CN1686248A - 一种具降血压作用的桑椹、桑椹汁、桑椹活性提取物及其制备方法、用途 - Google Patents

Abstract

本发明是一种具降压作用的桑椹，属食品、保健食品和医药技术领域，具体为一种桑椹或从桑椹制备的桑椹汁和桑椹活性提取物及其制备方法和用途。本发明表明，桑椹、桑椹汁或桑椹活性提取物对自发性高血压大鼠具有明显的降压作用，用本发明方法获得的桑椹系列药物制剂或系列功能性食品可用于制备预防和治疗高血压及相关心脑血管疾病，以及由高血压引起的眩晕耳鸣、心悸失眠等症，本发明原料来源广泛，制备方法易产业化，预防和治疗高血压等相关心脑血管疾病效果良好。

Description

一种具降血压作用的桑椹、桑椹汁、桑椹活性提取物及其制备方法、用途

技术领域

本发明属医药、食品、保健品等技术领域，具体涉及桑椹、桑椹汁和一种桑椹活性提取物及其制备方法及其在食品、保健食品和医疗药品方面的用途。

技术背景

桑椹，又称桑椹子、桑果、桑枣等，为桑科桑属植物桑Morus alba L.、华桑M.cathayanaHemsl.、黑桑M.nigraLinn.等植物的成熟果穗，即可食用，又作药用，具有补血滋阴，生津润燥的功效，用于眩晕耳鸣、心悸失眠、须发早白、津伤口渴，血虚便秘等症。桑椹中含有大量的还原糖、有机酸、维生素、氨基酸、桑色素及磷脂等营养成分，以及黄酮、生物碱等生物活性分子。现代药理研究表明桑椹及其制剂具有明显的调节免疫、抗衰老、促进造血细胞生长、降血糖、降血脂、保肝等药理活性。但是关于桑椹的降血压药理活性及活性部位和活性成分的作用、提取方法未见文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供桑椹、桑椹汁、桑椹活性提取物及其制备方法。

本发明的目的在于提供桑椹、桑椹汁、桑椹活性提取物在食品、保健食品和医疗药品方面的用途。

本发明所提供的桑椹，来源于桑科桑属的任一种或变种植物的果实。有关桑科桑属植物的科学定义和范畴，参见中国植物志第23卷第1册(中国植物志编委会编，北京：科学出版社，1998)或中国桑树品种志(中国农业科学院桑业研究所主编，北京：农业出版社，1993)。其中优选的是桑属桑组的任一种或变种的果实。

本发明所提供的桑椹活性提取物，是用上述新鲜或干燥的桑椹经提取、纯化、浓缩、干燥等步骤所制备的活性部位。

上述活性部位提取的活性物质主要含oxyresveratrol(1)、桑色素(2)、二氢桑色素(3)、染料木素(4)、山柰酚(5)、香柑内酯(6)及若干种花青素(7-11)等黄酮类成分，其结构式如下(见实施例4，5)：

                 R₁     R₂   R₃

7.Delphilidin    OH      OH    OH

8.Cyanidin       OH      OH    H

9.Petunidin      OH      OH    OCH₃

10.Pelargonidin  H       OH    H

11.Peonidin      OCH₃   OH    H

本发明还提供了一种桑椹活性部位的最佳制备方法，其具体步骤为：新鲜或干燥的桑椹，以2-20重量倍量的乙醇、甲醇或丙酮提取多次，合并提取液，离心、过滤、纯化即可。

本发明中，将成熟桑椹以20-100wt％的乙醇、甲醇或丙酮提取1-4次，每次1.5-3.0小时效果更好。

上述提取中滤液通过低极性或非极性的大孔吸附树脂(如D101、Diaion HP-20等)进行吸附，待全部提取液通过树脂柱后，先以2-3倍柱床体积的纯净水冲洗，再以2-3倍柱床体积的20wt％的乙醇冲洗，然后以50-75wt％的乙醇洗脱，收取洗脱液，此洗脱液中的内含物即为桑椹活性提取物，可制成各种制剂或复方制剂。

本发明中，从大孔树脂获得的洗脱液经真空回收乙醇后获得浓缩液。将该洗脱液浓缩后直接配制成口服液等液体制剂，或通过喷雾、真空或冷冻干燥法制备成粉末，供制备片剂，胶囊剂，合剂等固体制剂之用(见实施例3，8，9)。

本发明中，所获得的浓缩液通过喷雾、真空或冷冻干燥法制备成粉末。

本发明可将鲜桑椹用酿制法制得桑椹蜜饯，直接可食用。

本发明还提供了一种桑椹汁的最佳制备工艺，其具体方法和步骤为：取刚刚采摘的新鲜桑椹，先用压榨机压榨收取果汁1，残渣用3倍重量的纯净水分散并充分搅拌后压榨过滤，收取果汁2。合并果汁1和果汁2，充分搅拌均匀后加入一定量的澄清剂，如101果汁澄清剂，ZTC1+1天然澄清剂等，继续充分搅拌均匀，静置4小时以上使其充分澄清后用压榨法、抽滤法或离心过滤法过滤，滤液经灭菌后获得澄清桑椹原汁，该原汁可在低温下存储6个月以上。该桑椹原汁可进一步制备成饮料或口服液(见实施例2，6，7)。

本发明中，将经压榨所获得的桑椹汁充分搅拌均匀后加入澄清剂，继续充分搅拌均匀，静置2-4小时使其充分澄清。澄清剂如101果汁澄清剂，ZTC1+1天然澄清剂等。

本发明中，澄清液用压榨法或抽滤法或离心过滤法过滤，滤液经灭菌后获得澄清桑椹原汁。

本发明中，桑椹、桑椹汁或桑椹活性提取物可单独使用，也可与药物或食物配伍。

本发明中，若是配伍复方制剂是煎剂、酒剂、冲剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、糖浆、膏滋之任一种，适合不同人群的需求。

本发明中，桑椹、桑椹汁及桑椹活性提取物作为制备治疗高血压药物的应用，效果良好，无副作用。

本发明提出所述桑椹、桑椹汁和桑椹活性提取物的用途，三者均可以单独用于制备成食品、功能性保健食品或医疗药品，也可以与其它任何中西药物或食物，尤其是与某些具有降血压、降血脂、补血养阴、平肝潜阳的药物或食物配伍，用于制备药物、功能性保健食品或食品。

单独由桑椹、桑椹汁或桑椹活性提取物制备的药物、功能性保健食品和食品，或由桑椹、桑椹汁及桑椹活性提取物分别与其它中西药物或食物组成的复方药物、功能性保健食品和食品，均具有明显的降血压活性，可用于预防和治疗高血压及相关心脑血管疾病，以及由高血压引起的眩晕耳鸣、心悸失眠等症。

将桑椹用作药物、功能性保健食品和食品，一般可取鲜果直接食用，也可提供烘干、风干、冻干成桑椹干、或蜜酿成桑椹蜜饯后食用，或将鲜桑椹或桑椹干用水煎、酒泡后取汁饮用。此外，还可以以桑椹为主，配伍其它中西药物或食品，如罗布麻、钩藤、山楂、银杏叶、丹参、芹菜等，制成口服液、胶囊剂、片剂、颗粒剂等。

由桑椹汁制备药物、功能性保健食品和食品时，一般可由桑椹原汁直接用纯净水或酒、食用乙醇适当稀释后，加入一定量的调味剂如糖、蜂蜜、香精等，再经过滤、灌装、灭菌，制备成单纯的桑椹汁或其它液体制剂如口服液、糖浆等。也可以由桑椹原汁与山渣汁、芹菜汁、梨汁、马蹄汁、橙汁等天然果汁、或加入特定的维生素、矿物质、氨基酸、脂肪酸等，按一定的比例混合后配成复合桑椹果汁或其它液体制剂如口服液、糖浆等。

由桑椹活性提取物，或包含该提取物的药物和食物组合，用作食品、药品或保健食品时，可以采用本专业人员所熟知的方法和技术，直接和添加必要的辅料，制成胶囊剂、片剂、注射剂、颗粒剂、口服液、糖浆、膏滋、酒剂、饮料、果汁、速溶茶、冲剂等多种制剂成品。当本发明的桑椹活性提取物或其组合物被制成片剂时，它含有的赋型剂有：稀释剂，如淀粉、糊精、乳糖等；润湿剂或粘合剂，如：水、乙醇、淀粉浆、糊精、明胶浆、低取代羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂，如：干燥淀粉、泡腾崩解剂、表面活性剂等；润滑剂，如滑石粉、硬脂酸镁、液体石蜡、聚乙二醇6000或4000等。当本发明的桑椹活性提取物或其组合物被制成胶囊剂时，它含有的赋型剂有：稀释剂，如：淀粉、糊精、乳糖、氧化镁、碳酸镁等；润湿剂或粘合剂，如：水、乙醇、淀粉浆、糊精浆、明胶浆、低取代羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂，如：干燥淀粉、泡腾崩解剂、表面活性剂等；并选用明胶硬胶囊壳或软胶囊壳。当本发明的桑椹活性提取物或其组合物被制成口服液或饮料时，它含有的赋型剂有：蔗糖水溶液、矫味剂；助悬剂，如羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素等；防腐剂，如尼伯金乙酯或尼伯金甲酯、丙二醇、苯甲酸、山梨醇等。

本发明产物来源广、成本低、毒性小，由于桑椹是可食物，因此与其它食物、药物配伍使用，提高了保健品、药品的效果。以动物实验为例，已说明其对高血压有明显的降压效果，因此在预防、辅助治疗高血压病症上起着重要作用，有良好的应用前景。

附图说明

图1为桑椹活性提取物的HPLC化学指纹图谱。

具体实施方式

本发明对上述桑椹、桑椹汁和桑椹活性提取物进行了动物实验，表明三者均无毒、无副作用，对自发性高血压大鼠具有明显的降压作用。具体试验结果如下：

试验例1：急性毒性实验

小鼠急性毒性试验结果表明，以最大浓度，最大给药容积灌胃给予小鼠，其最大给药量为65.0g/kg，约为临床推荐剂量的120倍。

试验例2：桑椹汁对自发性高血压大鼠的降血压作用

(1)实验目的

研究单次口服及连续3天多次口服对自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响。

(2)试验材料

①受试样品

名称：桑椹汁

来源：复旦大学天然药物中心

批号：SS02011

形状：深棕色液体

②试验动物

名称：自发性高血压大鼠

性别：雄性

体重：220---250g

来源：上海高血压研究所

合格证书：沪医实验动物准字第30-35号

饲养：饲养于正压净化通风动物房，室温25±2℃，自由进食与饮水。

③试验仪器

CRS-III型电脑大鼠心率血压仪(上海高血压研究所)；101-2电热恒温箱(上海实验仪器厂)。

④实验方法

试验动物购入后，将大鼠放入测压仪中进行训练2周，并在第二周起隔日测定血压。测压前动物放入37±1℃电热箱内加温，15分钟后用CRS-III型电脑大鼠心率血压仪测定大鼠尾动脉收缩压(SBP)和舒张压(DBP)。将自发性高血压大鼠均分为2组，每组8只，分别为阴性对照组，受试药物桑椹提取液组，给药体积为4ml/只，阴性对照组口服同体积1％西黄蓍胶。每天一次，连续3天，测定给药前及给药后4小时的血压。

(3)实验结果

①统计检验

试验数据以平均值±标准差表示。统计检验以各组给药后时间点与给药前差值的平均值与阴性对照组同时间点的差值进行比较，以双测分布的组间t测验计算其差异的显著性。

②试验结果

桑椹提取液首次口服后，血压迅速下降，在4小时有明显降压作用，收缩压和舒张压下降值分别为-29.0±10.8mmHg和-35.8±9.9mmHg，至24小时仍分别有-23.8±16.5mmHg和-26.8±20.1mmHg，与阴性对照组比较差异非常显著(P＜0.01)；24小时后再次口服，给药4小时的收缩压和舒张压下降值明显降低，分别为-2.8±9.2mmHg和-3.0±12.4mmHg；但在48小时仍有下降，与试验开始给药前的差值分别为-34.0±7.8mmHg和-35.0±11.6mmHg；48小时时给药，情况与第24小时给药时相似，给药4小时血压没有明显下降。阴性对照组在48小时内血压基本稳定，同给药前也无显著差异。结果见表1。

试验结果表明，桑椹汁样品有明显降压作用，作用持续时间很长，但降压作用有一定极限，故给药第2和第3天的急性降压作用小于首次给药，但仍有少量的下降。

              表1桑椹汁口服给药对自发性高血压大鼠血压的影响

	血压(mmHg，±SD，n＝8只/组)
		0小时                      24小时                     48小时                       差值
	前      后      差      前      后      差      前      后      差      0-24      0-48小小时      时
		样  收缩压品  舒张压	200±      171±       -29±        176±       174±       -2.8±       166±       161±9  -5.3±        -24±            34±2      10      11**    16      10      9.3      7              11       16**      8**178±      142±       -36±        151±       148±       -3.0±       143±       131±3  -12±11   27±            -35±4       8      10**    19      7       12       9                       21**      12**
对  收缩压照  舒张压	184±      183±       -0.6±      190±       193±       2.6±         185±       184±       -0.6±         6.6±            1.0±10     11      3.4     4       6      3.5      9       10      4.7      6.4       3.7158±      158±       0.2±       168±        171±      3.0±          158±       157±       -1.2±         10.2±          0.6±1311     9       3.3     3       3      2.6      17      17      11       8.4

*P＜0.05，**P＜0.01与阴性对照组比较

试验例3.桑椹汁对自发性高血压大鼠血压、血流动力学及心动周期的影响

(1)实验目的：

采用颈动脉实时血压记录法，进一步测试桑椹汁对自发性高血压大鼠(SHR)血压、血流动力学及心动周期的影响。

(2)实验原理

取体重约200-300g的雄性SHR，用pentobarbital麻醉后，直接在颈动脉插入套管，描记血压曲线。套管连接的注射筒与多功能生理记录仪相连接，仪器校正启动后，测定大鼠的血压、血流动力学、心动周期等指标。

(3)实验内容

选10-12周龄自发高血压大鼠(SHR)8只，体重180-220克，雌雄各半。给药前先测定血压、血流动力学、心动周期等指标。然后，每天每只大鼠口服(灌胃)桑椹汁4ml，第六天给药后4小时，再测定血压、血流动力学、心动周期等指标。与给药前比较。

(4)实验结果：见表2。

表2.桑椹汁对自发性高血压大鼠血压、血流动力学及心动周期的影响

No.	给药前后	SBP(mmHg)	SBP(mmHg)	SBPV	DBPV	HP(ms)	HPV	MBP	MBPV
										1	给药前	178.346	128.776	6.865	4.249	162.337	6.652	149.274	5.387
给药6天后	149.182	103.192	5.872	5.372	158.243	6.187	153.236	5.512
									2		给药前	162.262	116.558	7.060	4.620	162.715	7.812	135.462	6.376
给药6天后	151.976	105.504	5.018	3.492	148.620	5.462	128.776	4.282
										3	给药前	182.052	124.236	7.246	4.189	158.237	6.511	140.263	4.996
给药6天后	156.316	103.425	5.912	5.203	152.644	6.532	145.127	5.667
									4		给药前	182.315	123.569	7.183	4.651	164.285	6.831	155.226	6.035
给药6天后	159.274	109.256	6.534	5.073	168.723	5.924	157.326	5.872
										5	给药前	175.689	125.346	6.543	4.168	160.152	6.541	146.369	5.187
给药6天后	146.013	101.287	5.925	5.216	156.946	6.453	148.542	5.258
									6		给药前	172.745	118.136	6.859	4.857	165.872	7.548	138.572	6.158
给药6天后	158.634	103.597	6.012	3.864	154.365	5.697	135.324	4.693
										7	给药前	181.765	122.876	7.065	4.256	156.129	6.453	141.236	5.109
给药6天后	158.324	100.562	6.128	5.067	154.812	6.387	145.697	5.672
									8		给药前	183.958	124.638	7.203	4.753	165.478	6.745	156.389	5.874
给药6天后	159.315	106.423	6.982	5.109	169.134	6.012	158.092	6.021

上述实验结果表明，给自发性高血压大鼠连续给予桑椹汁六天后，可使舒张压平均下降22.512mmHg，收缩压平均下降18.861mmHg。

(5)结论

桑椹汁对自发性高血压大鼠有一定的降压作用；对自发性高血压大鼠血流动力学的影响无明显差异；对自发性高血压大鼠的心动周期有缩短作用，但不明显；对自发性高血压大鼠的心率加快也不明显。

试验例3.桑椹活性提取物对自发性高血压大鼠血压的影响

(1)试验目的

观察和比较桑椹活性提取物(主要为黄酮类)和纯化过程中去除的杂质(主要为糖类)对自发性高血压大鼠(SHR)多次口服给药的治疗作用。

(2)材料与方法

①受试样品

名称：桑椹活性提取物(主要为黄酮类)和纯化过程中去除的杂质(主要为糖类)

样品制备：桑椹鲜果2kg，经95％乙醇提取，真空浓缩得340g浸膏。取其中的200g进行Diaion HP-20树脂柱层析。水及20％丙酮洗脱浓缩得杂质部位189.42g(SS02011-t)，70％丙酮洗脱浓缩得桑椹活性提取物5.60g(SS02011-s)。

批号：SS02011-t，SS02011-s

形状：浅棕色和深棕色固体

配制：将批号SS02011-t、SS02011-s的样品用蒸馏水稀释至0.2g/ml和0.05g/ml。

②试验动物

名称：自发性高血压大鼠

性别：雄性

体重：220---250g

来源：上海高血压研究所

合格证书：沪医实验动物准字第30-35号

饲养：饲养于正压净化通风动物房，室温25±2℃，自由进食与饮水。

③试验仪器

CRS-III型电脑大鼠心率血压仪，上海高血压研究所制造。

101-2电热恒温箱，上海实验仪器厂制造。

④实验方法

试验动物购入后，将大鼠放入测压仪中进行训练2周，并在第二周起隔日测定血压。测压前动物放入37±1℃电热箱内加温，15分钟后用CRS-III型电脑大鼠心率血压仪测定大鼠尾动脉收缩压(SBP)和舒张压(DBP)。将自发性高血压大鼠均分为2组，每组6只，给药体积为2ml/只。观察给药前、给药后第3天的血压变化，并在给药前和给药后4小时测量记录血压。

(3)试验结果

试验结果见表3-6。

试验结果显示：按照上述方法制备的桑椹活性提取物具有明显降压作用，而制备过程中去除的杂质没有降压作用。

表3桑椹杂质部位(SS02011-t)对自发性高血压大鼠收缩压的影响(n＝6)

动物号	收缩压(mmHg)
				给药前	第3天给药4小时后
	测定值	差值
			1		215	219	4
2	218	219		1
			3		230	218	-12
4	221	225		4
			5		232	228	-4
6	211	218		7
			均值		221	221	0.0
s	8	4		7.0

表4桑椹杂质部位(SS02011-t)对自发性高血压大鼠舒张压的影响(n＝6)

动物号	舒张压(mmHg)
				给药前	第3天给药4小时后
	测定值	差值
			1		163	159	-4
2	168	168		0
			3		184	179	-5
4	166	170		4
			5		185	199	14
6	171	179		8
			均值		173	176	2.8
S	9	14		7.3

表5桑椹活性部位(SS02011-s)对自发性高血压大鼠收缩压的影响(n＝6)

动物号	收缩压(mmHg)
				给药前	第3天给药4小时后
	测定值	差值
			1		223	198	-25
2	208	174		-34
			3		221	186	-35
4	219	202		-17
			5		218	195	-23
6	225	192		-33
			均值		219	191	-27.8
S	6	7.2		6.2

表6桑椹活性部位(SS02011-s)对自发性高血压大鼠舒张压的影响(n＝6)

动物号	舒张压(mmHg)
				给药前	第3天给药4小时后
	测定值	差值
			1		168	136	-32
2	169	135		-34
			3		161	130	-31
4	175	151		-24
			5		178	142	-36
6	172	145		-27
			均值		171	140	-30.7
S	6	6.2		3.4

实施例1桑椹果酒的制备

新鲜桑椹100g，依个人爱好用黄酒、白酒或葡萄酒500mL浸泡3天后饮用。实施例2桑椹原汁的制备

新鲜桑椹10Kg，先直接用压榨机压榨得果汁(1)6.8L，残渣用40L纯净水分散，充分搅拌后压榨过滤，收取果汁(2)40L。合并果汁(1)和果汁(2)，加入适量的纯净水调配成总量50L，充分搅拌均匀后加入5％的101果汁澄清剂，继续充分搅拌均匀，静置6小时，离心过滤，滤液经灭菌后获得澄清桑椹原汁。

实施例3桑椹活性部位的制备

桑椹鲜果2Kg，用20Kg 95％乙醇提取2次，每次2小时，真空回收乙醇至无醇味，浓缩液再用热水调配成50Kg，静置过夜后离心过滤。滤液加入D101大孔树脂柱(2Kg)进行吸附。待全部提取液通过树脂柱后，依次用10Kg的水及10Kg 20％的乙醇洗脱去除杂质，最后用15Kg 75％的乙醇洗脱。洗脱液经浓缩和真空干燥后得桑椹活性提取物60.0g，得率为3％。

实施例4桑椹活性部位化学成分的分离鉴定

由实施例2所得的桑椹活性提取物，用氯仿萃取时，母液中析出淡黄色沉淀21.0g。取2.5g沉淀进行硅胶柱层析(C-1柱)，以氯仿∶甲醇9∶1洗脱，得到七个组分，组分5(fr.17-23)继续进行硅胶柱层析(C-1-1柱)，以氯仿∶甲醇9∶1洗脱，得化合物1(493mg)及化合物2(180mg)。

合并乙酸乙酯与正丁醇部分(32.86g)，依次用Diaion HP-20、Toyopearl、MCI、ODS及硅胶柱层析反复分离，得到化合物3～6共4个化合物。

化合物1为淡黄色结晶，由EIMS测得m/z[M]⁺244，通过¹H NMR谱分析，确定分子式C₁₄H₁₂O₄。从¹HNMR谱可以得到以下结构信息：1)低场区域存在四个酚羟基信号，δ8.56(1H，s)，8.37(1H，s)，由δ8.16(2H，s)推断有两个酚羟基化学环境相同；2)δ6.89(1H，d，J＝16.5Hz)，7.34(1H，d，J＝16.5Hz)，由其偶合常数推断存在一个反式双键，且位于较低场，可能与苯环有共轭效应存在；3)芳香区域还有六个氢信号，δ6.24(1H，t，J＝2.1Hz)，6.53(2H，d，J＝2.1Hz)三个芳氢成一个AB₂偶合系统，δ6.39(1H，dd，J＝2.4，8.5Hz)，6.44(1H，d，J＝2.4Hz)，7.41(1H，d，J＝8.5Hz)三个芳氢成一个ABX偶合系统。由此推断该化合物是一个二苯乙烯类化合物。通过查阅文献^[13]核对¹H和¹³C NMR谱数据确定化合物1为已知化合物oxyresveratrol。

化合物2为黄色无定形粉末，由EIMS测得m/z[M]⁺302，通过分析¹H NMR谱，推定分子式为C₁₅H₁₀O₇。¹HNMR谱显示以下含氢官能团信息：1)5个酚羟基，其中一个与羰基形成分子内氢键，出现在最低场δ12.70，另外4个酚羟基为δ9.47(4H，br s)；2)参照化合物3，芳香区域存在一个苯环上的ABX体系δ7.49(1H，d，J＝8.6Hz)，6.30(1H，br d，J＝8.6Hz)和6.38(1H，br s)；3)2个间位偶合的芳质子信号δ6.17(1H，br s)，6.14(1H，brs)。与文献((上海药物研究所，1981；Ternai and Markhan，？)对照确定化合物2为桑色素(morin)。

化合物3为白色无定形粉末，由EIMS测得m/z[M]⁺304，通过分析¹H NMR谱，确定分子式C₁₅H₁₂O₇。¹H NMR显示以下含氢官能团：1)最低场存在5位羟基信号，与羰基形成分子内氢键，δ11.73；2)3个酚羟基信号δ9.62(1H，s)，8.45(1H，s)，8.37(1H，s)；3)存在一个苯环上的ABX体系δ7.33(1H，d，J＝8.3Hz)，6.44(1H，dd，J＝1.8，8.3Hz)，6.48(1H，d，J＝1.8Hz)，为黄酮类化合物2′、4′二取代的B环；4)2个间位偶合的芳质子δ5.94(1H，d，J＝1.5Hz)，5.99(1H，d，J＝1.5Hz)，为黄酮化合物的6位和8位氢；5)δ5.50(1H，d，J＝11.4Hz)，4.88(1H，dd，J＝11.4，3.6Hz)，4.69(1H，br s)，推断为二氢黄酮的2位、3位氢和3位羟基信号，从2位和3位氢的偶合常数判断它们为反式偶合的2个邻位氢。通过以上信息，推断该化合物为2′，4′，3，5，7-五羟基二氢黄酮。查阅核对文献(上海药物研究所，1981；Wenker and Gottlieb，1977)确定化合物3为二氢桑色素(dihydromorin)。

化合物4：浅黄色无定形粉末；¹H NMR(acetone-d₆，500MHz)δ13.04(1H，s，OH-5)，8.17(1H，s，H-2)，7.46(2H，d，J＝8.6Hz，H-2′，6′)，6.91(2H，d，J＝8.6Hz，H-3′，5′)，6.42(1H，d，J＝1.8Hz，H-8)，6.29(1H，d，J＝1.8Hz，H-6)；EIMS m/z270[M]⁺(100)，153(42)，118(14)。确定化合物4为染料木素(Genistein)。

化合物5：浅黄色无定形粉末；¹H NMR(acetone-d₆，500MHz)δ12.17(1H，s，OH-5)，9.05(3H，br s，OH-3，5，7)，8.16(2H，d，J＝8.6Hz，H-2′，6′)，7.02(2H，d，J＝8.6Hz，H-3′，5′)，6.54(1H，br s，H-8)，6.28(1H，br s，H-6)；EIMS m/z 286[M]⁺(100)，258(12)，229(11)，213(8)，153(14)，121(38)。确定化合物5为山柰酚(Kaempferol)。

化合物6：无色无定形粉末；¹H NMR(acetone-d₆，500MHz)δ8.21(1H，d，J＝10.0Hz，H-4)，7.86(1H，d，J＝2.5Hz，H-2’)，7.32(1H，dd，J＝1.0，2.5Hz，H-3’)，7.16(1H，d，J＝1.0Hz，H-8)，6.25(1H，d，J＝10.0Hz，H-3)，4.34(3H，s，OCH₃)；

¹³C NMR(acetone-d₆，125MHz)：δ160.8(C-2)，159.3(C-7)，153.8(C-9)，150.8(C-5)，146.2(C-2’)，139.9(C-4)，113.5(C-6)，113.3(C-3)，107.0(C-10)，106.3(C-3’)，93.9(C-8)，60.8(OCH₃)；EIMS m/z 216[M]⁺(100)，201(34)，188(11)，173(54)，

145(19).确定化合物6为香柑内酯(Bergapten)。

实施例5桑椹活性提取物的化学指纹图谱研究

(1)仪器与方法：

HPLC-MS及HPLC-DAD系统由Agilent1100系列高效液相色谱仪(including avacuum degasser，a quaternary pump，an autosampler，and a diode array detector)；ThermoFinnigan TSQ Quantum MS-MS配置ESI离子源；控制软件为Xcalibur(Reversion 1.1)。

色谱条件为：Agilent Zorbax SB C18(50mm×2.1mm)column，流动相：乙腈-H₂O＝2∶98(A)，乙腈-H₂O(90∶10)(B)；梯度洗脱：0～20min，10％B～100％B，20～30min，100％B；流量：0.2mL/min；进样量：5μL，总时间：30min。

质谱参数如下：

ScanTime(s)	参数Q1 PeakWidth	SprayVoltage(v)	Sheathgas	Aux gas	CapillaryTemp(℃)	Tube lens(V)	SourceCID
								0.5	0.7	3900	30	5	350	79	10

(2)结果分析与判断：

HPLC色谱图如图1所示。色谱图中各色谱峰对应化合物的确认主要依据保留时间及其对应的质谱和紫外光谱特征，并对照文献(Paola Dugo et al.，2001)。分析结果见表7。

         表7桑椹活性提取物的化学指纹特征

色谱峰编号	保留时间(RT)	分子离子峰(M+)	化合物
				369131516222427283335	7.678.629.7311.5412.3712.6217.9019.6621.2021.2223.7025.14	449433465/611419595414317271301287303	Cy-3-glcPg-3-glcPg-3-rutCy-3-sopCy-3-araCy-3-rutβ-sitosterolptpgpncydp

注：pt，Petunidin；pg，Pelargonidin；pn，Peonidin；dp，Delphilidin；cy，Cyanidin；glc，glucoside；sop，sophoroside；ara，arabinoside；rut，rutinoside.

实施例6桑椹纯汁饮料的制备

处方：桑椹原汁 50L

      蜂蜜     10L

      纯净水   40L

制法：将处方中的3种材料混合均匀，加入100g苯甲酸钠，充分溶解后过滤澄清，澄清液分装成250mL，高压灭菌，即得。规格：每升相当于100g鲜桑椹，每瓶(250mL)相当于25g鲜桑椹。

实施例7复合桑椹饮料的制备

处方：桑椹原汁 50L

      山楂汁   50L(由10Kg鲜山楂加水压榨而成)

      蜂蜜     20L

      纯净水   80L

制法：将处方中的3种材料混合均匀，加入200g苯甲酸钠，充分溶解后过滤澄清，澄清液分装成250mL，高压灭菌，即得。规格：每升相当于50g鲜桑椹和50g鲜山楂，每瓶(250mL)相当于25g鲜桑椹和25g鲜山楂。

实施例8桑椹胶囊的制备

处方：桑椹活性提取物500g

制法：将上述材料粉碎成细粉，装入0号胶囊，共1000粒，即得。每粒含桑椹活性提取物0.5g。

Claims (17)

1、一种具降血压作用的桑椹，其特征在于，该桑椹来源于桑科桑属任一种植物的成熟果穗。

2、根据权利要求1所述的桑椹，其特征在于，该桑椹是其活性提取物。

3、根据权利要求2所述的桑椹活性提取物，其特征在于，该提取物含oxyresveratrol、桑色素、二氢桑色素、染料木素、山柰酚、香柑内酯及花青素黄酮类成分。

4、根据权利要求2-3所述的活性提取物的制备方法，其特征在于，将成熟桑椹以2-20重量倍量的乙醇、甲醇或丙酮提取，合并提取液，离心、过滤、纯化即可。

5、根据权利要求4所述的活性提取物的制备方法，其特征在于，将成熟桑椹以20-100wt％的乙醇、甲醇或丙酮提取1-4次，每次1.5-3.0小时。

6、根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，滤液通过低极性或非极性的大孔吸附树脂进行纯化，其具体步骤为：待全部提取液通过树脂柱后，先以纯净水冲洗，再以乙醇收取洗脱液。

7、根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，从大孔树脂获得的洗脱液经真空回收乙醇后获得浓缩液。

8、根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所获得的浓缩液直接配制成液体制剂。

9、根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所获得的浓缩液通过喷雾、真空或冷冻干燥法制备成粉末。

10、根据权利要求1所述的桑椹，其特征在于，该桑椹是酿制法制成桑椹蜜饯。

11、根据权利要求1所述的桑椹，其特征在于该桑椹是榨制法制成的桑椹汁。

12、根据权利要求11所述的桑椹汁的制备方法，其特征在于，桑椹先用压榨机压榨收取果汁，残渣用1-4倍重量的纯净水或含醇溶液分散并充分搅拌后压榨过滤，收取果汁，合并两次果汁，得桑椹汁。

13、根据权利要求12所述的桑椹汁的制备方法，其特征在于，经压榨所获得的桑椹汁充分搅拌均匀后加入澄清剂，继续充分搅拌均匀，静置2-4小时使其充分澄清。

14、根据权利要求12-13所述的桑椹汁的制备方法，其特征在于，澄清液用压榨法或抽滤法或离心过滤法过滤，滤液经灭菌后获得澄清桑椹原汁。

15、根据权利要求1、2、11所述的桑椹、桑椹汁及桑椹活性提取物的应用，其特征在于该桑椹、桑椹汁或桑椹活性提取物可单独使用或与药物或食物配伍。

16、根据权利要求15所述的应用，其特征在于，该配伍的复方制剂是煎剂、酒剂、冲剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、糖浆、膏滋之任一种。

17、根据权利要求1、2、11所述的桑椹、桑椹汁及桑椹活性提取物作为制备治疗高血压药物的应用。