CN104569252A - 一种中药组合物的指纹图谱的建立方法 - Google Patents
一种中药组合物的指纹图谱的建立方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104569252A CN104569252A CN201410771500.5A CN201410771500A CN104569252A CN 104569252 A CN104569252 A CN 104569252A CN 201410771500 A CN201410771500 A CN 201410771500A CN 104569252 A CN104569252 A CN 104569252A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peak
- weight portion
- chinese medicine
- medicine composition
- finger
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明提供一种中药组合物的指纹图谱建立方法,以及采用所述方法建立的指纹图谱来检测所述中药组合物的成分的方法。所述中药组合物的原料组成为:陈皮、前胡、瓜蒌仁、半夏、紫菀、桑白皮、紫苏子、苦杏仁、款冬花、鱼腥草、茯苓和甘草;所述指纹图谱的建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物的保留时间。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域,具体涉及一种中药组合物的指纹图谱的建立方法,所述中药组合物为咳喘顺丸。
背景技术
基于中医药理论的中药组合物(中成药),药味组成一般比较繁多;在药物组合物的制备过程中,不同成分之间还可能相互发生反应,导致药物组合物的成分更加复杂。仅靠定性或定量检测其中某个或某几个成分,由于信息量有限,难以体现组合物作为整体的化学特征。随着现代分析技术的发展,指纹图谱已经是当今国际公认的控制中药质量的质控模式。
中药组合物指纹图谱的建立,应以系统的化学成分研究和药理学研究为依托,体现系统性、特征性和稳定性三个基本原则。才能保证指纹图谱的标准化、规范化、客观化,从而便于推广和应用。高效液相色谱法(HPLC)具有分离效率高,分析速度快,定量精密度高,检测器种类多,稳定性好等特点。不受样品挥发度和热稳定性的限制,样品中大多数成分均可在高效液相色谱仪上进行分析检测,是构建指纹图谱的主要方法之一。2010版《中国药典》收载了中成药品种共计1069个,但是仅收载了高效液相指纹图谱13项,其中提取物14项,中成药仅6项。可见中成药指纹图谱的建立,绝非易事,需要解决众多的技术问题,花费大量的劳动。
咳喘顺丸收载于2010年版《中国药典》一部第887页,其原料由陈皮、前胡、瓜蒌仁、半夏、紫菀、桑白皮、紫苏子、苦杏仁、款冬花、鱼腥草、茯苓和甘草12味中药材组成,主治痰湿蕴肺引起的咳嗽,喘息等病症。目前对咳喘顺丸的物质基础研究较少,且实验结果都不能全面的反映咳喘顺丸中的有效化学信息,因此这些研究结果不能很好的用于咳喘顺丸的质量控制。
发明内容
针对上述问题,本发明的一个目的在于提供一种中药组合物指纹图谱的建立方法,其中所述中药组合物为咳喘顺丸。本发明利用HPLC-UV技术,找出具有特征的色谱指纹特性,体现了苦杏仁苷、橙皮苷、白花前胡甲素、白花前胡乙素为指标的主要特征,从而可以用这些指标成分来检测咳喘顺丸中苦杏仁、陈皮、前胡药材的投料情况,并且提供了比常规质量标准更深层次的质量评价依据。
为了实现上述发明目的,本发明采用了如下的技术方案:
一种中药组合物的指纹图谱建立方法,所述中药组合物的原料组成为:陈皮、前胡、瓜蒌仁、半夏、紫菀、桑白皮、紫苏子、苦杏仁、款冬花、鱼腥草、茯苓和甘草,通过本领域常用的方法,与药学上可以接受的辅料,制备成临床上可以接受的制剂;所述方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物的保留时间,其中所述高效液相色谱的条件如下:
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相;
流动相为体积比为5:95~95:5的乙腈和重量百分浓度0.1%的磷酸水溶液组成的梯度洗脱系统,流速为0.5~1.5mL/min,优选为1ml/min
柱温为25~40℃,优选为30℃;
紫外检测波长为225nm。
优选的,所述方法的流动相梯度洗脱条件为:
0~50min,乙腈的体积百分比为5%→30%,所述0.1%磷酸水溶液的体积百分比为95%→70%;
50~120min,乙腈的体积百分比为30%→95%,所述0.1%磷酸水溶液的体积百分比为70%→5%。
优选的,所述方法包括通过以下方法制备供试品溶液:取所述中药组合物3g,粉碎,精密称定,置于50ml的锥形瓶中,精密加25ml甲醇,超声30min后,放冷至室温,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
作为一个优选的实施方式,本发明提供一种所述中药组合物的指纹图谱建立方法,所述方法具体的操作步骤包括:
1)供试品溶液的制备:取咳喘顺丸3g,粉碎,精密称定,置于50ml的锥形瓶中,精密加25ml甲醇,超声30min后,放冷至室温,既得;
2)测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,根据以下色谱条件进行测定,得到指纹图谱:
色谱柱:Agilent SB-C18,250×4.6mm,固定相平均粒径5μm;
流动相:体积比为5:95~95:5的乙腈和体积百分浓度0.1%的磷酸水溶液,按照如下程序进行梯度洗脱:
0~50min,乙腈的体积百分比为5%→30%,所述0.1%磷酸水溶液的体积百分比为95%→70%;
50~120min,乙腈的体积百分比为30%→95%,所述0.1%磷酸水溶液的体积百分比为70%→5%;
流速:1.0mL/min;
柱温:30℃;
紫外检测波长:225nm。
优选的,按照上述方法建立的指纹图谱,特征峰包括橙皮苷吸收峰,并以橙皮苷吸收峰为参照。
更优选的,按照上述方法建立的指纹图谱,特征峰还包括苦杏仁苷吸收峰、白花前胡甲素吸收峰或白花前胡乙素吸收峰中的一个或多个,相对保留时间分别为:
苦杏仁苷吸收峰:0.436±0.159%;白花前胡甲素吸收峰:1.917±0.027%;白花前胡乙素吸收峰:2.143±0.026%。
优选的,本发明所述的中药组合物,原料由如下重量份的药材组成:紫苏子120重量份,瓜蒌仁180重量份,茯苓150重量份,鱼腥草300重量份,苦杏仁90重量份,制半夏100重量份,款冬花120重量份,桑白皮150重量份,前胡120重量份,紫菀120重量份,陈皮50重量份,甘草100重量份。
优选的,所述中药组合物为丸剂。
更优选的,所述中药组合物为咳喘顺丸,通过如下方法制备:
1)准备如下重量份的药材:紫苏子120重量份,瓜蒌仁180重量份,茯苓150重量份,鱼腥草300重量份,苦杏仁90重量份,制半夏100重量份,款冬花120重量份,桑白皮150重量份,前胡120重量份,紫菀120重量份,陈皮50重量份,甘草100重量份;
2)以上十二味,紫苏子、前胡、半夏、茯苓、陈皮、苦杏仁、款冬花粉碎成粗粉,其余瓜蒌仁等五味加水煎煮二次,滤过,滤液合并,浓缩成稠膏。加入上述粗粉,干燥,粉碎成细粉,混匀。每100重量份粉末加炼蜜30~40重量份与水适量,泛丸。干燥,用活性炭包衣,干燥,即得。
上述丸剂按照本发明所述方法建立的指纹图谱,包括22个特征峰,以 橙皮苷吸收峰为参照,所述特征峰的相对保留时间分别为:
峰1:0.234±0.471%;峰2:0.395±0.244%;峰3:0.415±0.265%;峰4:0.436±0.159%;峰5:0.603±0.252%;峰6:0.802±0.104%;峰7:0.916±0.058%;峰8:0.936±0.110%;峰9:1.000±0.000%;峰10:1.051±0.068%;峰11:1.076±0.094%;峰12:1.223±0.076%;峰13:1.250±0.042%;峰14:1.480±0.038%;峰15:1.860±0.067%;峰16:1.887±0.027%;峰17:1.900±0.027%;峰18:1.917±0.027%;峰19:1.966±0.134%;峰20:2.143±0.026%;峰21:2.197±0.029%;峰22:2.508±0.084%;其中峰4是苦杏仁苷吸收峰,峰9是橙皮苷吸收峰,峰18是白花前胡甲素吸收峰,峰20是白花前胡乙素吸收峰。
本发明的另一目的在于提供上述方法在所述中药组合物,优选为咳喘顺丸的真伪鉴别和成分检测中的应用。
本发明还有一个目的在于提供一种采用上述方法建立的指纹图谱来检测所述中药组合物,优选为咳喘顺丸成分的方法。
本发明提供的指纹图谱建立方法,以高效液相色谱和紫外光谱联用为分离和鉴别手段,得到的指纹图谱具有系统性、特征性和稳定性,具体体现在:
1.系统性:所述中药组合物,优选为咳喘顺丸,原料组成为陈皮、前胡、瓜蒌仁、半夏、紫菀、桑白皮、紫苏子、苦杏仁、款冬花、鱼腥草、茯苓和甘草,在指纹图谱中,不仅体现了橙皮苷、苦杏仁苷、白花前胡甲素和白花前胡乙素等指标性成分,各个药材的化学成分都得到了体现。咳喘顺丸22个特征峰的归属,见表1。
表1 咳喘顺丸指纹图谱色谱峰归属表
2.特征性:采用本发明所述方法建立的指纹图谱,是基于本发明所述中药组合物的特定的原料药以及在制剂过程中化学成分间的相互作用,以橙皮苷吸收峰为参照,各个特征峰的相对保留时间和相对峰面积在一定范围内是固定的,并且会在药味组成发生变化(比如使用伪劣药材)时产生差异。据此,可以很好地鉴别真伪,控制质量。
3.稳定性:本发明所述方法对供试品溶液的制备、色谱条件、测定过程、数据采集、处理、分析等都做了详细限定,从而保证不同操作者、不同实验室多重复做出的指纹图谱都在允许的误差范围内,体现了所述方法的通用性和实用性。
总之,本发明提供的指纹图谱的建立方法,为咳喘顺丸的质量评价提供了更高和更深层次的依据,可以更好地保障患者用药安全和治疗效果。
附图说明
以下,结合附图来详细说明本发明的实施方案,其中:
图1为实施例1考察紫外检测波长试验的色谱图,其中1A是225nm检测波长下的色谱图,1B是254nm检测波长下的色谱图,1C是283nm检测 波长下的色谱图,1D是300nm检测波长下的色谱图,1E是320nm检测波长下的色谱图。
图2为实施例1考察流动相试验的色谱图,其中,2A是甲醇-水为流动相的色谱图,2B是乙腈-水为流动相的色谱图,2C是乙腈-0.1%(w/w)磷酸/水为流动相的色谱图。
图3为实施例1考察流动相洗脱程序试验的色谱图。
图4为实施例2的色谱图,其中4A为超声提取制备的供试品溶液的色谱图,4B为回流提取制备的供试品溶液的色谱图,4C是冷浸提取制备的供试品溶液的色谱图。
图5为实施例4仪器精密度考察的叠加色谱图。
图6为实施例4方法重现性考察的叠加色谱图。
图7为实施例4供试品稳定性考察的叠加色谱图。
图8为本发明提供的咳喘顺丸的制备图谱,其中的1-22为特征峰的编号。
图9为实施例5中16批样品的叠加色谱图,其中S1-S16为样品的编号。
图10为本发明的指纹图谱与对照药材和对照品色谱图的叠加比对图,图中自上而下的色谱图分别是混合对照品(苦杏仁苷、橙皮苷、白花前胡甲素、白花前胡乙素)、紫苑对照药材、紫苏子对照药材、鱼腥草对照药材、桑白皮对照药材、前胡对照药材、款冬花对照药材、苦杏仁对照药材、瓜蒌仁对照药材、甘草对照药材、茯苓对照药材、陈皮对照药材、半夏对照药材和本发明的指纹图谱。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解,这些实施例仅用于说明本发明,其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等,如无特殊说明,均为市售购买产品。其中:
1.仪器
Agilent 1200高效液相色谱仪,配置脱气机G1322A、四元泵G1311A、自动进样器G1329B、柱温箱G1316A、紫外检测器G1314A;
Waters2695e高效液相色谱仪,配置脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器2489;
戴安U3000高效液相色谱仪,配置脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器;
色谱柱:Agilent SB-C18,250×4.6mm,固定相平均粒径5μm;
KQ-250B型超声仪(40KHz,昆山市超声仪器有限公司);
AG204电子天平(梅特勒-毛利多仪器上海有限公司);
Synergy超纯水机(Millipore中国有限公司)。
2.试剂
乙腈、甲醇(HPLC级,Merck公司);
磷酸(超级纯,Merck公司);
水(Milli-Q超纯水);
甲醇、正丁醇、乙醚、乙酸乙酯(分析纯,广州试剂厂);
水(自制纯化水)。
3.样品、对照药材与标准品
3.1样品
咳喘顺丸,批号FT1641、FT1651、FT1661、FT1671、FT1681、FT1691、EH1701、EH 1711、EH 1721、EH 1731、EH 1741、EH 1751、EH 1761、EH1771、EH1781、EH1791;均由广州白云山陈李济药厂有限公司提供;制备工艺为:
1)准备如下重量份的药材:紫苏子120重量份,瓜蒌仁180重量份,茯苓150重量份,鱼腥草300重量份,苦杏仁90重量份,制半夏100重量份,款冬花120重量份,桑白皮150重量份,前胡120重量份,紫菀120重量份,陈皮50重量份,甘草100重量份;
2)以上十二味,紫苏子、前胡、半夏、茯苓、陈皮、苦杏仁、款冬花粉碎成粗粉,其余瓜蒌仁等五味加水煎煮二次,滤过,滤液合并,浓缩成稠膏。加入上述粗粉,干燥,粉碎成细粉,混匀。每100重量份粉末加炼蜜30~40重量份与水适量,泛丸。干燥,用活性炭包衣,干燥,即得
3.2对照药材:
下列对照药材购买自中国药品生物制品检定所:陈皮批号0969-9803、紫菀批号0956-9903、款冬花批号121449-200401、桑白皮批号121124-200402、前胡批号0951-20003、鱼腥草批号121046-200403、甘草批号120904-200511:
下列对照药材购买自中国食品药品检定研究:半夏批号121272-201103、茯苓批号121117-201107;
下列对照药材由广州白云山陈李济药材有限公司中心化验室鉴定并提供:紫苏子、瓜蒌仁、苦杏仁;
3.3对照品
下列对照品购买自中国药品生物制品检定所:苦杏仁苷批号110820-200403、橙皮苷批号110721-200613、白花前胡甲素批号111711-200602;
白花前胡乙素批号111904-201102,购买自中国食品药品检定研究院。
实施例1色谱条件的建立
供试品的制备:
取批号FT1641的样品3g,粉碎,精密称定,置于50ml的锥形瓶中,精密加25ml甲醇,超声30min后,放冷至室温,既得。
色谱条件:
色谱仪:Agilent 1200高效液相色谱仪,色谱柱:Agilent SB-C18色谱柱,柱温30℃,进样量10μl,流速:1ml/min。
1.1紫外检测波长的确定
流动相为乙腈-0.1%磷酸/水,采用梯度洗脱,洗脱时长120分钟,乙腈体积百分比从5%→95%,0.1%磷酸溶液体积百分比从95%→5%;分别考察225nm、254nm、283nm、300nm、320nm波长下的色谱图,结果分别见图1A-1E。
结果显示:225nm下的色谱峰较多,表观峰度较高,且基线相对平稳。因此选择225nm作为本发明所述方法的HPLC的检测波长。
1.2流动相的确定
柱温30℃,进样量10μl,流速:1ml/min,分别以甲醇-水、乙腈-水和乙腈-0.1%(w/w)磷酸/水为流动相,全部采用梯度洗脱,洗脱时长120分钟,有机相体积百分比从5%→95%,水或磷酸溶液体积百分比从95%→5%,考察225nm下的色谱图,分别见图2A-2C。
结果显示:乙腈-0.1%(w/w)磷酸/水为流动相,色谱峰的保留时间更合适、峰形更好、基线更平稳。因此选择乙腈-0.1%(w/w)磷酸/水为流动相。
1.3流动相洗脱程序的确定
柱温30℃,进样量10μl,流速:1ml/min,按照表2-1、表2-2、表2-3、表2-4的洗脱条件进行程序洗脱,结果见图3A-3D。
表2-1 程序洗脱条件I
洗脱时间 | 乙腈 | 0.1%磷酸/水 |
0 | 5 | 95 |
200 | 95 | 5 |
从图3A可以看出,此条件分离度不理想,0~40分钟之间峰分离度不好,60~90分钟之间及140~200分钟之间提供的信息量较少。
表2-2 程序洗脱条件II
洗脱时间 | 乙腈 | 0.1%磷酸/水 |
0 | 5 | 95 |
60 | 30 | 70 |
100 | 95 | 5 |
从图3B可以看出,此条件分离度不理想,0~30分钟之间及80~90分钟之间峰分离度不好且基线很不稳定。
表2-3 程序洗脱条件III
洗脱时间 | 乙腈 | 0.1%磷酸/水 |
0 | 5 | 95 |
15 | 5 | 95 |
70 | 30 | 70 |
120 | 95 | 5 |
125 | 95 | 5 |
从图3C可以看出,此条件分离度也不理想,0~20分钟之间及80~100分钟之间峰分离度不好且基线很不稳定,60~80分钟之间提供的信息量较少。
表2-4 程序洗脱条件IV
洗脱时间 | 乙腈 | 0.1%磷酸/水 |
0 | 5 | 95 |
50 | 30 | 70 |
120 | 95 | 5 |
从图3D可以看出,此条件下色谱峰分离度、峰形及基线的稳定性是最佳的。因此,本发明流动相的洗脱程序优选为上述程序洗脱条件IV。
1.4色谱柱的考察
研究发现,即使是同种规格的C18色谱柱,同一化合物在不同商家的产品中的出峰时间及峰形是有差异的。经过对比Agilent SB-C18色谱柱、Waters Sunfire C18色谱柱、菲罗门Luna C18色谱柱和Thermo ODS-2 HYPERSIL C18色谱柱,综合考虑分离度、色谱峰峰个数、色谱峰峰形及基线的稳定情况,确定选用Agilent SB-C18色谱柱。(色谱图略)
实施例2样品制备方法的考察
在实施例1建立的色谱条件下,分别考察采用超声提取、回流提取、冷浸提取制备的咳喘顺丸供试品溶液的色谱图。
超声提取:取批号FT1641咳喘顺丸3g,粉碎,精密称定,置于50ml的锥形瓶中,精密加25ml甲醇,超声30min后,放冷至室温,既得。
回流提取:取批号FT1641咳喘顺丸3g,粉碎,精密称定,置于50ml的锥形瓶中,精密加25ml甲醇,加热回流2h后,放冷至室温,既得。
冷浸提取:取批号FT1641咳喘顺丸3g,粉碎,精密称定,置于50ml的锥形瓶中,精密加25ml甲醇,冷浸24h后,放冷至室温,既得。
结果见图4A-4C。
从图4可以看出,三种提取方法制备的供试品溶液的色谱图在色谱峰数量和峰值响应上无明显差异,但是超声提取比回流提取、冷浸提取简单方便快速,因此选择超声提取方法。
实施例3咳喘顺丸的成分检测
1.色谱柱:型号为Agilent SB-C18(5μm,250×4.6mm ser#:880952-708);
2.流动相:以乙腈-0.1%磷酸/水溶液为流动相,按下表2-4中的规定进行梯度洗脱;
3.流速:1.0mL/分钟;
4.检测波长:225nm;
5.柱温30℃;
6.供试品溶液的制备:按照实施例2中“超声提取”项所述方法制备;
7.测定法:精密吸取供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,记录120分钟的色谱图。
实施例4方法学验证
4.1仪器精密度
取咳喘顺丸(批号FT1651),参照实施例3的方法,连续进样6次,测定色谱图,叠加图见图5。在测定时间内,共有22个吸收峰。以橙皮苷为参照,将其保留时间和峰面积定为1,考察其他色谱峰的相对保留时间、相对 峰面积。结果见表3和表4。利用指纹图谱软件评价相似度,结果见表5。
表3 精密度试验共有峰相对保留时间
表4 精密度试验共有峰相对峰面积
表5 精密度试验相似度评价结果
表3-表5的数据显示,22个峰的相对保留时间RSD均低于1%,相对峰面积RSD均小于3%,相似度均大于0.999,表明实验仪器的精密度良好,符合指纹图谱要求。
4.2方法重现性
取咳喘顺丸(批号FT1651),平行制备6份供试品溶液,参照实施例3的方法测定,色谱叠加图见图6。以橙皮苷为参照,将其保留时间和峰面积定为1,考察其他色谱峰的相对保留时间、相对峰面积。利用指纹图谱软件计算其相似度。22个共有峰的相对保留时间RSD均低于1%,相对峰面积RSD均小于4%,相似度均大于0.999,表明实方法重现性良好。
4.3稳定性考察
取咳喘顺丸(批号FT1651),参照实施例3的方法,分别在0h、2h、4h、8h、12h、24h、48h7个时间点测定,色谱叠加图见图7。以橙皮苷为参照,将其保留时间和峰面积定为1,考察其他色谱峰的相对保留时间、相对峰面积。利用指纹图谱软件计算其相似度。22个峰的相对保留时间RSD均低于1%,相对峰面积RSD均小于4%,相似度均大于0.997。结果表明,48小时内测定,供试品溶液稳定。
实施例5咳喘顺丸指纹图谱的建立
参照实施例3的方法,检测了16批咳喘顺丸,叠加的色谱图见图9。使用药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统,2004A版》软件,建立了咳喘顺丸的指纹图谱。
5.1指纹图谱共有峰的标定
根据16批供试品检测图谱,用相对保留时间标定了HPLC指纹图谱中的22个共有峰,峰号见图8。
5.2指纹图谱参照峰的选择
9号峰(橙皮苷吸收峰)峰面积最大,分离较好,保留时间适中且稳定,因而选择橙皮苷色谱峰作为参照峰。
5.3共有峰的相对保留时间及相对峰面积值
确定的22个共有峰,以橙皮苷为参照,将其保留时间和峰面积定为1,计算其他色谱峰的相对保留时间、相对峰面积,结果见表6和表7。
5.4 16批咳喘顺丸HPLC指纹图谱相似度评价
使用所述中药指纹图谱相似度评价软件对16批样品进行相似度评价。结果见表8。
表8 16批咳喘顺丸样品相似度结果
编号 | 相似度 | 编号 | 相似度 |
S1 | 0.998 | S9 | 0.999 |
S2 | 0.997 | S10 | 0.966 |
S3 | 0.976 | S11 | 0.997 |
S4 | 0.986 | S12 | 0.998 |
S5 | 0.973 | S13 | 0.984 |
S6 | 0.998 | S14 | 0.995 |
S7 | 0.998 | S15 | 0.996 |
S8 | 0.998 | S16 | 0.995 |
16批次咳喘顺丸供试液的相似度都在0.9~1.0之间,未发现离群样本,符合国家食品药品监督管理局对中药指纹图谱相似度的要求。
5.5制剂产品与各种原药材的相关性及特征峰归属
按照实施例3的方法,分别制备处方中各药材、以及对照品的供试品溶液,在实施例3所述色谱条件下,分别测定与制剂相应量各药材的指纹图谱以及对照品的图谱。将获得的咳喘顺丸、药材以及已知的对照品色谱图比对,从而确认样品指纹图谱各特征峰的归属。所得制剂供试品溶液的色谱图中22个色谱峰中,检出与处方中各药材参照指纹图谱相同的色谱峰共22个。对咳喘顺丸中各峰进行药材及对照品归属,结果见图10和表1。
结果显示,本发明建立的指纹图谱,原料中的各个药材的化学成分都有体现,与药材有良好的相关性。
通过以上研究,建立了咳喘顺丸的高效液相指纹图谱。通过对多批次样品的测定证明该方法重现性、专属性等良好,色谱体现了苦杏仁苷、橙皮苷、白花前胡甲素、白花前胡乙素为指标的主要特征,可以用这些指标成分来检测咳喘顺丸中苦杏仁、陈皮、前胡药材的投料情况,并且可以提供比常规质量标准更深层次的质量评价依据。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明,本领域技术人员可以根据本发明做出各种改变或变形,只要不脱离本发明的精神,均应属于本发明所附权利要求的范围。
Claims (10)
1.一种中药组合物的指纹图谱建立方法,所述中药组合物的原料组成为:陈皮、前胡、瓜蒌仁、半夏、紫菀、桑白皮、紫苏子、苦杏仁、款冬花、鱼腥草、茯苓和甘草,通过本领域常用的方法,与药学上可以接受的辅料,制备成临床上可以接受的制剂;所述方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物的保留时间,其中所述高效液相色谱的条件如下:
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相;
流动相为体积比为5:95~95:5的乙腈和重量百分浓度0.1%的磷酸水溶液组成的梯度洗脱系统,流速为0.5~1.5mL/min,优选为1ml/min
柱温为25~40℃,优选为30℃;
紫外检测波长为225nm。
2.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法,其特征在于,所述方法的流动相梯度洗脱条件为:
0~50min,乙腈的体积百分比为5%→30%,所述0.1%磷酸水溶液的体积百分比为95%→70%;
50~120min,乙腈的体积百分比为30%→95%,所述0.1%磷酸水溶液的体积百分比为70%→5%。
3.根据权利要求1或2所述的指纹图谱的建立方法,其特征在于,所述方法包括通过以下方法制备供试品溶液:取所述中药组合物3g,粉碎,精密称定,置于50ml的锥形瓶中,精密加25ml甲醇,超声30min后,放冷至室温,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
4.根据权利要求1所述的指纹图谱的建立方法,其特征在于,所述方法具体的操作步骤包括:
1)供试品溶液的制备:取咳喘顺丸3g,粉碎,精密称定,置于50ml的锥形瓶中,精密加25ml甲醇,超声30min后,放冷至室温,既得;
2)测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,根据以下色谱条件进行测定,得到指纹图谱:
色谱柱:Agilent SB-C18,250×4.6mm,固定相平均粒径5μm;
流动相:体积比为5:95~95:5的乙腈和体积百分浓度0.1%的磷酸水溶液,按照如下程序进行梯度洗脱:
0~50min,乙腈的体积百分比为5%→30%,所述0.1%磷酸水溶液的体积百分比为95%→70%;
50~120min,乙腈的体积百分比为30%→95%,所述0.1%磷酸水溶液的体积百分比为70%→5%;
流速:1.0mL/min;
柱温:30℃;
紫外检测波长:225nm。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的指纹图谱的建立方法,其特征在于,所述方法建立的指纹图谱,特征峰包括橙皮苷吸收峰,并以橙皮苷吸收峰为参照;
优选的,所述特征峰还包括苦杏仁苷吸收峰、白花前胡甲素吸收峰或白花前胡乙素吸收峰中的一个或多个,相对保留时间分别为:
苦杏仁苷吸收峰:0.436±0.159%;白花前胡甲素吸收峰:1.917±0.027%;白花前胡乙素吸收峰:2.143±0.026%。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的指纹图谱的建立方法,其特征在于,所述的中药组合物,原料由如下重量份的药材组成:紫苏子120重量份,瓜蒌仁180重量份,茯苓150重量份,鱼腥草300重量份,苦杏仁90重量份,制半夏100重量份,款冬花120重量份,桑白皮150重量份,前胡120重量份,紫菀120重量份,陈皮50重量份,甘草100重量份。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的指纹图谱的建立方法,其特征在于,所述中药组合物为丸剂,更优选为咳喘顺丸,通过如下方法制备:
1)准备如下重量份的药材:紫苏子120重量份,瓜蒌仁180重量份,茯苓150重量份,鱼腥草300重量份,苦杏仁90重量份,制半夏100重量份,款冬花120重量份,桑白皮150重量份,前胡120重量份,紫菀120重量份,陈皮50重量份,甘草100重量份;
2)以上十二味,紫苏子、前胡、半夏、茯苓、陈皮、苦杏仁、款冬花粉碎成粗粉,其余瓜蒌仁等五味加水煎煮二次,滤过,滤液合并,浓缩成稠膏,加入上述粗粉,干燥,粉碎成细粉,混匀,每100重量份粉末加炼蜜30~40重量份与水适量,泛丸,干燥,用活性炭包衣,干燥,即得。
8.根据权利要求7所述的指纹图谱的建立方法,其特征在于,所述丸剂按照所述方法建立的指纹图谱,包括22个特征峰,以橙皮苷吸收峰为参照,所述特征峰的相对保留时间分别为:
峰1:0.234±0.471%;峰2:0.395±0.244%;峰3:0.415±0.265%;峰4:0.436±0.159%;峰5:0.603±0.252%;峰6:0.802±0.104%;峰7:0.916±0.058%;峰8:0.936±0.110%;峰9:1.000±0.000%;峰10:1.051±0.068%;峰11:1.076±0.094%;峰12:1.223±0.076%;峰13:1.250±0.042%;峰14:1.480±0.038%;峰15:1.860±0.067%;峰16:1.887±0.027%;峰17:1.900±0.027%;峰18:1.917±0.027%;峰19:1.966±0.134%;峰20:2.143±0.026%;峰21:2.197±0.029%;峰22:2.508±0.084%;其中峰4是苦杏仁苷吸收峰,峰9是橙皮苷吸收峰,峰18是白花前胡甲素吸收峰,峰20是白花前胡乙素吸收峰。
9.权利要求1至7中任一项所述的指纹图谱的建立方法在一种中药组合物的真伪鉴别和成分检测中的应用,所述中药组合物的原料组成为陈皮、前胡、瓜蒌仁、半夏、紫菀、桑白皮、紫苏子、苦杏仁、款冬花、鱼腥草、茯苓和甘草;
优选的,所述中药组合物为咳喘顺丸。
10.一种检测原料组成为陈皮、前胡、瓜蒌仁、半夏、紫菀、桑白皮、紫苏子、苦杏仁、款冬花、鱼腥草、茯苓和甘草的中药组合物的成分的方法,其特征在于,采用权利要求1至7中任一项所述方法建立的指纹图谱;
优选的,所述中药组合物为咳喘顺丸。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410771500.5A CN104569252B (zh) | 2014-12-15 | 2014-12-15 | 一种中药组合物的指纹图谱的建立方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410771500.5A CN104569252B (zh) | 2014-12-15 | 2014-12-15 | 一种中药组合物的指纹图谱的建立方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104569252A true CN104569252A (zh) | 2015-04-29 |
CN104569252B CN104569252B (zh) | 2016-06-29 |
Family
ID=53085810
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410771500.5A Active CN104569252B (zh) | 2014-12-15 | 2014-12-15 | 一种中药组合物的指纹图谱的建立方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104569252B (zh) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105974005A (zh) * | 2016-04-26 | 2016-09-28 | 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 | 液质谱串联法测定清热镇咳糖浆中白花前胡甲素的方法 |
CN109061024A (zh) * | 2018-10-17 | 2018-12-21 | 湖南时代阳光药业股份有限公司 | 小儿扶脾颗粒的标准指纹图谱的构建方法及其应用 |
CN110297045A (zh) * | 2019-05-29 | 2019-10-01 | 四川新绿色药业科技发展有限公司 | 一种前胡配方颗粒的特征图谱检测方法 |
CN110441414A (zh) * | 2019-07-18 | 2019-11-12 | 神威药业集团有限公司 | 金水六君煎指纹图谱的建立方法 |
CN112578066A (zh) * | 2019-09-27 | 2021-03-30 | 江阴天江药业有限公司 | 一种紫菀样品的质量评价方法 |
CN112730681A (zh) * | 2020-12-25 | 2021-04-30 | 北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂 | 儿童咳液特征图谱及其构建方法和儿童咳液的质量检测方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006007538A2 (en) * | 2004-07-01 | 2006-01-19 | Baek Sung H | Composition and method for the treatment of asthma symptoms |
CN1824100A (zh) * | 2005-12-15 | 2006-08-30 | 北京阜康仁生物制药科技有限公司 | 咳喘顺制剂及新的制备方法 |
-
2014
- 2014-12-15 CN CN201410771500.5A patent/CN104569252B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006007538A2 (en) * | 2004-07-01 | 2006-01-19 | Baek Sung H | Composition and method for the treatment of asthma symptoms |
CN1824100A (zh) * | 2005-12-15 | 2006-08-30 | 北京阜康仁生物制药科技有限公司 | 咳喘顺制剂及新的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
杨海红 等: "HPLC 梯度洗脱法测定咳喘顺丸金丝桃苷/槲皮苷、去氢土莫酸和茯苓酸含量", 《中国中医药科技》, vol. 21, no. 5, 30 September 2014 (2014-09-30), pages 532 - 533 * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105974005A (zh) * | 2016-04-26 | 2016-09-28 | 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 | 液质谱串联法测定清热镇咳糖浆中白花前胡甲素的方法 |
CN109061024A (zh) * | 2018-10-17 | 2018-12-21 | 湖南时代阳光药业股份有限公司 | 小儿扶脾颗粒的标准指纹图谱的构建方法及其应用 |
CN110297045A (zh) * | 2019-05-29 | 2019-10-01 | 四川新绿色药业科技发展有限公司 | 一种前胡配方颗粒的特征图谱检测方法 |
CN110297045B (zh) * | 2019-05-29 | 2021-07-27 | 四川新绿色药业科技发展有限公司 | 一种前胡配方颗粒的特征图谱检测方法 |
CN110441414A (zh) * | 2019-07-18 | 2019-11-12 | 神威药业集团有限公司 | 金水六君煎指纹图谱的建立方法 |
CN112578066A (zh) * | 2019-09-27 | 2021-03-30 | 江阴天江药业有限公司 | 一种紫菀样品的质量评价方法 |
CN112730681A (zh) * | 2020-12-25 | 2021-04-30 | 北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂 | 儿童咳液特征图谱及其构建方法和儿童咳液的质量检测方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104569252B (zh) | 2016-06-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104569252A (zh) | 一种中药组合物的指纹图谱的建立方法 | |
CN103926351B (zh) | 生血宝制剂质量检测方法及其标准指纹图谱的构建方法 | |
CN103776926B (zh) | 溪黄草药材hplc指纹图谱的建立 | |
CN104459003B (zh) | 缩泉制剂标准指纹图谱及特征图谱的构建方法及质量检测方法 | |
CN105842373A (zh) | 一种建立金银花的药物制剂的指纹图谱的方法 | |
CN102370891A (zh) | 一种用hplc指纹图谱鉴别铁皮石斛真伪的方法 | |
CN102749401B (zh) | 一种中药组合物二十五味肺病制剂的检测方法 | |
CN105866296A (zh) | 一种建立白芍的药物制剂的指纹图谱的方法 | |
CN106404942B (zh) | 一种康肾颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱 | |
CN106093262A (zh) | 一种建立玄参的药物制剂的指纹图谱的方法 | |
CN101288699A (zh) | 一种用指纹图谱控制延胡索及其制剂质量和药效的方法 | |
CN102680628B (zh) | 安胃疡指纹图谱的建立方法 | |
CN102426205B (zh) | 血栓心脉宁胶囊的检测方法 | |
CN102890124B (zh) | 桑葛制剂中总黄酮类和总生物碱类成分的指纹图谱构建方法及检测方法 | |
CN104391072A (zh) | 一种治疗骨质疏松症的中药复方制剂的质量控制方法 | |
CN103412059A (zh) | 一种妇炎康分散片质量控制方法 | |
CN106918673B (zh) | 一种中药组合物的指纹图谱的建立方法 | |
CN104007198B (zh) | 一种灵芝皇制剂hplc标准指纹图谱及其构建方法和应用 | |
CN105911192A (zh) | 一种半枫荷活血化瘀活性部位的提取方法及指纹图谱检测方法 | |
CN105572261A (zh) | 建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱的方法及其质量检测方法 | |
CN107576739A (zh) | 一种龙牡壮骨颗粒的hplc指纹图谱检测方法 | |
CN102048906B (zh) | 鸡骨草胶囊的含量测定方法 | |
CN106918657B (zh) | 一种中药组合物制剂的指纹图谱的建立方法 | |
CN106018625A (zh) | 一种艾条中桉油精检测方法 | |
CN109633006A (zh) | 胃疡宁指纹图谱的构建方法及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |