CN104644752A - 桑椹α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 - Google Patents
桑椹α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属医药技术领域，具体涉及一种桑椹α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法以及它在降血糖、减肥、降血脂、治疗糖尿病等方面的医药用途。所述的提取物通过如下方法获得：先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该α-糖苷酶抑制活性提取物，或先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该α-糖苷酶抑制活性提取物。
Description
技术领域
本发明属医药技术领域，具体涉及一种桑椹α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法以及它在降血糖、减肥、降血脂、治疗糖尿病等方面的医药用途。
背景技术
桑椹Fructus Mori是桑科桑属多年生木本植物桑树的果实椭圆形长1—3厘米表面不平滑。未成熟时为绿色逐渐成长变为白色、红色成熟后为紫红色或紫黑色味酸甜。《本草新编》有“紫者为第一红者次之青则不可用”的记载。
桑椹中含有多种功能性成分如芦丁、花青素、白黎芦醇等具有良好的防癌、抗衰老、抗溃疡、抗病毒等作用。桑椹具有生津止渴、促进消化、帮助排便等作用，适量食用能促进胃液分泌，刺激肠蠕动及解除燥热。祖国医学认为，桑椹性味甘寒，具有补肝益肾、生津润肠、乌发明目等功效。
本发明通过大规模、系统地活性筛选，意外地发现维吾尔药桑椹提取物及其部分化学组分，具有显著地α-糖苷酶抑制活性，该活性提取物及其组合物有望应用于降血糖、减肥、降血脂、糖尿病等方面。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种桑椹提取物。
本发明还提供了以桑椹提取物为主要活性成分的组合物。
本发明同时提供了桑椹提取物及其组合物的制备和应用。
本发明是通过如下技术方案实现的：
维吾尔药桑椹经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2）柱分离，上样后的硅胶柱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱（石油醚-乙酸乙酯，比例见表1），各石油醚-乙酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其α-糖苷酶抑制活性，意外地发现先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱得到的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为α-糖苷酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有α-糖苷酶抑制活性的作用。特别地，优选为先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱20倍柱体积，洗脱液干燥后即为本发明α-糖苷酶抑制活性的提取物。α-糖苷酶抑制活性的提取物可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该桑椹α-糖苷酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC）分析表征如图1，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。
维吾尔药桑椹经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2）柱分离，上样后的硅胶柱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱（石油醚-乙酸乙酯，比例见表1），各石油醚-乙酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其α-糖苷酶抑制活性，意外地发现先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱得到的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为α-糖苷酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有α-糖苷酶抑制活性的作用。以上条件最优为先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱20倍柱体积，洗脱液干燥后即为本发明α-糖苷酶抑制活性的提取物。α-糖苷酶抑制活性的提取物可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该桑椹α-糖苷酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC）分析表征如图2，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（1:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。
具体，发现过程如下：
1、桑椹经水超声提取物的制备
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL水超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0149B，样品0.1918 g，留样0.0099g，上样量0.1819g，拌样硅胶0.5 g，空白硅胶5 g，石油醚-乙酸乙酯系统洗脱。
2、石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱方法和结果
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0149B， 0.1918 g，上柱，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上硅胶柱色谱，拌样硅胶0.5 g，空白硅胶5 g，玻璃柱内径1.5 cm，石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱（条件见表1），柱体积11 mL，每个梯度洗脱100mL，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图3，图4，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1），石油醚：乙酸乙酯：丙酮（1:1:1），显色方法：香草醛-硫酸显色。
表1
3、抑制α-糖苷酶活性筛选方法和结果
1) 实验条件
a、材料：DMSO(二甲基亚砜) (科密欧公司)；KH2PO4、K2HPO4·3H2O(广东汕头市西陇化工厂)；α-glucosidase酶(美国Sigma公司)；PNPG(美国Sigma公司)
b、实验仪器：多功能酶标仪Bio-Rad Model 680型(Bio-Rad Laboratories Inc.)
2) 实验方法和过程
样品处理：将1 mg待测样品溶于20 μL二甲基亚砜(DMSO)作为母液，取1 μL母液加入99 μL缓冲盐配成500 μg·mL-1的样品溶液。
在96孔板中依次加入α-glucosidase酶PBS溶液20 μL使其终浓度为0.07 u/mL，样品浓度为500 μg·mL-1的PBS溶液10 μL。冰浴5分钟，加入底物PBS溶液20 μL使其终浓度为2.5 mmol/l，用浓度为0.1 M、pH 6.84的PBS溶液补足体积为100 μL。加过样的96孔板在37 ℃水浴30分钟。于405 nm处测定反应物的吸光度，并以阿卡波糖作为阳性对照。样品抑制α-glucosidase酶活性比率用加样品较空白对照的OD值的比值来表示。样品抑制百分率按以下公式计算:
酶活性抑制率% = [A空白- (A样品- A背景)] / A空白× 100
式中A空白：不加样品反应后的吸收值；
A样品：加入样品反应后的吸收值；
A背景：只加样品的吸收值。
3) 实验结果
表2
结果发现：
本发明的最优方案为：维吾尔药桑椹经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物，即为该α-糖苷酶抑制活性提取物。该α-糖苷酶抑制活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。
维吾尔药桑椹经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物，即为该α-糖苷酶抑制活性提取物。该α-糖苷酶抑制活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图2。
4、α-糖苷酶抑制活性有效提取物的提取方法研究
1）提取溶剂的种类研究
分别用甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机溶剂提取，并测试提取物的α-糖苷酶抑制活性，实验结果如下：
表3
研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。
2）提取溶剂的用量研究
分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物的α-糖苷酶抑制活性，结果如下：
表4
活性提取物的提取所用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
3）干燥方法的研究
分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抑制α-糖苷酶活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对α-糖苷酶抑制活性提取物进行干燥，其中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
表5
优选地，桑椹α-糖苷酶抑制活性提取物的制备方法为：
维吾尔药桑椹经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该活性提取物。以上条件最优为先用石油醚:乙酸乙酯混合溶剂（石油醚:乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚:乙酸乙酯混合溶剂（石油醚:乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱20倍柱体积。
其中，
1) 提取物提取用溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。活性提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
2) 提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
维吾尔药桑椹经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该活性提取物。以上条件最优为先用石油醚:乙酸乙酯混合溶剂（石油醚:乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚:乙酸乙酯混合溶剂（石油醚:乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱20倍柱体积。
其中，
1） 提取物提取用溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。活性提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
2）提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
5. 桑椹抑制α-糖苷酶活性提取物的医药用途研究
按优化的桑椹α-糖苷酶抑制活性提取物制备方法制备的活性提取物，经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=20.5 μg/mL。
由于α-糖苷酶抑制剂具有降血糖、减肥、降血脂、糖尿病等方面的医药用途。因此，我们发现的桑椹α-糖苷酶抑制活性提取物具有广泛的医药用途。
6、桑椹抑制α-糖苷酶活性提取物的组合物及其制备方法研究
1）固体分散体
处方
桑椹提取物 20 g
Vc 1 g
聚乙烯吡咯烷酮 79 g
固体分散100g
制备方法：
称取桑椹提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP）按比例1:2、1:4、1:6的质量比分别放入烧杯中，加入适量的无水乙醇和Vc，用磁力搅拌器搅拌至桑椹提取物和载体完全溶解，充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得桑椹有效提取物PVP包合物。
2）环糊精包合物
处方：
桑椹提取物 20 g
Vc 1 g
β-环糊精 79 g
包合物100g
制备方法：
将β-环糊精与 1-5 倍水研匀,加桑椹有效提取物( 水难溶性的应先溶于少量有机溶剂中) 继续充分研磨至成糊状物, 低温干燥即得环糊精包合物。
3）分散片处方:
桑椹提取物 100
十二烷基硫酸钠 1
Vc 1
预胶化淀粉 10
可溶性淀粉 100
交联聚维酮 10
微晶纤维素 9
微分硅胶 0.3
滑石粉 1
100片
制备方法：
1. 桑椹有效提取物分散体的制备，精密称取桑椹提取物、Vc，加入处方量的十二烷基硫酸钠，用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70℃的温度下蒸干，粉碎，过100目筛；
2. 将第一步中的桑椹有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮，预胶化淀粉，用适量的浓度为70%乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min 后， 60℃烘箱烘干45min，16目筛整粒，加入处方量的滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片即得。
7、桑椹抑制α-糖苷酶活性提取物的检测方法研究
我们发现，可以用薄层色谱的方法，很好地检测和标示桑椹α-糖苷酶抑制活性提取物的特征。见图1
具体条件为：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1）（1:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。
附图说明：
图1 桑椹α-糖苷酶抑制活性提取物的TLC色谱图；
图2 桑椹α-糖苷酶抑制活性提取物的TLC色谱图；
图3 桑椹溶剂提取物的TLC色谱图；
图4 桑椹溶剂提取物的TLC色谱图。
具体实施方式:
以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
实施例 1：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=84.0 μg/mL。
实施例 2：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL乙醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=88.0 μg/mL。
实施例 3：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL石油醚超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥法，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=81.0 μg/mL。
实施例 4：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL丙酮超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=80.0 μg/mL。
实施例 5：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL氯仿超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=77.0 μg/mL。
实施例 6：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL乙酸乙酯超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=65.0 μg/mL。
实施例 7：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1：1）超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=87.0 μg/mL。
实施例 8：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1：1）超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=61.0 μg/mL。
实施例 9：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL乙醇-水混合溶剂（乙醇：水=90：10）超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=75.0 μg/mL。
实施例 10：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=82.0 μg/mL。
实施例 11：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL乙醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=87.0 μg/mL。
实施例 12：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL石油醚超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥法，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=78.0 μg/mL。
实施例 13：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL丙酮超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=85.0 μg/mL。
实施例 14：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL氯仿超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=83.0 μg/mL。
实施例 15：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL乙酸乙酯超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=67.0 μg/mL。
实施例 16：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1：1）超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=86.0 μg/mL。
实施例 17：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1：1）超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=55.0 μg/mL。
实施例 18：
取维吾尔药桑椹20 g，经100 mL乙醇-水混合溶剂（乙醇：水=90：10）超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm 内径小柱），先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC50=63.0 μg/mL。
实施例 19：固体分散体
称取桑椹提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP）按比例1:2、1:4、1:6的质量比分别放入烧杯中，加入适量的无水乙醇和Vc，用磁力搅拌器搅拌至桑椹提取物和载体完全溶解，充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得桑椹有效提取物PVP包合物。
实施例 20：环糊精包合物
将β-环糊精与 1-5 倍水研匀,加桑椹有效提取物( 水难溶性的应先溶于少量有机溶剂中) 继续充分研磨至成糊状物, 低温干燥即得环糊精包合物。
实施例21：分散片
1. 桑椹有效提取物分散体的制备，精密称取桑椹提取物、Vc，加入处方量的十二烷基硫酸钠，用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70℃的温度下蒸干，粉碎，过100目筛；
将第一步中的桑椹有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮，预胶化淀粉，用适量的浓度为70%乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min 后，60℃烘箱烘干45min，16目筛整粒，加入处方量的滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片即得。
Claims (11)
1.一种桑椹提取物，其特征为桑椹经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100:5的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比为100:8的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，用体积比为100:8的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物；或先用体积比为100:10石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比为100:14的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，用100:14石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物。
2.如权利要求1所述桑椹提取物，其特征为，提取所用溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇或95%乙醇。
3.如权利要求1所述桑椹提取物，其特征为桑椹经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱，，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物；或先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物。
4.如权利要求1-3任何一项所述的一种维吾尔药桑椹提取物，其特征为，用于洗脱的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂的洗脱体积为2-50倍柱体积。
5.如权利要求1所述提取物的制备方法，其特征为：桑椹经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱2-50倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物；以上条件最优为先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:5，体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:8，体积比）洗脱20倍柱体积；或先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱2-50倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物；以上条件最优为先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:10，体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14，体积比）洗脱20倍柱体积。
6.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药桑椹提取物和药学上可接受的载体。
7.一种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的桑椹提取物或权利要求6所述的药物组合物。
8.如权利要求7所述的药物制剂，其特征在于，所述的制剂为固体分散体、环糊精包合物、分散片。
9.如权利要求1-5任何一项所述提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求7所述的药物制剂在制备α-葡萄糖苷酶抑制活性药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的α-葡萄糖苷酶抑制活性，可用于降血糖、减肥、降血脂、治疗糖尿病等方面的医药用途。
11.如权利要求1-5任何一项所述的桑椹提取物，其特征在于，用TLC法检测，其色谱条件为：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，石油醚：乙酸乙酯：丙酮=,1:1:1， 显色方法：香草醛浓硫酸显色。
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| CN103610750A (zh) * | 2013-11-07 | 2014-03-05 | 李刚 | 一种葡萄糖苷酶抑制物的提取并分离纯化的方法 |
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| Title |
|---|
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