CN104644763A - 多刺绿绒蒿α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属医药技术领域，具体涉及一种多刺绿绒蒿α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法以及它在降血糖、减肥、降血脂、治疗糖尿病等方面的医药用途。所述的提取物通过如下方法获得：先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该α-糖苷酶抑制活性提取物。
Description
技术领域
本发明属医药技术领域，具体涉及一种多刺绿绒蒿α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法以及它在降血糖、减肥、降血脂、治疗糖尿病等方面的医药用途。
背景技术
多刺绿绒蒿Meconopsis horridula Hook.f. & Thoms.是 罂粟科绿绒篙属一年生草本植物，高15-20厘米。全体被黄褐色或淡黄色坚硬而平展的刺。主根肥而长。茎近无或极短。叶均基生，披针形，长5-12厘米，宽约1厘米，两面被上述的刺;叶柄长0.5-3厘米。6-8月开花，花革坚挺，常5-12条，密被黄褐色平展的刺。花单生于花葶顶，半下垂，直径约2.5-4厘米，花瓣5-8，有时为4，蓝色或蓝紫色，宽倒卵形，长1.2-2厘米，宽1厘米。蒴果倒卵形或椭圆状长圆形，长1.2-2.5厘米，被上述的刺。生于海拔4100-5400米的山坡石缝中。分布于西藏、云南、四川、青海和甘肃。缅甸、印度东北部、不丹、锡金、尼泊尔也有。
多刺绿绒蒿，归肝经。苦，寒。有小毒。活血化瘀，镇痛，燥湿，利咽。用于跌打损伤。本发明通过大规模、系统地活性筛选，意外地发现维吾尔药多刺绿绒蒿提取物及其部分化学组分，具有显著地α-糖苷酶抑制活性，该活性提取物及其组合物有望应用于降血糖、减肥、降血脂、糖尿病等方面。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种多刺绿绒蒿提取物。
本发明还提供了以多刺绿绒蒿提取物为主要活性成分的组合物。
本发明同时提供了多刺绿绒蒿提取物及其组合物的制备和应用。
本发明是通过如下技术方案实现的：
维吾尔药多刺绿绒蒿经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2）柱分离，上样后的硅胶柱，用氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱（氯仿-甲醇，比例见表1），各氯仿-甲醇比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其α-糖苷酶抑制活性，意外地发现先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱得到的氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为α-糖苷酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有α-糖苷酶抑制活性的作用。特别地，以上条件最优为先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱20倍柱体积，洗脱液干燥后所得提取物为本发明α-糖苷酶抑制活性的提取物。α-糖苷酶抑制活性的提取物可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该多刺绿绒蒿α-糖苷酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC）分析表征如图1。TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。
1、多刺绿绒蒿经甲醇超声提取物的制备
取维吾尔药多刺绿绒蒿20 g，经100 mL溶剂超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0033，样品2.9012 g，留样0.1424g，上样量2.7588g，拌样硅胶3 g，空白硅胶15 g，氯仿-甲醇系统洗脱。
2、石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱方法和结果
取维吾尔药多刺绿绒蒿20 g，经100 mL溶剂超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0033，样品2.9012 g，留样0.1424g，上样量2.7588g，上柱，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上硅胶柱色谱，拌样硅胶3 g，空白硅胶15 g，玻璃柱内径2.0 cm，氯仿-甲醇系统梯度洗脱（条件见表1），柱体积33 mL，每个梯度洗脱300mL，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，氯仿：甲醇梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图2。
表1
3、抑制α-糖苷酶活性筛选方法和结果
1) 实验条件
a、材料：DMSO(二甲基亚砜) (科密欧公司)；KH2PO4、K2HPO4·3H2O(广东汕头市西陇化工厂)；α-glucosidase酶(美国Sigma公司)；PNPG(美国Sigma公司)
b、实验仪器：多功能酶标仪Bio-Rad Model 680型(Bio-Rad Laboratories Inc.)
2) 实验方法和过程
样品处理：将1 mg待测样品溶于20 μL二甲基亚砜(DMSO)作为母液，取1 μL母液加入99 μL缓冲盐配成500 μg·mL-1的样品溶液。
在96孔板中依次加入α-glucosidase酶PBS溶液20 μL使其终浓度为0.07 u/mL，样品浓度为500 μg·mL-1的PBS溶液10 μL。冰浴5分钟，加入底物PBS溶液20 μL使其终浓度为2.5 mmol/l，用浓度为0.1 M、pH 6.84的PBS溶液补足体积为100 μL。加过样的96孔板在37 ℃水浴30分钟。于405 nm处测定反应物的吸光度，并以阿卡波糖作为阳性对照。样品抑制α-glucosidase酶活性比率用加样品较空白对照的OD值的比值来表示。样品抑制百分率按以下公式计算:
酶活性抑制率% = [A空白- (A样品- A背景)] / A空白× 100
式中A空白：不加样品反应后的吸收值；
A样品：加入样品反应后的吸收值；
A背景：只加样品的吸收值。
3) 实验结果
表2
结果发现：
本发明最优方案为：维吾尔药多刺绿绒蒿经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物，即为该α-糖苷酶抑制活性提取物。该α-糖苷酶抑制活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。
具体，发现过程如下：
4、α-糖苷酶抑制活性有效提取物的提取方法研究
1）提取溶剂的种类研究
分别用甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机溶剂提取，并测试提取物的α-糖苷酶抑制活性，实验结果如下：
表3
研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。
2）提取溶剂的用量研究
分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物的α-糖苷酶抑制活性，结果如下：
表4
活性提取物的提取所用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
3）干燥方法的研究
分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抑制α-糖苷酶活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对α-糖苷酶抑制活性提取物进行干燥，其中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
表5
优选地，多刺绿绒蒿α-糖苷酶抑制活性提取物的制备方法为：
维吾尔药多刺绿绒蒿经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该活性提取物。以上条件最优为先用氯仿：甲醇混合溶剂（氯仿：甲醇，100:2，体积比）洗脱10倍柱体积，继用氯仿：甲醇混合溶剂（氯仿：甲醇，100:5，体积比）洗脱20倍柱体积。
其中，
1) 提取物提取用溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。活性提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
2) 提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
5. 多刺绿绒蒿抑制α-糖苷酶活性提取物（洗脱液为200：5时干燥后所得的提取物）的医药用途研究
按优化的多刺绿绒蒿α-糖苷酶抑制活性提取物制备方法制备的活性提取物，经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=24.7 μg/mL。
由于α-糖苷酶抑制剂具有降血糖、减肥、降血脂、糖尿病等方面的医药用途。因此，我们发现的多刺绿绒蒿α-糖苷酶抑制活性提取物具有广泛的医药用途。
6、多刺绿绒蒿抑制α-糖苷酶活性提取物的组合物及其制备方法研究
1）固体分散体
处方
多刺绿绒蒿提取物 20 g
Vc 1 g
聚乙烯吡咯烷酮 79 g
固体分散100g
制备方法：
称取多刺绿绒蒿提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP）按比例1:2、1:4、1:6的质量比分别放入烧杯中，加入适量的无水乙醇和Vc，用磁力搅拌器搅拌至多刺绿绒蒿提取物和载体完全溶解，充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得多刺绿绒蒿有效提取物PVP包合物。
2）环糊精包合物
处方：
多刺绿绒蒿提取物 20 g
Vc 1 g
β-环糊精 79 g
包合物100g
制备方法：
将β-环糊精与 1-5 倍水研匀,加多刺绿绒蒿有效提取物( 水难溶性的应先溶于少量有机溶剂中) 继续充分研磨至成糊状物, 低温干燥即得环糊精包合物。
3）分散片处方:
多刺绿绒蒿提取物 100
十二烷基硫酸钠 1
Vc 1
预胶化淀粉 10
可溶性淀粉 100
交联聚维酮 10
微晶纤维素 9
微分硅胶 0.3
滑石粉 1
100片
制备方法：
1. 多刺绿绒蒿有效提取物分散体的制备，精密称取多刺绿绒蒿提取物、Vc，加入处方量的十二烷基硫酸钠，用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70℃的温度下蒸干，粉碎，过100目筛；
2. 将第一步中的多刺绿绒蒿有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮，预胶化淀粉，用适量的浓度为70%乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min 后， 60℃烘箱烘干45min，16目筛整粒，加入处方量的滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片即得。
7、多刺绿绒蒿抑制α-糖苷酶活性提取物的检测方法研究
我们发现，可以用薄层色谱的方法，很好地检测和标示多刺绿绒蒿α-糖苷酶抑制活性提取物的特征。见图1
具体条件为：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。
附图说明：
图1 多刺绿绒蒿α-糖苷酶抑制活性提取物的TLC色谱图；
图2 多刺绿绒蒿溶剂提取物的TLC色谱图。
具体实施方式:
以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
实施例 1：
取维吾尔药多刺绿绒蒿20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2.0 cm 内径小柱），先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=81.0 μg/mL。
实施例 2：
取维吾尔药多刺绿绒蒿20 g，经100 mL乙醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=89.0 μg/mL。
实施例 3：
取维吾尔药多刺绿绒蒿20 g，经100 mL石油醚超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥法，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=83.0 μg/mL。
实施例 4：
取维吾尔药多刺绿绒蒿20 g，经100 mL丙酮超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=80.0 μg/mL。
实施例 5：
取维吾尔药多刺绿绒蒿20 g，经100 mL氯仿超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=76.0 μg/mL。
实施例 6：
取维吾尔药多刺绿绒蒿20 g，经100 mL乙酸乙酯超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=64.0 μg/mL。
实施例 7：
取维吾尔药多刺绿绒蒿20 g，经100 mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1：1）超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=87.0 μg/mL。
实施例 8：
取维吾尔药多刺绿绒蒿20 g，经100 mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1：1）超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=53.0 μg/mL。
实施例 9：
取维吾尔药多刺绿绒蒿20 g，经100 mL乙醇-水混合溶剂（乙醇：水=90：10）超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=78.0 μg/mL。
实施例 10：固体分散体
称取多刺绿绒蒿提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP）按比例1:2、1:4、1:6的质量比分别放入烧杯中，加入适量的无水乙醇和Vc，用磁力搅拌器搅拌至多刺绿绒蒿提取物和载体完全溶解，充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得多刺绿绒蒿有效提取物PVP包合物。
实施例 11：环糊精包合物
将β-环糊精与 1-5 倍水研匀,加多刺绿绒蒿有效提取物( 水难溶性的应先溶于少量有机溶剂中) 继续充分研磨至成糊状物, 低温干燥即得环糊精包合物。
实施例12：分散片
1. 多刺绿绒蒿有效提取物分散体的制备，精密称取多刺绿绒蒿提取物、Vc，加入处方量的十二烷基硫酸钠，用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70℃的温度下蒸干，粉碎，过100目筛；
将第一步中的多刺绿绒蒿有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮，预胶化淀粉，用适量的浓度为70%乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min 后，60℃烘箱烘干45min，16目筛整粒，加入处方量的滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片即得。
Claims (11)
1.一种多刺绿绒蒿提取物，其特征为多刺绿绒蒿经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100:2的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，继用体积比为100:5的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，用100:5的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物。
2.如权利要求1所述多刺绿绒蒿提取物，其特征为该提取物的提取用溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。
3.如权利要求1所述多刺绿绒蒿提取物，其特征为多刺绿绒蒿经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该有效部位。
4.如权利要求1-3任何一项所述的一种维吾尔药多刺绿绒蒿提取物，其特征为，用于洗脱的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱体积为2-50倍柱体积。
5.如权利要求1所述提取物的制备方法，其特征为：多刺绿绒蒿经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱2-50倍柱体积，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该有效部位；以上条件最优为先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:5，体积比）洗脱20倍柱体积。
6.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药多刺绿绒蒿提取物和药学上可接受的载体。
7.一种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的多刺绿绒蒿提取物或权利要求6所述的药物组合物。
8.如权利要求7所述的药物制剂，其特征在于，所述的制剂为固体分散体、环糊精包合物、分散片。
9.权利要求1-5任何一项所述提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求7所述的药物制剂在制备α-葡萄糖苷酶抑制活性药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的α-葡萄糖苷酶抑制活性，可用于降血糖、减肥、降血脂、治疗糖尿病等方面的医药用途。
11.如权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药肉根黄芪胶提取物，其特征在于，用TLC检测法，其色谱条件为：GF254硅胶板，展开系统：氯仿：乙酸乙酯：甲醇=3:1:1，显色方法：香草醛浓硫酸显色。
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