CN104095938B - 一种治疗抑郁症的蒙药制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗抑郁症的蒙药制剂,该制剂是由下述重量份的原料药按常规方法制成的任何临床可接受的剂型:山沉香10~14份、广枣8~12份、肉豆蔻8~12份、当归6~10份、红花6~10份、丁香2~6份、荜茇2~4份。本发明以天然草药为原料,采用现代工艺技术制成,具有服用量小,治疗抑郁症疗效可靠,副作用小且成本低廉的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种蒙药制剂,尤其涉及一种治疗抑郁症的蒙药制剂。
背景技术
抑郁症是以显著而持久的心境低落为主要特征的情感性精神障碍疾病,其主要表现有兴趣丧失、无愉快感,精力减退或疲乏感,精神运动性迟滞或激越,自我评价过低、自责或有内疚感,严重者可出现幻觉、妄想等精神病性症状,抑郁症的发病机制复杂,与生物化学因素、遗传因素、社会与环境等各种因素有关。随着生活节奏的加快,生活和工作压力的增大,抑郁症已成为目前除心血管疾病、糖尿病、肿瘤之外影响人类健康的常见病,是一种发病率、伤残率、病死率较高的疾病,严重危害人们的身心健康。因此,抑郁症已成为当今医学领域研究的热点。抑郁症可有下述方面的症状:
⑴躯体症状:主要有睡眠障碍、乏力、食欲减退、体重下降、便秘、身体任何部位的疼痛、性欲减退、阳痿、闭经等。躯体不适的体诉可涉及各脏器,如恶心、呕吐、心慌、胸闷、出汗等。自主神经功能失调的症状也较常见。病前躯体疾病的主诉通常加重。睡眠障碍主要表现为早醒,一般比平时早醒2~3小时,醒后不能再入睡,这对抑郁发作具有特征性意义。有的表现为入睡困难,睡眠不深;少数患者表现为睡眠过多。体重减轻与食欲减退不一定成比例,少数患者可出现食欲增强、体重增加。
⑵精神症状:心情低落的直接体现。日常兴趣显著减退甚至丧失、无望感、无助感、精力和动机减退和丧失、自尊和自信下降,自我评价下降。所有这些症状都是下降减退和丧失,因此常被概括为失落感,但失落感含义广泛,抑郁症可说是显著而持久的失落感。
⑶流行病学调查表明:
①国外情况:抑郁症的流行病学研究已有大量报道,由于抑郁症诊断概念及分类上的意见分歧,特别是早期的研究未将单相抑郁症和双相障碍分开,故所报道的患病率和发病率数字相差甚远。1984美国国立卫生研究所(NIH)在其建立的流行病学调查地进行调查,发现抑郁症的终生患病率为4.9%。1994年的另一项调查表明,抑郁症的终生患病率17.1%,(其中男性为12.7%,女性为21.3%)。WHO估计,全世界的抑郁症患者约有3.4亿。1993年,WHO的一项以15个城市为中心的全球性合作研究,调查综合医院就诊者中的心理障碍,发现患抑郁症和恶劣心境者达12.5%
②国内情况:抑郁症在我国的情况也不容乐观,目前抑郁症在我国的发病率大约为4%。据应用新的疾病分类和诊断系统所进行的部分地区流行病学调查资料表明,我国抑郁症患病率约为10‰~15‰左右,已与发达国家统计结果相近。李辉等人(李辉,张建球,赵后锋,等.城市人群抑郁症流行病学调查.临床心身疾病杂志,2009,15(2):133-134.)釆用流行病学调查方法以2005年2月20日零时为调查时点,对徐州市城区两个街道中15a~60a的4440名居民进行调査分析,结果为抑郁症状发生率16.89%;抑郁症时点患病率0.67%,总患病率0.86%,但与1993年国内七个地区情感性精神障碍流行病学调查的抑郁症患病率0.52%相比增加了16倍多。这说明抑郁症患病率在过去的十几年呈迅速上升趋势,但与美国的流行病学资料相比,发现人群终身罹患抑郁障碍的机率为17.1%还相差甚远,这可能与民族、社会文化差异的影响有关,而方法学、诊断标准与认知水平等因素也会影响调查结果。
⑷抑郁症的疾病负担:根据2001年世界卫生组织的报告,抑郁症造成的伤残位居各类疾病之首;抑郁症造成的疾病负担列为全球疾病总负担第四位,估计到2020年将升至第二位,仅次于缺血性心脏病,在我国,神经精神疾病在疾病总负担中排名首位,约占疾病总负担的20%。根据世界卫生组织推算,中国神经精神疾病负担到2020年将上升至疾病总负担1/4。有资料显示,我国70%的人处于亚健康状态,与心理应激相关的疾病患者约占人群的5%~10%,身心疾病、心理障碍已成为多发病、常见病。2002年我国重点城市典型医院神经系统用药金额已达14.20亿元左右,京沪穗三大城市的比重占63.28%,抗抑郁药约占1/5。
目前,抑郁症的主要治疗方法包括:⑴药物治疗是中度以上抑郁发作的主要治疗措施。临床上一线的抗抑郁药包括选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI,代表药物氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普兰和艾司西酞普兰)、5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI,代表药物文拉法辛和度洛西汀)、去甲肾上腺素和特异性5-羟色胺能抗抑郁药(NaSSA,代表药物米氮平)等。传统的三环类、四环类抗抑郁药和单胺氧化酶抑制剂由于不良反应较大,应用明显减少。⑵心理治疗:对有明显心理社会因素作用的抑郁发作患者,在药物治疗的同时常需合并心理治疗。常用的心理治疗方法包括支持性心理治疗、认知行为治疗、人际治疗、婚姻和家庭治疗、精神动力学治疗等,其中认知行为学为治疗对抑郁发作的疗效已经得到公认。⑶物理治疗:有严重消极自杀企图的患者及使用抗抑郁药治疗无效的患者可采用改良电抽搐(MECT)治疗。电抽搐治疗后仍需用药物维持治疗。近年来又出现了一种新的物理治疗手段——重复经颅磁刺激(rTMS)治疗,主要适用于轻中度的抑郁发作。
蒙医药迄今已有2000多年的历史,其理论体系的基本特点为整体观念、辨证诊断和重病因辨证施治理论。蒙医经典文献中没有抑郁症的记载,但根据其典型临床表现,抑郁症与赫依(三根之一,三根为赫依、希拉、巴达干)、心的关系最为密切,赫依功能紊乱为抑郁症发病的主要原因,当赫依功能紊乱时影响三根之平衡,侵及心脏,进而影响白脉之传导功能而引起抑郁症。因此,抑郁症病因为赫依,病位在心脏。故治疗以调节赫依,调理三根,宁心安神,促进白脉传导为主要治疗原则。随着世界范围内回归自然、重视传统医药已成为一种潮流的今天,应更好地发挥蒙医药治疗情志精神疾病领域的优势。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种效果显著的治疗抑郁症的蒙药制剂。
为解决上述问题,本发明所述的一种治疗抑郁症的蒙药制剂,其特征在于:该制剂是由下述重量份的原料药按常规方法制成的任何临床可接受的剂型:
山沉香10~14份、广枣8~12份、肉豆蔻8~12份、当归6~10份、红花6~10份、丁香2~6份、荜茇2~4份。
所述剂型是指散剂、丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂中的任意一种。
本发明方中山沉香味辛、苦、性凉、抑赫依,具有清热、止痛、利呼吸的作用,为君药。以广枣、肉豆蔻为臣药,增强其调赫依功效,其中广枣味甘、酸、性平,具有清心热、强心之功效;肉豆蔻味辛、性温,具有抑赫依、调胃火、消食、开胃的功效。以当归、红花、丁香为佐药,增强调节赫依,平衡赫依血紊乱,其中当归味甘、辛,性温,具有清心热、解毒、调经、止痛、平赫依的作用;红花味甘、微苦,性凉,具有凉血、锁脉、调经、清肝、强身、止痛、消肿之功效;丁香味辛、微苦,性温,具有祛寒、祛赫依、调火、消食、开胃、解毒、表疹、利咽喉的功效。并以味辛、性温,具有调理胃火、祛巴达干赫依、调节体素的荜茇为使药。诸药合用,性温,调节赫依而平衡三根,进而心神宁、白脉通,则心烦不眠、夜卧不安、情绪低落等抑郁诸症自愈。
功能主治:具有调节赫依,宁心安神等功效;临床上主治赫依功能紊乱而引起,持久心境低落为主要特征的情感性精神障碍等轻中度抑郁症。
本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明以天然草药为原料,采用现代工艺技术制成,具有服用量小,治疗抑郁症疗效可靠,副作用小且成本低廉的优点。
2、药效学实验:
⑴药品与试剂:
本发明药物:按实施例1制备所得。拟推荐临床用法与用量:口服,一次15粒,一日1次。按成人体重60Kg计算,本发明药物推荐每日口服剂量相当于0.05g/Kg体重。
盐酸氟西汀分散片:PatheonFrance生产,礼来苏州制药有限公司分包装,产品批号2076A,分包装批号2076AA;羧甲基纤维素钠(CMC-Na):国药集团化学试剂有限公司,批号20120330;蔗糖:北京化工厂,批号20110303。
去甲肾上腺素(NE):批号088K1147;5-羟色胺(5-HT):批号028K5152;多巴胺(DA):批号06426ED;5-羟吲哚乙酸(5-HIAA):批号1413645;3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC):批号1364209;内标物3,4-二羟苄胺(DHBA):批号04429MO,均为Sigma产品。
CRH:批号201306172;ACTH:批号201306212;CORT:批号201306153,均为美国R&D公司分装试剂盒。
T3:批号C0502270384;T4:批号C0510270387;TSH:批号C0310260386;IL-2:批号P17037086;IL-6:批号Q03037087,均为武汉华美生物工程有限公司产品。
AnnexinV-FITC/PI双染试剂盒:批号3300119,杭州联科生物技术有限公司;〔125I〕cAMP放射性同位素免疫试剂盒:批号2013061121,北京环亚泰克生物医学技术有限公司;cAMP:批号201305122,美国Rapidbio公司;PKA:批号201305173,美国Rapidbio公司。
⑵实验环境与动物:
a实验环境:
实验在北京中医药大学SPF级动物房内进行,整个实验过程中动物自由摄食和饮水,室温20~22℃,相对湿度为60%~70%,光照周期为12h,7:00~19:00光照,19:00~7:00黑暗。
b实验动物:
清洁级ICR小鼠,雌性,雄性,体重18~22g,由北京维通利华公司提供,合格证号:SCXK(京)2012-0001,以清洁级大小鼠维持饲料饲养,由北京科澳协力饲料有限公司提供,合格证号:京饲审(2009)06166。
清洁级Wistar大鼠,雄性,体重180~200g,由斯贝福(北京)实验动物科学技术有限公司提供,合格证号:SCXK(京)2011-0004,以清洁级大小鼠维持饲料饲养,由北京科澳协力饲料有限公司提供,合格证号:京饲审(2009)06166。
⑶实验仪器:
电子天平:常熟市双杰测试仪器厂;ES125SM1/10万电子天平:瑞士precisa公司;金雀牌电子秒表:上海手表五厂;Agilent1100LC型色谱仪:美国安捷伦科技有限公司;DECADEⅡSDC型电化学检测器:荷兰ANTEC公司;J2-21低温离心机:美国Beckman公司;JY99-ⅢB型超声器:宁波新芝科器研究所;5415R高速离心机:德国Eppendorf公司;MultiskanMK3型酶标仪:美国ThermoScientific公司;ELx50自动洗板机:美国Biotek公司。
⑷具体方法与结果:
实验例1:对强迫游泳致小鼠抑郁模型的影响
①目的:
当小鼠放进一个有限的空间使之游泳,开始拼命游动力图逃脱,很快就变得漂浮不动状态,仅露出鼻孔保持呼吸,四肢偶尔划动以保持身体不至于下沉下去,这种状态叫做不动状态(immobility),实际是动物放弃逃脱的希望,也属于行为绝望(behavioraldespair)。绝大数抗抑郁药,如三环抗抑郁药、MAO抑制剂、多数非典型抗抑郁抗不动状态,电休克和快动眼睡眠剥夺等,在亚急性处理的情况下(24h内2~3次给药),可有效对抗不动状态,使动物游起来。本实验通过观察本发明药物对小鼠强迫游泳不动时间的影响,考察其抗抑郁作用。
②方法:
根据Porsolt建立的方法,选用ICR小鼠,雄性,体重18~22g。小鼠适应环境7天后,按照随机区组法分为5组:空白对照组、阳性药氟西汀组(3.3mg/kg)、本发明药物低、中、高(0.2、0.4、0.8g/kg)剂量组,每组12只。各组均按0.2mL/10g体重给药,每日一次,连续给药7天,空白对照组给去离子水。末次给药前小鼠禁食不禁水12h。末次给药后1h进行实验,将小鼠单个放入高20cm、直径18cm、水深10cm、水温23±2℃的水缸中,观察6min,适应2min,记录后4min内累计不动时间(s)。实验结果以均数±标准差(±s)表示,采用SPSS19.0统计软件对原始数据进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析法;P<0.05为差异有显著性。
③结果与结论:
由表1可见,本发明药物高、中剂量组小鼠的游泳不动时间低于正常对照组,统计差异显著(P<0.05);本发明药物低剂量组小鼠的游泳不动时间也有低于正常对照组趋势,但统计差异不显著(P>0.05),在所试剂量范围内有一定量效作用趋势。故可认为,本发明药物具有缩短小鼠强迫游泳不动时间的作用。
表1本发明药物对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响(单位:s,n=12,±s)
注:与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01。
实验例2:对悬尾致小鼠抑郁模型的影响
①目的:
小鼠在悬尾状态下很快会出现绝望行为(behavioraldespair),表现为不在挣扎,呈现特有的安静不动状态(immobility),抗抑郁药可以明显缩短不动状态的持续时间。通过观察给小鼠灌胃本发明药物对小鼠悬尾不动时间的影响,可以评价其抗抑郁作用。
②方法:
根据Steru等建立的方法,选用ICR小鼠,雄性,体重18~22g,60只。小鼠适应环境7天后,按照随机区组法分为5组:空白对照组、阳性药氟西汀组(3.3mg/kg)、本发明药物低、中、高(0.2、0.4、0.8g/kg)剂量组,每组12只,各组均按0.2mL/10g体重给药,每日一次,连续给药7天,空白对照组给去离子水。末次灌胃60min后,将小鼠尾部2cm处(距尾根3/4的部位)用黏膏条固定在处于同一水平的木棍上,使小鼠倒悬在一排带有间隔板的实验架,间隔板使实验架分成若干实验小室内(20cm×25cm×30cm),其头部离台面大约5cm,悬挂两端用挡板隔开动物的视线,观察6min内小鼠累计不动时间(S)。实验结果以均数±标准差(±s)表示,采用SPSS19.0统计软件对原始数据进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析法;P<0.05为差异有显著性。
③结果与结论:
由表2可见,本发明药物高、中剂量组小鼠的悬尾不动时间低于正常对照组,统计差异显著(P<0.05);本发明药物低剂量组小鼠的悬尾不动时间也有低于正常对照组趋势,但统计差异不显著(P>0.05),在所试剂量范围内有一定量效作用趋势。故可认为,本发明药物具有缩短小鼠悬尾不动时间的作用。
表2本发明药物对小鼠悬尾不动时间的影响(单位:S,n=12,±s)
注:与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01。
实验例3:对慢性轻度不可预见性应激(21天)致抑郁模型大鼠行为学和单胺递质的影响
①目的:
大鼠在遭受长期的、难以预测的、随机的、多种应激组合刺激后,难以适应,可出现一些列情绪性行为改变,如自发活动减少、学习能力下降、食欲减退以及大鼠蔗糖饮用水量下降(快感缺失)等典型抑郁表现,以此模型可以客观考察本发明药物的抗抑郁作用。
②方法:
Wistar大鼠70只,雄性,体重180~200g。大鼠适应1周后,对所有动物进行蔗糖水实验(动物禁食禁水24h后,给予1%蔗糖水,测定1h内的消耗量)和敞箱实验(高40cm,长和宽均为80cm,无盖,周壁和箱底均为黑色,底面划分为面积相等的25块方格)进行水平运动和垂直运动评分测试,以穿越方格数作为水平运动得分(以动物四肢均进入方格为准),以直立次数为垂直运动得分(两前肢离地1cm以上)。每只动物进行1次测定,每次3min。
选取两实验结果相近的大鼠60只,按照随机区组实验法,分成6组:即正常对照组、模型组、阳性药氟西汀组(3.3mg/kg)、本发明药物3个剂量组(0.2、0.4、0.8g/kg,分别相当于临床每日推荐剂量的4、8、16倍),每组10只。正常对照组大鼠每笼5只饲养,其他各组孤养。造模同时灌胃给药,正常对照组、模型组灌胃0.5%CMC-Na,氟西汀组和本发明药物各组大鼠分别灌胃西药氟西汀、本发明药物,各组均按1.0ml/100g体重给药。
除正常对照组外,其余各组大鼠均单个分笼饲养,并接受随机的、多种应激组合刺激,包括断食24h、断水24h、昼夜颠倒24h、45℃热环境5min、4℃冰水游泳5min、夹尾1min、电击足底(36V电压,每隔1min刺激一次,每次持续10s,共30次),实验过程中每种刺激平均3次。
在刺激开始首日开始给药,每天灌胃给药1次,连续21天。实验期间,每周记录动物体重、蔗糖水消耗量。末次给药后24h,用敞箱进行行为学测定。大鼠断头处死,同时迅速剥离全脑,在冰盘上迅速分离出前额叶皮质和左侧海马,称重(约50mg)后放置于EP管中经液氮快速冷冻,后移入-80℃冰箱中保存待测定。测定时样品加入已添加内标的组织裂解液,50μL/10mg组织,冰浴条件下超声破碎10s后,4℃下15000r离心30min,取上清液-80℃冷冻48h后析出蛋白。检测前于4℃下使标本完全解冻溶解后,15000r离心30min。取上清液用0.22μm耐酸过滤器过滤,取20μL用色谱仪检测NE、5-HT、DA及其代谢产物5-HIAA和DOPAC的含量。实验结果以均数±标准差(±s)表示,采用SPSS19.0统计软件对原始数据进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析法;P<0.05为差异有显著性。
③结果与结论:
由表3可见,本发明药物在实验第14天、21天,低、中、高剂量组大鼠体重显著高于模型组(P<0.01或P<0.05)。
由表4可见,本发明药物在实验第14天,中、高剂量组大鼠蔗糖水消耗量显著高于模型组(P<0.05),在实验第21天,低、中、高剂量组大鼠蔗糖水消耗量显著高于模型组(P<0.05)。
由表5可见,敞箱实验中本发明药物低、中、高剂量组水平运动次数显著高于模型组(P<0.05或P<0.01),本发明药物中、高剂量组垂直运动次数显著高于模型组(P<0.01)。
由表6、表7、表8可见,实验结束时,本发明药物中剂量组海马组织单胺递质5-HT、5-HIAA、DA含量显著高于模型组(P<0.05),前额叶皮质单胺递质NE、5-HT、DOPAC含量显著高于模型组(P<0.05),本发明药物中剂量组海马和前额叶皮层组织NE、DOPAC和5-HIAA含量无显著变化(P>0.05)。
以上结果表明,本发明药物对慢性轻度不可预见性应激致大鼠抑郁模型的自发活动减少、食欲减退以及蔗糖水消耗下降(快感缺失)等典型抑郁情绪性行为改变有明显对抗作用,其机制可能是通过影响大鼠海马和前额叶皮层组织中NE、DA、5-HT等单胺递质含量变化而发挥作用。
表3本发明药物对慢性应激抑郁模型大鼠体重的影响(单位:g,n=10,±s)
注:与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较▲P<0.05,▲▲P<0.01(表4-13同)。
表4本发明药物对慢性应激抑郁模型大鼠蔗糖水消耗量的影响(单位:ml,n=10,±s)
表5本发明药物对慢性应激抑郁模型大鼠敞箱实验的影响(单位:次,n=10,±s)
表6本发明药物对慢性应激抑郁模型大鼠海马和前额叶皮质NE含量的影响
(单位:ng/g湿组织,±S,n=10)
表7本发明药物对慢性应激抑郁模型大鼠海马和前额叶皮质5-HT、5-HIAA含量的影响
(单位:ng/g湿组织,±S,n=10)
表8本发明药物对慢性应激抑郁模型大鼠海马和前额叶皮质DA、DOPAC含量的影响
(单位:ng/g湿组织,±S,n=10)
实验例4:对慢性轻度不可预见性应激(28天)致抑郁模型大鼠神经内分泌、海马神经元凋亡与AC-cAMP-PKA信号通路的影响
①目的:
大鼠在遭受长期的、难以预测的、随机的、多种应激组合刺激后,可出现生化以及生理学的变化,包括单胺递质的减少以及神经信号通路的异常。通过相关指标的检测,可以客观观察本发明药物的抗抑郁作用机制。
②方法:
Wistar大鼠90只,雄性,体重180-200g。大鼠适应1周后,对所有动物进行蔗糖水实验(动物禁食禁水24h后,给予1%蔗糖水,测定1h内的消耗量)和敞箱实验(高40cm,长和宽均为80cm,无盖,周壁和箱底均为黑色,底面划分为面积相等的25块方格)进行水平运动和垂直运动评分测试,以穿越方格数作为水平运动得分(以动物四肢均进入方格为准),以直立次数为垂直运动得分(两前肢离地1cm以上)。每只动物进行1次测定,每次3min。
选取两实验结果相近的大鼠80只,按照随机区组实验法,分成4组:即正常对照组、模型组、阳性药氟西汀组(3.3mg/kg)、本发明药物剂量组(0.4g/kg,相当于临床每日推荐剂量8倍),每组20只。正常对照组大鼠每笼5只饲养,其他各组孤养。造模同时灌胃给药,正常对照组、模型组灌胃0.5%CMC-Na,氟西汀组和受试药物各组大鼠分别灌胃西药氟西汀、本发明药物,各组均按1.0ml/100g体重给药。
除正常对照组外,其余各组大鼠均单个分笼饲养,并接受随机的、多种应激组合刺激,包括断食24h、断水24h、昼夜颠倒24h、45℃热环境5min、4℃冰水游泳5min、夹尾1min、电击足底(36V电压,每隔1min刺激一次,每次持续10s,共30次),实验过程中每种刺激平均3次。
在刺激开始首日开始给药,每天灌胃给药1次,连续28天。实验结束后,每组随机取10只大鼠断头取血,血液未抗凝,用4℃,3000r/min离心10min,分离血清,采用ELISA法检测CRH、ACTH、CORT、T3、T4、TSH、IL-2、IL-6的含量。之后剥离全脑,在冰盘上迅速分离出双侧海马,分离出来的海马先用冷生理水冲洗1次,再置于预冷的PBS(0.01MPH7.2-7.4)中,剪成小碎块,加入0.25%胰蛋白酶0.3ml置于37℃恒温水浴消化30min,同时轻轻吹打。经过200目筛网过滤、预冷PBS溶液不断冲洗,将过滤后的物质收集到EP管中4℃离心,1000r/min,5min,弃上清,加入预冷PBS溶液1ml。重复操作一次,各EP管中取1ml细胞悬液,4℃离心,1000r/min,5min,弃上清,沉淀加入已稀释好的BindingBuffer,500μl/管(按1:4用MilliQ水稀释),轻轻振荡使细胞悬浮,将细胞重悬于500μlBindingBuffer液中,加入5μlAnnexinV-FITC和10μlPropidiumIodide,轻轻混匀,避光室温反应15min。加入300μlBindingBuffer液,用流式细胞仪进行检测分析。各组另10只大鼠断头处死,剥离全脑,在冰盘上迅速分离出双侧海马及前额叶皮层,液氮速冻后-70℃保存待测。将海马和前额叶皮层组织于4℃复温,取适量组织样品,按1:40加入预冷的Tris-HCl缓冲液(0.05moL·L-1,pH7.4),在冰浴下充分研磨成组织混悬匀浆液。取适量匀浆液,用Bradford法测定蛋白含量。反应总体积为500μL,其中含有50mmoLTris-HCl缓冲液,8mmoL茶碱,4mmoLDTT,1mmoLEGTA,1mmoLATP。加入100μL组织匀浆后,30℃水浴保温15min,于沸水中加热3min终止反应,冷却后于3000r·min-1离心10min,取上清液100μL,Tris-HCl缓冲液按1:10稀释测定。实验设置空白孔,以反应管的cAMP量减去空白孔的cAMP量,即为AC催化净生成的cAMP量,以pmoL/mg/min表示酶的活性。取海马和前额叶皮层50mg组织样品,加入0.5mL匀浆液(Tris10mmoL·L-1,NaCl137mmoL·L-1,KCl5mmoL·L-1,CaCl22mmoL·L-1,MgCl22.5mmoL·L-1,蔗糖0.25mmoL·L-1,PMSF0.1mmoL·L-1,BSA0.1%),液氮中反复冻融3次,每次10min,然后在冰浴中超声3×4s,12000r·min-1,离心30min,取上清,用考马斯亮兰G-250蛋白定量后,采用ELISA法检测cAMP、PKA的含量。实验结果以均数±标准差(±s)表示,采用SPSS19.0统计软件对原始数据进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析法;P<0.05为差异有显著性。
③结果与结论:
由表9、表10可见,实验结束时,本发明药物中剂量组大鼠血清CRH、ACTH、CORT、IL-6含量明显降低(P<0.01或P<0.05)、TSH含量明显升高(P<0.05)。
由表11可见,实验结束时,本发明药物中剂量组大鼠海马神经元凋亡率明显降低,差异有显著性(P<0.01)。
由表12、表13可见,实验结束时,本发明药物中剂量组大鼠海马中AC活性、cAMP和PKA含量均较模型组显著升高(P<0.05),前额叶皮层中cAMP和PKA含量均较模型组显著升高(P<0.05)。
表9本发明药物对慢性应激抑郁模型大鼠血清CRH、ACTH、CORT含量的影响
(±S,n=10)
表10本发明药物对慢性应激抑郁模型大鼠血清T3、T4、TSH和IL-2、IL-6含量的影响
(±S,n=10)
表11本发明药物对慢性应激抑郁模型大鼠海马神经元凋亡的影响(单位:%,n=10,±s)
表12本发明药物对慢性应激抑郁模型大鼠海马和前额叶皮层AC活性的影响(pmoL/mg/min,±s,n=10)
表13本发明药物对慢性应激抑郁模型大鼠海马和前额叶皮层cAMP、PKA含量的影响(ng·mg-1,±s,n=10)
以上结果表明,本发明药物可能调节抑郁模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴和下丘脑-垂体-甲状腺轴功能以及免疫功能,抑制慢性应激造成的大鼠海马神经元凋亡和通过上调海马和前额叶皮层AC-cAMP-PKA信号通路而发挥抗抑郁作用。
⑸综上所述,本发明的药理研究表明,对多种抑郁模型均有特异性地抑制作用,并能显著升高抑郁动物脑内5-羟色胺、多巴胺、去甲肾上腺素,以及抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴的亢奋、海马神经元的凋亡,调节脑内环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)信号通路而达到抗抑郁作用。
3、本发明对小鼠的急性毒性实验:
⑴目的:
急性毒性实验处在药物毒理研究的早期阶段,是认识和研究药物对机体毒效应的第一步,通过观察动物中毒表现、毒作用强度和死亡情况,根据各种反应在不同剂量下出现的时间、发生率、剂量-反应关系、不同种属动物及实验室的历史背景数据、病理学检查的结果以及同类药物的特点,判断所出现的反应与药物作用的相关性,对阐明药物的毒性作用、剂量-反应(效应)关系和了解其毒性靶器官具有重要意义。本实验通过观察本发明药物对小鼠的急性毒性,考察其毒性作用。
⑵方法:
ICR小鼠48只,雌雄各半,体重18~20g,适应环境7天后进行实验。先选择8只小鼠进行预实验,将小鼠禁食不禁水16h,随机分成2组,每组雌、雄各2只。将本发明药物配制成(16号小鼠灌胃针头可以抽取)0.4g·ml-1,浓度较稠,但灌胃给药尚可,再增高浓度时药物很难抽吸,故此浓度为最大给药浓度。给小鼠灌胃该浓度的本发明药物采用2种体积,20ml·kg-1和40ml·kg-1,给药2次,剂量分别为16g·kg-1和32g·kg-1。结果所有动物均未见毒性反应和死亡。根据预实验结果,决定测定最大耐受量。将40只动物按体重随机分2组,本发明药物组和对照组,各组均有雌、雄小鼠10只。实验前小鼠先禁食16h,不禁水。本发明药物可配制的最大浓度为0.4g·ml-1,按小鼠体重灌胃给予本发明药物混悬液2次,给药体积为40ml·kg-1体重,给药剂量为32g·kg-1,约为人(60kg)日剂量的640倍(为小鼠与人按照体表面积折算后的倍数,1984版内蒙古蒙成药标准记载的水丸用量一般为3g/人/日,按照最大剂量计算,60kg人1日内用量为0.05g生药/kg)。对照组灌胃给予同体积的0.5%的羧甲基纤维素钠。给药后连续观察动物的反应情况,包括一般表现、呼吸、行为、活动及有无惊厥等;毒性症状发生的时间、持续时间、恢复情况,逐日记录动物死亡数。死亡动物进行大体解剖,观察各主要脏器情况。存活动物于实验期间每日称体重。观察至给药后14天。14天观察期结束后,对存活的动物进行大体解剖,肉眼观察各主要脏器有无明显病变。
⑶结果与结论:
由表14可见,在本发明药物32g·kg-1的剂量下,40只小鼠急性毒性实验没发现毒性。其本发明药物最大耐受量为32g·kg-1,约为60kg人临床推荐日剂量的640倍。实验结束后,对存活的动物进行解剖,肉眼观察主要脏器无明显病变。
表14本发明药物对小鼠急性毒性试验分组及最大耐受量
具体实施方式
实施例1一种治疗抑郁症的蒙药制剂,该制剂是由下述重量份(g)的原料药按常规方法制成的临床可接受的水丸:
山沉香12g、广枣10g、肉豆蔻10g、当归8g、红花8g、丁香4g、荜茇2g。
将上述原料药混匀粉粹,过120目筛,取粉末,制成水丸。
用法用量:一次11~15粒,一日1~2次,饭后温开水送服;7日为一疗程。
实施例2一种治疗抑郁症的蒙药制剂,该制剂是由下述重量份(g)的原料药按常规方法制成的临床可接受的胶囊。
山沉香12g、广枣10g、肉豆蔻10g、当归8g、红花8g、丁香4g、荜茇2g。
将上述原料药混匀粉粹,过120目筛,取粉末填装胶囊。
用法用量:一次3g,一日1~2次,饭后温开水送服;7日为一疗程。
实施例3一种治疗抑郁症的蒙药制剂,该制剂是由下述重量份(g)的原料药按常规方法制成的临床可接受的散剂。
山沉香10g、广枣8g、肉豆蔻8g、当归6g、红花6g、丁香2g、荜茇2g。
将上述原料药混匀粉粹,过120目筛即可。
用法用量:一次3g,一日1~2次,饭后温开水送服;7日为一疗程。
实施例4一种治疗抑郁症的蒙药制剂,该制剂是由下述重量份(g)的原料药按常规方法制成的临床可接受的片剂。
山沉香14g、广枣12g、肉豆蔻12g、当归10g、红花10g、丁香6g、荜茇4g。
将上述原料药混匀粉粹,过120目筛,得到粉料;然后将粉料按常规方法与乳糖、糊精、淀粉、羧甲基淀粉混匀,经制粒、干燥、压片,得到片剂。
用法用量:一次6片,一日1~2次,饭后温开水送服;7日为一疗程。
实施例5一种治疗抑郁症的蒙药制剂,该制剂是由下述重量份(g)的原料药按常规方法制成的临床可接受的颗粒剂。
山沉香11g、广枣9g、肉豆蔻9g、当归7g、红花7g、丁香3g、荜茇3g。
将上述原料药混匀粉粹,过120目筛,得到粉料;然后将粉料按常规方法与乳糖、糊精、乙醇混匀,经制粒、干燥,得到颗粒剂。
用法用量:一次4g,一日1~2次,饭后温开水送服;7日为一疗程。
Claims (2)
1.一种治疗抑郁症的蒙药制剂,其特征在于:该制剂是由下述重量份的原料药按常规方法制成的任何临床可接受的剂型:
山沉香10~14份、广枣8~12份、肉豆蔻8~12份、当归6~10份、红花6~10份、丁香2~6份、荜茇2~4份。
2.如权利要求1所述的一种治疗抑郁症的蒙药制剂,其特征在于:所述剂型是指散剂、丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂中的任意一种。
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