CN104483417B - 一种疏风止咳的中药组合物的质量检测方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，通过选择合适的色谱条件，特定选择流动相组成以及梯度洗脱程序，可以同时对该药物组成中的芍药苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸铵、柴胡皂苷B2等有效成分进行鉴别，克服了由于中药药味繁多、化学成分复杂造成的干扰以致不能全面的、清楚的对所述疏风止咳的中药组合物的质量进行检测的缺陷，实现了对所述疏风止咳的中药组合物质量的稳定性和一致性的控制。

Description

一种疏风止咳的中药组合物的质量检测方法及其应用

技术领域

本发明属于中药制剂的质量检测领域，具体涉及一种疏风止咳的中药组合物的质量检测方法及其应用。

背景技术

咳嗽变异性哮喘(Cough variant asthma,CVA)又称隐匿型哮喘或咳嗽性哮喘，是一种特殊类型的哮喘，咳嗽是其唯一或主要临床表现，无明显喘息、气促等症状或体征，但是由于哮喘患者的呼吸道持续存在变态反应性的炎症，支气管上皮肿胀，使得气道内皮下的刺激感受器兴奋阀值低于正常人，因此有气道高反应性，对各种外界刺激物的感应性增高，稍有刺激就发生哮喘，并且难以治愈，容易反复发作，如感冒、冷空气、灰尘、油烟等容易诱发或加重咳嗽。

咳嗽变异性哮喘主要临床表现为刺激性干咳，通常咳嗽比较剧烈，夜间咳嗽为其重要特征。感冒、冷空气、灰尘、油烟等容易诱发或加重咳嗽。

咳嗽变异性哮喘虽不会危及生命但是因其长期持续且多在夜间发作或加剧的特征极大地降低了患者的生活质量，若不进行正确的早期干预治疗，不仅易复发，而且易发展成典型哮喘。又由于CVA几乎没有任何喘息和呼吸困难症状，故常被漏诊、误诊、误治，许多患者因长期反复无效的使用抗生素和镇咳药物，导致病情迁延加重。

咳嗽变异性哮喘的发病机制目前尚不完全清楚，其发病机制与典型支气管哮喘相同,其病理机制是由于大量细胞因子、粘附分子、炎性细胞和炎性介质参与气道变应性炎症的调节。现代医学对本病的治疗，多以支气管扩张剂、吸入激素、白三烯受体调节为主，此类药物短期疗效尚可，但是停药后咳嗽易复发，且易产生耐药和毒、副作用，患者依从性差，也不能从根本上使气道慢性炎症得到有效控制，使得气道高反应性下降、咳嗽敏感性降低。因而探索和寻找更有效的治疗方法和药物一直是该病研究的一个重点。

近年来，经过中医药广泛深入的研究和临床医师多年的临床实践，证实其不但具有良好的临床疗效，且弥补了西药临床疗效不佳及副作用较大等不足。但是鉴于中药是一个由多种成分、多种因素构成的复杂体系，其化学成分的多样性与复杂性是其疗效的物质基础，该物质基础长久以来处于一种模糊的状态；复方的质量优劣难以以明确的指标进行评价，然而中药复方的质量不稳定性、不可控性，直接导致了中药复方治疗效果的不稳定、不可控性。而中药的质量控制方法必须能对起效的全部成分如有机成分、无机成分或络合物成分进行控制，只有这样，所建立的质量控制体系才能真正达到控制中药质量、保证中药用药安全有效地目的。因此，建立符合中医药特点的现代质量控制体系，攻克中药质量分析与评价的难题，改进中药现有质量控制方法已经成为人们积极研究的课题。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种疏风止咳的中药组合物的质量检测方法及其应用，克服了由于中药药味繁多、化学成分复杂造成的干扰以致不能全面的、清楚的对所述疏风止咳的中药组合物的质量进行检测的缺陷，提高了所述疏风止咳的中药组合物质量的稳定性、一致性和可控性。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，所述疏风止咳的中药组合物的原料药组成为：柴胡6-10重量份、黄芩6-10重量份、荆芥6-10重量份、防风6-10重量份、蜜款冬花6-10重量份、炒苦杏仁6-9重量份、炒白芍10-15重量份、乌梅6-10重量份、穿山龙10-15重量份、虎杖10-15重量份、射干6-10重量份、生甘草3-6重量份；

所述中药组合物的质量检测方法包括如下含量检测的步骤：

A、芍药苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸铵、柴胡皂苷B₂的含量检测：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物1克，研细，加入体积浓度为90-100％的甲醇溶液10-30ml，超声处理0.5-1小时，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：另取芍药苷对照品、升麻素苷对照品、虎杖苷对照品、甘草苷对照品、射干苷对照品、甘草酸铵对照品、柴胡皂苷B₂对照品适量，精密称定，加体积浓度为90-100％的甲醇溶液制成每1ml分别含芍药苷150μg、升麻素苷30μg、虎杖苷130μg、甘草苷30μg、射干苷25μg、甘草酸铵30μg和柴胡皂苷B₂25μg的混合溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为10cm，内径为4.6mm，粒径为2.6μm；流动相：以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按照以下程序进行梯度洗脱：0-25min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→10％：90％；25-26min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→14％：86％；26-35min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→14％：86％；35-36min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→34％：66％；36-54.5min，流动相A：流动相B的体积比为34％：66％→34％：66％；54.5-55min，流动相A：流动相B的体积比为34％：66％→10％：90％；55-60min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→10％：90％；控制流动相流速为0.5-1.5ml/min；控制柱温为20-40℃；检测波长：240-260nm；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算。

优选的，所述的疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，所述中药组合物的质量检测方法包括如下含量检测步骤：

A、芍药苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸铵、柴胡皂苷B₂的含量检测：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物1克，研细，加入甲醇20ml，超声处理40min，所述超声的功率为200-300w,频率为30-50kHz，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：另取芍药苷对照品、升麻素苷对照品、虎杖苷对照品、甘草苷对照品、射干苷对照品、甘草酸铵对照品、柴胡皂苷B₂对照品适量，精密称定，加体积浓度为100％的甲醇溶液制成每1ml分别含芍药苷150μg、升麻素苷30μg、虎杖苷130μg、甘草苷30μg、射干苷25μg、甘草酸铵30μg和柴胡皂苷B₂25μg的混合溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为10cm，内径为4.6mm，粒径为2.6μm；流动相：以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱；控制流动相流速为0.8ml/min；控制柱温为30℃；检测波长：250nm；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算。

所述的疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，所述中药组合物的质量检测方法还包括如下含量测定方法中的至少一种：

B、黄芩的含量测定：

供试品溶液的制备：精密称定所述中药组合物0.5克，精密加入60-80％乙醇溶液40-60ml，超声处理0.5-1小时，放冷，用60-80％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加90-100％甲醇溶液制成每1ml含150μg黄芩苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为18-26％：74-82％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相：控制流动相流速为0.5-1.5ml/min；控制柱温为20-40℃；检测波长：270-290nm，理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1-5μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得；或

C、炒白芍的含量测定：

供试品溶液的制备：精密称定所述中药组合物1克，精密加入体积浓度为60-80％乙醇溶液20-30ml，超声处理0.5-1小时，放冷，用体积浓度为60-80％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为90-100％的甲醇溶液制成每1ml含100μg芍药苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为8-16％:84-92％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相；控制流动相流速为0.5-1.5ml/min；控制柱温为20-40℃；检测波长240-260nm；理论塔板数按芍药苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得。

优选的，所述的疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，所述中药组合物的质量检测方法还包括如下含量测定方法中至少一种：

B、黄芩的含量测定：

供试品溶液的制备：精密称定所述中药组合物0.5克，精密加入70％乙醇溶液50ml，超声处理40min，所述超声的功率为200-300w,频率为30-50kHz，放冷，用70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含150μg黄芩苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为22％：78％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相：控制流动相流速为1ml/min；控制柱温为25℃；检测波长：280nm，理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2000。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1-5μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得；或

C、炒白芍的含量测定：

供试品溶液的制备：精密称定所述中药组合物1克，精密加入体积浓度为70％乙醇溶液25ml，超声处理40min，所述超声的功率为200-300w,频率为30-50kHz，放冷，用体积浓度为70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为90-100％的甲醇溶液制成每1ml含100μg芍药苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为12％:88％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相；控制流动相流速为1ml/min；控制柱温为25℃；检测波长250nm；理论塔板数按芍药苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得。

所述的疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，所述中药组合物的质量检测方法还包括如下至少一种定性鉴别的方法：

D、乌梅的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为1-3：1的乙醚-甲醇溶液20-40ml，超声处理10-60分钟，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为1-3:1-3的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：另取乌梅对照药材1g，加体积浓度为90-100％的甲醇溶液20-40ml，超声处理10-60分钟，滤过，蒸干所得滤液，加水10-30ml溶解残渣，随后加体积浓度为90-100％乙醚溶液振摇提取1-3次，每次10-30ml，合并乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣1-3次，每次10-30ml，浸泡约1-3分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇1-3ml溶解，即得；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各1-5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为18-22：3-7：6-10：0.1-0.3的环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂展开，然后取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在102-108℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；或

E、炒苦杏仁的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物2g，研细，加20-40ml的30～60℃水溶解，冷却，离心，取上清液通过D101型大孔吸附树脂柱，所述大孔吸附树脂柱内径为1.5cm，柱高为10cm，用70-90ml水洗脱，弃去水洗脱液，再用70-90ml体积浓度为10-30％的乙醇溶液洗脱，弃去乙醇洗脱液，再次用90-110ml体积浓度为40-60％的乙醇溶液洗脱，收集所述乙醇洗脱液，减压浓缩，向所得残渣中加体积浓度为90-100％甲醇溶液1-3ml溶解，即得；

对照品溶液的制备：另取苦杏仁苷对照品，加体积浓度为90-100％的甲醇溶液制成每1ml含2mg苦杏仁苷的溶液，即得；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1-3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为18-22：8-12：1-5：1-3的三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水溶液为展开剂，展开，然后取出，晾干，喷以含有0.5-1.0％磷钼酸的10-20％的硫酸乙醇溶液，在102-108℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；或

F、蜜款冬花的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为1-3：1的乙醚-甲醇溶液20-40ml，超声处理10-60分钟，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为1-3:1-3的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：取蜜款冬花、款冬花对照药材各2g，加体积浓度为90-100％的甲醇溶液20-40ml，超声处理10-60分钟，滤过，蒸干所得滤液，加水10-30ml溶解残渣，随后加体积浓度为90-100％乙醚溶液振摇提取1-3次，每次加入10-30ml，合并所述乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣1-3次，每次加入10-30ml，浸泡约1-3分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇1-3ml溶解，即得蜜款冬花、款冬花对照品溶液；

鉴别：照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1～5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1-5:1的60～90℃的石油醚－丙酮为展开剂，展开二次，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在102-108℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

优选的，所述的疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，所述中药组合物的质量检测方法还包括如下至少一种定性鉴别的方法：

D、乌梅的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为2：1的乙醚-甲醇溶液30ml，超声处理30分钟，所述超声的功率为200-300w,频率为30-50kHz，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为1:1的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：另取乌梅对照药材1g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，蒸干所得滤液，加水20ml溶解残渣，随后加乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣2次，每次15ml，浸泡约1.5分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇2ml溶解，即得；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各1-5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为20：5：8：0.1的环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂展开，然后取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；或

E、炒苦杏仁的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物2g，研细，加30ml的50℃水溶解，冷却，离心，取上清液通过D101型大孔吸附树脂柱，所述大孔吸附树脂柱内径为1.5cm，柱高为10cm，用80ml水洗脱，弃去水洗脱液，再用80ml体积浓度为20％的乙醇溶液洗脱，弃去乙醇洗脱液，再次用100ml体积浓度为50％的乙醇溶液洗脱，收集所述乙醇洗脱液，减压浓缩，向所得残渣中加甲醇溶液1ml溶解，即得；

对照品溶液的制备：另取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg苦杏仁苷的溶液，即得；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1-3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为20：10：3：1的三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水溶液为展开剂，展开，然后取出，晾干，喷以含有0.8％磷钼酸的15％硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；或

F、蜜款冬花的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为2：1的乙醚-甲醇溶液30ml，超声处理30分钟，所述超声的功率为200-300w,频率为30-50kHz，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为1:1的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：取蜜款冬花、款冬花对照药材各2g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，蒸干所得滤液，加水20ml溶解残渣，随后加乙醚振摇提取2次，每次加入20ml，合并乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣2次，每次加入15ml，浸泡约1.5分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇2ml溶解，即得蜜款冬花、款冬花对照品溶液；

鉴别：照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1～5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3:1的60～90℃的石油醚－丙酮为展开剂，展开二次，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

所述的疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，所述中药组合物的原料药组成为：柴胡8重量份、黄芩8重量份、荆芥8重量份、防风8重量份、蜜款冬花8重量份、炒苦杏仁7重量份、炒白芍13重量份、乌梅8重量份、穿山龙13重量份、虎杖13重量份、射干8重量份、生甘草4重量份；或

柴胡6重量份、黄芩10重量份、荆芥6重量份、防风10重量份、蜜款冬花6重量份、炒苦杏仁9重量份、炒白芍10重量份、乌梅10重量份、穿山龙10重量份、虎杖15重量份、射干6重量份、生甘草6重量份；或

柴胡10重量份、黄芩6重量份、荆芥10重量份、防风6重量份、蜜款冬花10重量份、炒苦杏仁6重量份、炒白芍15重量份、乌梅6重量份、穿山龙15重量份、虎杖10重量份、射干10重量份、生甘草3重量份；或

柴胡7重量份、黄芩9重量份、荆芥7重量份、防风9重量份、蜜款冬花7重量份、炒苦杏仁8重量份、炒白芍12重量份、乌梅9重量份、穿山龙12重量份、虎杖14重量份、射干7重量份、生甘草5重量份；或

柴胡9重量份、黄芩7重量份、荆芥9重量份、防风7重量份、蜜款冬花9重量份、炒苦杏仁7重量份、炒白芍14重量份、乌梅7重量份、穿山龙14重量份、虎杖11重量份、射干9重量份、生甘草4重量份。

所述的疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，还包括制备所述中药组合物的方法，包括如下步骤：

(1)按照选定重量份数称取柴胡、黄芩、荆芥、防风、蜜款冬花、炒苦杏仁、炒白芍、乌梅、穿山龙、虎杖、射干、生甘草，分别粉碎成细粉后混合或混合后粉碎成细粉，过筛备用；

(2)取上述细粉加水提取，合并并过滤所得提取液，将所得滤液减压浓缩获得清膏；

(3)将获得的清膏进行干燥，制成干膏粉，然后选择性的加入常规辅料，按照常规工艺制成临床上可接受的剂型。

所述的疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，制备所述中药组合物的方法，包括如下步骤：

(1)按照选定重量份数称取柴胡、黄芩、荆芥、防风、蜜款冬花、炒苦杏仁、炒白芍、乌梅、穿山龙、虎杖、射干、生甘草，分别粉碎成细粉后混合或混合后粉碎成细粉，过筛备用；

(2)取上述细粉加水煎煮1-3次，每次1-3小时，每次加入8-12倍所述细粉重量的水，合并并过滤所得煎煮液，将所得滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.10-1.15的清膏；

(3)将获得的清膏进行干燥，制成干膏粉，然后选择性的加入常规辅料，按照常规工艺制成临床上可接受的剂型。

本发明提供一种所述的质量检测方法在中药组合物或药物制剂质量检测领域中的用途。

本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：

(1)本发明所述的疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，通过严格控制高效液相色谱的条件，选择流动相组成以及梯度洗脱的程序，有力的克服了由于中药药味繁多、化学成分复杂造成的干扰以致不能全面的、清楚的对所述疏风止咳的中药组合物的质量进行检测的缺陷，得到以对该药物组成中的芍药苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸铵、柴胡皂苷B₂等有效成分的色谱峰，从而实现了全面的、清楚的对所述疏风止咳的中药组合物进行质量检测，进一步实现了所述疏风止咳的中药组合物质量的控制，且该质量检测方法具有简单快速、稳定可靠、精密度高、重现性好、易于掌握的优势；

(2)本发明所述的疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，通过对供试品溶液或对照品溶液进行超声处理，特定选择了适于所述疏风止咳的中药组合物的超声功率、频率以及处理时间，使得获得的供试品溶液或对照品溶液更有利于药物的质量检测，使得检测得到的色谱更精确、稳定可靠，且该超声处理方法具有方便，时间短，操作简单的优点；

(3)本发明所述的疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，通过对黄芩和/或白芍的含量测定，使得对所述疏风止咳的中药组合物的质量检测更全面，更完善的表征了药物的有效活性组分及其质量，有利于对活性成分的全面监控，保证了所述疏风止咳的中药组合物质量的稳定性、一致性和可控性，并确保了所述中药组合物的安全性和有效性；

(4)本发明所述的疏风止咳的中药组合物的质量检测方法，通过对乌梅和/或苦杏仁的鉴别，使得对所述疏风止咳的中药组合物的质量检测更全面，更完善的表征了药物的有效活性组分及其质量，有利于对活性成分的全面监控，进一步保证了所述疏风止咳的中药组合物质量的稳定性、一致性和可控性，并确保了所述中药组合物的安全性和有效性。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中

图1是本发明实施例2中对照品的检测色谱图；

图2是本发明实施例2中所述疏风止咳的中药组合物的检测色谱图；

图3是本发明实施例5中对照品的检测色谱图；

图4是本发明实施例5中所述疏风止咳的中药组合物的检测色谱图；

图5是本发明实施例5中所述的回归方程的曲线图；

图6是本发明实施例8中对照品的检测色谱图；

图7是本发明实施例8中所述疏风止咳的中药组合物的检测色谱图；

图8是本发明实施例8中所述的回归方程的曲线图；

图9是本发明实施例11中所述疏风止咳的中药组合物的薄层色谱图；

图10是本发明实施例14中所述疏风止咳的中药组合物的薄层色谱图；

图11是本发明实施例17中所述疏风止咳的中药组合物的薄层色谱图。

具体实施方式

实施例1

本实施为所述疏风止咳的中药组合物的制备，具体如下：

【处方】柴胡8重量份、黄芩8重量份、荆芥8重量份、防风8重量份、蜜款冬花8重量份、炒苦杏仁7重量份、炒白芍13重量份、乌梅8重量份、穿山龙13重量份、虎杖13重量份、射干8重量份、生甘草4重量份。

【制备方法】(1)按照选定重量份数称取柴胡、黄芩、荆芥、防风、蜜款冬花、炒苦杏仁、炒白芍、乌梅、穿山龙、虎杖、射干、生甘草，分别粉碎成细粉后混合或混合后粉碎成细粉，过筛备用；

(2)取上述细粉加水煎煮2次，每次2小时，第一次加入10倍所述细粉重量的水，第二次加入8倍所述细粉重量的水，合并并过滤所得煎煮液，将所得滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.13的清膏；

(3)将获得的清膏进行干燥，制成干膏粉，然后加入甜菊素3g和二氧化硅3g和适量糊精混合均匀，按照常规工艺制成临床上可接受的颗粒剂。

实施例2

本实施例对所述中药组合物的芍药苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸铵、柴胡皂苷B₂的含量进行检测。

取实施例1制备的所述中药组合物进行质量检测，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物1克，研细，加入体积浓度为100％的甲醇溶液20ml，超声处理40min，所述超声的功率为250w,频率为40kHz，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：另取芍药苷对照品、升麻素苷对照品、虎杖苷对照品、甘草苷对照品、射干苷对照品、甘草酸铵对照品、柴胡皂苷B₂对照品适量，精密称定，加体积浓度为100％的甲醇溶液制成每1ml分别含芍药苷150μg、升麻素苷30μg、虎杖苷130μg、甘草苷30μg、射干苷25μg、甘草酸铵30μg和柴胡皂苷B₂25μg的混合溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为10cm，内径为4.6mm，粒径为2.6μm；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按照以下程序进行梯度洗脱：0-25min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→10％：90％；25-26min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→14％：86％；26-35min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→14％：86％；35-36min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→34％：66％；36-54.5min，流动相A：流动相B的体积比为34％：66％→34％：66％；54.5-55min，流动相A：流动相B的体积比为34％：66％→10％：90％；55-60min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→10％：90％；控制流动相流速为0.8ml/min；控制柱温为30℃；检测波长：250nm；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算。所述对照品的谱图见图1所示，所述供试品检测所得到的谱图见图2所示。

可见，本实施例所述检测方法可有效将芍药苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸铵、柴胡皂苷B₂一次性的定性鉴别。

实施例3

本实施例对所述中药组合物的芍药苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸铵、柴胡皂苷B₂的含量进行检测。

取实施例1制备的所述中药组合物进行质量检测，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物1克，研细，加入体积浓度为90％的甲醇溶液30ml，超声处理0.5小时，所述超声的功率为200w,频率为50kHz，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：另取芍药苷对照品、升麻素苷对照品、虎杖苷对照品、甘草苷对照品、射干苷对照品、甘草酸铵对照品、柴胡皂苷B₂对照品适量，精密称定，加体积浓度为90％的甲醇溶液制成每1ml分别含芍药苷150μg、升麻素苷30μg、虎杖苷130μg、甘草苷30μg、射干苷25μg、甘草酸铵30μg和柴胡皂苷B₂25μg的混合溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为10cm，内径为4.6mm，粒径为2.6μm；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按照以下程序进行梯度洗脱：0-25min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→10％：90％；25-26min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→14％：86％；26-35min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→14％：86％；35-36min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→34％：66％；36-54.5min，流动相A：流动相B的体积比为34％：66％→34％：66％；54.5-55min，流动相A：流动相B的体积比为34％：66％→10％：90％；55-60min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→10％：90％；控制流动相流速为1.5ml/min；控制柱温为20℃；检测波长：260nm；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算。

实施例4

本实施例对所述中药组合物的芍药苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸铵、柴胡皂苷B₂的含量进行检测。

取实施例1制备的所述中药组合物进行质量检测，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物1克，研细，加入体积浓度为95％的甲醇溶液10ml，超声处理1小时，所述超声的功率为300w,频率为30kHz，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：另取芍药苷对照品、升麻素苷对照品、虎杖苷对照品、甘草苷对照品、射干苷对照品、甘草酸铵对照品、柴胡皂苷B2对照品适量，精密称定，加体积浓度为95％的甲醇溶液制成每1ml分别含芍药苷150μg、升麻素苷30μg、虎杖苷130μg、甘草苷30μg、射干苷25μg、甘草酸铵30μg和柴胡皂苷B₂25μg的混合溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为10cm，内径为4.6mm，粒径为2.6μm；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按照以下程序进行梯度洗脱：0-25min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→10％：90％；25-26min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→14％：86％；26-35min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→14％：86％；35-36min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→34％：66％；36-54.5min，流动相A：流动相B的体积比为34％：66％→34％：66％；54.5-55min，流动相A：流动相B的体积比为34％：66％→10％：90％；55-60min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→10％：90％；控制流动相流速为0.5ml/min；控制柱温为40℃；检测波长：240nm；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算。

实施例5

对实施例1制备的所述中药组合物中的黄芩进行含量测定，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取装量差异项下的所述中药组合物，研细，取约0.5克，精密称定，精密加入70％乙醇溶液50ml，超声处理40min，所述超声的功率为250w,频率为40kHz，放冷，用体积浓度为70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；以上述方法制备3个批次的样品的供试溶液进行检测；

对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含150μg黄芩苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为22％：78％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相：控制流动相流速为1ml/min；控制柱温为25℃；检测波长：280nm，理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1-5μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得。所述对照品的谱图见图3所示，所述供试品检测所得到的谱图见图4所示。

可见，本实施例所述检测方法可有效将黄芩进行一次性的检测，计算并拟合待测物的回归方程，黄芩苷0.01820μg～1.8202μg范围内进样量与峰面积有呈良好的线性关系，所述回归方程为Y＝3091x+11.03，R＝0.9995，所述回归方程的曲线图见图5所示，用外标一点法计算供试品中黄芩苷的含量即可。计算得到的黄芩苷含量见下表1。

表1 样品中黄芩苷的含量

实施例6

对实施例1制备的所述中药组合物中的黄芩进行含量测定，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取装量差异项下的所述中药组合物，研细，取约0.5克，精密称定，精密加入60％乙醇溶液60ml，超声处理0.5小时，所述超声的功率为300w，频率为30kHz，放冷，用体积浓度为80％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为90％甲醇溶液制成每1ml含150μg黄芩苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为18％：82％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相：控制流动相流速为0.5ml/min；控制柱温为40℃；检测波长：270nm，理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1-5μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得。

实施例7

对实施例1制备的所述中药组合物中的黄芩进行含量测定，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取装量差异项下的所述中药组合物，研细，取约0.5克，精密称定，精密加入80％乙醇溶液40ml，超声处理1小时，所述超声的功率为200w，频率为50kHz，放冷，用体积浓度为60％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为95％甲醇溶液制成每1ml含150μg黄芩苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为26％：74％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相：控制流动相流速为1.5ml/min；控制柱温为20℃；检测波长：290nm，理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1-5μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得。

实施例8

对实施例1制备的所述中药组合物中的炒白芍进行含量测定，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取装量差异项下的所述中药组合物，研细，取约1克，精密称定，精密加入体积浓度为70％乙醇溶液25ml，超声处理40min，所述超声的功率为250w,频率为40kHz，放冷，用体积浓度为70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；以上述方法制备3个批次的样品的供试溶液进行检测；

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含100μg芍药苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为12％:88％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相；控制流动相流速为1ml/min；控制柱温为25℃；检测波长250nm；理论塔板数按芍药苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得。所述对照品的谱图见图6所示，所述供试品检测所得到的谱图见图7所示。

可见，本实施例所述检测方法可有效将炒白芍进行检测，计算并拟合待测物的回归方程，芍药苷0.09034μg～1.6262μg范围内进样量与峰面积有呈良好的线性关系，所述回归方程为Y＝311.3x+1.199，R²＝0.9995，所述回归方程的曲线图见图8所示，用外标一点法计算芍药苷的含量即可。计算得到的芍药苷含量见下表2。

表2 样品中芍药苷的含量

实施例9

对实施例1制备的所述中药组合物中的炒白芍进行含量测定，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取装量差异项下的所述中药组合物，研细，取约1克，精密称定，精密加入体积浓度为60％乙醇溶液30ml，超声处理0.5小时，所述超声的功率为200w,频率为50kHz，放冷，用体积浓度为80％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为90％的甲醇溶液制成每1ml含100μg芍药苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为8％:92％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相；控制流动相流速为1.5ml/min；控制柱温为20℃；检测波长260nm；理论塔板数按芍药苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得。

实施例10

对实施例1制备的所述中药组合物中的炒白芍进行含量测定，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取装量差异项下的所述中药组合物，研细，取约1克，精密称定，精密加入体积浓度为80％乙醇溶液20ml，超声处理1小时，所述超声的功率为300w,频率为30kHz，放冷，用体积浓度为60％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为95％的甲醇溶液制成每1ml含100μg芍药苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为16％:84％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相；控制流动相流速为0.5ml/min；控制柱温为40℃；检测波长240nm；理论塔板数按芍药苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得。

实施例11

对实施例1制备的所述中药组合物中的乌梅进行鉴别，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为2：1的乙醚-甲醇溶液30ml，超声处理30分钟，所述超声的功率为250w,频率为40kHz，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为1:1的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：另取乌梅对照药材1g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，所述超声的功率为250w,频率为40kHz，滤过，蒸干所得滤液，加水20ml溶解残渣，随后加乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣2次，每次15ml，浸泡约1.5分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇2ml溶解，即得；

阴性样品溶液:按照供试品溶液的制备方法制备，其区别仅在于所述中药组合物中不含有乌梅；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各1-5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为20：5：8：0.1的环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂展开，然后取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，经阴性样品对照，阴性样品无干扰，所述谱图见图9所示，其中1为乌梅对照品，2、3、4为供试品样品，5为乌梅阴性样品。

实施例12

对实施例1制备的所述中药组合物中的乌梅进行鉴别，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为1：1的乙醚-甲醇溶液40ml，超声处理10分钟，所述超声的功率为200w,频率为50kHz，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为3:1的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：另取乌梅对照药材1g，加体积浓度为90％的甲醇溶液40ml，超声处理10分钟，所述超声的功率为200w,频率为50kHz，滤过，蒸干所得滤液，加水30ml溶解残渣，随后加体积浓度为90％乙醚溶液振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣3次，每次10ml，浸泡约3分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇1ml溶解，即得；

阴性样品溶液:按照供试品溶液的制备方法制备，其区别仅在于所述中药组合物中不含有乌梅；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各1-5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为18：7：6：0.3的环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂展开，然后取出，晾干，喷以12％硫酸乙醇溶液，在108℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例13

对实施例1制备的所述中药组合物中的乌梅进行鉴别，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为3：1的乙醚-甲醇溶液20ml，超声处理60分钟，所述超声的功率为300w,频率为30kHz，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为1:3的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：另取乌梅对照药材1g，加体积浓度为95％的甲醇溶液20ml，超声处理60分钟，所述超声的功率为300w,频率为30kHz，滤过，蒸干所得滤液，加水10ml溶解残渣，随后加体积浓度为95％乙醚溶液振摇提取1次，每次130ml，合并乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣1次，每次30ml，浸泡约1分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇3ml溶解，即得；

阴性样品溶液:按照供试品溶液的制备方法制备，其区别仅在于所述中药组合物中不含有乌梅；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各1-5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为22：3：10：0.1的环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂展开，然后取出，晾干，喷以8％硫酸乙醇溶液，在102℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例14

对实施例1制备的所述中药组合物中的炒苦杏仁进行鉴别，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物2g，研细，加30ml的50℃水溶解，冷却，离心，取上清液通过D101型大孔吸附树脂柱，所述大孔吸附树脂柱内径为1.5cm，柱高为10cm，用80ml水洗脱，弃去水洗脱液，再用80ml体积浓度为20％的乙醇溶液洗脱，弃去乙醇洗脱液，再次用100ml体积浓度为50％的乙醇溶液洗脱，收集所述乙醇洗脱液，减压浓缩，向所得残渣中加甲醇溶液1ml溶解，即得；

对照品溶液的制备：另取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg苦杏仁苷的溶液，即得；

阴性样品溶液:按照供试品溶液的制备方法制备，其区别仅在于所述中药组合物中不含有炒苦杏仁；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1-3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为20：10：3：1的三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水溶液为展开剂，展开，然后取出，晾干，喷以含有0.8％磷钼酸的15％硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，经阴性样品对照，阴性样品无干扰，所述谱图见图10所示，其中5为杏仁苷对照品，1、2、3为供试品样品，4为炒苦杏仁阴性样品。

实施例15

对实施例1制备的所述中药组合物中的苦杏仁进行鉴别，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物2g，研细，加20ml的60℃水溶解，冷却，离心，取上清液通过D101型大孔吸附树脂柱，所述大孔吸附树脂柱内径为1.5cm，柱高为10cm，用70ml水洗脱，弃去水洗脱液，再用90ml体积浓度为10％的乙醇溶液洗脱，弃去乙醇洗脱液，再次用110ml体积浓度为40％的乙醇溶液洗脱，收集所述乙醇洗脱液，减压浓缩，向所得残渣中加体积浓度为95％甲醇溶液1ml溶解，即得；

对照品溶液的制备：另取苦杏仁苷对照品，加体积浓度为90％的甲醇溶液制成每1ml含2mg苦杏仁苷的溶液，即得；

阴性样品溶液:按照供试品溶液的制备方法制备，其区别仅在于所述中药组合物中不含有苦杏仁；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1-3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为18：12：1：3的三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水溶液为展开剂，展开，然后取出，晾干，喷以含有0.5％磷钼酸的20％的硫酸乙醇溶液，在102℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例16

对实施例1制备的所述中药组合物中的炒苦杏仁进行鉴别，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物2g，研细，加40ml的30℃水溶解，冷却，离心，取上清液通过D101型大孔吸附树脂柱，所述大孔吸附树脂柱内径为1.5cm，柱高为10cm，用90ml水洗脱，弃去水洗脱液，再用70ml体积浓度为30％的乙醇溶液洗脱，弃去乙醇洗脱液，再次用90ml体积浓度为60％的乙醇溶液洗脱，收集所述乙醇洗脱液，减压浓缩，向所得残渣中加体积浓度为90％甲醇溶液3ml溶解，即得；

对照品溶液的制备：另取苦杏仁苷对照品，加体积浓度为95％的甲醇溶液制成每1ml含2mg苦杏仁苷的溶液，即得；

阴性样品溶液:按照供试品溶液的制备方法制备，其区别仅在于所述中药组合物中不含有炒苦杏仁；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1-3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为22：8：5：1的三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水溶液为展开剂，展开，然后取出，晾干，喷以含有1.0％磷钼酸的10％的硫酸乙醇溶液，在108℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例17

对实施例1制备的所述中药组合物中的蜜款冬花进行鉴别，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为2：1的乙醚-甲醇溶液30ml，超声处理30分钟，所述超声的功率为250w,频率为40kHz，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为1:1的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：分别取蜜款冬花、款冬花对照药材各2g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，所述超声的功率为250w,频率为40kHz，滤过，蒸干所得滤液，加水20ml溶解残渣，随后加乙醚振摇提取2次，每次加入20ml，合并乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣2次，每次加入15ml，浸泡约1.5分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇2ml溶解，即得蜜款冬花、款冬花对照品溶液；

阴性样品溶液:按照供试品溶液的制备方法制备，其区别仅在于所述中药组合物中不含有蜜款冬花；

鉴别：照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1～5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3:1的60～90℃的石油醚－丙酮为展开剂，展开二次，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，经阴性样品对照，阴性样品无干扰，所述谱图见图11所示，其中1为款冬花对照品，2为蜜款冬花对照品，3、4、5为供试品样品，6为款冬花阴性样品。

实施例18

对实施例1制备的所述中药组合物中的蜜款冬花进行鉴别，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为1：1的乙醚-甲醇溶液40ml，超声处理10分钟，所述超声的功率为200w,频率为50kHz，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为3:1的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：分别取蜜款冬花、款冬花对照药材各2g，加体积浓度为95％的甲醇溶液20ml，超声处理60分钟，所述超声的功率为200w,频率为50kHz，滤过，蒸干所得滤液，加水10ml溶解残渣，随后加体积浓度为95％乙醚溶液振摇提取1次，每次加入30ml，合并所述乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣1次，每次加入30ml，浸泡约1分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇3ml溶解，即得蜜款冬花、款冬花对照品溶液；

阴性样品溶液:按照供试品溶液的制备方法制备，其区别仅在于所述中药组合物中不含有蜜款冬花；

鉴别：照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1～5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1:1的60～90℃的石油醚－丙酮为展开剂，展开二次，取出，晾干，喷以12％硫酸乙醇溶液，在102℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例19

对实施例1制备的所述中药组合物中的蜜款冬花进行鉴别，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为3：1的乙醚-甲醇溶液20ml，超声处理60分钟，所述超声的功率为300w,频率为30kHz，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为1:3的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：分别取蜜款冬花、款冬花对照药材各2g，加体积浓度为90％的甲醇溶液40ml，超声处理10分钟，所述超声的功率为300w,频率为30kHz，滤过，蒸干所得滤液，加水30ml溶解残渣，随后加体积浓度为90％乙醚溶液振摇提取3次，每次加入10ml，合并所述乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣3次，每次加入10ml，浸泡约3分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇1ml溶解，即得蜜款冬花、款冬花对照品溶液；

阴性样品溶液:按照供试品溶液的制备方法制备，其区别仅在于所述中药组合物中不含有蜜款冬花；

鉴别：照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1～5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5:1的60～90℃的石油醚－丙酮为展开剂，展开二次，取出，晾干，喷以8％硫酸乙醇溶液，在108℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种疏风止咳的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述疏风止咳的中药组合物的原料药组成为：柴胡6-10重量份、黄芩6-10重量份、荆芥6-10重量份、防风6-10重量份、蜜款冬花6-10重量份、炒苦杏仁6-9重量份、炒白芍10-15重量份、乌梅6-10重量份、穿山龙10-15重量份、虎杖10-15重量份、射干6-10重量份、生甘草3-6重量份；

所述中药组合物的检测方法包括如下含量检测的步骤：

A、芍药苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸铵、柴胡皂苷B₂的含量检测：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物1克，研细，加入体积浓度为90-100％的甲醇溶液10-30ml，超声处理0.5-1小时，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：另取芍药苷对照品、升麻素苷对照品、虎杖苷对照品、甘草苷对照品、射干苷对照品、甘草酸铵对照品、柴胡皂苷B₂对照品适量，精密称定，加体积浓度为90-100％的甲醇溶液制成每1ml分别含芍药苷150μg、升麻素苷30μg、虎杖苷130μg、甘草苷30μg、射干苷25μg、甘草酸铵30μg和柴胡皂苷B₂ 25μg的混合溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按照以下程序进行梯度洗脱：0-25min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→10％：90％；25-26min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→14％：86％；26-35min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→14％：86％；35-36min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→34％：66％；36-54.5min，流动相A：流动相B的体积比为34％：66％→34％：66％；54.5-55min，流动相A：流动相B的体积比为34％：66％→10％：90％；55-60min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→10％：90％；控制流动相流速为0.5-1.5ml/min；控制柱温为20-40℃；检测波长：240-260nm；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算。

2.根据权利要求1所述的疏风止咳的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述中药组合物的检测方法包括如下含量检测步骤：

A、芍药苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸铵、柴胡皂苷B₂的含量检测：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物1克，研细，加入甲醇20ml，超声处理40min，所述超声的功率为200-300w,频率为30-50kHz，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：另取芍药苷对照品、升麻素苷对照品、虎杖苷对照品、甘草苷对照品、射干苷对照品、甘草酸铵对照品、柴胡皂苷B₂对照品适量，精密称定，加体积浓度为100％的甲醇制成每1ml分别含芍药苷150μg、升麻素苷30μg、虎杖苷130μg、甘草苷30μg、射干苷25μg、甘草酸铵30μg和柴胡皂苷B₂ 25μg的混合溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱；控制流动相流速为0.8ml/min；控制柱温为30℃；检测波长：250nm；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算。

3.根据权利要求1或2所述的疏风止咳的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述中药组合物的检测方法还包括如下含量测定方法中的至少一种：

B、黄芩的含量测定：

供试品溶液的制备：精密称定所述中药组合物0.5克，精密加入体积浓度为60-80％乙醇溶液40-60ml，超声处理0.5-1小时，放冷，用体积浓度为60-80％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为90-100％甲醇溶液制成每1ml含150μg黄芩苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为18-26％：74-82％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相；控制流动相流速为0.5-1.5ml/min；控制柱温为20-40℃；检测波长：270-290nm，理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1-5μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得；或

C、炒白芍的含量测定：

供试品溶液的制备：精密称定所述中药组合物1克，精密加入体积浓度为60-80％乙醇溶液20-30ml，超声处理0.5-1小时，放冷，用体积浓度为60-80％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为90-100％的甲醇溶液制成每1ml含100μg芍药苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为8-16％:84-92％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相；控制流动相流速为0.5-1.5ml/min；控制柱温为20-40℃；检测波长240-260nm；理论塔板数按芍药苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得。

4.根据权利要求3所述的疏风止咳的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述中药组合物的检测方法还包括如下含量测定方法中至少一种：

B、黄芩的含量测定：

供试品溶液的制备：精密称定所述中药组合物0.5克，精密加入体积浓度为70％乙醇溶液50ml，超声处理40min，所述超声的功率为200-300w，频率为30-50kHz，放冷，用体积浓度为70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含150μg黄芩苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为22％：78％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相：控制流动相流速为1ml/min；控制柱温为25℃；检测波长：280nm，理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1-5μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得；或

C、炒白芍的含量测定：

供试品溶液的制备：精密称定所述中药组合物1克，精密加入体积浓度为70％乙醇溶液25ml，超声处理40min，所述超声的功率为200-300w,频率为30-50kHz，放冷，用体积浓度为70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含100μg芍药苷的溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以体积比为12％:88％的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相；控制流动相流速为1ml/min；控制柱温为25℃；检测波长250nm；理论塔板数按芍药苷峰计算不低于2000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3-10μl，注入液相色谱仪，测定并计算，即得。

5.根据权利要求1或2或4所述的疏风止咳的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述中药组合物的检测方法还包括如下至少一种定性鉴别的方法：

D、乌梅的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为1-3：1的乙醚-甲醇溶液20-40ml，超声处理10-60分钟，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为1-3:1-3的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：另取乌梅对照药材1g，加体积浓度为90-100％的甲醇溶液20-40ml，超声处理10-60分钟，滤过，蒸干所得滤液，加水10-30ml溶解残渣，随后加体积浓度为90-100％乙醚溶液振摇提取1-3次，每次加入10-30ml，合并所述乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣1-3次，每次加入10-30ml，浸泡约1-3分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇1-3ml溶解，即得；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各1-5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为18-22：3-7：6-10：0.1-0.3的环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂展开，然后取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在102-108℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；或

E、炒苦杏仁的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物2g，研细，加20-40ml的30～60℃的水溶解，冷却，离心，取上清液通过D101型大孔吸附树脂柱，所述大孔吸附树脂柱内径为1.5cm，柱高为10cm，用70-90ml水洗脱，弃去水洗脱液，再用70-90ml体积浓度为10-30％的乙醇溶液洗脱，弃去乙醇洗脱液，再次用90-110ml体积浓度为40-60％的乙醇溶液洗脱，收集所述乙醇洗脱液，减压浓缩，向所得残渣中加体积浓度为90-100％甲醇溶液1-3ml溶解，即得；

对照品溶液的制备：另取苦杏仁苷对照品，加体积浓度为90-100％的甲醇溶液制成每1ml含2mg苦杏仁苷的溶液，即得；

鉴别：照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1-3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为18-22：8-12：1-5：1-3的三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水溶液为展开剂，展开，然后取出，晾干，喷以含有0.5-1.0％磷钼酸的10-20％硫酸乙醇溶液，在102-108℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；或

F、蜜款冬花的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为1-3：1的乙醚-甲醇溶液20-40ml，超声处理10-60分钟，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为1-3:1-3的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：分别取蜜款冬花、款冬花对照药材各2g，加体积浓度为90-100％的甲醇溶液20-40ml，超声处理10-60分钟，滤过，蒸干所得滤液，加水10-30ml溶解残渣，随后加体积浓度为90-100％乙醚溶液振摇提取1-3次，每次加入10-30ml，合并所述乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣1-3次，每次加入10-30ml，浸泡约1-3分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇1-3ml溶解，即得蜜款冬花、款冬花对照品溶液；

鉴别：照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1～5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1-5:1的60～90℃的石油醚－丙酮为展开剂，展开二次，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在102-108℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

6.根据权利要求5所述的疏风止咳的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述中药组合物的检测方法还包括如下至少一种定性鉴别方法：

D乌梅的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为2：1的乙醚-甲醇溶液30ml，超声处理30分钟，所述超声的功率为200-300w,频率为30-50kHz，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为1:1的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：另取乌梅对照药材1g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，蒸干所得滤液，加水20ml溶解残渣，随后加乙醚振摇提取2次，每次加入20ml，合并乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣2次，每次加入15ml，浸泡约1.5分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇2ml溶解，即得；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各1-5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为20：5：8：0.1的环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂展开，然后取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；或

E、炒苦杏仁的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物2g，研细，加30ml的50℃水溶解，冷却，离心，取上清液通过D101型大孔吸附树脂柱，所述大孔吸附树脂柱内径为1.5cm，柱高为10cm，用80ml水洗脱，弃去水洗脱液，再用80ml体积浓度为20％的乙醇溶液洗脱，弃去20％乙醇洗脱液，再次用100ml体积浓度为50％的乙醇溶液洗脱，收集所述乙醇洗脱液，减压浓缩，向所得残渣中加甲醇溶液1ml溶解，即得；

对照品溶液的制备：另取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg苦杏仁苷的溶液，即得；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1-3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为20：10：3：1的三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水溶液为展开剂，展开，然后取出，晾干，喷以含有0.8％磷钼酸的15％硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；或

F、蜜款冬花的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物3g，研细，加体积比为2：1的乙醚-甲醇溶液30ml，超声处理30分钟，所述超声的功率为200-300w,频率为30-50kHz，滤过，蒸干所得滤液，然后加入体积比为1:1的甲醇-无水乙醇溶液溶解残渣，即得；

对照品溶液的制备：取蜜款冬花、款冬花对照药材各2g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，蒸干所得滤液，加水20ml溶解残渣，随后加乙醚振摇提取2次，每次加入20ml，合并乙醚液，蒸干，用30～60℃的石油醚浸泡残渣2次，每次加入15ml，浸泡约1.5分钟，倾去石油醚，向所述残渣中加入无水乙醇2ml溶解，即得蜜款冬花、款冬花对照品溶液；

鉴别：照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1～5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3:1的60～90℃的石油醚－丙酮为展开剂，展开二次，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

7.根据权利要求1或2或4或6所述的疏风止咳的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述中药组合物的原料药组成为：柴胡8重量份、黄芩8重量份、荆芥8重量份、防风8重量份、蜜款冬花8重量份、炒苦杏仁7重量份、炒白芍13重量份、乌梅8重量份、穿山龙13重量份、虎杖13重量份、射干8重量份、生甘草4重量份；或

柴胡6重量份、黄芩10重量份、荆芥6重量份、防风10重量份、蜜款冬花6重量份、炒杏仁9重量份、炒白芍10重量份、乌梅10重量份、穿山龙10重量份、虎杖15重量份、射干6重量份、生甘草6重量份；或

柴胡10重量份、黄芩6重量份、荆芥10重量份、防风6重量份、蜜款冬花10重量份、炒苦杏仁6重量份、炒白芍15重量份、乌梅6重量份、穿山龙15重量份、虎杖10重量份、射干10重量份、生甘草3重量份；或

柴胡7重量份、黄芩9重量份、荆芥7重量份、防风9重量份、蜜款冬花7重量份、炒苦杏仁8重量份、炒白芍12重量份、乌梅9重量份、穿山龙12重量份、虎杖14重量份、射干7重量份、生甘草5重量份；或

柴胡9重量份、黄芩7重量份、荆芥9重量份、防风7重量份、蜜款冬花9重量份、炒苦杏仁7重量份、炒白芍14重量份、乌梅7重量份、穿山龙14重量份、虎杖11重量份、射干9重量份、生甘草4重量份。

8.根据权利要求7所述的疏风止咳的中药组合物的检测方法，其特征在于，还包括制备所述中药组合物的方法，包括如下步骤：

(1)按照选定重量份数称取柴胡、黄芩、荆芥、防风、蜜款冬花、炒苦杏仁、炒白芍、乌梅、穿山龙、虎杖、射干、生甘草，分别粉碎成细粉后混合或混合后粉碎成细粉，过筛备用；

(2)取上述细粉加水提取，合并并过滤所得提取液，将所得滤液减压浓缩获得清膏；

(3)将获得的清膏进行干燥，制成干膏粉，然后选择性的加入常规辅料，按照常规工艺制成临床上可接受的剂型。

9.根据权利要求8所述的疏风止咳的中药组合物的检测方法，其特征在于，制备所述中药组合物的方法，包括如下步骤：

(1)按照选定重量份数称取柴胡、黄芩、荆芥、防风、蜜款冬花、炒苦杏仁、炒白芍、乌梅、穿山龙、虎杖、射干、生甘草，分别粉碎成细粉后混合或混合后粉碎成细粉，过筛备用；

(2)取上述细粉加水煎煮1-3次，每次1-3小时，每次加入8-12倍所述细粉重量的水，合并并过滤所得煎煮液，将所得滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.10-1.15的清膏；

(3)将获得的清膏进行干燥，制成干膏粉，然后选择性的加入常规辅料，按照常规工艺制成临床上可接受的剂型。

10.由权利要求1-9任一所述的检测方法在中药组合物或中药制剂检测领域中的用途。