CN104489687A - 含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品,其特征在于,采用保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01与中药材提取物组成的复合配方,该配方中含副干酪乳杆菌ZPY01的重量百分比为20%~50%,其余为中药提取物;所述中药材提取物为下列重量配比的中药材:蒲公英15份、马齿笕25份、白术6份、白芍8份、茉莉花6份、桃仁8份、藏红花1份,加水煎煮所得的提取物。可应用于预防和治疗非酒精性脂肪肝。
Description
技术领域
本发明涉及含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品。
背景技术
脂肪肝,是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变。脂肪性肝病正严重威胁国人的健康,成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病,已被公认为隐蔽性肝硬化的常见原因。脂肪肝是一种常见的临床现象,而非一种独立的疾病。其临床表现轻者无症状,重者病情凶猛。一般而言,脂肪肝属可逆性疾病,早期诊断并及时治疗常可恢复正常。
脂肪肝包括酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝两大类。酒精性脂肪肝一般不需特殊治疗,大多在戒酒和治疗1个月左右,肝内脂肪减少,轻者数月后消失,重者一到两年消失。非酒精性脂肪肝的诊断需符合以下3项条件:① 无饮酒史或饮酒折合乙醇量小于140g/周(女性<70g/周);② 除外病毒性肝炎、药物性肝病、全胃肠外营养、肝豆状核变性、自身免疫性肝病等可导致脂肪肝的特定疾病;③肝活检组织学改变符合脂肪性肝病的病理学诊断标准。在中医学中并无此病名,但根据其临床表现,众多学者认为其当归属于中医学的“胁痛”、“肥气”、“肝着”、“痰浊”、“积聚”等范畴。
目前本病治疗的目标是延缓疾病进展及并发症的发生。主要方法包括基础治疗和药物治疗,极少数患者需肝移植。基础治疗方法如控制饮食、增加有氧运动、减肥等。西药尚无防治脂肪肝的有效药物,如维生素B、C、E,卵磷脂、熊去氧胆酸、水飞蓟素、肌苷、辅酶A、还原型谷胱甘肽、牛磺酸、肉毒碱乳清酸盐、肝泰乐,以及某些降脂药物等。中医药治疗本病多是针对湿痰瘀阻互结,痹阻肝络的基本病机,采用疏肝理气、活血化瘀、健脾祛痰、清热利湿和补益肝肾等治法,临床上确有疗效。
由于任何药物进入体内都要经过肝脏解毒,在选用药物时更要慎重,谨防药物的毒副作用,特别对肝脏有损害的药物绝对不能用,避免进一步加重肝脏的损害。
本发明所涉及的中药材均可见记载于《中华本草》。
现代的人体及动物实验证明活的乳酸菌具有确切的降胆固醇作用。但是由于人体肠道内是含有胆盐的酸性环境,所以常见的乳酸菌在人体消化道内难以存活,以至于应用乳酸菌实现降低胆固醇的发现难以在临床有效实施。
发明内容
本发明的目的在于提供一种含有一种副干酪乳杆菌与中药材提取物复合配方的保健食品。
本发明是通过如下技术方案实现的:
含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品,其特征在于,采用保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01与中药材提取物组成的复合配方,该配方中含副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉的重量百分比为20%~50%,其余为中药提取物;
所述中药材提取物为下列重量配比的中药材:蒲公英15份、马齿笕25份、白术6份、白芍8份、茉莉花6份、桃仁8份、藏红花1份,加水煎煮所得的提取物。
所述的副干酪乳杆菌ZPY01按照以下步骤进行发酵培养:(1)制备脱脂乳培养基:1000ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉,溶解后分装到试管中,121℃条件下灭菌15min,备用;(2)菌种的活化:将菌种接种至脱脂乳培养基中,37℃恒温培养;反复接种培养,直至活化到凝乳时间为4~5h,得发酵液;
所述副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉的制备方法:将上述发酵液离心分离菌体得到菌泥,向菌泥中加入1倍重量的海藻糖,乳化冻干,即得到所述的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉。
所述中药材提取物的提取方法为:称取所述重量配比的药材,加8倍量水,煎煮1.5小时,过滤;滤渣加6倍量水,煎煮1小时,过滤;合并滤液,浓缩,干燥。
所述的含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品,应用于预防和治疗非酒精性脂肪肝。
发明人认为,肝脏是脂质代谢的中心,参与脂蛋白的合成和分解。非酒精性脂肪肝以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征,以肝细胞脂肪变性和脂肪贮积为病理特征。因此,降血脂和护肝是治疗本病的根本。
本发明所采用的保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01为发明人新近提纯的新菌种,该菌种具有较强的耐酸性,在pH2.5的酸性条件下可以保持4h活性;对胆盐的抗性也比较明显,能耐受0.40%牛胆酸钠。能够实现在人体消化道长时间存活并发挥降低胆固醇的功效。
非酒精性脂肪肝的病机主要为肝失疏泄,脾失健运,湿热内蕴、痰湿内生、瘀血阻滞,而最终形成痰瘀互结。本发明方中重用马齿笕、蒲公英入肝经,清热解毒,利湿化浊;茉莉花行气化痰;白术健脾益气;白芍养血柔肝;桃仁以及少量藏红花活血化淤;诸药合用,共奏清热解毒、利湿化浊、健脾柔肝、活血化瘀之功效。
本发明采用副干酪乳杆菌ZPY01与传统中药结合,从而实现从根本调理病根的同时迅速降低胆固醇的功效,标本兼治。
本发明所选用的原料药食两用,安全性高,适于长期服用。
下面结合实验数据说明副干酪乳杆菌ZPY01的特性:
一、实验材料与方法
(一)、材料
1、菌种
实验菌种来自臧牧民自制牦牛酸奶中,对其进行筛选分离后,参照伯杰氏细菌鉴定手册(第八版)和《乳酸菌——生物学基础及应用》,对其进行生理生化鉴定。形态观察和生理生化鉴定结果表明:分离菌为副干酪乳杆菌,命名为副干酪乳杆菌ZPY01,实验编号为:Lp—ZPY01;对照菌株Lactobacillus paracasei为公知常见菌株,来自鲁东大学生命科学学院发酵室,实验编号为:Lp—CK。
2、培养基
MRS培养基;胆固醇培养基:在MRS培养基中添加0.3mg/ml的胆固醇;脱脂乳培养基:新西兰恒天然脱脂奶粉,121℃灭菌10min。
3、试剂
牛胆酸钠;胆固醇。
4、仪器与设备
722光栅分光光度计,恒温水浴锅、电热蒸汽灭菌锅、生化培养箱、pH计、超净工作台等。
(二)、方法
1、脱脂乳培养基
10%脱脂乳培养基:1000ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉,溶解后分装到试管中,每支分装10ml,121℃、15min灭菌后备用。
2、菌种的活化
将菌种接种至10ml已灭菌的脱脂牛奶中,37℃恒温培养。反复接种培养,直至活化到凝乳时间为4~5h。
3、菌株抗酸性测定
用1.0mol/L的HCl将MRS培养基调至pH3.5、pH2.5。将活化好的菌液以1.0%的接种量分别接种于MRS 液体培养基中,37℃恒温培养4.0h后,重新接入新鲜培养基中(接种量1.0%),每隔7h取样测定在波长600nm处的吸光度。绘制菌株的生长曲线,检测菌株对酸的耐受性,实验重复3次,取其平均值。
4、菌株抗胆盐测定
在MRS培养基中分别加入牛胆酸钠,使胆盐浓度分别为0.3%和0.4%。将活化好的菌以1.0%的接种量分别接种于MRS液体培养基中,每隔7h取样测定在波长600nm处的吸光度。绘制菌株的生长曲线,比较菌株生长与胆盐含量的关系,实验重复3次,取其平均值。
5、胆固醇测定方法的建立
将活化好的菌液以1.0%的接种量分别接种于胆固醇培养基中,37℃恒温培养72h,以未接菌的培养基为空白对照。胆固醇含量的测定参照GB/T15206—1994食品中胆固醇的测定方法:直接离心铁矾比色法。用可见分光光度计在波长560nm 处测定其光密度。胆固醇清除率按下式计算:
式中:A为发酵72h,在560nm处测定的培养液的光密度(OD值);C为空白对照的OD值。
二、实验结果与分析
(一)、菌株抗酸能力实验
食物停留在酸性胃环境中的时间约为2—4h。进食后由于食物的中和会使pH值上升至3或更高一些,但在消化过程中随着胃酸的分泌,胃液pH值又会下降。
本发明模拟人体胃肠环境,将MRS培养基用1.0mol/L的HCl将pH值调至pH3.5和pH2.5形成两种不同酸度的实验环境,将副干酪乳杆菌ZPY01和对照菌株La—CK以1.0%的接种量分别接种于MRS液体培养基中,37℃恒温培养4.0h后,重新接入新鲜培养基中,每隔7h取样测定在波长600nm处的吸光度。实验重复3次,取其平均值。绘制菌株的生长曲线,其生长曲线见图1。
由图1可知,两株菌经不同的pH处理,其生长情况不同。经pH3.5处理后的生长情况均好于pH2.5处理后的生长情况。两株菌经pH2.5处理后其休眠期均延长,说明酸性环境对菌株的生长影响很大,环境酸性越低对菌株的生长越不利。经pH2.5处理、培养42h以后,副干酪乳杆菌ZPY01的生长情况明显好于副干酪乳杆菌La—CK,说明副干酪乳杆菌ZPY01在pH2.5的环境中可以良好生长,对酸具有较强的耐受性,具有很好的耐胃酸能力。
(二)、菌株抗胆汁盐能力实验
人体小肠中胆汁盐含量在0.30%左右。模拟人体胃肠环境,在MRS培养基中分别加入牛胆酸钠,使胆盐浓度分别为0.3%和0.4%。将副干酪乳杆菌ZPY01和对照菌株La—CK以1.0%的接种量分别接种于MRS液体培养基中,每隔7h取样测定在波长600nm处的吸光度,实验重复3次,取其平均值。绘制菌株的生长曲线,其生长曲线见图2。
由图2可知,这两种菌株都具有良好的抗胆汁盐能力,如在0.4%的胆汁盐环境中这两株菌都能生长。但副干酪乳杆菌ZPY01在这两个培养基中的生长情况均优于副干酪乳杆菌La—CK。结果说明:副干酪乳杆菌ZPY01抗胆汁盐能力优于副干酪乳杆菌La—CK。
(三)、菌株清除胆固醇能力实验
将副干酪乳杆菌ZPY01和副干酪乳杆菌La—CK以1.0%的接种量分别接种于胆固醇培养基中,37℃恒温培养72h后,以未接菌的培养基为空白对照,胆固醇清除率实验结果见表1。
表1 菌株的胆固醇清除能力
菌株 | 胆固醇脱除率 (%) |
副干酪乳杆菌ZPY01 | 43.2 |
副干酪乳杆菌La—CK | 23.5 |
由表1可知,副干酪乳杆菌ZPY01降胆固醇的效率较高,达到43.2%,是一株具有高效降胆固醇功能的乳酸菌。
益生菌体外降低胆固醇的机理目前尚无定论。可能机理主要包括(1)、沉淀理论:游离胆酸盐与胆固醇的共沉淀作用。(2)吸收理论:细菌对胆固醇的吸收。(3)胆盐水解酶理论:把结合态的胆盐催化水解为氨基酸残基和游离胆盐,从而促进胆固醇的分解代谢。(4)结合理论:胆固醇结合到乳酸菌的细胞膜或壁上。(5)共沉淀和吸收共同作用。
附图说明
图1是本发明菌株Lp—ZPY01和对照菌株La-CK经低pH处理后的生长曲线。
图2是胆盐对本发明菌株Lp—ZPY01和对照菌株La-CK生长的影响曲线。
具体实施方式
本发明所采用的菌种现保藏于:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,邮政编码:100101;保藏中心登记入册编号:10059;分类命名:副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei;保藏日:2014年11月26日。
本发明副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)ZPY01具有以下特性:
(1)、菌落边缘整齐、表面光滑、扁平,呈乳白色,为圆形,直径大多1.0mm以上;
(2)、镜检为无芽孢的长杆菌,单个或成对出现;
(3)、在pH2.5处理4小时之后的存活率为61%;
(4)、对胆汁盐的抗性比较明显,能耐受0.40%牛胆酸钠;
(5)、其体外胆固醇清除率达43.2%。
下面结合实施例进一步说明本发明:
实施例1
含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品,采用保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01与中药材提取物组成的复合配方,该配方中含副干酪乳杆菌ZPY01的重量百分比为30%,其余为中药提取物;
所述中药材提取物为下列重量配比的中药材:蒲公英15份、马齿笕25份、白术6份、白芍8份、茉莉花6份、桃仁8份、藏红花1份,加水煎煮所得的提取物;提取方法为:称取所述重量配比的药材,加8倍量水,煎煮1.5小时,过滤;滤渣加6倍量水,煎煮1小时,过滤;合并滤液,浓缩,干燥。
所述的副干酪乳杆菌ZPY01的发酵培养按照以下步骤进行:(1)制备脱脂乳培养基:1000ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉,溶解后分装到试管中,121℃条件下灭菌15min,备用;(2)菌种的活化:将菌种接种至脱脂乳培养基中,37℃恒温培养;反复接种培养,直至活化到凝乳时间为4~5h。
将发酵培养后得到的发酵液,离心分离菌体得到菌泥,向菌泥中加入1倍重量的冻干保护剂海藻糖,乳化冻干,即得到所述的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉。
取30%重量的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉,与70%重量的上述中药材提取物混合均匀,装入胶囊壳,封装,制得本发明保健食品的胶囊剂。
可用于预防和治疗非酒精性脂肪肝。每日建议用量12克,分2~3次服用。
实施例2
含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品,采用保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01与中药材提取物组成的复合配方,该配方中含副干酪乳杆菌ZPY01的重量百分比为20%,其余为中药提取物;
所述中药材提取物为下列重量配比的中药材:蒲公英15份、马齿笕25份、白术6份、白芍8份、茉莉花6份、桃仁8份、藏红花1份,加水煎煮所得的提取物;提取方法为:称取所述重量配比的药材,加8倍量水,煎煮1.5小时,过滤;滤渣加6倍量水,煎煮1小时,过滤;合并滤液,浓缩,干燥。
所述的副干酪乳杆菌ZPY01的发酵培养按照以下步骤进行:(1)制备脱脂乳培养基:1000ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉,溶解后分装到试管中,121℃条件下灭菌15min,备用;(2)菌种的活化:将菌种接种至脱脂乳培养基中,37℃恒温培养;反复接种培养,直至活化到凝乳时间为4~5h。
将发酵培养后得到的发酵液,离心分离菌体得到菌泥,向菌泥中加入1倍重量的冻干保护剂海藻糖,乳化冻干,即得到所述的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉。
取20%重量的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉,与80%重量的上述中药材提取物混合均匀,装入胶囊壳,封装,制得本发明保健食品的胶囊剂。
可用于预防和治疗非酒精性脂肪肝。每日建议用量10克,分2~3次服用。
实施例3
含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品,采用保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01与中药材提取物组成的复合配方,该配方中含副干酪乳杆菌ZPY01的重量百分比为50%,其余为中药提取物;
所述中药材提取物为下列重量配比的中药材:蒲公英15份、马齿笕25份、白术6份、白芍8份、茉莉花6份、桃仁8份、藏红花1份,加水煎煮所得的提取物;提取方法为:称取所述重量配比的药材,加8倍量水,煎煮1.5小时,过滤;滤渣加6倍量水,煎煮1小时,过滤;合并滤液,浓缩,干燥。
所述的副干酪乳杆菌ZPY01的发酵培养按照以下步骤进行:(1)制备脱脂乳培养基:1000ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉,溶解后分装到试管中,121℃条件下灭菌15min,备用;(2)菌种的活化:将菌种接种至脱脂乳培养基中,37℃恒温培养;反复接种培养,直至活化到凝乳时间为4~5h。
将发酵培养后得到的发酵液,离心分离菌体得到菌泥,向菌泥中加入1倍重量的冻干保护剂海藻糖,乳化冻干,即得到所述的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉。
取50%重量的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉,与50%重量的上述中药材提取物混合均匀,装入胶囊壳,封装,制得本发明保健食品的胶囊剂。
可用于预防和治疗非酒精性脂肪肝。每日建议用量15克,分2~3次服用。
下面结合临床试验数据来说明本发明的有益效果:
1、临床资料
1.1 一般资料:申请人共收集40例患有非酒精性脂肪肝的门诊病例,其中男性24例、女性16例;年龄30—62岁;其中伴高脂血症者37例。
1.2 诊断标准:①肝区胀满,隐痛或两胁不适,胃脘满闷不适,疲劳乏力,烦急,大便黏滞不爽,腹胀食后为甚。②B超显示肝区光点密集增粗,回声增强,小血管显示不清,肝后缘回声衰减;或CT检查肝密度普遍减低。③肝功能检查血清丙氨酸氨基转移酶(ATL),天冬氨酸氨基转移酶(AST)轻度升高。④血检胆固醇(CHO)甘油三酯(TG)增高。
2、治疗方法
所有患者口服本发明按照具体实施例1制得的胶囊,3次/d,每次4g,4周1个疗程。
3、疗效观察
3.1 疗效标准:显效:症状及体征消失,转氨酶及血脂均恢复正常,B超肝脏缩小,透亮度减低,肝回声光点减低。有效:症状及体征基本消失,转氨酶及血脂较前有所下降。无效:症状、体征及辅助检查均无好转。
3.2 治疗结果:
40例患者服用2个疗程后,其中显效33例,有效3例,无效4例,总有效率90%。
Claims (4)
1.含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品,其特征在于,采用保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01与中药材提取物组成的复合配方,该配方中含副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉的重量百分比为20%~50%,其余为中药提取物;
所述中药材提取物为下列重量配比的中药材:蒲公英15份、马齿笕25份、白术6份、白芍8份、茉莉花6份、桃仁8份、藏红花1份,加水煎煮所得的提取物。
2.根据权利要求1 所述的含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品,其特征在于,所述的副干酪乳杆菌ZPY01按照以下步骤进行发酵培养:(1)制备脱脂乳培养基:1000ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉,溶解后分装到试管中,121℃条件下灭菌15min,备用;(2)菌种的活化:将菌种接种至脱脂乳培养基中,37℃恒温培养;反复接种培养,直至活化到凝乳时间为4~5h,得发酵液;
所述副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉的制备方法:将上述发酵液离心分离菌体得到菌泥,向菌泥中加入1倍重量的海藻糖,乳化冻干,即得到所述的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉。
3.根据权利要求1 所述的含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品,其特征在于,所述中药材提取物的提取方法为:称取所述重量配比的药材,加8倍量水,煎煮1.5小时,过滤;滤渣加6倍量水,煎煮1小时,过滤;合并滤液,浓缩,干燥。
4.根据权利要求4所述的含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗脂肪肝的保健食品,其特征在于,应用于预防和治疗非酒精性脂肪肝。
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