CN104542309B - 一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基 - Google Patents

一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基 Download PDF

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Abstract

一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基。我们发现培养基中添加马齿苋提取物、南瓜粉、丙三醇、苹果酸、邻苯甲酰磺酰亚胺、水苏糖，无根铁皮石斛无菌试管幼苗生根率达到100%，但生根后的平均根数仅为3-5根，且根粗较细；我们对母液V和母液VI的组成进行了调整，使母液V的组成为苹果酸、邻苯甲酰磺酰亚胺、苏糖、丙三醇，母液VI的组成水马齿苋提取物和南瓜粉，发现无根铁皮石斛无菌试管幼苗生根率达到100%的同时，壮苗生根后的植株平均根数达到15-20条，且根系壮，植株生长较快。

Description

一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基
技术领域
本发明涉及一种铁皮石斛苗专用培养基，尤其涉及一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基。
背景技术
铁皮石斛为兰科石斛属多年生草本植物，是一种十分珍贵的中药材植物。但由于铁皮石斛生长条件十分苛刻，自然产量极少，加上农民的过度采挖，致使野生资源已濒临绝种，国内市场供应紧缺。近年来，很多研究者在铁皮石斛栽培方面做了大量研究，铁皮石斛成分分离鉴定方而也有不少报道，同时利用组织培养培育铁皮石斛也较多涉及，但是铁皮石斛仍存在增长率不高、移栽成活率低等许多问题。其中，生根壮苗是组培苗移栽成活的关键因素，因此在组织培养过程中提高组培苗生根率和生根数量尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基，可使无根铁皮石斛无菌试管幼苗生根率达到100%的同时，壮苗生根后的植株平均根数达到15-20条，植株生长较快。
本发明是通过如下方案实现的：
一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基，其制作步骤为：
（1）母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制：按母液Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ配方表，分别称量母液Ⅰ、母液Ⅱ和母液Ⅳ所需的各种药品，称量完毕后，分别用300ml蒸馏水溶解，然后分别用蒸馏水定容到1L，分别得到母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ；
（2）母液Ⅲ的配制：按母液Ⅲ的配方表，将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O称好后分别加入400ml蒸馏水，放到磁力加热搅拌器上，一边加热，一边不断搅拌使它们充分溶解，然后将Na2-EDTA·2H2O溶液缓慢倒入FeSO4·7H2O溶液中，使两种溶液充分混合，最后用蒸馏水定容到1L，得到母液Ⅲ；
（3）母液V的配制：按母液V的配方表，将原料称好后，先用3ml蒸馏水溶解，再用蒸馏水定容至100mL，得到母液V；
（4）母液VI的配制：按母液VI的配方表，将原料称好后，用100ml蒸馏水溶解，再用蒸馏水定容至500mL，得到母液VI；
（5）配制培养基：分别量取母液Ⅰ50ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ各5ml，母液V25ml母液VI10ml放入烧杯中，再加入0.8g的琼脂粉，煮沸后调pH值至5.8-6.0，高压灭菌，即得。
其中马齿苋提取物是通过如下方法得到的：取干燥的马齿苋粉碎并过40目筛，再用15倍质量的体积分数为70%的乙醇浸提5个小时，浸提温度为100℃，然后将浸提液浓缩并烘干，得到粉末状固体，即为马齿苋提取物。
其中南瓜粉是通过如下方法得到的：选择皮较硬、肉质呈桔红色的南瓜洗净、切块、去籽后自然风干或晒干；然后把南瓜粉碎成细粉状，过100目筛，把过筛后的粉末放入烘箱,温度调到80℃,烘干2小时即得南瓜粉。
其中母液Ⅰ的配方表为：
母液Ⅱ的配方表为：
母液Ⅲ的配方表为：
母液Ⅳ的配方表为：
母液V的配方表为：
母液VI的配方表为：
我们发现培养基中添加马齿苋提取物、南瓜粉、丙三醇、苹果酸、邻苯甲酰磺酰亚胺、水苏糖，无根铁皮石斛无菌试管幼苗生根率达到100%，但生根后的平均根数仅为3-5根，且根粗较细；我们对母液V和母液VI的组成进行了调整，使母液V的组成为苹果酸、邻苯甲酰磺酰亚胺、水苏糖、丙三醇，母液VI的组成水马齿苋提取物和南瓜粉，发现无根铁皮石斛无菌试管幼苗生根率达到100%的同时，壮苗生根后的植株平均根数达到15-20条，且根系壮，植株生长较快。
本发明中的铁皮石斛生根壮苗专用培养基可使无根铁皮石斛无菌试管幼苗生根率达到100%的同时，壮苗生根后的植株平均根数达到15-20条，根粗能达到0.18-0.20cm，植株生长较快，粗壮。
具体实施例
实施例1：一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基，其制作步骤为：
（1）母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制：按母液Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ配方表，分别称量母液Ⅰ、母液Ⅱ和母液Ⅳ所需的各种原料，称量完毕后，分别用300ml蒸馏水溶解，然后分别用蒸馏水定容到1L，分别得到母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ；
（2）母液Ⅲ的配制：按母液Ⅲ的配方表，将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O称好后分别加入400ml蒸馏水，一边加热，一边不断搅拌使它们充分溶解，然后将Na2-EDTA·2H2O溶液缓慢倒入FeSO4·7H2O溶液中，使两种溶液充分混合，最后用蒸馏水定容到1L，得到母液Ⅲ；
（3）母液V的配制：按母液V的配方表，将原料称好后，先用3ml蒸馏水溶解，再用蒸馏水定容至100mL，得到母液V；
（4）母液VI的配制：按母液VI的配方表，将原料称好后，用100ml蒸馏水溶解，再用蒸馏水定容至500mL，得到母液VI；
（5）配制培养基：分别量取母液Ⅰ50ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ各5ml，母液V25ml母液VI10ml放入烧杯中，再加入0.8g的琼脂粉，煮沸后调pH值至5.8-6.0，高压灭菌，即得。
其中马齿苋提取物是通过如下方法得到的：取干燥的马齿苋粉碎并过40目筛，再用15倍质量的体积分数为70%的乙醇浸提5个小时，浸提温度为100℃，然后将浸提液浓缩并烘干，得到粉末状固体，即为马齿苋提取物。
其中南瓜粉是通过如下方法得到的：选择皮较硬、肉质呈桔红色的南瓜洗净、切块、去籽后自然风干或晒干；然后把南瓜粉碎成细粉状，过100目筛，把过筛后的粉末放入烘箱，温度调到80℃，烘干2小时即得南瓜粉。
其中母液Ⅰ的配方表为：
母液Ⅱ的配方表为：
母液Ⅲ的配方表为：
母液Ⅳ的配方表为：
母液V的配方表为：
母液VI的配方表为：
实施例2：一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基，其母液V的配方表为：
母液VI的配方表为：
其余同实施例1。
实施例3：一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基，其母液V的配方表为：
母液VI的配方表为：
其余同实施例1。
实施例4：一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基，其母液V的配方表为：
母液VI的配方表为：
其余同实施例1。
实施例5：一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基，其母液V的配方表为：
母液VI的配方表为：
其余同实施例1。
实施例6：何俊平、涂小云在江苏农业科学2013年第41卷第2期第57-59页发表的论文《不同培养基配方对铁皮石斛生根培养的影响》中记载了一种铁皮石斛生根培养基，其组成为为1/2MS+0.2mg/LNAA（萘乙酸）+1g/L活性炭+10%香蕉泥。
试验例：选择苗高为2-3cm、叶片数4-5片的无根铁皮石斛种苗，弃去黄化和发育不良的种苗，无菌条件下接入实施例1-6所述的培养基，每个处理接种10瓶，每瓶10颗，培养温度(25±1)℃，光照强度2000-2500lx，光照时间12h/d。60d后观察统计铁皮石斛苗生根和生长情况，并记录生根条数、根粗、生根率，结果见表1。
表1各试验组铁皮石斛生长情况
实施例1-3（各技术参数均在本发明技术方案内）的生根率达到100%，平均根数和根粗也优于其他的实施例，尤以实施例1效果最佳。实施例4中其原料的用量与本发明技术方案相同，但母液V和母液VI的组成与本发明技术方案不同，其生根率也能达到100%，但平均根数和根粗远不及实施例1-3。说明本发明的铁皮石斛生根壮苗专用培养基可使无根铁皮石斛无菌试管幼苗生根率达到100%的同时，壮苗生根后的植株平均根数达到15-20条，且根系壮，植株生长较快。

Claims (1)

1.一种铁皮石斛生根壮苗专用培养基，其特征在于：其中母液Ⅰ的配方组成为：NH4NO333000mg、KNO338000mg、CaCl2·2H2O8800mg、MgSO4·7H2O7400mg、KH2PO43400mg；母液Ⅱ的配方组成为：KI166mg、H3BO31240mg、MnSO4·4H2O4460mg、ZnSO4·7H2O1720mg、Na2MoO4·2H2O50mg、CuSO4·5H2O5mg、CoCl2·6H2O5mg；母液Ⅲ的配方组成为：FeSO4·7H2O5560mg、Na2-EDTA·2H2O7460mg；母液Ⅳ的配方组成为：肌醇20000mg、烟酸100mg、盐酸吡哆醇100mg、盐酸硫胺素20mg、甘氨酸400mg；母液V的配方组成为：苹果酸50-65mg、邻苯甲酰磺酰亚胺10-20mg、水苏糖150-200mg、丙三醇10-20mg；母液VI的配方组成为：马齿苋提取物15000-20000mg、南瓜粉5000-10000mg；
母液V的配方组成为：苹果酸55mg、邻苯甲酰磺酰亚胺15mg、水苏糖180mg、丙三醇15mg；母液VI的配方组成为：马齿苋提取物18000mg、南瓜粉8000mg；
制作步骤为：
（1）母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制：按母液Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ配方组成，分别称量母液Ⅰ、母液Ⅱ和母液Ⅳ所需的各种原料，称量完毕后，分别用300ml蒸馏水溶解，然后分别用蒸馏水定容到1L，分别得到母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ；
（2）母液Ⅲ的配制：按母液Ⅲ的配方组成，将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O称好后分别加入400ml蒸馏水，一边加热，一边不断搅拌使它们充分溶解，然后将Na2-EDTA·2H2O溶液缓慢倒入FeSO4·7H2O溶液中，使两种溶液充分混合，最后用蒸馏水定容到1L，得到母液Ⅲ；
（3）母液V的配制：按母液V的配方组成，将原料称好后，先用3ml蒸馏水溶解，再用蒸馏水定容至100mL，得到母液V；
（4）母液VI的配制：按母液VI的配方组成，将原料称好后，用100ml蒸馏水溶解，再用蒸馏水定容至500mL，得到母液VI；
（5）配制培养基：分别量取母液Ⅰ50ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ各5ml，母液V25ml母液VI10ml放入烧杯中，再加入0.8g的琼脂粉，煮沸后调pH值至5.8-6.0，高压灭菌，即得；
其中马齿苋提取物是通过如下方法得到的：取干燥的马齿苋粉碎并过40目筛，再用15倍质量的体积分数为70%的乙醇浸提5个小时，浸提温度为100℃，然后将浸提液浓缩并烘干，得到粉末状固体，即为马齿苋提取物；
其中南瓜粉是通过如下方法得到的：选择皮较硬、肉质呈桔红色的南瓜洗净、切块、去籽后自然风干或晒干；然后把南瓜粉碎成细粉状，过100目筛，把过筛后的粉末放入烘箱,温度调到80℃,烘干2小时即得南瓜粉。
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