CN104491226A - 一种药物组合物的新的医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种药物组合物新的医药用途，具体的说是涉及一种中药组合物在制备预防、治疗抑郁症药物中的应用。实验证明，本发明所述中药组合物抗抑郁的疗效显著，见效快、毒副作用小、是一种安全的抗抑郁药物。

Description

一种药物组合物的新的医药用途

技术领域

本发明涉及中药组合物的新的医药用途，特别是涉及一种中药组合物在制备治疗或预防抑郁症药物中的用途。

背景技术

抑郁症是一种以持续情绪低落为主要症状的精神情志障碍性疾病，具有患病率高、复发率高、自杀率高的特点，是全球公共卫生问题之一，受到国际社会和世界各国的广泛重视。该病在我国疾病经济负担排名中居第二位，为6.2％。抑郁症的核心症状包括：抑郁心境、兴趣丧失、负罪感和无价值感、睡眠紊乱和食欲下降、活动减少、注意力下降以及自杀观念等。我国随着现代生活节奏的加快和社会竞争的加剧，精神疾病的患病率呈逐年上升趋势。我国抑郁症发病率为3-5％，现有超过2600万人患有抑郁症，每年造成的直接和间接经济损失达80亿美元，17岁以下的3.4亿名儿童、青少年中，约有3000万人受到情绪和心理问题的困扰。世界卫生组织、世界银行和哈弗大学的一项联合研究表明，抑郁症已经成为中国疾病负担的第二大疾病。据世界卫生组织统计，全世界抑郁症的发生率为3.1％，在发达国家接近6％，全球有抑郁病患者3.4左右，已成为世界第四大疾患，预计到2020年，抑郁症将成为仅次于心脑血管疾病的第二大疾病。抑郁症严重困扰着人们的正常的工作、学习和生活，给患者家庭和社会带来沉重的负担，其高自杀率倾向还直接影响社会安定。

抑郁症的发病主要与生物化学因素、遗传因素、社会与环境等因素有关，其发病机制尚不十分清楚，脑内中枢神经去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)等神经递质释放减少和相应受体功能低下，大脑海马区域神经元发生减少或萎缩，神经胶质密度减低和前额叶皮质神经元体积减少，以及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)失调、脑源性神经营养因子(BDNF)表达下降，都可能导致抑郁症的发生。目前临床使用的抗抑郁药物主要包括三环四环等杂环类抗抑郁药(TCAs)、单胺氧化酶抑制剂(MAOIs)、NE重摄取抑制剂(SNRIs)、选择性5-HT重摄取抑制剂(SSRIs)、非选择性重摄取抑制剂(NSRIs)、多巴胺和去甲肾上腺素重摄取抑制剂(DNRIs)、5-HT受体调节剂(SRMs)以及其它抗抑郁药如噻奈普汀等类型。这些抗抑郁药主要是基于单胺假说的化学合成药，长期服用会出现严重的毒副作用，也存在抗抑郁谱窄、起效慢、症状缓解不彻底、易复发等缺点。如丙咪嗪、阿米替林等TACs会引起患者视网膜模糊、扩瞳、排尿困难、肝功能异常、粒细胞缺乏症等，并伴有中枢神经系统毒性和心血管系统毒性；异丙肼、环丙胺等选择性MAOIs会引起恶心、失眠、体位性低血压、水肿等不良反应；SNRIs的代表药物文拉法辛有致狂躁可能，常伴有恶心、口干、乏力、焦虑、震颤及阳痿等。而中药是人们在长期医疗实践中认识自然并利用自然的产物，作用温和、副作用少，因此，国内外在抗抑郁药物的研制与开发方面逐渐重视传统药物和天然药物。

专利号为ZL02131435.7发明专利提供了一种含有治疗有效量的人参、银杏叶和西红花等中药的组合物，用于治疗缺血性脑血管疾病和血管性痴呆、老年性痴呆疾病等。申请人以该专利为基础研制了“塞络通胶囊”(其最初商品名是维脑康)目前正处于临床阶段。专利申请201410557573.4提供了上述中药组合物的预防、治疗抑郁症的医药用途。申请人对201410557573.4专利申请涉及的组合物的组分进行了大量的实验性研究，发现了特定的重量份的人参、银杏叶和西红花组成的组合物具有更优的治疗或预防抑郁症的作用。根据该研究发现，可以进一步降低人参、银杏叶和西红花组成的组合物在药物中的使用剂量，不仅能起到节约能源、降低成本的作用，更进一步降低了该组合物长期服用可能产生的副作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种由人参、银杏叶、西红花组成的中药组合物在制备治疗或预防抑郁症药物中的用途。

本发明的技术方案：将由人参、银杏叶、西红花组成的中药组合物用于制备治疗或预防抑郁症的药物中。

所述的中药组合物由下列重量份的原料制备而成：人参1份、银杏叶0.8-1.5份、西红花0.018-0.030份，以上份数均为重量份。

优选的中药组合物由下列重量份的原料制备而成：人参1份、银杏叶1份、西红花0.018-0.030份，以上份数均为重量份。

还优选的中药组合物由下列重量份的原料制备而成：人参1份、银杏叶0.9-1.2份、西红花0.020-0.025份，以上份数均为重量份。

更优选的中药组合物由下列重量份的原料制备而成：人参1份、银杏叶1份、西红花0.020-0.025份，以上份数均为重量份。

最优选的中药组合物由下列重量份的原料制备而成：人参1份、银杏叶1份、西红花0.022份，以上份数均为重量份。

另外，上述两种技术方案中所述的组合物可以和至少一种药学上可接受的辅料制备成液体制剂、固体和半固体制剂、气体制剂。所述液体制剂包括口服液、混悬液、糖浆、注射液、药酒、酊剂，所述的固体和半固体制剂包括片剂、丸剂、膏剂、丹剂、散剂、颗粒剂、栓剂、粉剂、乳剂、咀嚼剂和胶囊剂，所述的气体制剂包括气雾剂和吸入剂。

最后，上述技术方案所述的组合物最优选剂型是胶囊剂。

上述技术方案所述的中药组合物及相应药物的制备方法为：按比例称取各种原料药，其制备步骤参见专利号为ZL02131435.7发明专利的具体实施例方法。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

(1)本发明发现了已知中药组合物新的医药用途，将其用于抗抑郁症，并可制备治疗或预防抑郁症的药物或保健食品，从而为该中药组合物的应用拓展了一个新的领域。

(2)本发明所述中药组合物及其相应的药物剂型，采用不同的动物模型，通过口服注射途径进行了大量的动物实验，实验结果表明：a.本发明中药组合物能显著缩短小鼠悬尾不动时间和强迫游泳不动时间；b.能显著降低利血平诱导的体温下降；c.能显著抑制慢性应激抑郁大鼠的体重下降，对蔗糖消耗量的下降，显著降低抑郁大鼠跳台错误次数，显著增加大鼠敞箱活动的水平和垂直运动的得分；d.能显著增加抑郁大鼠脑内的单胺类神经递质去甲肾上腺素、5-羟色胺含量，表明本发明所述中药组合物具有较强的抗抑郁作用。

(3)与现有技术相比本发明组合物可以降低药品使用剂量，节约成本，节约能源。

本发明中药组合物毒副作用小、安全性能好、能够长期服用，具有良好的药用前景。

具体实施方案

下述是结合具体实施例和实验例，进一步阐述本发明。但这些实施例和实验例仅限于说明本发明而不是用于限制本发明的范围。下列实施例和实验例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。

第一部分：中药组合物及其制剂的制备

实施例1

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    0.8份

西红花    0.018份

其相应制剂制备方法：按发明专利ZL02131435.7实施例1公开的方法提取，并按常规的方式分别制备成颗粒剂、胶囊剂、注射剂。

实施例2

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    1.5份

西红花    0.030份

其相应制剂按本发明实施例1所述方法制备。

实施例3

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    1份

西红花    0.018份

其相应制剂按本发明实施例1所述方法制备。

实施例4

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    1份

西红花    0.030份

其相应制剂按本发明实施例1所述方法制备。

实施例5

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    0.9份

西红花    0.020份

其相应制剂按本发明实施例1所述方法制备。

实施例6

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    1.2份

西红花    0.025份

其相应制剂按本发明实施例1所述方法制备。

实施例7

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    1份

西红花    0.20份

其相应制剂按本发明实施例1所述方法制备。

实施例8

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    1份

西红花    0.025份

其相应制剂按本发明实施例1所述方法制备。

实施例9

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    1份

西红花    0.022份

其中人参、银杏叶的提取方法参照中国药典(2010)提取，西红花提取方法按文献(《中国现代应用药学》2011年8月第28卷第8期729-731页)方法提取，并按常规的方式分别制备成颗粒剂、胶囊剂、注射剂。

实施例10

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    0.8份

西红花    0.030份

其相应制剂按本发明实施例9所述方法制备。

实施例11

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    1.5份

西红花    0.018份

其相应制剂按本发明实施例9所述方法制备。

实施例12

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    0.9份

西红花    0.025份

其相应制剂按本发明实施例9所述方法制备。

实施例13

中药组合物：

人参      1份

银杏叶    1.2份

西红花    0.02份

其相应制剂按本发明实施例9所述方法制备。

第二部分：对比例中药组合物及其制剂的制备

对比例1

中药组合物：专利申请201410557573.4实施例9所述组合物

其相应制剂：专利申请201410557573.4实施例9所述制剂。

对比例2

中药组合物：专利申请201410557573.4实施例1所述组合物

其相应制剂：专利申请201410557573.4实施例1所述制剂。

对比例3

中药组合物：专利申请201410557573.4实施例10所述组合物

其相应制剂：专利申请201410557573.4实施例10所述制剂。

对比例4

中药组合物：专利申请201410557573.4实施例2所述组合物

其相应制剂：专利申请201410557573.4实施例2所述制剂。

对比例5

中药组合物：专利申请201410557573.4实施例3所述组合物

其相应制剂：专利申请201410557573.4实施例3所述制剂。

第三部分药效学实验

试验例1本发明所述中药组合物灌胃给药对小鼠悬尾实验的影响

1.实验材料

ICR小鼠，雄性，体重18～20g，由维通利华动物实验中心提供。

本发明中药组合物(自制，使用前按本发明各实施例所述的方法制备成相应的制剂)，对比例中药组合物(自制，使用前按专利申请201410557573.4各实施例所述的方法制备成相应的制剂)；阳性药物：盐酸氟西汀胶囊(奥麦伦)，上海中西药业股份有限公司新冈制药厂。

JZ型300g张力换能器(高碑店市新航积淀设备有限公司)，Medlab生物信号采集处理系统(南京易美)。

2.试验方法及结果

将正常小鼠按体重随机分为14个组，每组20只，即模型组、阳性药盐酸氟西汀胶囊(0.0035g/kg/d)、实施例1、2、5、6、9、10、11中药组合物组(10g/kg/d，所用剂量按人参、银杏叶、西红花的原药量计算)、对比例1～5中药组合物组(10g/kg/d，所用剂量按人参、银杏叶、西红花的原药量计算)。各组均按0.2mL/10g体重灌胃给药，连续给药2天。

于第2天给药1h之后将小鼠尾端(在距尾尖2cm处)用胶布固定在100g张力换能器的连线上，使其呈倒悬状态，头部离试验台约15cm，每次同时测试2只动物，相互之间用纸板隔开。换能器连接到Medlab生物信号采集处理系统，适应2min后，记录6min之内的结果，将不动状态换算成时间(s)。

实验数据用表示，实验结果用SPSS11.5统计软件(购自美国SPSS公司)进行方差分析。实验结果见表1。

表1灌胃给药本发明中药组合物对小鼠悬尾不动时间的影响

注：与模型组相比*P<0.05；**P<0.01

实验结果表明：灌胃给药本发明中药组合物组能非常显著缩短小鼠悬尾不动时间(与模型组比较，P<0.01)；对比例1中药组合物组能显著缩短小鼠悬尾不动时间(与模型组比较，P<0.05)；对比例2～5中药组合物组小鼠悬尾不动时间有缩短趋势，但不具有统计学意义；提示本发明中药组合物与对比例中药组合物相比具有更好的抗抑郁功能。

试验例2本发明所述中药组合物灌胃给药对小鼠强迫游泳试验的影响

1.实验材料

ICR小鼠，雄性，体重18～20g，由维通利华动物实验中心提供。

本发明中药组合物(自制，使用前按本发明各实施例所述的方法制备成相应的制剂)，对比例中药组合物(自制，使用前按专利申请201410557573.4各实施例所述的方法制备成相应的制剂)；阳性药物：盐酸氟西汀胶囊(奥麦伦)，上海中西药业股份有限公司新冈制药厂。

温度计，秒表，玻璃缸，柏拉图数码摄像头，笔记本电脑。

2.实验方法

将正常小鼠按体重随机分为14个组，每组20只，即模型组、阳性药盐酸氟西汀胶囊(0.0035g/kg/d)，实施例1、2、5、6、9、10、11中药组合物组(10g/kg/d，所用剂量按人参、银杏叶、西红花的原药量计算)、对比例1～5中药组合物组(10g/kg/d，所用剂量按人参、银杏叶、西红花的原药量计算)。各组均按0.2mL/10g体重灌胃给药，连续给药2天，空白对照组给去离子水。

于第2天给药1h之后将小鼠单个放入高20cm、直径18cm、水深10cm、水温23±2℃的水缸中，观察7min，适应2min，记录后5min内累计不动时间(s)。

实验数据用表示，实验结果用SPSS11.5统计软件处理，用One-Way ANOVA方法，方差齐性用LSD和SNK检验。实验结果见表2。

表2灌胃给药本发明中药组合物对小鼠强迫游泳的影响

注：与模型组相比*P<0.05；**P<0.01

实验结果表明，灌胃给药本发明中药组合物组均能非常显著缩短小鼠强迫游泳不动时间(与模型组比较，P<0.01)，对比例1中药组合物组能显著缩短小鼠强迫游泳不动时间(与模型组比较，P<0.05)，对比例2～5中药组合物组小鼠强迫游泳不动时间有缩短趋势，但是无统计学意义，提示本发明中药组合物与对比例中药组合物相比具有更好的抗抑郁功能；本发明中药组合物组的效果与阳性药效果相当。

试验例3本发明所述中药组合物腹腔注射对小鼠强迫游泳试验的影响

1.实验材料

ICR小鼠，雄性，体重18～20g，由维通利华动物实验中心提供。

本发明中药组合物(自制，使用前按本发明各实施例所述的方法制备成相应的制剂)，对比例中药组合物(自制，使用前按专利申请201410557573.4各实施例所述的方法制备成相应的制剂)；阳性药物，盐酸氟西汀胶囊(奥麦伦)，上海中西药业股份有限公司新冈制药厂。

JZ型300g张力换能器(高碑店市新航积淀设备有限公司)，Medlab生物信号采集处理系统(南京易美)。

2.试验方法及结果

将正常小鼠按体重随机分为14个组，每组20只，即模型组、阳性药盐酸氟西汀胶囊(0.0035g/kg)，实施例1、2、5、6、9、10、11中药组合物组(10g/kg/d，所用剂量按人参、银杏叶、西红花的原药量计算)、对比例1～5中药组合物组(10g/kg/d，所用剂量按人参、银杏叶、西红花的原药量计算)。各组均按0.2mL/10g体重给药。

腹腔注射给药组给药30min进行试验。将小鼠尾端(在距尾尖2cm处)用胶布固定在100g张力换能器的连线上，使其呈倒悬状态，头部离试验台约15cm，每次同时测试2只动物，相互之间用纸板隔开。换能器连接到Medlab生物信号采集处理系统，适应2min后，记录6min之内的结果，将不动状态换算成时间(s)。

实验数据用表示，实验结果用SPSS11.5统计软件(购自美国SPSS公司)进行方差分析。实验结果见表3。

实验结果表明：腹腔注射本发明中药组合物组能非常显著缩短小鼠悬尾不动时间(与模型组比较，P<0.01)，对比例1中药组合物组能显著缩短小鼠悬尾不动时间(与模型组比较，P<0.05)，对比例2～5中药组合物组小鼠悬尾不动时间有缩短趋势，但不具有统计学意义。提示本发明中药组合物与对比例中药组合物相比具有更好的抗抑郁功能；本发明中药组合物组的效果与阳性药效果相当。

表3腹腔注射本发明中药组合物对小鼠悬尾不动时间的影响

注：与模型组相比*P<0.05；**P<0.01

试验例4本发明所述中药组合物对小鼠利血平诱导体温下降试验的影响

1.实验材料

ICR小鼠，雄性，体重20.0～22g，由维通利华动物实验中心提供。

本发明中药组合物(自制，使用前按本发明各实施例所述的方法制备成相应的制剂)，对比例中药组合物(自制，使用前按专利申请201410557573.4各实施例所述的方法制备成相应的制剂)；阳性药物：帕罗西汀(赛乐特)，中美天津史克制药有限公司产品；利血平：广东邦民制药有限公司。

GM222型电子温度计、秒表。

2.试验方法及结果

将正常小鼠按体重随机分为17个组，每组10只，即模型组生理盐水组、帕罗西汀对照组(0.003g/kg/d)，实施例1、2、5、6、9、10、11中药组合物组(10g/kg/d，所用剂量按人参、银杏叶、西红花的原药量计算)、对比例1～5中药组合物组(10g/kg/d，所用剂量按人参、银杏叶、西红花的原药量计算)。

在第8天给药后1小时测定小鼠肛温，然后经腹腔注射利血平2mg/kg，于注射利血平4小时再测定小鼠肛温。每次测温时温度计插入小鼠肛门的深度及时间均一致。

实验数据用表示，实验结果用SPSS11.5统计软件(购自美国SPSS公司)进行方差分析。实验结果见表4。

表4本发明中药组合物对小鼠利血平诱导体温下降的影响

注：与模型组相比*P<0.05；**P<0.01

实验结果表明：本发明中药组合物组和阳性药对照组(帕罗西汀组)均能显著减少利血平诱导的体温下降，具有非常显著性差异(与模型组比较P<0.01)，对比例1～2中药组合物组能显著减少利血平诱导的体温下降，具有显著性差异(与模型组比较P<0.05)，对比例3～5中药组合物组体温下降有减少的趋势，但是无统计学意义。提示本发明中药组合物抗抑郁作用可能与影响单胺递质含量有关，且其效果好于对比例中药组合物。

试验例5本发明所述中药组合物对慢性应激抑郁大鼠体重及行为的影响

1.实验材料

SD大鼠，雄性，体重180.0～220g，由维通利华动物实验中心提供。

本发明中药组合物(自制，使用前按本发明各实施例所述的方法制备成相应的制剂)，对比例中药组合物(自制，使用前按专利申请201410557573.4各实施例所述的方法制备成相应的制剂)；阳性药物：盐酸氟西汀胶囊(奥麦伦)，上海中西药业股份有限公司新冈制药厂。

蔗糖，购自北京国华化学试剂厂。

烘箱、大鼠固定笼、止血钳、水桶、温度计、足底点击箱，1/100秒表，大鼠行为观察敞箱，大鼠跳台反应箱。

2.实验方法

正常大鼠24小时禁水不禁食后，给予1％蔗糖水，测定1小时内的消耗量。按体重随机分为15组，即空白组、模型组、盐酸氟西汀对照组(0.0035g/kg/d)，实施例1、2、5、6、9、10、11中药组合物组(7g/kg/d，所用剂量按人参、银杏叶、西红花的原药量计算)、对比例1～5中药组合物组(7g/kg/d，所用剂量按人参、银杏叶、西红花的原药量计算)。造模同时灌胃给药，每日一次，连续给药21天。各组均按1.0ml/100g体重给药，每周称一次体重。

参照文献方法(许晶，李晓秋，慢性应激抑郁模型的建立及其评价，中国行为医学科学，2003,12(1)：14～16)进行造模(即采用CUMS法造抑郁症动物模型)：将电击足底(36伏电压，每隔1分钟电击一次，一次持续10秒，共20次)、4℃冰水游泳(5分钟)、45℃热烘(5分钟)、夹尾(1分钟)、潮湿饲养(潮湿垫料)、昼夜颠倒(24小时)、禁食(24小时)、禁食(24小时)等刺激随机安排到21天内，每日给予一种刺激，除空白组外其余动物均单笼饲养，自由饮食，室温(24±1)℃，相对湿度(60±10)％。

2.1行为学观察

2.1.1蔗糖水消耗量

每次禁水后，测定每组动物1小时内的1％蔗糖水消耗量。

2.1.2敞箱实验(open-field)

敞箱高度40cm、长和宽均为80cm，无盖，周壁和箱底均为黑色，底面划分为面积相等的25块方格。以动物穿越方格数作为水平活动得分，以直立次数为垂直活动得分(两前肢离地1cm以上)。每只动物进行1次测定，每次3分钟。

2.1.3跳台实验

实验装置为一个长方形黑色塑料板制成的反应箱，分割为两间。底面是铜栅，间距为0.8cm，可以通电，电压由一变压器控制。每间右后角置一高5cm、直径为8cm的木头平台。将动物放入反应箱内适应环境3分钟，然后立即通36V交流电，动物受到电击，正常反应是跳上平台以躲避伤害性刺激。多数动物可能会再次或多次跳至铜栅上，受到电击后又迅速跳回平台，如此训练5分钟，并记录每只大鼠跳上平台的时间，即反应时间；第一次跳下平台的潜伏期；受到电击的次数为错误次数，第一次跳下平台后5min内在铜栅上所呆的累计时间及停留时间以此作为学习成绩。24小时候重做测验，此即记忆保持测验，将大鼠置于平台上，通电并计时，记录第一次调下平台的潜伏期；在铜栅上停留时间和5min内的错误次数。

所测定指标均采用均数±标准差表示，使用SPSS12.0软件中的方差分析(ANOVA)进行检验，P<0.05表示差异具有显著性。

3.结果

3.1本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠体重的影响

实验结果见表5。

表5本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠体重的影响

注：与模型组相比*P<0.05

结果表明，实验第0天、7天各组动物体重无明显差异(P>0.05)；实验第14天与空白组比较模型组大鼠体重显著降低(P<0.05)，与模型组相比本发明中药组合物组和阳性药组、对比例1中药组合物组大鼠体重显著增加(P<0.05)；实验第21天与空白组比较模型组大鼠体重显著降低(P<0.05)，与模型组相比本发明中药组合物组和阳性药组、对比例1中药组合物组大鼠体重显著增加(P<0.05)。

3.2本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠蔗糖水消耗量的影响

实验结果见表6。

表6本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠蔗糖水消耗量的影响

注:与模型组相比*P<0.05；**P<0.01

结果表明，实验第0天、7天各组动物蔗糖水消耗无明显差异(P>0.05)；实验第14天与模型组比较，本发明中药组合物组、对比例1中药组合物组和阳性药组大鼠蔗糖水消耗量显著增加(与模型组相比，P<0.05)、阳性药组大鼠蔗糖水消耗量非常显著增加(与模型组相比，P<0.01)；实验第21天与空白组比较模型组大鼠蔗糖水消耗量显著增加(P<0.01)，与模型组相比本发明中药组合物组和阳性药组大鼠蔗糖水消耗量非常显著增加(P<0.01)、对比例1中药组合物组大鼠蔗糖水消耗量显著增加(P<0.05)，其他对比例中药组合物组大鼠蔗糖水消耗量有增加趋势，但无统计学意义。提示本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠蔗糖水消耗量的影响强于对比例中药组合物。

3.3本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠敞箱活动行为的影响

实验结果见表7。

表7本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠敞箱活动的影响

注与模型组相比*P<0.05

结果表明，模型组相比，空白对照组大鼠水平运动得分、垂直运动得分显著增加(P<0.05)；与模型组比较，本发明中药组合物组、对比例1组和阳性药组大鼠水平运动得分、垂直运动得分显著增加(P<0.05)，对比例2～5中药组合物组大鼠水平运动得分、垂直运动得分有增加趋势，但无统计学意义。提示本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠敞箱活动的影响强于对比例中药组合物。

3.4本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠跳台行为的影响

实验结果见表8。

表8本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠跳台行为的影响

注：与模型组相比*P<0.05；**P<0.01

结果表明，与模型组比较，空白组大鼠训练期错误次数和测试期错误次数显著减少(P<0.01)；与模型组比较，本发明中药组合物组、对比例1中药组合物组和阳性药组大鼠训练期错误次数和测试期错误次数相比显著减少(P<0.05)，对比例2～5中药组合物组大鼠训练期错误次数和测试期错误次数有减少趋势，但无统计学意义。提示本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠跳台行为的影响强于对比例中药组合物。

4.结论

应激是抑郁症的发病因素之一，应用CUMS制造的抑郁症动物模型，其模拟行为学以及神经内分泌等变化与人类抑郁症相类似，已成为国内外探讨抑郁症的发病机制及抗抑郁药作用机制而广泛应用的动物模型之一。但以往研究中所采用的应激模型多为单一形式的应激，如束缚、强迫游泳等。为了避免动物对同一应激原产生适应，本研究采用了多因素的慢性应激模型，每天随机将不同的应激刺激作用于动物，使其不可预测应激的发生时间和类型，与人类抑郁症中慢性、低水平的应激源促进抑郁症的发生及发展的机制更为接近。在此基础上结合孤养、改变群居动物生活环境，更保证模型的成功。模型大鼠水平活动和垂直活动得分显著降低，蔗糖溶液消耗量明显减少，说明动物表现出抑郁状态，兴趣丧失、探究行为降低和快感缺失，表明大鼠抑郁模型造模成功。

从敞箱探究活动、跳台行为、体重和对糖水消耗量试验结果显示，本发明中药组合物能有效改善抑郁模型大鼠的抑郁行为，对抑郁症具有治疗作用，作用效果与阳性药基本相当，且好于对比例中药组合物。

试验例6本发明所述中药组合物对慢性应激大鼠脑内单胺类神经递质的的影响

1.实验材料

SD大鼠，雄性，体重220～240g。由维通利华动物实验中心提供。

本发明中药组合物(自制，使用前按本发明各实施例所述的方法制备成相应的制剂)，对比例中药组合物(自制，使用前按专利申请201410557573.4各实施例所述的方法制备成相应的制剂)；阳性药：盐酸氟西汀胶囊(奥麦伦)，上海中西药业股份有限公司新冈制药厂，大鼠用量为0.0025g/kg。

去甲肾上腺素(NE，Serva公司)；多巴胺(DA，Fluka公司)；5-羟色胺(5-HT，Sigma公司)；3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC，Sigma公司)；3,4-二羟苄胺(DHBA，Sigma公司)；二正丁胺(上海化学试剂厂)，D-8离子对试剂(天津化学试剂二厂)，甲醇(优级纯，北京化工厂)，其他试剂均为国产分析纯。

Waters510泵，M464电化学检测器DL-822色谱工作站，MSE150型超声粉碎器。

2.实验方法

2.1分组和给药

SD大鼠，24h禁水不禁食后，给予1％蔗糖水，测定1h内的消耗量。根据蔗糖水消耗量随机分成15个组，每组12只，即空白组、模型组、盐酸氟西汀对照组(0.0025g/kg/d)，实施例1、2、5、6、9、10、11中药组合物组(7g/kg/d，所用剂量按人参、银杏叶、西红花的原药量计算)、对比例1～5中药组合物组(7g/kg/d，所用剂量按人参、银杏叶、西红花的原药量计算)。造模同时灌胃给药，每日一次，连续给药21天。各组均按1.0mL/100g体重给药，每周称一次体重。

2.2造模

正常对照组6只/笼饲养，正常饮食饮水，不给任何刺激。

其他五个组，1只/笼饲养，并接受21天不可预知的应激刺激，包括：冰水游泳，热烘，夹尾，潮湿饲养，昼夜颠倒，禁食，禁水等。每组每天随机给予一种刺激。

每种应激的具体操作方法：

(1)冰水游泳：将动物放入盛有4℃冷水(冰水混合)的桶中，水深15cm，大鼠足尖刚能触及桶底，5min后将动物取出。

(2)热烘：烘箱温度调至45℃固定，将动物放入烘箱中，5min后将动物取出。

(3)夹尾：将大鼠放入固定笼中，露出尾巴，用止血钳夹住距尾跟部1cm处(用力不要过大，使大鼠发出哀嚎即可)，持续1min。

(4)潮湿饲养：早上8点，往鼠笼中加入200ml水，至次日8点换掉。

(5)昼夜颠倒：早上8点，将大鼠放入黑暗箱中，晚上8点打开灯照明，至次日早8点。

(6)禁食：24断料。

(7)禁水：24h断水。

2.3样品制备及检测

动物断头处死，迅速在冰上剥离大脑，取前额皮质，称重后置组织冷冻管中用液氮快速冷冻后，放入-70℃冰箱保存至测定。

根据脑组织的重量，加入预冷的0.1mol/L过氯酸(内含0.3mM EDTA二钠和0.5mM亚硫酸钠)，2μg/mL DHBA，配制成800μL，超声匀浆，11000rpm离心10min，上清液用于神经递质测定。

采用高效液相色谱-电化学检测器系统(HPLC-ECD)进行测定，色谱条件为：色谱柱为4×150mm，Nova-pak C18,5μm；流动相为50mM柠檬酸-乙酸钠缓冲液pH3.5(内含1.0mM B-8离子对试剂，1.8mM二正丁胺，0.3mM EDTA二钠，4％甲醇)，流速1.0mL/min，玻璃碳工作电极，检测池电压为+0.75V；3,4-二羟苄胺DHBA为内标物，样品中各主要组分用内标法进行定量。

检测数据以表示，以SPSS 13.0软件处理，用One-Way ANOVA方法，检测结果见表9、10。

表9本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠脑内甲肾上腺素的影响

注：与模型组相比*P<0.05

表10本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠脑内五羟色胺的影响

注：与模型组相比*P<0.05

表9、表10中的实验数据表明，连续给药21天后，与模型组比较空白组大鼠脑内单胺类神经递质去甲肾上腺素、5-羟色胺含量明显升高(P<0.05)；与模型组比较本发明中药组合物组和阳性药组大鼠脑内单胺类神经递质去甲肾上腺素、5-羟色胺含量明显升高(P<0.05)，对比例中药组合物组大鼠脑内单胺类神经递质去甲肾上腺素、5-羟色胺含量有升高趋势，但是无统计学意义。提示，本发明中药组合物对慢性应激抑郁大鼠脑内单胺类神经递质去甲肾上腺素、5-羟色胺含量的影响强于对比例中药组合物组。

脑内单胺类递质，如去甲肾上腺素、5-羟色胺和多巴胺等功能不足，导致抑郁症发病。利血平降压的同时引发抑郁症的原因就是由于利血平使突触前膜囊泡中的去甲肾上腺素耗竭所致。本实验研究显示慢性应激大鼠脑内5-羟色胺、去甲肾上腺素含量明显降低，本发明中药组合物能显著提高5-羟色胺、去甲肾上腺素的含量。提示以上作用可能是本发明中药组合物的抗抑郁作用的重要机制之一，且本发明中药组合物的效果强于对比例中药组合物。

Claims (8)

1.下述药物组合物在制备治疗或预防抑郁症的药物中的应用，

人参1份                     银杏叶0.8-1.5份

西红花0.018-0.030份

上述份数均为重量份。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述组合物的组成为：

人参1份              银杏叶1份

西红花0.018-0.030份

上述份数均为重量份。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述组合物的组成为：

人参1份            银杏叶0.9-1.2份

西红花0.020-0.025份

上述份数均为重量份。

4.如权利要求2或3所述的应用，其特征在于所述组合物的组成为：

人参1份             银杏叶1份

西红花0.020-0.025份

上述份数均为重量份。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述组合物的组成为：

人参1份             银杏叶1份

西红花0.022份

上述份数均为重量份。

6.如权利要求1-5任意一项所述的应用，其特征在于所述的组合物和至少一种药学上可接受的辅料制备成液体制剂、固体和半固体制剂、气体制剂。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述液体制剂包括口服液、混悬液、糖浆、注射液、药酒、酊剂，所述的固体和半固体制剂包括片剂、丸剂、膏剂、丹剂、散剂、颗粒剂、栓剂、粉剂、乳剂、咀嚼剂和胶囊剂，所述的气体制剂包括气雾剂和吸入剂。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述的组合物可以制备成胶囊剂。