CN104628725A - 一种高纯度钩藤碱单体的制备方法 - Google Patents

一种高纯度钩藤碱单体的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104628725A
CN104628725A CN201510042326.5A CN201510042326A CN104628725A CN 104628725 A CN104628725 A CN 104628725A CN 201510042326 A CN201510042326 A CN 201510042326A CN 104628725 A CN104628725 A CN 104628725A
Authority
CN
China
Prior art keywords
rhynchophylline
uncarine
extraction
preparation
high purity
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201510042326.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104628725B (zh
Inventor
张清海
林昌虎
谭红
林绍霞
洪江
罗文敏
蒋影
张继东
宋光林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GUIZHOU ACADEMY OF TESTING AND ANALYSIS
Original Assignee
GUIZHOU ACADEMY OF TESTING AND ANALYSIS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GUIZHOU ACADEMY OF TESTING AND ANALYSIS filed Critical GUIZHOU ACADEMY OF TESTING AND ANALYSIS
Priority to CN201510042326.5A priority Critical patent/CN104628725B/zh
Publication of CN104628725A publication Critical patent/CN104628725A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104628725B publication Critical patent/CN104628725B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D471/20—Spiro-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

本发明涉及一种高纯度钩藤碱单体的制备方法，属于中药活性成分分离纯化技术领域。它包括以下步骤a、将钩藤碱提取物上样于硅胶柱色谱，采用卤代烷烃-醇系统进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，得钩藤碱粗品；b、将所述钩藤碱粗品溶解液上样于高速逆流色谱仪，即分别得钩藤碱和去氢钩藤碱单体。本发明的优点是：能有效制备出纯度在96％以上的钩藤碱和去氢钩藤碱两种单体。

Description

一种高纯度钩藤碱单体的制备方法
技术领域
本发明属于中药活性成分分离纯化技术领域，具体涉及一种高纯度钩藤碱单体的制备方法。
背景技术
钩藤为茜草科植物钩藤Uncaria rhynchophylla(Miq.)Miq.ex Havil，大叶钩藤U.macrophylla Wall.，毛钩藤U.hirsuta Havil.，华钩藤U.sinensis(Oliv.)Havil.，或无柄果钩藤U.sessilifructus Roxb.的干燥带钩茎枝。钩藤性微寒，味甘，归肝、心包经，可清热平肝，熄风定惊，具有清热镇惊、平肝熄风的功效，药理研究表明钩藤具有显著的降压作用。
钩藤中主要有效成分为生物碱。其中钩藤碱占总碱的28.9％，毒性低，副作用小，具有良好的药用疗效。近年来其药理研究报道大致可分为以下几个方面：
1、对心脑血管系统的药理作用：降压作用、抗心律失常、对脑缺氧缺血的保护作用、逆转心肌重构等。
2、对中枢神经系统的作用：镇静、抗惊厥、抗癫痫、对脑的保护、对神经细胞等的作用。
3、对血液系统的作用：钩藤碱有明显的抗血小板聚集和抗血栓形成的作用。
4、抗癌作用。
目前国内外多采用萃取、硅胶柱色谱和制备液相等传统方法分离纯化钩藤碱单体，过程复杂、分离效率低、分离时间长、溶剂消耗量大。在我国，钩藤的开发利用主要是制成钩藤片、钩藤茶口服液等单方制剂，或钩藤与天麻等多种中药组成的复方制剂。中国专利CN102311435A、CN102093359A等中描述的技术得到的产品均只是一种钩藤碱单体，目前尚未见到同时制备出两种高纯度钩藤碱单体的报道。
基于上述情况，我们发明了高纯度钩藤碱单体的分离制备技术，采用硅胶柱色谱进行富集，然后利用pH区带精制逆流色谱技术一步分离就可得到纯度大于96％的钩藤碱和去氢钩藤碱单体。
发明内容
本发明的目的是提供一种高纯度钩藤碱单体的制备方法，该制备方法能有效制备出纯度在96％以上的钩藤碱和去氢钩藤碱两种单体。
本发明所采取的技术方案是一种高纯度钩藤碱单体的制备方法，包括以下步骤：
a、将钩藤碱提取物上样于硅胶柱色谱，采用卤代烷烃-醇系统进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，得钩藤碱粗品；
b、量取惰性溶剂、酯、醇和水，混合后，得分离溶剂；将所述钩藤碱粗品用加有三乙胺溶液的所述分离溶剂进行溶解，得钩藤碱粗品溶解液；所述分离溶剂静置分层，上层液加入三乙胺溶液备用，下层液加入盐酸溶液备用；将所述钩藤碱粗品溶解液上样于高速逆流色谱仪，以加有三乙胺溶液的上层液作为固定相，加有盐酸溶液的下层液作为流动相，对所述钩藤碱粗品溶解液进行分离纯化，即分别得钩藤碱和去氢钩藤碱。
优选的，所述步骤a中卤代烷烃-醇系统，卤代烷烃选自四氯化碳、三氯甲烷或二氯甲烷中的一种，或它们任意两个的混合物；醇选自甲醇或乙醇中一种。
特别优选的，在采用卤代烷烃-醇系统进行洗脱时，按体积比，依次采用氯仿-甲醇比例为50:1、30:1、20:1、10:1来进行洗脱。
优选的，所述步骤b中惰性溶剂选自石油醚、环己烷或正己烷中的一种，或它们的任意两个的混合物；所述步骤b中酯选自乙酸乙酯；所述步骤b中醇选自甲醇、乙醇或异丙醇中的一种，或它们的任意两个的混合物。
优选的，所述步骤b中分离溶剂由惰性溶剂：酯：醇：水的体积比为1.5-3.5:5-7:2-4:7-11进行混合后制得。
优选的，所述步骤a中钩藤碱提取物由钩藤经乙醇提取，浓缩制得。
优选的，在所述浓缩得浸膏后，还包括将浸膏用水溶解，调节pH为9～10，再用氯仿萃取，将氯仿萃取液浓缩，得钩藤碱提取物。
优选的，所述乙醇的质量百分比浓度为90％以上的乙醇溶液；所述提取的次数为1～5次，提取的时间为1～5小时，提取的方式采用回流提取或浸提的方式来进行。
优选的，所述乙醇的质量百分比浓度为95％的乙醇溶液；所述提取的次数为3次，提取的时间为1～2小时。
本发明的有益效果在于：采用pH区带精制逆流色谱分离制备高纯度钩藤碱单体，仅需一步就能从钩藤碱粗品中分离制备出纯度在96％以上的钩藤碱和去氢钩藤碱两种单体。具有分离时间短、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点。
附图说明
图1实施例1钩藤总生物碱的高速逆流色谱分离的色谱图；
图2实施例2钩藤总生物碱的高速逆流色谱分离的色谱图。
具体实施方式
为使本领域技术人员详细了解本发明的生产工艺和技术效果，下面以具体的生产实例来进一步介绍本发明的应用和技术效果。
实施例1：
称取钩藤10kg，粗碎，用质量百分比浓度为95％的乙醇溶液进行回流提取，提取的次数为3次，每次提取2小时，合并3次提取液，减压浓缩，得浸膏。浸膏溶于1000毫升水中，用氨水调pH值至9.5，再用氯仿萃取，氯仿萃取液浓缩后，得42.6g钩藤提取物。
将钩藤碱提取物上样于硅胶柱色谱，按体积比，依次采用氯仿-甲醇比例为50:1、30:1、20:1、10:1来进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得钩藤碱粗品；
按体积比，以石油醚：乙酸乙酯：异丙醇：水为2:6:3:9量取各溶剂，混合后，取10mL混合好的分离溶剂加入适量10mmol/L三乙胺溶液后，将2g钩藤碱粗品进行溶解，得钩藤碱粗品溶解液。剩余的分离溶剂置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，平衡一段时间后将上下两相分开，分别得上层液和下层液。
将钩藤碱粗品溶解液上样于上海同田生物技术有限公司生产的TBE-300A型制备型高速逆流色谱仪，通过注射器使样品进入色谱分离柱。以加有10mmol/L三乙胺溶液的上层液作为固定相，加有5mmol/L盐酸溶液的下层液作为流动相，开启速度控制器，使逆流色谱仪的色谱分离柱正转，转速达800r/min时，设置流动相流速为2.0mL/min，开始泵流动相，待流动相流出色谱分离柱时，然后根据检测器的紫外光谱图(参见图1)接收目标成分，分别收集对应的馏分，HPLC测定纯度，减压浓缩，峰A得到无色结晶163mg，峰B得到无色结晶149mg，经质谱、核磁、HPLC分析鉴定峰A为钩藤碱，纯度97.1％；峰B为去氢钩藤碱，纯度96.2％。
利用HPLC分析分离物。HPLC条件：Agilent SB C18(4.6×250mm，5μm)，紫外检测波长254nm，柱温：30℃，流速:1.0ml/min，进样量:10μl，流动相：A：甲醇，B：2mM醋酸铵溶液(用三乙胺调pH＝8.0)，0-30min 60％-100％A。
实施例2：
称取钩藤10kg，粗碎，用质量百分比浓度为90％的乙醇溶液进行回流提取，提取的次数为2次，每次提取3小时，合并2次提取液，减压浓缩，得浸膏。浸膏溶于1000毫升水中，用氨水调pH值至10，再用氯仿萃取，氯仿萃取液浓缩后，得44.3g钩藤提取物。
将钩藤碱提取物上样于硅胶柱色谱，按体积比，采用氯仿-甲醇比例为20:1来进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得钩藤碱粗品；
按体积比，以石油醚：乙酸乙酯：乙醇：水为2:7:2:9量取各溶剂，混合后，取10mL混合好的分离溶剂加入适量10mmol/L三乙胺溶液后，将2g钩藤碱粗品进行溶解，得钩藤碱粗品溶解液。剩余的分离溶剂置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，平衡一段时间后将上下两相分开，分别得上层液和下层液。
将钩藤碱粗品溶解液上样于上海同田生物技术有限公司生产的TBE-300A型制备型高速逆流色谱仪，通过注射器使样品进入色谱分离柱。以加有10mmol/L三乙胺溶液的上层液作为固定相，加有5mmol/L盐酸溶液的下层液作为流动相，开启速度控制器，使逆流色谱仪的色谱分离柱正转，转速达800r/min时，设置流动相流速为2.0mL/min，开始泵流动相，待流动相流出色谱分离柱时，然后根据检测器的紫外光谱图(参见图2)接收目标成分，分别收集对应的馏分，HPLC测定纯度，减压浓缩，峰A得到无色结晶167mg，峰B得到无色结晶151mg，经质谱、核磁、HPLC分析鉴定峰A为钩藤碱，纯度97.7％；峰B为去氢钩藤碱，纯度98.2％。
利用HPLC分析分离物。HPLC条件：Agilent SB C18(4.6×250mm，5μm)，紫外检测波长254nm，柱温：30℃，流速:1.0ml/min，进样量:10μl，流动相：A：甲醇，B：2mM醋酸铵溶液(用三乙胺调pH＝8.0)，0-30min 60％-100％A。
最后应说明的是，以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域技术人员应当理解，依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。

Claims (9)

1.一种高纯度钩藤碱单体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、将钩藤碱提取物上样于硅胶柱色谱，采用卤代烷烃-醇系统进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，得钩藤碱粗品；
b、量取惰性溶剂、酯、醇和水，混合后，得分离溶剂；将所述钩藤碱粗品用加有三乙胺溶液的所述分离溶剂进行溶解，得钩藤碱粗品溶解液；所述分离溶剂静置分层，上层液加入三乙胺溶液备用，下层液加入盐酸溶液备用；将所述钩藤碱粗品溶解液上样于高速逆流色谱仪，以加有三乙胺溶液的上层液作为固定相，加有盐酸溶液的下层液作为流动相，对所述钩藤碱粗品溶解液进行分离纯化，即分别得钩藤碱和去氢钩藤碱。
2.根据权利要求1所述一种高纯度钩藤碱单体的制备方法，其特征在于，所述步骤a中卤代烷烃-醇系统，卤代烷烃选自四氯化碳、三氯甲烷或二氯甲烷中的一种，或它们任意两个的混合物；醇选自甲醇或乙醇中一种。
3.根据权利要求2所述一种高纯度钩藤碱单体的制备方法，其特征在于，在采用卤代烷烃-醇系统进行洗脱时，按体积比，依次采用氯仿-甲醇比例为50:1、30:1、20:1、10:1来进行洗脱。
4.根据权利要求1所述一种高纯度钩藤碱单体的制备方法，其特征在于，所述步骤b中惰性溶剂选自石油醚、环己烷或正己烷中的一种，或它们的任意两个的混合物；所述步骤b中酯选自乙酸乙酯；所述步骤b中醇选自甲醇、乙醇或异丙醇中的一种，或它们的任意两个的混合物。
5.根据权利要求1所述一种高纯度钩藤碱单体的制备方法，其特征在于，所述步骤b中分离溶剂由惰性溶剂：酯：醇：水的体积比为1.5-3.5:5-7:2-4:7-11进行混合后制得。
6.根据权利要求1所述一种高纯度钩藤碱单体的制备方法，其特征在于，所述步骤a中钩藤碱提取物由钩藤经乙醇提取，浓缩制得。
7.根据权利要求6所述一种高纯度钩藤碱单体的制备方法，其特征在于，在所述浓缩得浸膏后，还包括将浸膏用水溶解，调节pH为9～10，再用氯仿萃取，将氯仿萃取液浓缩，得钩藤碱提取物。
8.根据权利要求6所述一种高纯度钩藤碱单体的制备方法，其特征在于，所述乙醇的质量百分比浓度为90％以上的乙醇溶液；所述提取的次数为1～5次，提取的时间为1～5小时，提取的方式采用回流提取或浸提的方式来进行。
9.根据权利要求8所述一种高纯度钩藤碱单体的制备方法，其特征在于，所述乙醇的质量百分比浓度为95％的乙醇溶液；所述提取的次数为3次，提取的时间为1～2小时。
CN201510042326.5A 2015-01-28 2015-01-28 一种高纯度钩藤碱单体的制备方法 Expired - Fee Related CN104628725B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510042326.5A CN104628725B (zh) 2015-01-28 2015-01-28 一种高纯度钩藤碱单体的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510042326.5A CN104628725B (zh) 2015-01-28 2015-01-28 一种高纯度钩藤碱单体的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104628725A true CN104628725A (zh) 2015-05-20
CN104628725B CN104628725B (zh) 2016-08-24

Family

ID=53208014

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510042326.5A Expired - Fee Related CN104628725B (zh) 2015-01-28 2015-01-28 一种高纯度钩藤碱单体的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104628725B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105949192A (zh) * 2016-07-18 2016-09-21 唐翔 一种从钩藤中提取钩藤碱的工艺方法
CN112851673A (zh) * 2021-02-26 2021-05-28 遵义医科大学 钩藤中四种生物碱组分的富集纯化方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102311435A (zh) * 2011-07-05 2012-01-11 南京泽朗农业发展有限公司 一种高纯度钩藤碱的制备方法
CN102311436A (zh) * 2011-07-05 2012-01-11 南京泽朗农业发展有限公司 一种异钩藤碱的制备方法
CN102659781A (zh) * 2012-04-25 2012-09-12 南京泽朗医药科技有限公司 一种二氢柯楠因碱的提取方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102311435A (zh) * 2011-07-05 2012-01-11 南京泽朗农业发展有限公司 一种高纯度钩藤碱的制备方法
CN102311436A (zh) * 2011-07-05 2012-01-11 南京泽朗农业发展有限公司 一种异钩藤碱的制备方法
CN102659781A (zh) * 2012-04-25 2012-09-12 南京泽朗医药科技有限公司 一种二氢柯楠因碱的提取方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105949192A (zh) * 2016-07-18 2016-09-21 唐翔 一种从钩藤中提取钩藤碱的工艺方法
CN112851673A (zh) * 2021-02-26 2021-05-28 遵义医科大学 钩藤中四种生物碱组分的富集纯化方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN104628725B (zh) 2016-08-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108083989B (zh) 一种高纯度大麻二酚的制备方法
CN101643466B (zh) 一种高纯度的表没食子儿茶素没食子酸酯及其制备方法
CN109942380A (zh) 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备大麻二酚的方法
CN101445545B (zh) 一种从雷公藤叶中分离雷公藤内酯醇的方法
CN101824018B (zh) 一种二氢杨梅素的纯化方法
CN103992260A (zh) 一种从大青叶中提取靛玉红的方法
CN104628725A (zh) 一种高纯度钩藤碱单体的制备方法
CN102070683B (zh) 同时制备parishin、parishin B、parishin C化学对照品的方法
CN102533431B (zh) 从沙棘果肉中连续提取分离沙棘油和异鼠李素的方法
CN114907184A (zh) 一种高纯度丹参素钠的提取工艺
CN102260307A (zh) 一种特女贞苷的制备方法
CN102070647B (zh) 一种从银杏内酯混合物中分离银杏内酯b的方法
CN104926659B (zh) 从三种高山鼠尾草植物中制备迷迭香酸化学对照品的方法
CN102234298A (zh) 由桃仁中提纯苦杏仁苷的方法
CN104987285B (zh) 一种分离纯化仙鹤草中间苯三酚类化合物的方法
CN102702289A (zh) 应用高速逆流色谱法从大叶白麻中纯化三种黄酮苷的方法
CN110194758A (zh) 一种从关木通中快速分离纯化马兜铃酸类化合物的方法
CN103145729B (zh) 银杏内酯b化合物及其制备方法
CN103193836B (zh) 一种连翘花中单体化合物的分离纯化方法
CN103980099A (zh) 一种从石斛中提取毛兰素的方法
CN103880895A (zh) 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备哈巴俄苷和斩龙剑苷a的方法
CN102863439A (zh) 从育亨宾树皮中提取育亨宾盐酸盐的方法
CN102311436A (zh) 一种异钩藤碱的制备方法
CN102911240A (zh) 一种制备高纯度贝萼皂苷元的方法
CN103479702A (zh) 一种红花黄色素的提取方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20160824

Termination date: 20180128