CN104587216B - 一种护肝解酒复方制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种护肝解酒复方制剂的制备方法。该制备方法是将原料用煎煮法水提三次，合并三次滤液，浓缩滤液，加入可溶性淀粉，混合均匀，干燥即得。本发明所提供的护肝解酒复方制剂的制备方法简单、方便，易于推广到工业规模生产。以药效为指标，筛选该护肝解酒复方制剂提取工艺的溶媒，结果表明以水为溶媒的水提物有较好的护肝解酒作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种复方制剂的制备方法，尤其涉及一种护肝解酒复方制剂的制备方法。
背景技术
醉酒是过量饮酒后，身体不适，头脑不清醒的一种状态。醉酒是因为饮入的酒精大约四分之一会被胃直接吸收，吸收后会引起胃壁的毛细血管扩张使人有吃饱的感觉，同时，影响胃的正常蠕动，导致呕吐的发生。其余的酒精在肝内进行生物代谢，使酒精转化为乙醛，再转化成乙酸，最终分解为三磷酸腺苷、水和二氧化碳。过量饮酒后，肝脏需要更长的时间分解酒精，而乙醛对肝细胞有直接的危害，较高浓度的乙醛会对肝细胞造成严重的损害。目前，市场上有很多解酒产品，各个产品成分不同，制备方法和效果也不一样。
发明内容
本发明的目的是提供一种护肝解酒复方制剂的制备方法。
本发明所提供的护肝解酒复方制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)取如下原料：余甘果、万寿果、罗汉果、杭菊花、石斛、车前子、柠檬、葡萄籽和陈皮；
(2)将所述步骤(1)的原料按料液比为1：10-1：14加水，浸泡25-35min，煮沸提取25-35min，过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：8-1：12加水，煮沸提取25-35min，过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：8-1：12加水，煮沸提取25-35min，过滤，合并三次滤液；
(3)将所述步骤(2)合并的三次滤液浓缩至1:1，加乙醇使含醇量达40％-60％，静置24h-72h，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.15，即得。
所述步骤(1)中所述原料为如下重量份的原料：余甘果13份～18份、万寿果13份～18份、罗汉果10份～15份、杭菊花8份～12份、石斛8份～12份、车前子8份～12份、柠檬3份～8份、葡萄籽3份～8份和陈皮3份～8份。
所述步骤(2)中将所述步骤(1)的原料按料液比为1：12加水，浸泡30min，煮沸提取30min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：10加水，煮沸提取30min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：10加水，煮沸提取30min，300目滤布过滤，合并三次滤液。
所述步骤(3)中将所述步骤(2)合并的三次滤液浓缩至1:1，加乙醇使含醇量达50％，静置48h。
所述步骤(2)中将所述步骤(1)的原料按料液比为1：14加水，浸泡35min，煮沸提取35min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：12加水，煮沸提取35min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：12加水，煮沸提取35min，300目滤布过滤，合并三次滤液。
所述步骤(3)中将所述步骤(2)合并的三次滤液浓缩至1:1，加乙醇使含醇量达60％，静置72h。
所述步骤(2)中将所述步骤(1)的原料按料液比为1：10加水，浸泡25min，煮沸提取25min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：8加水，煮沸提取25min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：8加水，煮沸提取25min，300目滤布过滤，合并三次滤液。
所述步骤(3)中将所述步骤(2)合并的三次滤液浓缩至1:1，加乙醇使含醇量达40％，静置24h。
所述原料中加入药学上可接受的辅料或载体，将所述护肝解酒复方制剂制成颗粒剂、胶囊剂、片剂或口服液。
本发明所提供的护肝解酒复方制剂的制备方法简单、方便，易于推广到工业规模生产。以药效为指标，筛选该护肝解酒复方制剂提取工艺的溶媒，结果表明以水为溶媒的水提物有较好的解酒护肝作用。
具体实施方式
实施例1、以药效为指标，筛选护肝解酒复方制剂的提取工艺溶媒
1提取工艺溶媒的筛选
筛选提取工艺的溶媒，以确定是用水、乙醇、或水与乙醇的混合物作为溶媒。本实验以解酒护肝药效为考察指标，筛选护肝解酒复方制剂的提取工艺的溶媒。方法与结果如下：
1.1实验方法
取20±2g健康雄性小鼠70只，随机分为7组，分别为空白对照组、模型对照组、海王金樽对照组、水提组、50％醇提组、70％醇提组、90％醇提组，每组10只。各组按上述得的最佳给酒量灌服二锅头，空白对照组灌服以等体积的纯净水。30min后，空白对照组和模型对照组灌服纯净水20ml/kg，海王金樽对照组灌服海王金樽2.0g/kg,水提组、50％醇提组、70％醇提组、90％醇提组灌服解酒方62.4g/kg。
观察小鼠步态情况，记录翻正反射消失时间和恢复时间，计算出醉酒维持时间(从翻正反射消失到恢复的时间)。灌酒后12h禁食，24h后眼球取血，3500r/min离心5min，取上清液按试剂盒说明书操作测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性；眼球取血后，断颈处死小鼠，立即取出肝脏，用PBS缓冲液冲洗并用滤纸吸净，精密称定，剪碎加PBS缓冲液，匀浆后以3500r/min离心5min，取上清液制成10％肝匀浆上清液，测定乙醇脱氢酶(ADH)活性。按测定试剂盒说明书操作、测定并计算。
1.2实验结果
与模型组比，水提物组及海王金樽对照组均能缩短小鼠的醉酒维持时间，有显著性差异(P<0.05)；水提物组及海王金樽对照组能使小鼠肝组织中ADH活力升高，并降低血清中AST、ALT活力。具体结果数据详见表1-3。
表1.1翻正反应结果(n＝10)
注：与模型组比较：△P<0.05，△△P<0.01
表1.2小鼠肝组织中ADH活力(n＝10)
注：与空白组比较：*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较：△P<0.05，△△P<0.01
表1.3小鼠血清中AST、ALT活力(n＝10)
注：与空白组比较：*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较：△P<0.05，△△P<0.01
1.3实验小结
由表1.1可见，与模型组比，水提物组能缩短小鼠的醉酒维持时间，有显著性差异(P<0.05)；由表1.2、表1.3可见，水提物组能使小鼠肝组织中ADH活力升高，并降低血清中AST、ALT活力。这些实验结果表明，以水为溶媒的水提物有较好的解酒护肝作用，而以乙醇(50％～70％)为溶媒的提取物的解酒护肝作用，虽有一定的作用，但不如以水为溶媒的。因此，确定以水作为提取工艺的提取溶媒。
实施例2、制备护肝解酒复方制剂
该实施例中所用的原料均可从商业途径购买得到。
一、制备护肝解酒复方制剂
(一)原料的提取：
(1)取如下重量份的原料：余甘果13份、万寿果13份、罗汉果10份、杭菊花8份、石斛8份、车前子8份、柠檬3份、葡萄籽3份、陈皮3份；
(2)将所述步骤(1)的原料按料液比为1：12加水，浸泡30min，煮沸提取30min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：10加水，煮沸提取30min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：10加水，煮沸提取30min，300目滤布过滤，合并三次滤液；
(3)将所述步骤(2)合并的三次滤液浓缩至1:1，加乙醇使含醇量达50％，静置48h，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.15，即得原料的提取物。
(二)颗粒剂的制备：
向上述制备得到的原料提取物中加入药用辅料可溶性淀粉，用水使之粘合，用干法制粒机直接制粒或湿法制粒后干燥、整粒，分装，即得颗粒剂。
(三)胶囊剂的制备：
向上述制备得到的原料提取物中加入药用辅料可溶性淀粉，用水或者淀粉浆使之粘合，用干法制粒机直接制粒或湿法制粒后干燥，粉碎，加辅料制粒，装入胶囊壳，得到胶囊剂。
(四)片剂的制备：
向上述制备得到的原料提取物中加入药用辅料乳糖、淀粉、硬脂酸镁，用水或者淀粉浆使之粘合，用干法制粒机直接制粒或湿法制粒后干燥，制粒，加入硬脂酸镁，用压片机压片即得片剂。
二、本实施例护肝解酒复方制剂的功能评价
附实验方法与结果如下：
1试药与仪器
1.1试药
本实施例护肝解酒复方制剂的高剂量组(简称：高剂量组)的配制方法：称取一定量本实施例护肝解酒复方制剂，加纯净水溶解，配成0.36g/mL的药液，即小鼠给药量7.2g/kg，相当于19.6g(药材)/kg；
本实施例护肝解酒复方制剂的中剂量组(简称：中剂量组)的配制方法：取实施例护肝解酒复方制剂高剂量药液，加纯净水稀释成0.18g/mL的药液，即小鼠给药量3.6g/kg，相当于9.8g(药材)/kg；
本实施例护肝解酒复方制剂的低剂量组(简称：低剂量组)的配制方法：取本实施例护肝解酒复方制剂中剂量药液，加纯净水稀释成0.09g/mL的药液，即小鼠给药量1.8g/kg，相当于4.9g(药材)/kg。
红星二锅头酒(56°，北京红星股份有限公司，批号：20111101)；海王金樽片(深圳海王健康科技发展有限公司，批号：20120503)；磷酸氢二钠(分析纯，成都市科龙化工试剂厂，批号：0120522)；磷酸二氢钠(分析纯，天津博迪化工股份有限公司，批号：20111006)；考马斯亮兰测试盒(南京建成生物工程研究所，批号：20140113)；乙醇脱氢酶(ADH)测试盒(组织)(南京建成生物工程研究所，批号：20140115)；谷丙转氨酶(ALT/GPT)测试盒(南京建成生物工程研究所，20131223)；谷草转氨酶(AST/GOT)测试盒(南京建成生物工程研究所，20131228)；丙二醛(MDA)测试盒(南京建成生物工程研究所，20140112)；还原型谷胱甘肽(GSH)测试盒(南京建成生物工程研究所，20140111)；甘油三酯测定试剂盒(酶偶联比色法/单试剂型)(浙江瓯诊断产品有限公司，2013110023)。
1.2动物
昆明种小鼠，购于广西医科大学实验动物中心(实验动物许可证号：SCXK桂2009-0002)。
1.3器材
TU-1901双光束紫外可见光光度计(北京普析通用仪器有限公司)；YN-80P型制冰机(上海英纽特制冷设备有限公司；酶标仪(美国EPOCH BIOTEK)；一次性使用无菌注射器(浙江欧健医用器材有限公司)；采样容器(试管)(姜堰市永康医疗器械厂)。
2试验方法
2.1小鼠醉酒量的确定
取20±2g健康雄性小鼠30只，随机分为3组，每组10只，各组分别以56°二锅头，以0.12mL/10g、0.14mL/10g、0.16mL/10g灌胃，观察小鼠步态和活动情况，记录翻正反射消失和恢复时间，根据实验结果确定小鼠醉酒量。
2.2解酒护肝作用研究
取20±2g健康雄性小鼠84只，随机分为6组，分别为空白对照组、模型对照组、海王金樽对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组14只。各组按上述所得的最佳给酒量灌服二锅头，空白对照组灌服以等体积的纯净水。30min后，空白对照组和模型对照组灌服纯净水20ml/kg，阳性对照组灌服海王金樽2.0g/kg，本发明组合物高、中、低剂量组分别按7.2g/kg、3.6g/kg、1.8g/kg灌服。
观察并记录小鼠步态情况，记录小鼠翻正反射消失时间和恢复时间，计算出耐受时间(从灌胃酒精至翻正反射完全消失的时间)和醉酒维持时间(从翻正反射消失到恢复的时间)。灌酒后12h禁食，24h后眼球取血,3500r/min离心5min，取上清液，按试剂盒说明书操作测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性。眼球取血后，断颈处死小鼠，立即取出肝脏，用PBS缓冲液冲洗并用滤纸吸净，精密称定，剪碎加PBS缓冲液，匀浆后以3500r/min离心5min，取上清液制成10％肝匀浆上清液，测定乙醇脱氢酶(ADH)活性；并测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、甘油三酯(TG)含量。按测定试剂盒说明书操作、测定并计算。
2.3统计学方法
实验数据以表示，两组间均数差异采用t检验，P<0.05为有统计学意义。
3实验结果
3.1小鼠醉酒量的确定结果
由表1可知，小鼠灌酒后，均出现步态不稳，活动量减少情况，第1组小鼠浅睡，腹呼吸明显；第2组全部翻正反射消失，出现沉睡现象，第3组在灌酒后24h内有死亡，因此，本实验选择第2组0.14ml/10g为适宜灌酒量。
表2.1小鼠醉酒量的确定结果(n＝10)
注：耐受时间——从灌胃酒精至翻正反射完全消失的时间；醉酒维持时间——从翻正反射消失到恢复的时间
2.2小鼠解酒护肝作用研究结果
如表2～5所示，与模型组比，高剂量组能缩短小鼠的醉酒维持时间，有显著性差异(P<0.05)；高、中剂量组能使小鼠肝组织中ADH活力显著升高(P<0.05)，显著提高GSH含量(P<0.05)，显著降低MDA和TG的含量(P<0.05)；显著降低血清中AST、ALT活力(P<0.05)。
表2.2本实施例护肝解酒复方制剂对小鼠醉酒时间的影响
与模型组比较：△P<0.05，△△P<0.01
表2.3本实施例护肝解酒复方制剂对小鼠肝组织中ADH活力的影响
与空白组比较：*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较：△P<0.05，△△P<0.01
表2.4本实施例护肝解酒复方制剂对小鼠血清中AST、ALT活力的影响
与空白组比较：*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较：△P<0.05，△△P<0.01
表2.5本实施例护肝解酒复方制剂对小鼠肝组织中GSH、MDA、TG含量的影响
与空白组比较：*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较：△P<0.05，△△P<0.01
以上实验结果表2.2-2.5中显示，本实施例护肝解酒复方制剂的高、中剂量组显著提高小鼠肝组织中ADH活力(P<0.05)；高、中剂量组显著减低小鼠血清中的AST活力；高、中剂量组显著减低小鼠血清中的ALT活力(P<0.05，P<0.01)；高、中、低剂量组显著抑制小鼠肝组织中的TG、MDA的升高(P<0.05或P<0.01)；高、中剂量组显著增加小鼠肝组织中GSH的含量(P<0.05)。
本实验结果表明，本实施例护肝解酒复方制剂具有显著的解酒、护肝作用。
三、本实施例护肝解酒复方制剂的急性毒性实验
实验方法：取本实施例护肝解酒复方制剂配成最浓溶液3.8g/mL，选用昆明系小鼠40只，♀各半，分成空白对照组和给药组，每组20只，实验前禁食12h。以每次灌胃量为40mL/kg，给动物灌胃。24h内注意观察小鼠无中毒反应，随后每天观察1次察小鼠的采食及饮水情况，精神状态，自主活动，粪便等，并及时做好记录，连续观察14d观察期间保证喂养条件不变于用药后第15天将所有供试鼠断颈处死，剖检小鼠的心、肝、脾、肺、肾、胃、胸腺与空白对照组比较有无异常。
实验结果：给药组没有死亡状况，与空白对照组比较，给药组精神状态良好，活动自主，采食、饮水及粪便情况正常，心、肝、脾、肺、肾、胃、胸腺与空白对照组比较无异常。则本发明护肝解酒复方制剂最大耐受量为152g(生药量)/kg，为有效剂量的42倍。
实施例3、制备具有护肝解酒作用的护肝解酒复方制剂
该实施例中所用的原料均可从商业途径购买得到。
一、制备护肝解酒复方制剂
(一)原料的提取：
(1)取如下重量份的原料：余甘果18份、万寿果18份、罗汉果15份、杭菊花12份、石斛12份、车前子12份、柠檬8份、葡萄籽8份、陈皮8份；
(2)将上述原料按料液比为1：14加水，浸泡35min，煮沸提取35min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：12加水，煮沸提取35min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：12加水，煮沸提取35min，300目滤布过滤，合并三次滤液；
(3)将上述合并的三次滤液浓缩至1:1，加乙醇使含醇量达60％，静置72h，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.15，即得原料的提取物。
(二)颗粒剂的制备：
向上述制备得到的原料提取物中加入药用辅料羧甲基淀粉钠，用水使之粘合，用干法制粒机直接制粒或湿法制粒后干燥、整粒，分装，即得颗粒剂。
(三)胶囊剂的制备：
向上述制备得到的原料提取物中加入药用辅料淀粉和糊精，用水或者淀粉浆使之粘合，用干法制粒机直接制粒或湿法制粒后干燥，粉碎，加辅料制粒，装入胶囊壳，得到胶囊剂。
(四)片剂的制备：
向上述制备得到的原料提取物中加入药用辅料乳糖、淀粉，用水或者淀粉浆使之粘合，用干法制粒机直接制粒或湿法制粒后干燥，制粒，加入硬脂酸镁，用压片机压片即得片剂。
二、本实施例护肝解酒复方制剂的功能评价
用与上述实施例2中相同的方法对本实施例护肝解酒复方制剂的功能进行评价，实验结果与实施例2无显著差异。表明本实施例护肝解酒复方制剂具有显著的解酒、护肝作用。
三、本实施例护肝解酒复方制剂的急性毒性实验
实验方法：与上述实施例2相同。
实验结果：与上述实施例2无显著差异。
实施例4、制备护肝解酒复方制剂
该实施例中所用的原料均可从商业途径购买得到。
一、制备护肝解酒复方制剂
(一)原料的提取：
(1)取如下重量份的原料：余甘果15份、万寿果15份、罗汉果13份、杭菊花10份、石斛10份、车前子10份、柠檬5份、葡萄籽5份、陈皮5份；
(2)将上述原料按料液比为1：10加水，浸泡25min，煮沸提取25min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：8加水，煮沸提取25min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：8加水，煮沸提取25min，300目滤布过滤，合并三次滤液；
(3)将上述合并的三次滤液浓缩至1:1，加乙醇使含醇量达40％，静置24h，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.15，即得原料的提取物。
(二)颗粒剂的制备：
向上述制备得到的原料提取物中加入药用辅料羧甲基淀粉钠，用水使之粘合，用干法制粒机直接制粒或湿法制粒后干燥、整粒，分装，即得颗粒剂。
(三)胶囊剂的制备：
向上述制备得到的原料提取物中加入药用辅料淀粉和糊精，用水或者淀粉浆使之粘合，用干法制粒机直接制粒或湿法制粒后干燥，粉碎，加辅料制粒，装入胶囊壳，得到胶囊剂。
(四)片剂的制备：
向上述制备得到的原料提取物中加入药用辅料乳糖、淀粉，用水或者淀粉浆使之粘合，用干法制粒机直接制粒或湿法制粒后干燥，制粒，加入硬脂酸镁，用压片机压片即得片剂。
二、本实施例护肝解酒复方制剂的功能评价
用与上述实施例2中相同的方法对本实施例护肝解酒复方制剂的功能进行评价，实验结果与实施例2无显著差异。表明本实施例护肝解酒复方制剂具有显著的解酒、护肝作用。
三、本实施例护肝解酒复方制剂的急性毒性实验
实验方法：与上述实施例2相同。
实验结果：与上述实施例2无显著差异。
Claims (8)
1.一种护肝解酒复方制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)取如下原料：余甘果、万寿果、罗汉果、杭菊花、石斛、车前子、柠檬、葡萄籽和陈皮；所述原料为如下重量份的原料：余甘果13份～18份、万寿果13份～18份、罗汉果10份～15份、杭菊花8份～12份、石斛8份～12份、车前子8份～12份、柠檬3份～8份、葡萄籽3份～8份和陈皮3份～8份；
(2)将所述步骤(1)的原料按料液比为1：10-1：14加水，浸泡25-35min，煮沸提取25-35min，过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：8-1：12加水，煮沸提取25-35min，过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：8-1：12加水，煮沸提取25-35min，过滤，合并三次滤液；
(3)将所述步骤(2)合并的三次滤液浓缩至1:1，加乙醇使含醇量达40％-60％，静置24h-72h，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.15，即得。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中将所述步骤(1)的原料按料液比为1：12加水，浸泡30min，煮沸提取30min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：10加水，煮沸提取30min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：10加水，煮沸提取30min，300目滤布过滤，合并三次滤液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中将所述步骤(2)合并的三次滤液浓缩至1:1，加乙醇使含醇量达50％，静置48h。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中将所述步骤(1)的原料按料液比为1：14加水，浸泡35min，煮沸提取35min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：12加水，煮沸提取35min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：12加水，煮沸提取35min，300目滤布过滤，合并三次滤液。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中将所述步骤(2)合并的三次滤液浓缩至1:1，加乙醇使含醇量达60％，静置72h。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中将所述步骤(1)的原料按料液比为1：10加水，浸泡25min，煮沸提取25min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：8加水，煮沸提取25min，300目滤布过滤，滤液备用；药渣按料液比为1：8加水，煮沸提取25min，300目滤布过滤，合并三次滤液。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中将所述步骤(2)合并的三次滤液浓缩至1:1，加乙醇使含醇量达40％，静置24h。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述原料中加入药学上可接受的辅料或载体，将所述护肝解酒复方制剂制成颗粒剂、胶囊剂、片剂或口服液。
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| 中药护肝降酶有效成分的研究概况;邓家刚等;《广西中医学院学报》;20061231;第9卷(第3期);81－84 * |
| 醒酒冲剂药效学研究;苗明三等;《河南中医药学刊》;19961231;第11卷(第04期);13－16 * |
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