CN104666771A - 一种治疗抑郁症的中药胶囊及制备工艺与检测分析方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药领域，名称为一种治疗抑郁症的中药胶囊及制备工艺与检测分析方法，该中药组合物是由以下重量份的原料制成的：大活1～2重量份，乌苏里瓦韦1～2重量份，五叶薯1～2重量份，花楸果1～2重量份。其制备工艺为：取干燥的大活、乌苏里瓦韦、五叶薯、花楸果，加水煎煮1～3次，加水4～15倍量，浸泡0.5～2h，煎煮0.5～2h，合并煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成干膏粉，加入辅料，采用中药学中常规的制药方法制备成片剂、丸剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂。本发明还提供该中药的含量测定方法及指纹图谱检测方法，该方法具有较高准确度、稳定性和重复性。该中药组合物可用于制备治疗失眠症、健忘症的药物。

Description

一种治疗抑郁症的中药胶囊及制备工艺与检测分析方法

技术领域

本发明属于中药领域，涉及一种治疗抑郁症的中药组合物，具体涉及一种由为大活、乌苏里瓦韦、五叶薯、花楸果为原料制成的中药组合物。

背景技术

抑郁症（depression）是一种常见的精神疾病，主要表现为情绪低落，兴趣减低，悲观，思维迟缓，缺乏主动性，自责自罪，饮食、睡眠差，担心自己患有各种疾病，感到全身多处不适，严重者可出现自杀念头和行为。抑郁症是自杀率最高的疾病。但其发病病因、发病机制尚不清楚。一般认为抑郁症的发病主要与生物化学因素如5-HT、DA、NE，遗传因素，社会与环境等因素有关。

随着生活节奏的加快，生活和工作压力的增大，抑郁症已成为目前除心血管疾病、糖尿病、肿瘤之外影响人类健康的常见病、多发病。抑郁症发病率很高，几乎每7个成年人中就有1个抑郁症患者，因此它被称为精神病学中的感冒。抑郁症对患者及其家属造成的痛苦，对社会造成的损失是其他疾病所无法比拟的。造成这种局面的主要原因是社会对抑郁症缺乏正确的认识，偏见使患者不愿到精神科就诊。在我国，仅有2%的抑郁症患者接受过治疗，大量的病人得不到及时的诊治，病情恶化，甚至出现自杀的严重后果。另一方面，由于民众缺乏有关抑郁症的知识，对出现抑郁症状者不能给予应有的理解和情感支持，对患者造成更大的心理压力，使病情进一步恶化。预测到2020年，除心血管疾病以外，它将成为21世纪人类健康的主要杀手。因此，抑郁症的发病机制及治疗成为人类关心的一大问题。

抑郁症具有发病率高、患病率高、复发率高、自杀率高，而知晓率低、治疗率低等特点，抑郁症患者对家庭和社会造成了重大的经济负担，因而受到全球各国的关注。然而，无法回避的是，本症的病因及发病机制至今未明，抑郁症的病因机制非常复杂，其生物学异常涉及体内多个系统，仅从某一方面进行研究往往不能得到对整体现象的圆满解释，也不能完整地阐明其发病机制。与抑郁症关联的神经、免疫、内分泌三大系统不仅各自具有复杂的生物分子网络、自身调节和自我反馈功能，而且彼此之间借助于神经递质、细胞因子和内分泌激素而联结成更复杂、更庞大的网络，在更高层次上相互作用、相互制约。这三个系统之间平衡的破坏或任何一个系统内部环节的异常都可能导致抑郁症。

就中医病名而言，大多数文献都将抑郁症与中医的郁证直接对应，对此当然也有不同看法。曲氏结合古代文献及临床研究，从文献记载和临床症状、病因病机等方面论述抑郁症与郁证的差异及共性。认为中医“郁证”本身含有两层含义，一为以病机而立病名，二为情志之病，中医有关抑郁症的描述只见于后者，而且有关抑郁症的描述也在多种中医病名的症状群中出现，因此抑郁症与郁证二者不是简单的等同关系。并提出抑郁症中医辨证应以虚证为纲，结合临床观察，以益肾补虚为大法治疗抑郁症，取得了较好的疗效。有一些研究者指出，中医学虽无抑郁症病名，但相关论述却分散在许多古代医籍的“郁证”、“癫证”、“脏躁”、“百合病”等篇章中，并对郁证的两个不同概念进行了辨析。许多文献都引述了张景岳对不同“郁证”的认识。张景岳强调“五气之郁”与“情志之郁”不同，并且对于“情志之郁”也不能以疏肝解郁通治，而当分虚实。冯氏等列举了中医学中在症状表现上与抑郁症有相似之处的病症，并进一步指出，历代医家对病症的命名往往是以某一症状或病因等来命名的，古代的一个病可包括现代医学的多个病，也可能只是现代医学的一个症状。

从病机方面来说，从肝论郁为大多数医家所认同。杨氏明确提出“抑郁症系肝”，兼及脾胃，初期多实，久病兼虚。基本病机为肝气郁结，贯穿疾病始终。并划分8种证型：肝郁气滞型、气郁化火型、肝郁痰阻型、肝郁血瘀型、肝郁脾虚型、肝郁肾虚型、肝郁血虚型、肝郁气虚型，包氏提出肝气虚是抑郁症的基本病机，补肝气法为其治疗的重要方法，临床应用滑伯仁的补肝散（山茱萸、当归、五味子、山药、黄芪、川芎、木瓜、熟地黄、白术、独活、酸枣仁）为基本方，收效显著。马氏认为肝郁气滞在郁证发病中居首位，郁证之初以气滞为主，继发血瘀、火郁、痰结、食滞等，经久不愈，由实转虚，随其影响的脏腑及耗损气血阴阳的不同，而形成心、脾、肝、肾亏虚的不同病变。因此，中医治疗抑郁证也多从疏肝理气、清肝泻火、化痰开郁、补益心脾、滋养肝肾等方面着手。

中药复方的抗抑郁机制是从多环节、多部位发挥作用的，显示出明显的多靶点效应，如白松片等的抗抑郁作用就涉及神经递质、神经元保护等多个方面。现已知抑郁症发病机制复杂，可能涉及多系统、多环节功能失调或障碍，这就更突显了中药复方在治疗抑郁症中所具有的优势和良好的应用前景。因此，在今后的研究中还应注重在中医药理论和实践的指导下，加大对相关方药的探索力度，同时也要注重对其他传统医学领域里的抗抑郁药物筛选和研究。在对作用机制的探讨中，应加强从多系统、多层次、多靶点来着手设计研究，尽量能较全面地发现药物的作用靶点，并揭示他们之间可能存在的联系或影响，从而有利于甄别关键靶点，以便开发出高效、低毒的抗抑郁药物。可以预期，随着对抑郁症发病机制的研究的不断进展，将会为抑郁症病因学带来重要发现，也会给抑郁症更完善的分类学和更有效的治疗学带来新的希望。充分利用这些机制探讨的成果来开展中药复方抗抑郁的研究可能是未来研究的热点和重点。

本发明提供了一种治疗抑郁症的中药组合物，经研究表明，该中药组合物对抑郁症具有较好的治疗效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗抑郁症的中药组合物。

本发明的另一目的是提供该中药组合物的制备方法。

本发明还提供该中药组合物的质量检测方法。

本发明还提供了该中药组合物的制药用途。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

一种治疗抑郁症的中药组合物，该中药组合物是由以下重量份的原料制成的：大活1～2重量份，乌苏里瓦韦1～2重量份，五叶薯1～2重量份，花楸果1～2重量份。

该中药组合物优选是由以下重量份的原料制成的：大活1重量份，乌苏里瓦韦2重量份，五叶薯1重量份，花楸果2重量份。

该中药组合物优选是由以下重量份的原料制成的：大活2重量份，乌苏里瓦韦1重量份，五叶薯2重量份，花楸果1重量份。

该中药组合物优选是由以下重量份的原料制成的：大活1重量份，乌苏里瓦韦1重量份，五叶薯1重量份，花楸果1重量份。

该中药组合物采用如下方法制备：取干燥的大活、乌苏里瓦韦、五叶薯、花楸果，加水煎煮1～3次，加水4～15倍量，浸泡0.5～2h，煎煮0.5～2h，合并煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成干膏粉，加入辅料，采用中药学中常规的制药方法制备成片剂、丸剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、散剂。

优选采用如下方法制备：取干燥的大活、乌苏里瓦韦、五叶薯、花楸果，加水煎煮2次，第一次加水11倍量，浸泡1h，煎煮1h，第二次加水4倍量，煎煮1h，合并两次煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成干膏粉，加入比例为1:1的糊精和可溶性淀粉作为辅料，干膏粉与辅料比例为4:1，混匀，制粒，装入硬胶囊，即得。

该药物组合物的含量测定方法为：采用高效液相色谱指纹图谱测定：

（1）色谱条件：色谱柱为C₁₈柱，流动相为比例为17:84的乙腈:水，流速0.8mL▪min^-1，检测波长230nm，柱温30℃，理论板数按伞形花内酯峰计不低于3000；

（2）供试品溶液：取装量差异符合规定的本品内容物，研细，50℃烘干至恒重，取1g，精密称量；置具塞20mL容量瓶中，加入80%乙醇至刻度，室温下超声处理2次，0.5h/次；摇匀，滤过，取续滤液，用80%乙醇调至20mL，作为供试品溶液；

（3）对照品溶液制备：精密称取伞形花内酯对照品4.21mg，置100mL量瓶中，加80%乙醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液；精密吸取上述溶液1.0mL置10mL量瓶中，用80%乙醇稀释至刻度，作为对照品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

该药物组合物的高效液相色谱指纹图谱的检测方法为：

（1）色谱条件：色谱柱：Kromasil C₁₈色谱柱；流动相：乙腈-0.6%磷酸水溶液，梯度洗脱：0min～30min，乙腈从10%线性上升至25%，0.6%磷酸水溶液从90%线性下降至75%，30min～60min，乙腈从25%线性上升至60%，0.6%磷酸水溶液从75%线性下降至40%，60min～65min，乙腈从60%线性上升至67%，0.6%磷酸水溶液从40%线性下降至33%，65min～75min，乙腈保持67%，0.6%磷酸水溶液保持33%，75min～95min，乙腈从67%线性上升至100%，0.6%磷酸水溶液从33%线性下降至0；体积流量：0.8ml/min；柱温：30℃；检测波长：322nm；

（2）参比物溶液的配制：精密称取紫花前胡苷对照品适量，加流动相制成质量浓度为100µg/ml的溶液，摇匀，即得；

（3）供试品溶液的制备：取10粒本发明中药组合物的内容物，混匀，称取1.0g，精密称定，置于50ml量瓶中，加80%甲醇适量，超声30min，放凉，加80%甲醇至刻度，经0.45µm滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、参比物溶液溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

该中药组合物可以用于制备治疗失眠症的药物。

该中药组合物还可以用于制备治疗健忘症的药物。

通过如下实验研究验证本发明的技术效果：

实验一：本发明中药组合物抗抑郁作用实验研究

1材料与方法

1.1药物

（1）本发明中药组合物：取干燥的大活250.0g，乌苏里瓦韦250.0g，五叶薯250.0g，花楸果250.0g，加水煎煮2次，第一次加水11000mL，浸泡1h，煎煮1h，第二次加水4000mL，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，置冰箱保存，实验时以常水配成所需浓度。

（2）对比中药组合物甲：取干燥的大活333.3g，乌苏里瓦韦333.3g，五叶薯333.3g，加水煎煮2次，第一次加水11000mL，浸泡1h，煎煮1h，第二次加水4000mL，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，置冰箱保存，实验时以常水配成所需浓度。

（3）对比中药组合物乙：取干燥的乌苏里瓦韦333.3g，五叶薯333.3g，花楸果333.3g，加水煎煮2次，第一次加水11000mL，浸泡1h，煎煮1h，第二次加水4000mL，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，置冰箱保存，实验时以常水配成所需浓度。

（4）对比中药组合物丙：五叶薯333.3g，花楸果333.3g，大活333.3g，加水煎煮2次，第一次加水11000mL，浸泡1h，煎煮1h，第二次加水4000mL，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，置冰箱保存，实验时以常水配成所需浓度。

（5）对比中药组合物丁：花楸果333.3g，大活333.3g，乌苏里瓦韦333.3g，加水煎煮2次，第一次加水11000mL，浸泡1h，煎煮1h，第二次加水4000mL，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，置冰箱保存，实验时以常水配成所需浓度。

1.2动物

健康SD大鼠，雄性，体重180～200g，健康ICR小鼠，雌雄不限，体重18～22g，黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

1.3药品及试剂

盐酸文拉法辛缓释胶囊，北京万生药业有限责任公司，国药准字H20143052，给药剂量6.25mg/Kg，为人临床用量1.25mg/Kg的5倍；利血平片，哈尔滨泰华药业股份有限公司，国药准字H23021360。

1.4仪器

有机玻璃游泳槽，高40cm，长60cm，宽30cm，黑龙江中医药大学实验动物中心提供；XZ-4小鼠自主活动计数器，黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

1.5方法

1.5.1大鼠强迫游泳实验：健康SD大鼠70只，雄性，按体重随机分成7组，每组10只，即模型对照组，阳性对照盐酸文拉法辛缓释胶囊6.25mg/Kg剂量组及本发明中药组合物20.00生药/Kg剂量组，对比中药组合物甲20.00生药/Kg剂量组，对比中药组合物乙20.00生药/Kg剂量组，对比中药组合物丙20.00生药/Kg剂量组，对比中药组合物丁20.00生药/Kg剂量组，模型对照组给予同体积去离子水。大鼠灌胃给药，给药1次/天，连续10天。第9天，于给药后30min将大鼠单个放入有机玻璃游泳槽中，水深为15cm，水温25℃，强迫其游泳，15min后取出动物，晒干，然后放回笼中。于末次给药30min后，将大鼠放入游泳槽中，记录5min内大鼠保持不动状态的时间，即大鼠微蜷躯体，但保持垂直姿势，鼻孔露出水面的时间。

1.5.2小鼠尾悬挂实验：健康ICR小鼠70只，雌、雄各半，按体重随机分成7组，每组10只，即模型对照组、阳性对照盐酸文拉法辛缓释胶囊6.25mg/Kg剂量组及本发明中药组合物20.00生药/Kg剂量组，对比中药组合物甲20.00生药/Kg剂量组，对比中药组合物乙20.00生药/Kg剂量组，对比中药组合物丙20.00生药/Kg剂量组，对比中药组合物丁20.00生药/Kg剂量组，模型对照组给予同体积去离子水。小鼠灌胃给药，每日1次，连续10天。于末次给药30min后，将小鼠尾（距尾尖1cm处）用胶布粘在高出桌面3cm的木条上，记录5min内动物的不动时间。

1.5.3利血平拮抗实验：健康小鼠140只，雌、雄各半，按体重随机分成7组，每组20只，分组及剂量同上，于末次给药30min后，小鼠尾静脉注射利血平2mg/Kg，于注射1h后观察小鼠眼睑下垂的动物数、身体僵直保持肌挛状态不动的动物数，并计算其发生率，观察并记录注射利血平前后体温变化。

1.5.4自主活动实验：健康小鼠70只，雌雄各半，按体重随机分成7组，每组10只，即模型对照组、盐酸文拉法辛缓释胶囊组及本发明中药组合物组，对比中药组合物甲组，对比中药组合物乙组，对比中药组合物丙组，对比中药组合物丁组，给药剂量同前。小鼠灌胃给药，每日1次，连续10天。于末次给药后30min，以XZ-4小鼠自主活动计数器记录各组小鼠的自主活动情况，记录5min，测定2次，取其平均值。

1.6统计学方法

应用SPSS10.0统计软件进行数据处理，所有计量资料以均数±标准（±s）差表示，组间比较采用t检验，计数资料采用χ²检验。

2结果

2.1大鼠强迫游泳实验

强迫游泳模型中出现的不动状态也反映了动物的绝望行为，可以模拟人类的抑郁状态。与模型对照组比较，本发明中药组合物组可明显对抗“失望”，缩短游泳不动时间（P<0.05），而对比中药组合物甲组至对比中药组合物丁组的作用效果则不明显。见表1。

表1本发明中药组合物对大鼠强迫游泳实验的影响（±s）

与模型对照组比较，*P<0.05

2.2小鼠尾悬挂实验

小鼠在悬尾模型中出现的不动状态反映了动物的绝望行为。与模型对照组比较，本发明中药组合物组可缩短小鼠悬尾的不动时间（P<0.05），而对比中药组合物甲组至对比中药组合物丁组的作用效果则不明显。提示本发明中药组合物具有减轻小鼠绝望行为、抗抑郁作用。见表2。

表2本发明中药组合物对小鼠悬尾实验的作用（±s）

与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

2.3利血平拮抗实验

与模型对照组比较，本发明中药组合物组可明显降低利血平引起小鼠眼睑下垂及小鼠运动不能发生率（P<0.05），可减轻注射利血平后体温降低的程度（P<0.05）；而对比中药组合物甲组至对比中药组合物丁组的作用效果则不明显。见表3～表5。

表3本发明中药组合物对利血平引起小鼠眼睑下垂作用的影响（±s）

与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

表4本发明中药组合物对利血平引起小鼠运动不能的影响（±s）

与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

表5本发明中药组合物对利血平引起小鼠体温降低的影响（±s）

与模型对照组比较，*P<0.05

2.4自主活动实验

未见本发明中药组合物各剂量组对小鼠自主活动有显著影响。见表6。

表6 本发明中药组合物对小鼠自主活动的影响（±s）

与模型对照组比较，**P<0.01

3.结论

常用的抑郁症动物模型主要有应激模型、药物诱发的抑郁模型等。小鼠悬尾实验和绝望游泳实验是根据环境因素致病学说，利用绝望行为建立的经典抑郁模型，用于抗抑郁药物药效的初步评价。药物诱发的抑郁模型主要筛选具有专一神经化学作用抑郁药，而利血平拮抗模型主要对增强单胺神经递质功能的药物比较敏感。利血平是一种囊泡再摄取抑制剂，它使递质留在囊泡外，易被单胺氧化酶降解，从而使儿茶酚胺（去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺和5-HT）耗竭，引起行为和生理上的变化。经利血平处理的动物出现上眼睑下垂、体温下降及强直

症状，预先用三环抗抑郁药及单胺氧化酶抑制剂处理，能拮抗上眼睑下垂及体温下降的症状。事实上此实验包含3个方面独立的生物学检测，因为利血平引起的上眼睑下垂、体温下降及强直可分别被α-肾上腺素能或5-HT能激动剂、β-肾上腺素能激动剂及多巴胺能激动剂所拮抗。

从动物实验结果看，本发明中药组合物可明显对抗“失望”，缩短游泳不动时间；可缩短小鼠悬尾的不动时间；可降低利血平引起小鼠眼睑下垂及小鼠僵直状态发生率，减轻注射利血平后体温降低的程度；对正常小鼠自主活动无影响。由此可见，本发明中药组合物对行为应激模型和药物诱发的抑郁模型有一定的抗抑郁作用，同时对正常小鼠的自主活动没有显著影响，此点与阳性药物比较具有一定的区别。

综上，本发明中药组合物具有明显的抗抑郁作用，并且优于对比中药组合物甲、对比中药组合物乙、对比中药组合物丙和对比中药组合物丁，说明本发明药物组合物中各药味之间的配伍精良，缺一不可，各药味之间的组合产生了明显的协同增效作用，具有开发成一个抗心肌缺血抗抑郁的中药新药的前景。

实验二：本发明中药组合物胶囊治疗抑郁症的临床研究

本研究对黑龙江中医药大学附属第一医院收治的40例抑郁症患者采用本发明中药组合物胶囊治疗，取得满意效果，报道如下。

1.资料与方法

1.1临床资料选取2013年1月至2014年10月医院住院或门诊收治的40例抑郁症患者，均符合全国精神疾病分类方案与诊断标准（第3版）（CCMD-3）抑郁症诊断标准。采用随机单盲法将其分为对照组和观察组，每组20例。其中：

对照组男性12例，女性8例，年龄44～58岁，平均年龄（49.61±5.33）岁，病程1～8年，平均病程（2.54±0.72）年，本次发作病期（0.85±0.53）年，发作次数（1.95±0.97）次，HAMD-17评分（26.83±4.50）分；

观察组男性11例，女性9例，年龄44～57岁，平均年龄（49.19±5.47）岁，病程1～8年，平均病程（2.63±0.68）年，本次发作病期（0.87±0.57）年，发作次数（1.98±1.08）次，HAMD-17评分（26.43±4.47）分。

两组患者的性别、年龄、病程以及病情差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。入选患者均在入组前2周内未使用其他抗抑郁药，并签署知情同意书。

1.2纳入标准

纳入标准：

（1）汉密尔顿抑郁量表（HAMD-17）总分≥18分；

（2）中医辨证：主症精神抑郁，症见善悲易哭或急躁易怒、胸胁胀痛或满闷、头痛眩晕、迟滞、入睡困难、少寐多梦、心悸纳呆、腰膝酸软、疲乏无力、舌质淡或红、舌苔黄腻或白腻、脉弦或兼细、数、滑等。

排除标准：

（1）心肺肝肾等严重躯体疾病者；

（2）继发性抑郁症及双相情感障碍抑郁症患者；

（3）神志不清、失语、痴呆等器质性疾病者；

（4）不遵守试验方案服药者以及无人监护者；

（5）严重药物过敏史、哺乳期、妊娠者；

（6）心电图检查或化验室检查结果异常者。

1.3治疗方法

对照组给予盐酸帕罗西汀片（北京万生药业有限责任公司，国药准字H20133084 ）初始剂量10mg，1次/d，3d后加至20mg/d，以后根据病情变化及药物耐受性情况加至个体化治疗剂量（最高剂量为40mg/d），平均日剂量（19.4±6.5）mg/d，疗程为6周。

观察组给予说明书实施例1的本发明中药组合物胶囊，1次3粒，2次/d，疗程为6周。

1.4观察项目

所有患者均于治疗前和治疗后1周、2周、4周、6周进行临床疗效、汉密尔顿抑郁量表（HAMD）评分判定疗效、临床疗效总评量表（CGI-SI）、抑郁自评量表（SDS）评分及副反应量表（TESS）评分。

1.5疗效评价标准

根据HADM评分和临床症状改善程度制定疗效评定标准。

（1）痊愈：HAMD减分率≥75%，临床症状消失；

（2）显效：HAMD减分率≥50%，临床症状明显改善；

（3）有效：HAMD减分率≥25%，临床症状部分改善；

（4）无效：HAMD减分率＜25%，临床症状大部分无缓解。

1.6统计学方法

采用SPSS17.0统计学软件分析所得数据，计量资料用（±s）表示，进行t检验；计数资料用χ²检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2.结果

2.1临床疗效比较

由表7可看出，观察组的治愈率和总有效率明显高于对照组（P＜0.05），无效率明显低于对照组（P＜0.05）。

表7 两组抑郁症患者的临床疗效比较（n，%）

注：与对照组比较，*P＜0.05。

2.2两组患者治疗前后的HAMD、SDS及CGI评分比较由表8可看出，两组患者治疗后的HAMD、CGI及SDS评分明显低于治疗前（P＜0.05或0.01）。观察组治疗2周后的HAMD、CGI及SDS评分明显低于对照组（P＜0.05）。

表8 两组抑郁症患者治疗前后的HAMD、SDS及CGI-SI评分比较

（n=20，±s）

注：与治疗前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与对照组比较，#P＜0.05。

2.3不良反应

对照组2例出现口干，恶心2例，腹泻3例、便秘5例、眩晕或头晕2例，头痛2例，视力模糊3例、失眠5例，嗜睡2例，TESS（0.87±0.51）分；

观察组2例出现口干，恶心2例，腹泻1例、便秘1例、眩晕或头晕2例，头痛1例，视力模糊1例、失眠0例，嗜睡1例，TESS（0.56±0.43）分。

观察组的不良反应数及TESS评分均低于对照组（P＜0.05或0.01），其中观察组患者的便秘及失眠数明显低于对照组（P＜0.01）。

3.结论

帕罗西汀是一种选择性血清素再吸收抑制剂（SS-RI）型的抗抑郁药，具有起效快、疗效好、安全性强的特点。本发明中药组合物不仅可通过调节不同脑区的5-HT、NE等神经递质，并且可通过降低慢性应激导致的过高浓度的CORT、ACTH、TNF-α、IL-1β，逆转神经-内分泌-免疫功能紊乱，产生抗抑郁作用。本研究显示，观察组的治愈率和总有效率明显高于对照组（P＜0.05或0.01）；两组患者治疗后的HAMD、CGI及SDS评分明显低于治疗前（P＜0.05或0.01）；观察组治疗2周后的HAMD、CGI及SDS评分明显优于对照组（P＜0.05）；观察组的不良反应数及TESS评分均明显低于对照组（P＜0.05或0.01），且能明显改善患者的睡眠质量（P＜0.05）。揭示本发明中药组合物胶囊能有效改善抑郁症的临床症状、HAMD评分以及SDS评分。因此，本发明中药组合物胶囊治疗抑郁症的临床效果显著，不良反应少，且能改善患者睡眠质量。

实验三：本发明中药组合物胶囊治疗失眠症的临床研究

1　资料与方法

1.1　一般资料

选取2014年5月至2014年12月黑龙江中医药大学附属第一医院收治的54例肝郁血虚证失眠患者作为研究对象，按照随机数字表法将患者分为观察组和对照组各27例。其中：

观察组：男13例，女14例；患者年龄为30～49岁，平均年龄为（41.43±3.25）岁；病程8个月至2年，平均病程（1.45±0.65）年。

对照组：男14例，女13例；患者年龄为31～50岁，平均年龄为（41.36±3.64）岁；病程7个月至2年，平均病程（1.38±0.47）年。

两组患者性别、年龄、病程等一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2　诊断标准

所有患者经检查均符合相关诊断标准，且排除药物不耐受者。

西医诊断标准：患者睡眠潜伏期延长，入睡时间超过30min；患者睡眠夜间觉醒次数达2次以上；患者睡眠多梦，睡眠质量下降；总睡眠时间低于6h。上述症状持续1个月以上。

中医诊断标准：患者有典型的失眠症状，入睡较难，多梦，全天睡眠低于5h；反复发作。中医辨证标准：患者胸胁胀满、头痛目眩、面色无华，或表现为肢体麻木、舌淡、脉细等。

1.3　方法

1.3.1　对照组　采用艾司唑仑治疗，每天睡前30min口服，每次1mg。治疗2周为1个疗程，共2个疗程。

1.3.2　观察组　采用中药本发明中药组合物胶囊治疗，按照说明书实施例1的方法制备，口服，1次3粒，每日2次，治疗2周为1个疗程，共2个疗程。观察两组患者临床疗效。

1.4　疗效评价标准

（1）治愈：经治疗后，患者睡眠时间恢复正常，醒后精力充沛；

（2）显效：经治疗后，患者睡眠时间有显著改善，睡眠深度增加；

（3）有效：经治疗后，患者失眠症状减轻，睡眠时间比之前增加3h以内；

（4）无效：经治疗后，患者失眠症状未见好转，甚至病情加重。

总有效率＝（治愈＋显效＋有效）例数／总例数×100%

1.5　统计学方法

实验数据采用SPSS11.0统计软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验；计数资料以百分比表示，采用χ²检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

结果表明，观察组患者治疗总有效率（88.89%）显著高于对照组（66.67%），差异具有统计学意义（*P＜0.05）。见表9。

表9 两组患者临床疗效比较［n（%）］

3　结论

观察组患者治疗总有效率（88.89%）显著高于对照组（66.67%），差异具有统计学意义（P＜0.05）。采用本发明中药组合物胶囊治疗肝郁血虚证失眠疗效显著。

实验四：本发明中药组合物胶囊制备工艺及质量检测方法研究

1仪器与试药

JA5003N型电子天平（上海精密科学仪器有限公司生产），RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂生产），ZK-1真空干燥箱（天津市中环试验电炉有限公司生产），LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津公司生产）；SPD-10A紫外检测器（日本岛津公司生产）；江申通用汉字色谱工作站。

硅胶G（青岛海洋化工集团公司，批号：20100212）；大活、乌苏里瓦韦、五叶薯、花楸果，均为市售产品，均由哈药集团人民同泰药店提供；水为新制蒸馏水；辅料均为药用辅料；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2试验方法与结果

2.1提取工艺条件优化

2.1.1正交实验设计：选择加水量、浸泡时间、煎煮时间作为考察因素，以干膏收率为评价指标，采用L₉（3⁴）正交表安排试验，所选因素水平见表10。

表10 提取工艺正交试验因素水平表

2.1.2干膏收率的测定：精密量取提取液50mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴上蒸干残渣，于105℃烘箱中干燥3h，移至干燥器中冷却30min，迅速精密称量，计算干膏收率。

2.1.3正交试验结果：按处方比例精密称取9份药材（每份50g），置入1000mL烧瓶中，加入规定量水，浸泡至规定时间后，进行煎煮，达到规定时间后过滤药渣，并加入水进行2次煎煮，过滤，合并滤液，浓缩至稠膏状，分别计算干膏收率。见表11。

表11 正交试验结果

方差分析结果见表12。

表12 方差分析结果

F0.05（2，2）=19.00

由表11极差分析的结果可知，各因素对评价指标干膏收率影响主次顺序为B＞C＞A，即煎煮时间＞浸泡时间＞总加水量。且A2＞A3＞A1，B2＞B1＞B3，C2＞C3＞C1，并且各因素对评价指标均无显著影响，故应选A2，B2，C2，因此即总加水量：第一次11倍、第二次4倍，煎煮时间：分别为1h，浸泡时间：1h。

2.2成型工艺条件优化

2.2.1辅料种类的筛选：干膏粉碎后过40目筛得到干膏粉，取干膏粉适量，按一定比例与辅料分别混合均匀，添加适量95%乙醇，进行制粒，分别测定吸湿率和休止角。制得的颗粒置于温度40℃、相对湿度70%环境下，考察颗粒吸湿情况。采用不同辅料制粒后试验结果见表13。

表13 不同辅料对制粒效果的影响

由表12可知，添加4种不同的辅料按1:1比例制粒后，颗粒的休止角分别有不同程度的下降，采用糊精和可溶性淀粉作为辅料制粒效果比较理想，休止角最小，说明颗粒流动性最优。

2.2.2辅料用量的筛选：以干膏粉和辅料不同比例混合制粒后流动性和颗粒状态见表14。

表14 不同辅料添加比对制粒效果的影响

由表13可知，当干膏粉与辅料比例为4:1时，所制得的颗粒流动性最优，并且制成的颗粒状态较好，因此，确定本发明中药组合物胶囊干膏粉与辅料的添加比例为4:1。

2.3伞形花内酯含量测定

2.3.1色谱条件：色谱柱为C₁₈（150×46.5nm），流动相为乙腈:水（17:84），流速0.8mL▪min^-1，检测波长230nm，进样量20μL，柱温30℃，理论板数按伞形花内酯峰计不低于3000。

2.3.2溶液制备：对照品溶液制备：精密称取伞形花内酯对照品4.21mg，置100mL量瓶中，加80%乙醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液。精密吸取上述溶液1.0mL置10mL量瓶中，用80%乙醇稀释至刻度，作为对照品溶液，冰箱中低温保存备用。

供试品溶液制备：取装量差异符合规定的本品内容物，研细，50℃烘干至恒重，取1g，精密称量；置具塞20mL容量瓶中，加入80%乙醇至刻度，室温下超声处理2次，0.5h/次；摇匀，滤过，取续滤液，用80%乙醇调至20mL，作为供试品溶液，冰箱中低温保存备用。

2.3.3线性关系考察：分别精密吸取对照品贮备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL置10mL量瓶中，加80%乙醇至刻度，摇匀；按“2.3.1”色谱条件分别进样20μL，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，以对照品溶液浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=2.432×10^-5A－0.1934，r=0.9998（n=5）。伞形花内酯在2.105～11.367μg/mL范围内有良好的线性关系。

2.3.4干扰实验：除大活外，按处方比例称取其它各药材，按本发明中药组合物胶囊工艺标准制成阴性样品；按“2.3.2”项下方法制成阴性供试品溶液。依照“2.3.1”项下色谱条件分别进样，记录色谱图，可见在伞形花内酯位置处无吸收峰，即其它成份对测定无干扰。

2.3.5精密度实验：精密吸取各对照品溶液20μL，按“2.3.1”色谱条件连续进样，记录色谱图，计算伞形花内酯峰面积RSD为1.48%，表明仪器精密度良好。

2.3.6稳定性实验：精密吸取供试品溶液20μL，分别在0、4、8、12、18、24h进样，记录色谱图，计算伞形花内酯峰面积RSD为1.5%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.3.7重复性实验：精密称取同批本发明中药组合物胶囊样品5份，按“2.3.2”方法平行制备，在上述色谱条件下进行分析，计算RSD为0.9%，表明重复性良好。

2.3.8回收率实验：精密称取已知伞形花内酯含量的本发明中药组合物胶囊样品5份，各样品分别精密加入已知伞形花内酯含量的对照品溶液1mL，按供试品溶液制备方法平行制备。按“2.3.1”色谱条件，分别进样20μL。结果伞形花内酯的平均回收率为99.81%。结果见表15。

表15 回收率实验结果（n=5）

2.3.9供试品含量测定：取本发明中药组合物胶囊样品5份，50℃烘干至恒重，精密称定。按“2.3.2”项下方法制成供试品，按“2.3.1”项下色谱条件分别进行分析测定，分别进样20μL，按外标法计算样品中伞形花内酯的含量。含量测定结果表明，5批样品中伞形花内酯平均含量分别为1.1，1.2，1.3，1.2，1.0，平均含量为1.16mg·g^-1。结果见表16。

表16 样品中伞形花内酯含量测定（n=5）

本发明中药组合物胶囊每粒装0.3g，依实验数据，每粒胶囊中伞形花内酯平均含量0.350mg；考虑到中药材质量、工艺稳定性等因素，暂定质量标准为每粒本发明中药组合物胶囊中伞形花内酯平均含量不得低于0.200mg。

3讨论

该研究以干膏收率为指标，以加水量、浸泡时间、煎煮时间为影响因素，采用正交试验法系统优化了本发明中药组合物胶囊剂的提取工艺；通过对比试验，考察了该胶囊剂辅料类型和配比、辅料用量成型工艺条件；建立了本发明中药组合物胶囊剂的含量检查项，为有效检测该制剂的有效性与安全性提供了实验依据。

实验五：本发明中药组合物胶囊的 HPLC 指纹图谱研究

为了表征本发明中药组合物的主要有效成分，采用高效液相色谱（HPLC）法对其进行分析，参照中药注射剂指纹图谱的有关技术要求进行试验；同时对该制剂中4个指标成分即伞形花内酯、紫花前胡苷、欧前胡内酯、对聚伞花素进行定量分析。

1仪器与试药

岛津高效液相色谱仪，附LC-20AD双泵，SPD-M20A二极管阵列检测器，SIL-20ACHT自动进样器，CTO-20A柱温箱，LC/Labsoluion色谱工作站，日本岛津公司；电子分析天平，1/10万g，型号ME235S，德国塞多利斯公司；SK250-LHC超声波发生器，上海科导超声仪器有限公司。乙腈、甲醇，色谱级，美国Honey-well公司；水为自制超纯水，由Millipore纯水仪，美国millipore公司；其余为分析纯。伞形花内酯、紫花前胡苷、欧前胡内酯、对聚伞花素对照品均购自中国药品生物制品检定所；本发明中药组合物胶囊，按照本发明说明书实施例1的方法制备，批号：20140224、20140225、20140226、20140301、20140302、20140306、20140309、20140311、20140316、20140318。

2指纹图谱测定方法与结果

2.1色谱条件：色谱柱：Kromasil C₁₈色谱柱（250×4.6mm，5µm，瑞士Kromasil公司）；流动相：乙腈（A）-0.6%磷酸水溶液溶液（B），梯度洗脱，0～30min，A10%→25%；30～60min，A25%→60%：60～65min，A60%→67%；65～75min，A67%；75～95min，A67%→100%。记录时间为95min。体积流量：0.8ml/min；柱温：30℃；检测波长：322nm；进样20µl。

2.2参比物与供试品溶液的制备

2.2.1参比物溶液的配制：精密称取紫花前胡苷对照品适量，加流动相制成质量浓度为100µg/ml的溶液，摇匀，即得。

2.2.2供试品的制备：取10粒本发明中药组合物胶囊内容物，混匀，称取1.0g，精密称定，置于50ml量瓶中，加80%甲醇适量，超声30min，放凉，加80%甲醇至刻度，滤过（0.45µm滤膜），滤液作为供试品溶液。

2.3方法学考察

2.3.1精密度试验：取供试品溶液（批号20140224），连续进样6次，分别对共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行考察。结果表明，各共有峰的相对保留时间RSD小于1.0%；相对峰面积RSD小于2.0%，表明仪器精密度良好。

2.3.2稳定性试验：取供试品溶液（批号20140224），分别于0、2、4、8、12、24h进样分析，考察共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果表明，各共有峰相对保留时间RSD小于1.0%，相对峰面积RSD小于2.0%，表明供试品在24h内稳定性良好。

2.3.3重复性试验：取供试品（批号20140224）6份，分别按供试品溶液的制备与检测方法进行检测，分别对共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行考察。结果表明，各共有峰相对保留时间RSD小于1.0%，相对峰面积RSD小于2.0%，表明重复性良好。

2.3.4指纹图谱建立与相似度分析：取10批样品，分别按供试品溶液的制备与检测方法进行检测，进样20µl，记录指纹图谱，峰10为紫花前胡苷，建立指纹图谱。10批样品共有色谱峰的相对保留时间的RSD均小于1.0%，相对峰面积的RSD均小于5.0%，符合指纹图谱研究技术的要求。运用中国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”对10批本发明中药组合物胶囊的指纹图谱进行相似度分析，首先将色谱工作站数据导入中药指纹图谱相似度计算软件，选定33个共有峰进行谱峰匹配，通过中位数矢量计算得出样品指纹图谱的共有模式，并以此共有模式为标准，进行整体相似度评价，结果相似度为0.955～0.995，表明这10批本发明中药组合物胶囊的化学成分一致性较好。见附图1、附图2。

附图说明：

图1：本发明中药组合物胶囊 HPLC 指纹图谱

图2：10批本发明中药组合物胶囊的 HPLC 指纹图谱

具体实施方式：

实施例 1 ：

处方：大活250.0g、乌苏里瓦韦250.0g、五叶薯250.0g、花楸果250.0g。

制法：取干燥的大活250.0g，乌苏里瓦韦250.0g，五叶薯250.0g，花楸果250.0g，加水煎煮2次，第一次加水11000mL，浸泡1h，煎煮1h，第二次加水4000mL，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，加入比例为1:1的糊精和可溶性淀粉作为辅料，干膏粉与辅料比例为4:1，混匀，制粒，装入硬胶囊，制成硬胶囊1000粒。

含量测定：采用高效液相色谱法测定：

（1）色谱条件：色谱柱为C₁₈柱，流动相为比例为17:84的乙腈:水，流速0.8mL▪min^-1，检测波长230nm，柱温30℃，理论板数按伞形花内酯峰计不低于3000；

（2）供试品溶液：取装量差异符合规定的10粒本发明中药组合物胶囊的内容物，研细，50℃烘干至恒重，取1g，精密称量；置具塞20mL容量瓶中，加入80%乙醇至刻度，室温下超声处理2次，0.5h/次；摇匀，滤过，取续滤液，用80%乙醇调至20mL，作为供试品溶液；

（3）对照品溶液制备：精密称取伞形花内酯对照品4.21mg，置100mL量瓶中，加80%乙醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液；精密吸取上述溶液1.0mL置10mL量瓶中，用80%乙醇稀释至刻度，作为对照品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；

（5）测定结果：每粒本发明中药组合物胶囊中伞形花内酯为0.355mg。

指纹图谱测定：高效液相色谱指纹图谱的检测：

（1）色谱条件：色谱柱：Kromasil C₁₈色谱柱；流动相：乙腈-0.6%磷酸水溶液，梯度洗脱：0min～30min，乙腈从10%线性上升至25%，0.6%磷酸水溶液从90%线性下降至75%，30min～60min，乙腈从25%线性上升至60%，0.6%磷酸水溶液从75%线性下降至40%，60min～65min，乙腈从60%线性上升至67%，0.6%磷酸水溶液从40%线性下降至33%，65min～75min，乙腈保持67%，0.6%磷酸水溶液保持33%，75min～95min，乙腈从67%线性上升至100%，0.6%磷酸水溶液从33%线性下降至0；体积流量：0.8ml/min；柱温：30℃；检测波长：322nm；

（2）参比物溶液的配制：精密称取紫花前胡苷对照品适量，加流动相制成质量浓度为100µg/ml的溶液，摇匀，即得；

（3）供试品溶液的制备：取10粒本发明中药组合物胶囊的内容物，混匀，称取1.0g，精密称定，置于50ml量瓶中，加80%甲醇适量，超声30min，放凉，加80%甲醇至刻度，经0.45µm滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、参比物溶液溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；

（5）检测结果：符合指纹图谱标准。

功能主治：抑郁症、失眠症、健忘症。

用法用量：口服，1次3粒，每日2次。

实施例 2 ：

处方：大活166.7g、乌苏里瓦韦333.3g、五叶薯166.7g、花楸果333.3g。

制法：取干燥的大活166.7g、乌苏里瓦韦333.3g、五叶薯166.7g、花楸果333.3g，加水煎煮2次，第一次加水11000mL，浸泡1h，煎煮1h，第二次加水4000mL，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，加入比例为1:1的糊精和可溶性淀粉作为辅料，干膏粉与辅料比例为4:1，混匀，制粒，装入硬胶囊，制成硬胶囊1000粒。

含量测定：采用高效液相色谱法测定：

（1）色谱条件：色谱柱为C₁₈柱，流动相为比例为17:84的乙腈:水，流速0.8mL▪min^-1，检测波长230nm，柱温30℃，理论板数按伞形花内酯峰计不低于3000；

（2）供试品溶液：取装量差异符合规定的10粒本发明中药组合物胶囊的内容物，研细，50℃烘干至恒重，取1g，精密称量；置具塞20mL容量瓶中，加入80%乙醇至刻度，室温下超声处理2次，0.5h/次；摇匀，滤过，取续滤液，用80%乙醇调至20mL，作为供试品溶液；

（3）对照品溶液制备：精密称取伞形花内酯对照品4.21mg，置100mL量瓶中，加80%乙醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液；精密吸取上述溶液1.0mL置10mL量瓶中，用80%乙醇稀释至刻度，作为对照品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；

（5）测定结果：每粒本发明中药组合物胶囊中伞形花内酯为0.264mg。

指纹图谱测定：高效液相色谱指纹图谱的检测：

（1）色谱条件：色谱柱：Kromasil C₁₈色谱柱；流动相：乙腈-0.6%磷酸水溶液，梯度洗脱：0min～30min，乙腈从10%线性上升至25%，0.6%磷酸水溶液从90%线性下降至75%，30min～60min，乙腈从25%线性上升至60%，0.6%磷酸水溶液从75%线性下降至40%，60min～65min，乙腈从60%线性上升至67%，0.6%磷酸水溶液从40%线性下降至33%，65min～75min，乙腈保持67%，0.6%磷酸水溶液保持33%，75min～95min，乙腈从67%线性上升至100%，0.6%磷酸水溶液从33%线性下降至0；体积流量：0.8ml/min；柱温：30℃；检测波长：322nm；

（2）参比物溶液的配制：精密称取紫花前胡苷对照品适量，加流动相制成质量浓度为100µg/ml的溶液，摇匀，即得；

（3）供试品溶液的制备：取10粒本发明中药组合物胶囊的内容物，混匀，称取1.0g，精密称定，置于50ml量瓶中，加80%甲醇适量，超声30min，放凉，加80%甲醇至刻度，经0.45µm滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、参比物溶液溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；

（5）检测结果：符合指纹图谱标准。

功能主治：抑郁症、失眠症、健忘症。

用法用量：口服，1次3粒，每日2次。

实施例 3 ：

处方：大活333.3g、乌苏里瓦韦166.7g、五叶薯333.3g、花楸果166.7g

制法：取干燥的大活333.3g、乌苏里瓦韦166.7g、五叶薯333.3g、花楸果166.7g，加水煎煮3次，第一次加水10000mL，浸泡1h，煎煮1h，第二次加水5000mL，煎煮1h，第二次加水4000mL，煎煮0.5h，合并煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，加入比例为1:1的糊精和可溶性淀粉作为辅料，干膏粉与辅料比例为4:1，混匀，制粒，压制成1000片，包衣，即得。

含量测定：采用高效液相色谱法测定：

（1）色谱条件：色谱柱为C₁₈柱，流动相为比例为17:84的乙腈:水，流速0.8mL▪min^-1，检测波长230nm，柱温30℃，理论板数按伞形花内酯峰计不低于3000；

（2）供试品溶液：取装量差异符合规定的10片本发明中药组合物片剂，研细，50℃烘干至恒重，取1g，精密称量；置具塞20mL容量瓶中，加入80%乙醇至刻度，室温下超声处理2次，0.5h/次；摇匀，滤过，取续滤液，用80%乙醇调至20mL，作为供试品溶液；

（3）对照品溶液制备：精密称取伞形花内酯对照品4.21mg，置100mL量瓶中，加80%乙醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液；精密吸取上述溶液1.0mL置10mL量瓶中，用80%乙醇稀释至刻度，作为对照品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；

（5）测定结果：每片本发明中药组合物片剂中伞形花内酯为0.422mg。

指纹图谱测定：高效液相色谱指纹图谱的检测：

（1）色谱条件：色谱柱：Kromasil C₁₈色谱柱；流动相：乙腈-0.6%磷酸水溶液，梯度洗脱：0min～30min，乙腈从10%线性上升至25%，0.6%磷酸水溶液从90%线性下降至75%，30min～60min，乙腈从25%线性上升至60%，0.6%磷酸水溶液从75%线性下降至40%，60min～65min，乙腈从60%线性上升至67%，0.6%磷酸水溶液从40%线性下降至33%，65min～75min，乙腈保持67%，0.6%磷酸水溶液保持33%，75min～95min，乙腈从67%线性上升至100%，0.6%磷酸水溶液从33%线性下降至0；体积流量：0.8ml/min；柱温：30℃；检测波长：322nm；

（2）参比物溶液的配制：精密称取紫花前胡苷对照品适量，加流动相制成质量浓度为100µg/ml的溶液，摇匀，即得；

（3）供试品溶液的制备：取10片本发明中药组合物片剂，混匀，称取1.0g，精密称定，置于50ml量瓶中，加80%甲醇适量，超声30min，放凉，加80%甲醇至刻度，经0.45µm滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、参比物溶液溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；

（5）检测结果：符合指纹图谱标准。

功能主治：抑郁症、失眠症、健忘症。

用法用量：口服，1次3片，每日2次。

本发明中药组合物中的大活为金星蕨伞形科当归属植物兴安白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Bench. et Hook. f. ex Franch. et Sav.[Callisace dahurica Fisch. ex Hoffm.]的根；乌苏里瓦韦为水龙骨科瓦韦属植物乌苏里瓦韦Lepisorus ussuriensis (Regel et Maack) Ching [Pleopeltis ussuriensis Regel et Maack]的全草。五叶薯为薯蓣科薯蓣属植物五叶薯蓣Dioscrorea pentaphylla L.的块茎。花楸果为蔷薇科花楸属植物花楸树Sorbus pohuashanensis (Hance)Hedl.[Pyrus pohuashanensis Hance]的果实。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (10)

1.一种治疗抑郁症的中药组合物，其特征在于，该中药组合物是由以下重量份的原料制成的：大活1～2重量份，乌苏里瓦韦1～2重量份，五叶薯1～2重量份，花楸果1～2重量份。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，该中药组合物是由以下重量份的原料制成的：大活1重量份，乌苏里瓦韦2重量份，五叶薯1重量份，花楸果2重量份。

3.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，该中药组合物是由以下重量份的原料制成的：大活2重量份，乌苏里瓦韦1重量份，五叶薯2重量份，花楸果1重量份。

4.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，该中药组合物是由以下重量份的原料制成的：大活1重量份，乌苏里瓦韦1重量份，五叶薯1重量份，花楸果1重量份。

5.如权利要求1～4任意一项所述的中药组合物，其特征在于，该中药组合物采用如下方法制备：取干燥的大活、乌苏里瓦韦、五叶薯、花楸果，加水煎煮1～3次，加水4～15倍量，浸泡0.5～2h，煎煮0.5～2h，合并煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成干膏粉，加入辅料，采用中药学中常规的制药方法制备成片剂、丸剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、散剂。

6.如权利要求5所述的中药组合物，其特征在于，该中药组合物采用如下方法制备：取干燥的大活、乌苏里瓦韦、五叶薯、花楸果，加水煎煮2次，第一次加水11倍量，浸泡1h，煎煮1h，第二次加水4倍量，煎煮1h，合并两次煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成干膏粉，加入比例为1:1的糊精和可溶性淀粉作为辅料，干膏粉与辅料比例为4:1，混匀，制粒，装入硬胶囊，即得。

7.如权利要求1～4任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物的含量测定方法为：采用高效液相色谱指纹图谱测定：

（1）色谱条件：色谱柱为C₁₈柱，流动相为比例为17:84的乙腈:水，流速0.8mL▪min^-1，检测波长230nm，柱温30℃，理论板数按伞形花内酯峰计不低于3000；

（2）供试品溶液：取装量差异符合规定的本品内容物，研细，50℃烘干至恒重，取1g，精密称量；置具塞20mL容量瓶中，加入80%乙醇至刻度，室温下超声处理2次，0.5h/次；摇匀，滤过，取续滤液，用80%乙醇调至20mL，作为供试品溶液；

（3）对照品溶液制备：精密称取伞形花内酯对照品4.21mg，置100mL量瓶中，加80%乙醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液；精密吸取上述溶液1.0mL置10mL量瓶中，用80%乙醇稀释至刻度，作为对照品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

8.如权利要求1～4任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物的高效液相色谱指纹图谱的检测方法为：

（1）色谱条件：色谱柱：Kromasil C₁₈色谱柱；流动相：乙腈-0.6%磷酸水溶液，梯度洗脱：0min～30min，乙腈从10%线性上升至25%，0.6%磷酸水溶液从90%线性下降至75%，30min～60min，乙腈从25%线性上升至60%，0.6%磷酸水溶液从75%线性下降至40%，60min～65min，乙腈从60%线性上升至67%，0.6%磷酸水溶液从40%线性下降至33%，65min～75min，乙腈保持67%，0.6%磷酸水溶液保持33%，75min～95min，乙腈从67%线性上升至100%，0.6%磷酸水溶液从33%线性下降至0；体积流量：0.8ml/min；柱温：30℃；检测波长：322nm；

（2）参比物溶液的配制：精密称取紫花前胡苷对照品适量，加流动相制成质量浓度为100µg/ml的溶液，摇匀，即得；

（3）供试品溶液的制备：取10粒本发明中药组合物的内容物，混匀，称取1.0g，精密称定，置于50ml量瓶中，加80%甲醇适量，超声30min，放凉，加80%甲醇至刻度，经0.45µm滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、参比物溶液溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

9.如权利要求1～4任意一项所述的中药组合物，其特征在于，该中药组合物在制备治疗失眠症药物中的应用。

10.如权利要求1～4任意一项所述的中药组合物，其特征在于，该中药组合物在制备治疗健忘症药物中的应用。