CN104569168A - 一种氨基脲的液相色谱串联质谱检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于食品污染物氨基脲(SEM)的检测领域。包括如下步骤：样品中加入0.2mol/L的盐酸水解溶液、2-硝基苯甲醛衍生剂、内标物进行SEM的水解和衍生化，离心，取上清液调pH至中性，过Poly-Sery？HLB固相萃取小柱，用甲醇进行洗脱，收集洗脱液氮吹至干，10％乙腈溶液定容，用0.22μm膜过滤，进液相色谱串联质谱仪检测。液相色谱选用XBridge？BEH？Amide正相色谱柱，乙腈和纯水(80∶20，体积比)作为流动相；质谱采用电喷雾，正离子模式，多反应监测的扫描方式。最低检出限为0.01μg/kg。本方法提供了一种检测速度快，灵敏度高，检测成本低的SEM测定方法。

Description

一种氨基脲的液相色谱串联质谱检测方法

技术领域

本发明属于食品污染物的检测领域，是利用液相色谱串联质谱快速、准确地检测氨基脲的方法。

背景技术

氨基脲(SEM)作为有机合成原料，因其是兽药呋喃西林的特征性代谢产物而被人们熟知。随后发现面粉改良剂偶氮甲酰胺(ADA)在面制品加工过程中可以转化为SEM。另外以聚氯乙烯(PVC)为主要原料的塑料垫圈中加入发泡剂ADA，在密封玻璃瓶以及消毒处理过程中，经过高温加热条件处理后，该发泡剂热分解生成SEM。

国内外已经对SEM的毒性进行了一系列研究，通过毒理学实验研究表明SEM具有致癌性与致突变性，可引起的是肺部和血管肿瘤。因此欧盟规定不允许食品中含有硝基呋喃残留物或它们的分解产物，禁止使用ADA作为罐头垫片中的发泡剂。国家标准GB9685-2008《食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准》通过修订后规定添加剂ADA在PVC等塑料包装产品中的最大使用量不得超过2.0％，橡胶中不得超过5.0％。目前我国尚没有制订食品以及食品包装材料中SEM的检测方法标准。

发明内容

本发明目的在于提供一种操作简便、分析迅速的SEM的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。本发明的技术方案如下：

(1)样品预处理

在样品中加入0.2mol/L的水解液、2-硝基苯甲醛衍生剂、内标物进行SEM的水解和衍生化，离心，取上清液调pH至中性后过Poly-Sery HLB固相萃取小柱，弃去流出液，用甲醇进行洗脱，收集洗脱液氮吹至干，并用10％乙腈溶液定容，用0.22μm膜过滤，从而完成样品的前处理。

(2)LC-MS/MS条件

采用XBridge BEH Amide色谱柱(3.5μm×4.6mm×150mm)；柱温：35℃；流动相：等度洗脱，V(乙腈)∶V(水)＝80∶20；流速：0.6mL/min；时间：5min；

电喷雾，正离子模式；扫描方式：多反应监测；离子喷雾电压：5500V；离子源温度：550℃；雾化气：50。

(3)SEM液相色谱串联质谱检测标准曲线的绘制

准确称取SEM标准品0.01g(精确到0.0001g)置于10mL棕色容量瓶中，先用少部分甲醇溶解，再用甲醇定容至10mL，配制成1000mg/L的SEM储备液。称取6个阴性空白面粉1.0g(精确到0.0001g)于50mL离心管中，分别加入SEM标准溶液，配置最终分别含有1.0、2.5、5.0、10.0、30.0、50.0μg/kg SEM面粉样品。再按照方案(1)中样品预处理后，按方案(2)的检测条件进行测定，以SEM浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，用于分析样品中SEM的含量。

(4)样品的测定

取不同的实际样品，根据方案(1)中样品预处理后，按方案(2)中检测条件进行检测，并利用方案(3)中得到的标准曲线计算样品中SEM含量。

本发明的优点与有益效果是：采用本发明的LC-MS/MS法检测食品及包装材料中SEM，方便快捷，灵敏度高，检测限低，有利于SEM的快速检测，可用于大规模样品检测，适于标准化。

附图说明

图1为SEM的标准曲线，横坐标为SEM浓度，纵坐标为SEM色谱峰峰面积。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细洗明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。

实施例1

准确称取SEM标准品0.01g(精确到0.0001g)，置于10mL棕色容量瓶中，先用少部分甲醇溶解，再用甲醇定容至10mL，配制成1000mg/L的SEM储备液。称取6个阴性空白面粉1.0g(精确到0.0001g)于50mL离心管中，分别加入SEM标准溶液，使得最终浓度分别为1.0、2.5、5.0、10.0、30.0、50.0μg/kg，按照方案(1)中样品预处理后，按方案(2)的检测条件进行测定，以峰面积(Y)对浓度X(mg/L)进行线性回归，绘制标准曲线(图1)，通过不断降低标准溶液浓度，取信噪比为3时的浓度为最低检出限。得标准曲线函数关系为：Y＝0.5885+0.1871X，相关系数为R²＝0.9995，最低检出限为0.01μg/kg。

实施例2

准确称取3份空白面粉1.0g(精确至0.0001g)作为基质，分别加入SEM标准溶液，使得面粉中SEM含量分别为10.0、20.0、40.0μg/kg，按照方案(1)中样品前处理步骤进行处理，每个浓度水平下做3个平行试验，按照按方案(2)检测条件进行检测，测定该方法的回收率与精密度。分析结果见表1，回收率为89.46％～101.20％，相对标准偏差为2.48％～4.71％，说明本研究建立的方法可靠。

表1加标面粉SEM回收率和精密度测定结果

实施例3

通过对不同类型的9种面制产品进行了SEM含量的检测，按照方案(1)中样品前处理步骤进行处理，按照按方案(2)检测条件进行检测，测定结果如表2。

表2市售面制品中SEM的含量

实施例4

将不含SEM的PVC垫圈切碎(1平方毫米)，取一定量的碎片分别加入SEM标准溶液，使得样品中SEM含量分别为5.0、20.0、100.0μg/kg，用四氢呋喃超声溶解，15mL甲醇沉淀，离心分层后取5mL上层液氮气吹干，再按照方案(1)中样品预处理后，按方案(2)的检测条件进行测定，测定该方法的回收率与精密度。分析结果见表3，回收率为84.85％～98.10％，相对标准偏差为1.16％～3.29％，说明本研究建立的方法可靠。

表3样品中SEM回收率和精密度测定结果

实施例5

取一市售的糖水桃罐头，按照方案(1)中样品前处理步骤，按照按方案(2)检测条件进行SEM检测，样品做5个平行试验。测定结果见表4，该样品中SEM的浓度约21.96mg/kg，相对标准偏差低于5％，平行性好。

表4糖水桃罐头中SEM含量测定结果

以上较佳实施例仅用于说明本发明的内容，除此之外，本发明还有其他实施方式，但凡本领域技术人员因本发明所涉及之技术启示，而采用等同替换或等效变形方式形成的技术方案均落在本发明的保护范围内。

Claims (7)

1.一种氨基脲的液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)在样品中加入水解液、衍生剂、内标物进行氨基脲(SEM)的水解和衍生化，离心，取上清液调pH至中性后过固相萃取小柱，弃去流出液，用洗脱液进行洗脱，收集洗脱液氮吹至干，并用10％乙腈溶液定容，用0.22μm膜过滤，从而完成样品的前处理；

(2)用液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)测定样品中SEM：液相色谱选用正相色谱柱，乙腈和纯水作为流动相；质谱采用电喷雾，正离子模式，多反应监测的扫描方式；

(3)将步骤(1)所得的经过处理的样品按步骤(2)设定的参数进行HPLC-MS/MS检测。

2.根据权利要求1所述的SEM的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中所用的水解液为0.2mol/L的盐酸溶液。

3.根据权利要求1所述的SEM的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中所用的衍生剂为0.02mol/L的2-硝基苯甲醛溶液。

4.根据权利要求1所述的SEM的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中固相萃取小柱为Poly-Sery HLB小柱。

5.根据权利要求1所述的SEM的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中洗脱液为甲醇。

6.根据权利要求1所述的SEM的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中所用正相色谱柱为XBridge BEH Amide色谱柱。

7.根据权利要求1所述的SME的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中流动相的体积比为V(乙腈)∶V(纯水)＝80∶20。