度为99.12%的α-熊果苷白色针状结晶。
实施例2
将蓝莓叶粉碎成蓝莓叶粉,目数在20-40目;将蓝莓叶粉与溶剂混合均匀后用高压脉冲电场提取器进行提取,提取料液比为1∶7(w/v),提取溶剂为60%的酒精,提取温度为44℃,提取时间为80min,提取2遍,电场强度为13kv/cm,脉冲数为19,收集提取液;将收集到的提取液采用真空减压浓缩,真空度为-0.07Mpa,浓缩温度在55℃,回收溶剂,得到浓缩物;向浓缩物中加入原料重量40%的去离子水将浓缩物稀释,然后用微滤膜进行预处理后再用超滤膜进行处理,微滤膜和超滤膜的材质都选用偏氟乙烯(PVDF),微滤膜孔径为0.2um,操作压力为0.15MPa,料液温度为30℃,超滤膜的孔径为80000Dal,料液温度为35℃、超滤压力为0.20MPa、超滤时间为50,收集过滤液;将过滤液用大孔吸附树脂进行处理,大孔吸附树脂选用D101,过滤液上柱流速为1.5BV/h,水洗液流速为2BV/h,洗脱溶剂为70%的酒精溶液,洗脱流速为2BV/h,洗脱剂用量为6BV,得到含有α-熊果苷的洗脱液;将洗脱液采用真空减压法进行浓缩,真空度为-0.07Mpa,浓缩温度在55℃,回收溶剂,所得浸膏中水分含量低于5%;将得到的浸膏用6倍量(v/w)的甲醇溶解,溶解温度为60℃,然后过滤,收集过滤液;采用模拟移动床色谱分离技术从过滤液中分离纯化α-熊果苷,所用的模拟移动床为IV带结构,由8根C18色谱柱组成,每个带由2根色谱柱串联组成,流动相为甲醇∶水=70∶30,进样液流速为0.15ml/min,洗脱液流速为3ml/min,冲洗液流速为3ml/min,切换时间为18min,色谱系统操作温度为30℃;对得到的含有α-熊果苷的洗脱液进行真空减压浓缩,得到纯度为99.35%的α-熊果苷白色针状结晶。
Claims (8)
1.一种从蓝莓中分离纯化α-熊果苷的方法,其特征在于,包括以下几个步骤:
(1)将蓝莓叶粉碎成蓝莓叶粉,目数在20-40目;
(2)将蓝莓叶粉与溶剂混合均匀后用高压脉冲电场提取器进行提取,收集提取液;
(3)将步骤(2)收集到的提取液浓缩,回收溶剂,得到浓缩物;
(4)向步骤(3)得到的浓缩物中加入去离子水稀释,然后用微滤膜进行预处理后再用超滤膜进行处理,收集过滤液;
(5)将过滤液用大孔吸附树脂进行处理,得到含有α-熊果苷的洗脱液;
(6)将步骤(5)得到的洗脱液进行浓缩,回收溶剂,得到浸膏;
(7)将步骤(6)得到的浸膏用甲醇溶解后过滤,收集过滤液:
(8)采用模拟移动床色谱分离技术从步骤(7)的过滤液中分离纯化α-熊果苷。
2.根据权利要求1所述的一种从蓝莓叶中分离纯化α-熊果苷的方法,其特征在于:所述的步骤(2)中,提取料液比为1∶5~10(w/v),提取溶剂为40~70%的酒精,提取温度为40~44℃,提取时间为60~90min,提取2~3遍,电场强度为11~15kv/cm,脉冲数为13~20。
3.根据权利要求1所述的一种从蓝莓叶中分离纯化α-熊果苷的方法,其特征在于:所述的步骤(3)中,采用真空浓缩,真空度为-0.05~-0.08Mpa,浓缩温度在50~60℃。
4.根据权利要求1所述的一种从蓝莓叶中分离纯化α-熊果苷的方法,其特征在于:所述的步骤(4)中,去离子水的加入量为原料重量的30~50%,微滤膜和超滤膜的材质都选用偏氟乙烯(PVDF),微滤膜孔径为0.1~0.2um,操作压力为0.15MPa,料液温度为20~30℃,超滤膜的孔径为30000~100000Dal,料液温度为25~35℃、超滤压力为0.1~0.30MPa、超滤时间为40~60min。
5.根据权利要求1所述的一种从蓝莓叶中分离纯化α-熊果苷的方法,其特征在于:所述的步骤(5)中,大孔吸附树脂选用D101,过滤液上柱流速为1.5BV/h,水洗液流速为2BV/h,洗脱溶剂为70%的酒精溶液,洗脱流速为2BV/h,洗脱剂用量为6BV。
6.根据权利要求1所述的一种从蓝莓叶中分离纯化α-熊果苷的方法,其特征在于:所述的步骤(6)中,采用真空浓缩,真空度为-0.05~-0.08Mpa,浓缩温度在50~60℃,所得浸膏中水分含量低于5%。
7.根据权利要求1所述的一种从蓝莓叶中分离纯化α-熊果苷的方法,其特征在于:所述的步骤(7)中,滤饼∶甲醇溶液=1∶5~10(w/v),溶解温度范围在55~60℃。
8.根据权利要求1所述的一种从蓝莓叶中分离纯化α-熊果苷的方法,其特征在于:所述的步骤(8)中,采用模拟移动床色谱分离技术从甲醇层中分离纯化紫檀芪,所用的模拟移动床为IV带结构,由4~8根C18色谱柱组成,每个带由1~2根色谱柱串联组成,流动相为甲醇∶水=70∶30,进样液流速为0.1~0.4ml/min,洗脱液流速为1~3ml/min,冲洗液流速为1~3ml/min,切换时间为15~18min,色谱系统操作温度为25~30℃。
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