CN104569196B - 一种泰地罗新的含量检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种泰地罗新的含量检测方法，采用Agilent‑1260高效液相色谱仪进行分析，采用DAD检测器，检测波长为216nm，进样量为20ul，色谱条件：色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充物，用Agilent‑1260高效液相色谱Wondasil C18柱进行测定；流动相是乙腈‑0.5％甲酸，乙腈的体积分数是65％‑80％；流速是0.6‑1.5ml/min；柱温是20‑40℃，分别对标准品与供试品进行自动进样，用外标法以峰面积计算泰地罗新的含量，是一种简便、分离效果好、精密度和准确度高的泰地罗新含量的检测方法。

Description

一种泰地罗新的含量检测方法
技术领域
本发明涉及一种药物含量检测方法，尤其是一种泰地罗新的含量检测方法。
背景技术
呼吸系统疾病的高发病率和死亡率是全球猪、牛养殖业面临的首要问题。在牛养殖过程中，全球每年因呼吸道疾病造成的经济损失高达3亿美元以上。
泰地罗新是广谱抗菌药，对一些革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌均具有抗菌活性，对引起猪、牛呼吸系统疾病的病原菌尤其敏感，如胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌以及溶血性曼海姆菌、睡眠嗜组织菌等。泰地罗新消化道内吸收率很低，肌肉、皮下注射吸收迅速，达峰时间短，消除半衰期长，生物利用度高。
泰地罗新，英文名：Tylonolide,CAS号为328898-40-4，4，分子式为C41H71N3O8，分子量754.02，熔点为192℃，溶于极性有机溶剂(如甲醇、丙酮等)，水中微溶，结构式如(Ⅰ)所示，
目前监测泰地罗新的方法是固相萃取液质联用技术，设备复杂，过程复杂，对操作人员技能要求比较高，不适合工业化大批量样本操作。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种泰地罗新的含量检测方法。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种泰地罗新的含量检测方法，采用Agilent-1260高效液相色谱仪进行分析，采用DAD检测器，检测波长为216nm，进样量为20ul，具体步骤为：
(1)色谱条件：
色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充物，用Agilent-1260高效液相色谱Wondasil C18柱进行测定；流动相是乙腈-0.5％甲酸，乙腈的体积分数是65％-80％；流速是0.6-1.5ml/min；柱温是20-40℃；
(2)样品处理：
精密称量标准品约为50.0mg，放入50ml容量瓶中，加入色谱乙腈溶解后定容至刻度线，摇匀后用0.45um有机滤头过滤；
精密称量相同质量的供试品，放入50ml容量瓶中，加入色谱乙腈溶解后定容至刻度线，摇匀后用0.45um有机滤头过滤；
(3)测定法：按上述条件，分别对标准品与供试品进行自动进样，用外标法以峰面积计算泰地罗新的含量，测定公式为：
泰地罗新含量(％)＝(待测品峰面积/标准品峰面积)*(标准品浓度/待测品浓度)*100％。
优选的，上述泰地罗新的含量检测方法，所述(1)中高效液相色谱Wondasil C18柱为4.6*250mm，5um Wondasil C18柱、4.6*150mm，5um Wondasil C18柱或4.6*100mm，5umWondasil C18柱。
优选的，上述泰地罗新的含量检测方法，所述高效液相色谱Wondasil C18柱为4.6*250mm，5um Wondasil C18柱，具有更好的分离效果。
优选的，上述泰地罗新的含量检测方法，所述(1)中乙腈的体积是75％。
优选的，上述泰地罗新的含量检测方法，所述(1)中流速为1ml/min，柱温度是30℃。
本发明的有益效果是：
上述泰地罗新的含量检测方法，通过液相色谱进行分析检测，是一种简便、分离效果好、精密度和准确度高的泰地罗新含量的检测方法，检测结果准确可靠，检测范围大，灵敏度高和准确性高。
附图说明
图1为泰地罗新标准品的HPLC检测图谱；
图2为泰地罗新的线性关系图与回归方程。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。
实施例1
精密称取标准品50.0mg，置于50ml容量瓶中，加色谱乙腈超声溶解后稀释定容至刻度线，用1ml注射器取溶液经0.45μm的一次性有机滤头过滤，得标准品溶液；精密称取相同重量的供试品，置于50ml容量瓶中，加色谱乙腈超声溶解后稀释定容至刻度线，用1ml注射器取溶液经0.45μm的一次性有机滤头过滤，即得供试品溶液。标准品溶液和供试品溶液各配置5份。
色谱条件：用Agilent-1260高效液相色谱Wondasil C18柱(4.6*250mm，5um)；流动相：乙腈-0.5％甲酸(75:25V/V)；流速：1ml/min；检测波长：216nm；检测器：紫外检测器；采集时间：25min；柱温：30℃。
按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，如图1所示，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为6965.6，RSD值为0.35％；供试品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为6723.2，RSD值为0.45％。
根据公式：
泰地罗新含量(％)＝(待测品峰面积/标准品峰面积)*(标准品浓度/待测品浓度)*100％
采用外标法将标准品与供试品平均值代入即可得供试品泰地罗新的含量为99.47％。
本发明实施例1所述检测方法的方法学考察
(1)精密度考察
称取同一泰地罗新样品，进行6次重复试验，峰面积表1：
表1 泰地罗新6次重复试验的面积
次数 1 2 3 4 5 6
峰面积 6989 6920 6982 6963 6974 6966
峰面积RSD为0.35，结果表明，本HPLC法检测泰地罗新含量精密度高，重现性好。
(2)线性关系试验
根据发明所述方法，用50ml的容量瓶配制浓度为10㎎/ml的储备液，加乙腈分别稀释成0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml的标准溶液，按照本方面分析方法，对进样量(X)和峰面积(Y)进行数据回归分析，线性关系如图2所示，回归方程为Y＝348.20X-2.9954，r＝0.9999。结果表明泰地罗新在2ug-40ug浓度范围内，峰面积和进样量呈良好的线性关系。
(3)加样回收试验
准确称取已知含量的泰地罗新样品适量，再分别精密加入一定量的泰地罗新样品80％、100％、120％，使供试品溶液中的泰地罗新浓度分别在泰地罗新标准曲线的高、中、低区域各3份，按本发明项下的操作，依法测定，计算回收率，结果平均回收率为99.82％，RSD为0.71％，表面该方法加样回收率好。
综上表明本发明所述含量检测方法稳定性好，精密度高，适用于泰地罗新的含量测定。
再次精密称量50mg相同样品置于50ml容量瓶中，加色谱乙腈稀释后定容至刻度线；精密称量20、40、50、60、80mg标准品分别置于50ml容量瓶中，加色谱乙腈稀释后定容至刻度，得到标准品溶液0.4mg/ml、0.8mg/ml、1mg/ml、1.2mg/ml、1.6mg/ml。
色谱条件:Agilent Zorbax Extend C18色谱柱(3*50mm，3um)，柱温：30°，流速：0.9ml/min；检测波长：216nm；检测器：紫外检测器；进样量：10μl，流动相：A 0.5％甲酸，B乙腈(0.5％甲酸)，采用梯度冲洗的方法见下表2。
表2
时间(min) A B
0 95 5
0.5 95 5
1.5 5 95
4 5 95
4.3 95 5
6.5 95 5
质谱条件：电喷雾电离源(ESI)；喷雾电压(IS)-4.2kV；多反应监测模式(MRM)；负离子扫描；雾化气压力(GS1)50psi，辅助气流速(GS2)55L/min，气帘气压力(CUR)20psi，离子源温度(TEM)600℃，碰撞室压力(CAD)7psi，选择性检测质荷比(m/z)为367.9带负电荷的分子离子峰。
按上述条件，对标准品1、2、3、4、5和供试品分别进样，测得供试品中泰地罗新的含量99.2％。
实施例2
样品及标准品配置同实施例1。
色谱条件：用Agilent-1260高效液相色谱Wondasil C18柱(4.6*150mm，5um)；流动相：乙腈-0.5％甲酸(65:35V/V)；流速：0.6ml/min；检测波长：216nm；检测器：紫外检测器；采集时间：25min；柱温：20℃。
按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为7020，RSD值为0.20％；供试品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为6829，RSD值为0.30％。
根据公式：
泰地罗新含量(％)＝(待测品峰面积/标准品峰面积)*(标准品浓度/待测品浓度)*100％
采用外标法将标准品与供试品平均值代入即可得泰地罗新的含量为100.3％。
实施例3
样品及标准品配置同实施例1。
色谱条件：用Agilent-1260高效液相色谱Wondasil C18柱(4.6*100mm，5um)；流动相：乙腈-0.5％甲酸(80:20V/V)；流速：1.5ml/min；检测波长：216nm；检测器：紫外检测器；采集时间：25min；柱温：40℃。
按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为6841，RSD值为0.17％；供试品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为6595，RSD值为0.20％。
根据公式：
泰地罗新含量(％)＝(待测品峰面积/标准品峰面积)*(标准品浓度/待测品浓度)*100％
采用外标法将标准品与供试品平均值代入即可得泰地罗新的含量为99.3％。
上述参照具体实施方式对该一种泰地罗新的含量检测方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种泰地罗新的含量检测方法，其特征在于：采用Agilent-1260高效液相色谱仪进行分析，采用紫外检测器，检测波长为216nm，进样量为20ul，具体步骤为：
(1)色谱条件：
色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充物，用Agilent-1260高效液相色谱WondasilC18柱进行测定；流动相是乙腈-0.5％甲酸，其中，乙腈与甲酸的体积比为75:25、65:35或80:20，乙腈的体积分数是65％-80％；流速是0.6-1.5ml/min；柱温是20-40℃；
(2)样品处理：
精密称量标准品约为50.0mg，放入50ml容量瓶中，加入色谱乙腈溶解后定容至刻度线，摇匀后用0.45um有机滤头过滤；
精密称量相同质量的供试品，放入50ml容量瓶中，加入色谱乙腈溶解后定容至刻度线，摇匀后用0.45um有机滤头过滤；
(3)测定法：按上述条件，分别对标准品与供试品进行自动进样，用外标法以峰面积计算泰地罗新的含量，测定公式为：
泰地罗新含量(％)＝(待测品峰面积/标准品峰面积)*(标准品浓度/待测品浓度)*100％。
2.根据权利要求1所述的泰地罗新的含量检测方法，其特征在于：所述(1)中高效液相色谱Wondasil C18柱为4.6*250mm，5um Wondasil C18柱、4.6*150mm，5um Wondasil C18柱或4.6*100mm，5um Wondasil C18柱。
3.根据权利要求1所述的泰地罗新的含量检测方法，其特征在于：所述(1)中乙腈与甲酸的体积比为75:25。
4.根据权利要求1所述的泰地罗新的含量检测方法，其特征在于：所述(1)中流速为1ml/min，柱温度是30℃。
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