CN104483411A - 一种连翘及含连翘产品的检测方法 - Google Patents
一种连翘及含连翘产品的检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种连翘及含连翘产品的检测方法，其对照品为五福花苷酸，或用连翘苷对照品为五福花苷酸替代物，用校正因子计算五福花苷酸含量。在现有产品中，有个别商家为了以次充好，用连翘叶来替代连翘果实，导致最终产品效果差，发明人意外的发现：连翘叶中不含五福花苷酸，利用检测五福花苷酸可以控制连翘产品质量的合法性，以保证含连翘产品的质量。
Description
技术领域
本发明涉及中药的检测方法领域，具体涉及一种连翘及含连翘产品的检测方法。
背景技术
连翘是中国临床常用传统中药之一，又名黄花条、连壳、青翘、落翘、黄奇丹等，果实入药。连翘是清热解毒的中药，主治热病初起，风热感冒，发热，心烦，咽喉肿痛，急性肾炎等。
连翘的入药部位为连翘(Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl)的干燥果实。秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称青翘；果实熟透时采收，晒干，除去杂质，习称老翘。
在《中国药典》2010年版中，有连翘提取物和连翘的含量检测方法，具体如下：
连翘，有两种成分连翘苷(C27H34O14)、连翘酯苷(C29H36O15)，限定连翘苷不低于0.15％，连翘酯苷A不少于0.25％，具体含量检测方法为：
连翘苷
色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(25：75)为流动相；检测波长为277nm，理论板数按连翘苷峰应不低于3000；
对照品溶液的制备：取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过五号筛)约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15ml，称定重量，浸渍过夜，超声处理(功率250W，频率40kHz)25分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，蒸至近干，加中性氧化铝0.5g拌匀，加在中性氧化铝柱(100-200目，1g，内径为1-1.5cm)上，用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50％甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
连翘酯苷A
色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4％冰醋酸溶液(15：85)为流动相；检测波长为330nm，理论板数按连翘酯苷F峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：取连翘酯苷A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得(临用配制)；
供试品溶液的制备：取本品粉末(过五号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇15ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
连翘提取物中，连翘苷A不得少于6.0％，连翘苷不得少于0.5％。其制备方法为，取连翘，粉碎成粗粉，加水煎煮三次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，滤液于60℃以下减压浓缩至相对密度1.10-1.20(室温)的清膏，放冷，加入4倍量乙醇，搅匀，静置2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩液喷雾干燥，即得。
关于连翘提取物的含量测定方法，具体为：
色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以水为流动相B，按照下表进行梯度洗脱，检测波长为235nm，理论板数按连翘酯苷F峰计算应不低于4000；
| 时间(分钟) | 流动相A | 流动相B |
| 0-10 | 10→25 | 90→75 |
| 10-40 | 25→40 | 75→60 |
| 40-60 | 40→60 | 60→40 |
对照品溶液的制备：取连翘酯苷A对照品和连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含连翘酯苷A300μg和连翘苷30μg的混合溶液，即得(临用配制)；
供试品溶液的制备：取本品25mg，精密称定，量5ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
双黄连口服液，《中国药典》2010年版规定，每1ml双黄连口服液中含连翘以连翘苷计不得少于0.30mg。其中对照品溶液的制备中，用50％甲醇制成每1ml含60μg的溶液，供试品溶液的制备中，是将1ml口服液加在中性氧化铝柱中，用70％乙醇40ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加50％甲醇适量溶解，温热使溶解。
注射用双黄连(冻干)，《中国药典》2010年版规定，每1支含连翘以连翘苷计应为1.4-2.1mg。其中，对照品溶液的制备与供试品溶液的制备与双黄连口服液类似。
双黄连注射液，其标准见WS5-B-2104-96-2010，其含量检测中，有关连翘的规定是，每1ml注射液含连翘以连翘苷计应为0.12-0.18mg，其检测方法与双黄连口服液相似。
小儿热速清口服液，《中国药典》2010年版中并没有规定连翘的含量检测，仅规定黄芩苷的含量检测。
复方芩兰口服液，其标准见国家中成药标准汇编内科肺系(一)分册的第217页，WS-10749(ZD-0749)-2002，没有对产品含量的测定要求。
通过以上内容可知，现有连翘或含连翘产品的检测多以连翘苷和连翘酯苷A为主要成分进行，这就导致一些不法商贩用含有连翘苷的连翘叶替代连翘投料，现有标准无法甄别含连翘药品的真伪。
因此，需要一种可以鉴别连翘与“伪连翘”的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种连翘或含连翘产品的检测方法。
本发明提供的一种连翘或含连翘产品的检测方法，其对照品为五福花苷酸，或用连翘苷对照品为五福花苷酸替代物，用校正因子计算五福花苷酸含量。
所述含连翘产品为连翘与其他中药组合制成的产品，优选地，所述含连翘产品为双黄连口服液、双黄连注射液、双黄连胶囊、双黄连颗粒、双黄连片、双黄连糖浆、双黄连滴丸、双黄连泡腾片、双黄连气雾剂、注射用双黄连(冻干)、双黄连栓、小儿热速清口服液、小儿热速清糖浆、小儿热速清颗粒、复方芩兰口服液。
其中双黄连口服液中每1ml含五福花苷酸以连翘苷(C27H34O11)计不得少于0.4mg。
由于五福花苷酸对照品是从连翘提取物中分离所得，制备成本高，采用对照品替代法测定五福花苷酸含量降低成本。并且两种方法测得的结果无显著差异，对照品替代法符合方法验证中的准确度要求。
本发明提供的具体的含量检测方法，该方法包括五福花苷酸的检测方法，具体为：色谱条件与系统适用性试验、对照品的制备、供试品的制备、检测。
所述色谱条件与系统适用性试验为：色谱柱：Agilent Zorbax EclipseXDB-C18，以0.05％甲酸乙腈溶液为流动相A，以0.05％甲酸溶液为流动相B，；柱温为20℃；流速为每分钟0.9ml；检测器：二极管阵列检测器，定性鉴别检测条件：波长扫描范围：190-400nm，检测波长：236nm，278nm；定量测定检测条件：检测波长：0min，236nm，20min，278nm，理论板数按连翘苷峰计算不低于6000。
所述梯度洗脱的程序见下表：
| 时间(分钟) | 流动相A(﹪) | 流动相B(﹪) |
| 0-10.0 | 5→7 | 95→93 |
| 10.0-15.0 | 7→21 | 93→79 |
| 15.0-20.0 | 21→24 | 79→76 |
| 时间(分钟) | 流动相A(﹪) | 流动相B(﹪) |
| 20.0-35.0 | 24 | 76 |
| 35.0-36.0 | 24→95 | 76→5 |
| 36.0-41.0 | 95 | 5 |
| 41.0-42.0 | 95→5 | 5→95 |
所述供试品溶液的制备：
连翘药材：取药材1-2g，置锥形瓶中，加40％甲醇25-50ml，摇匀，称重，超声2小时，补重，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；或
制剂：精密量取本品1ml(或0.5g)置5ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
所述对照品溶液的制备：取五福花苷酸对照品适量，精密称定，加40％甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。
具体的，本发明提供的检测五福花苷酸的方法，该方法包括以下步骤：
对照品溶液的制备：取五福花苷酸对照品适量，精密称定，加40％甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：
连翘药材：取药材1-2g，置锥形瓶中，加40％甲醇25-50ml，摇匀，称重，超声2小时，补重，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；或
含连翘产品：精密量取本品1ml(或0.5g)至5ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm i.d.，5μm)，配XDB-C18预柱；流动相：以0.05％甲酸乙腈溶液为流动相A，以0.05％甲酸溶液为流动相B，线性梯度洗脱程序见下表；流速：0.9ml/min；检测波长：0min 236nm，20min 278nm；柱温：20℃；进样量：5μl；
| 时间(分钟) | 流动相A(﹪) | 流动相B(﹪) |
| 0-10.0 | 5→7 | 95→93 |
| 10.0-15.0 | 7→21 | 93→79 |
| 时间(分钟) | 流动相A(﹪) | 流动相B(﹪) |
| 15.0-20.0 | 21→24 | 79→76 |
| 20.0-35.0 | 24 | 76 |
| 35.0-36.0 | 24→95 | 76→5 |
| 36.0-41.0 | 95 | 5 |
| 41.0-42.0 | 95→5 | 5→95 |
本发明还提供了另外一种检测方法，可选择连翘苷对照品为对照品替代物，用校正因子计算五福花苷酸含量，该方法包括以下步骤：
对照品溶液制备：取连翘苷对照品适量，精密称定，加40％甲醇制成每1ml含(200-260)μg的溶液，即得；
对照药材溶液制备：取连翘对照药材(0.1-0.5)g至5ml量瓶中，精密称定，加40％甲醇至近5ml，密塞，超声处理(功率250W，频率40kHz)2小时，放冷，加40％甲醇至刻度，摇匀，10000rpm离心10min，取上清液，再用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；
供试品溶液制备：
连翘药材：取药材1-2g，置锥形瓶中，加40％甲醇25-50ml，摇匀，称重，超声2小时，补重，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；或
含连翘产品：精密量取本品0.5-2ml(或0.5-2g)至5ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mmi.d.，5μm)，配XDB-C18预柱；流动相：(0.01％-0.4％)(甲酸、乙酸、磷酸)乙腈溶液(A)-(0.01％-0.4％)(甲酸、乙酸、磷酸)溶液(B)，按照线性梯度洗脱表运行41min，具体见下表；色谱图记录35min；流速：0.80-1.10ml/min；柱温：20-25℃；进样量：2-10μl，检测器：二极管阵列检测器，定性鉴别条件：波长扫描范围：190-400nm，检测波长：236nm，278nm；定量检测条件：检测波长：0min，236nm，20min，278nm。
| 时间(分钟) | 流动相A(﹪) | 流动相B(﹪) |
| 0-10.0 | 5→7 | 95→93 |
| 10.0-15.0 | 7→21 | 93→79 |
| 时间(分钟) | 流动相A(﹪) | 流动相B(﹪) |
| 15.0-20.0 | 21→24 | 79→76 |
| 20.0-35.0 | 24 | 76 |
| 35.0-36.0 | 24→95 | 76→5 |
| 36.0-41.0 | 95 | 5 |
| 41.0-42.0 | 95→5 | 5→95 |
本发明提供的连翘和含连翘产品的检测方法具有以下优点：
1、本发明提供的检测方法，不同浓度下连翘苷对五福花苷酸的校正因子稳定，平均校正因子为：0.460，校正因子测定RSD为1.44％。(RSD<2％)。
2、在现有产品中，有个别商家为了以次充好，用连翘叶来替代连翘果实，导致最终产品效果差，发明人意外的发现：连翘叶中不含五福花苷酸，利用检测五福花苷酸可以控制连翘产品质量的合法性。
3、目前，尚未见到五福花苷酸用于连翘的检测或鉴别。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
说明：关于含乙腈的溶液，以0.05％甲酸乙腈溶液为例，该溶液是指0.05g甲酸溶解到100ml的乙腈中。
实施例1：双黄连口服液中五福花苷酸的检测
1、仪器及试验药物
仪器：Agilent 1100型高效液相色谱仪，配脱气机、四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、紫外检测器(Agilent公司)。
试剂：乙腈、甲醇为色谱纯(Merck公司)，甲酸为色谱纯(ROC Scientific公司)，水为Milli-Q超纯水。
五福花苷酸(HPLC纯度：99.24％)浙江大学药物信息学实验室自制；连翘苷(批号：110821-201213，供含量测定用，含量以95.3％计)；连翘(批号：120908-201216)，中国食品药品检定研究院。
双黄连口服液(黑龙江珍宝岛药业股份有限公司提供，批号：B20140412、B20140413、B20140414、S130724-1、S130724-2、S130724-3、S130724-4、S130724-5、S130724-6、S130802-1)；
采用连翘叶制备的双黄连口服液(黑龙江珍宝岛药业股份有限公司提供，批号：S130729-1、S130729-2、S130729-3、S130729-4、S130729-5、S130729-6、S130812-2)；
掺有部分连翘叶的双黄连口服液，黑龙江珍宝岛药业股份有限公司提供：
连翘:连翘叶(1:3)制备的双黄连口服液(批号：S130801-1、S130801-4、S130801-7)；
连翘:连翘叶(1:2)制备的双黄连口服液(批号：S130801-2、S130801-5、S130801-8)；
连翘:连翘叶(2:3)制备的双黄连口服液(批号：S130801-3、S130801-6、S130801-9)
连翘:连翘叶(4:1)制备的双黄连口服液(批号：S20131225-1、S20131225-2、S20131225-3、S20131225-4、S20131225-5、S20131226-1、S20131226-2、S20131226-3、S20131226-4、S20131226-5)。
2、溶液制备
2.1对照品溶液制备：取五福花苷酸对照品适量，精密称定，加40％甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。
2.2供试品溶液制备：精密量取双黄连口服液1ml于5ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
3、色谱条件
色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm i.d.，5μm)，配XDB-C18预柱；流动相：0.05％甲酸乙腈溶液(A)-0.05％甲酸溶液(B)，线性梯度洗脱程序见表1，运行41min，色谱图记录35min；流速：0.9ml/min；检测波长：0min 236nm，20min 278nm；柱温：20℃；进样量：5μl。
表1：线性梯度洗脱程序
| 时间(分钟) | 流动相A(﹪) | 流动相B(﹪) |
| 0-10.0 | 5→7 | 95→93 |
| 10.0-15.0 | 7→21 | 93→79 |
| 15.0-20.0 | 21→24 | 79→76 |
| 时间(分钟) | 流动相A(﹪) | 流动相B(﹪) |
| 20.0-35.0 | 24 | 76 |
| 35.0-36.0 | 24→95 | 76→5 |
| 36.0-41.0 | 95 | 5 |
| 41.0-42.0 | 95→5 | 5→95 |
4、检测结果：表2
表2：双黄连口服液中五福花苷酸含量测定结果(n＝3)
表2结果显示：各批次双黄连口服液中五福花苷酸含量在0.470-0.833mg/ml范围内；用连翘叶替代连翘制备的双黄连口服液中五福花苷酸含量小于10μg/ml；用20-75％连翘叶替代连翘制成的双黄连口服液中五福花苷酸含量在0.123-0.372mg/ml范围内。
实施例2：双黄连注射液的检测
同实施例1的方法。
实施例3：小儿热速清糖浆和复方芩兰口服液的检测
同实施例1的方法。
实施例4：双黄连胶囊、双黄连颗粒、小儿热速清颗粒
同实施例1的方法。
供试品溶液制备：精密量取本品0.5g于5ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
实施例5：连翘药材
同实施例1的方法。
供试品溶液制备：取药材1.5g，置锥形瓶中，加40％甲醇25-50ml，摇匀，称重，超声2小时，补重，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；
实施例6：对照品替代法测定双黄连口服液中五福花苷酸含量(方法一)
1、原理：对照品替代法测定被替代物含量原理：在一定的色谱条件下，单位质量的替代物和被替代物的响应值为一恒定值，符合Lambert-Beer定律。
2、溶液制备
2.1对照品溶液制备
取连翘苷对照品适量，精密称定，加40％甲醇制成每1ml含210μg的溶液，即得。
2.2对照药材溶液制备
取连翘对照药材0.2g至5ml量瓶中，精密称定，加40％甲醇至近5ml，密塞，超声处理(功率250W，频率40kHz)2小时，放冷，加40％甲醇至刻度，摇匀，10000rpm离心10min，取上清液，再用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
2.3供试品(同实施例1)溶液制备
精密量取双黄连口服液1ml于5ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
3、色谱条件
色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm i.d.，5μm)，配XDB-C18预柱；流动相：0.05％甲酸乙腈溶液(A)-0.05％甲酸溶液(B)，线性梯度洗脱程序见实施例1的表1，色谱图记录35min；流速：0.9ml/min；柱温：20℃；进样量：5μl，检测器：二极管阵列检测器，定性鉴别条件：波长扫描范围：190-400nm，检测波长：236nm，278nm；定量检测条件：检测波长：0min，236nm，20min，278nm。
4、试验结果：见表3
表3：双黄连口服液中五福花苷酸含量测定结果(n＝3)
表3结果显示：双黄连口服液中五福花苷酸以连翘苷计，其含量为0.473-0.835mg/ml；连翘和连翘苷按照4：1配伍制备的双黄连口服液，五福花苷酸以连翘苷计含量为0.336-0.374mg/ml。
实施例7：对照品替代法测定双黄连口服液中五福花苷酸含量(方法二)
1、原理：对照品替代法测定被替代物含量原理：在一定的色谱条件下，单位质量的替代物和被替代物的响应值为一恒定值，符合Lambert-Beer定律。
2、溶液制备
2.1对照品溶液制备
取连翘苷对照品适量，精密称定，加40％甲醇制成每1ml含260μg的溶液，即得。
2.2对照药材溶液制备
取连翘对照药材0.5g至5ml量瓶中，精密称定，加40％甲醇至近5ml，密塞，超声处理(功率250W，频率40kHz)2小时，放冷，加40％甲醇至刻度，摇匀，10000rpm离心10min，取上清液，再用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
2.3供试品(同实施例1)溶液制备
精密量取双黄连口服液2ml于5ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
3、色谱条件
色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm i.d.，5μm)，配XDB-C18预柱；流动相：0.2％乙酸乙腈溶液(A)-0.2％乙酸溶液(B)，线性梯度洗脱程序见实施例1的表1，色谱图记录35min；流速：0.9ml/min；柱温：20℃；进样量：5μl，检测器：二极管阵列检测器，定性鉴别条件：波长扫描范围：190-400nm，检测波长：236nm，278nm；定量检测条件：检测波长：0min，236nm，20min，278nm。
4、试验结果：见表4
表4：双黄连口服液中五福花苷酸含量测定结果(n＝3)
表4结果显示：双黄连口服液中五福花苷酸以连翘苷计，其含量为0.472-0.838mg/ml；连翘和连翘苷按照4：1配伍制备的双黄连口服液，五福花苷酸以连翘苷计含量为0.332-0.369mg/ml。
实施例8：对照品替代法测定双黄连口服液中五福花苷酸含量(方法三)
1、原理：对照品替代法测定被替代物含量原理：在一定的色谱条件下，单位质量的替代物和被替代物的响应值为一恒定值，符合Lambert-Beer定律。
2、溶液制备
2.1对照品溶液制备
取连翘苷对照品适量，精密称定，加40％甲醇制成每1ml含230μg的溶液，即得。
2.2对照药材溶液制备
取连翘对照药材0.3g至5ml量瓶中，精密称定，加40％甲醇至近5ml，密塞，超声处理(功率250W，频率40kHz)2小时，放冷，加40％甲醇至刻度，摇匀，10000rpm离心10min，取上清液，再用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
2.3供试品(同实施例1)溶液制备
精密量取双黄连口服液1ml于5ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
3、色谱条件
色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm i.d.，5μm)，配XDB-C18预柱；流动相：0.4％磷酸乙腈溶液(A)-0.4％磷酸溶液(B)，线性梯度洗脱程序见实施例1的表1，色谱图记录35min；流速：0.9ml/min；柱温：20℃；进样量：5μl，检测器：二极管阵列检测器，定性鉴别条件：波长扫描范围：190-400nm，检测波长：236nm，278nm；定量检测条件：检测波长：0min，236nm，20min，278nm。
4、试验结果：见表5
表5：双黄连口服液中五福花苷酸含量测定结果(n＝3)
表5结果显示：双黄连口服液中五福花苷酸以连翘苷计，其含量为0.472-0.836mg/ml；连翘和连翘苷按照4：1配伍制备的双黄连口服液，五福花苷酸以连翘苷计含量为0.332-0.368mg/ml。
实施例9：校正因子测定
1.对照品储备液制备：
取五福花苷酸及连翘苷对照品各适量，精密称定，加40％甲醇溶解，分别制成每1ml含五福花苷酸为0.748mg/ml，连翘苷为1.282mg/ml的对照品储备液，于4℃保存。
2.不同浓度混合对照品溶液制备：
精密吸取各对照品储备液适量，加40％甲醇稀释制成每1ml含五福花苷酸为0.299mg/ml、连翘苷为0.641mg/ml的混合对照品溶液，精密吸取混合对照品溶液适量，加40％甲醇稀释制成5个不同浓度水平混合对照品溶液，每个浓度水平各分别制备3份，10000rpm离心10min，取上清液按色谱条件测定。
3.色谱条件：
色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm i.d.，5μm)，配XDB-C18预柱；流动相：0.05％甲酸乙腈溶液(A)-0.05％甲酸溶液(B)，线性梯度洗脱程序见实施例1的表1，色谱图记录35min；流速：0.9ml/min；柱温：20℃；进样量：5μl，检测器：二极管阵列检测器，定性鉴别条件：波长扫描范围：190-400nm，检测波长：236nm，278nm；定量检测条件：检测波长：0min，236nm，20min，278nm。
根据矫正因子公式计算：
校正因子f＝(A替代物/C替代物)/(A被替代物/C被替代物)
A替代物：连翘苷的峰面积；C替代物：连翘苷的浓度；
A被替代物：五福花苷酸的峰面积；C被替代物：五福花苷酸的浓度。
4.结果：见表6
表6连翘苷对五福花苷酸的校正因子测定结果
表6结果表明不同浓度下连翘苷对五福花苷酸的校正因子稳定，平均校正因子为：0.460，校正因子测定RSD为1.44％。(RSD<2％)。
实施例10：两种检测方法的准确度
1、对照品溶液制备
取连翘苷对照品适量，精密称定，加40％甲醇制成每1ml含230μg的溶液，即得。
取五福花苷酸对照品适量，精密称定，加40％甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。
2、供试品溶液制备：精密量取双黄连口服液1ml于5ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
3、色谱条件
色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm i.d.，5μm)，配XDB-C18预柱；流动相：0.05％甲酸乙腈溶液(A)-0.05％甲酸溶液(B)，线性梯度洗脱程序见实施例1的表1，色谱图记录35min；流速：0.9ml/min；检测波长：0min 236nm，20min 278nm；柱温：20℃；进样量：5μl。
4、校正因子以平均校正因子0.460计算，结果见表7：
表7二种方法测得的双黄连口服液中五福花苷酸含量结果比较(n＝3)
| 批号 | 常规外标法(mg/ml) | 对照品替代法(mg/ml) |
| B20140412 | 0.476 | 0.479 |
| B20140413 | 0.499 | 0.497 |
| B20140414 | 0.476 | 0.476 |
| S130724-1 | 0.833 | 0.835 |
| S130724-2 | 0.671 | 0.672 |
| S130724-3 | 0.657 | 0.657 |
| S130724-4 | 0.829 | 0.830 |
| S130724-5 | 0.686 | 0.686 |
| S130724-6 | 0.649 | 0.648 |
| S130802-1 | 0.470 | 0.473 |
| S20131225-1 | 0.336 | 0.338 |
| S20131225-2 | 0.336 | 0.336 |
| S20131225-3 | 0.338 | 0.338 |
| S20131225-4 | 0.334 | 0.334 |
| S20131225-5 | 0.362 | 0.363 |
| S20131226-1 | 0.357 | 0.363 |
| S20131226-2 | 0.353 | 0.358 |
| S20131226-3 | 0.364 | 0.366 |
| S20131226-4 | 0.372 | 0.374 |
| S20131226-5 | 0.365 | 0.367 |
表7结果显示：采用t检验法比较常规外标法与对照品替代法测定的20批次双黄连口服液中五福花苷酸含量，结果P>0.05。
结果表明：本发明提供的两种检测方法测得的结果无显著差异，对照品替代法符合方法验证中的准确度要求。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种连翘及含连翘产品的检测方法，其对照品为五福花苷酸，或用连翘苷对照品为五福花苷酸替代物，用校正因子计算五福花苷酸含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含连翘产品为连翘与其他中药组合制成的产品，优选地，所述含连翘产品为双黄连口服液、双黄连注射液、双黄连胶囊、双黄连颗粒、双黄连片、双黄连糖浆、双黄连滴丸、双黄连泡腾片、双黄连气雾剂、注射用双黄连(冻干)、双黄连栓、小儿热速清口服液、小儿热速清糖浆、小儿热速清颗粒、复方芩兰口服液。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，双黄连口服液中每1ml含五福花苷酸以连翘苷计不得少于0.4mg。
4.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，该方法包括五福花苷酸的检测方法，具体为：色谱条件与系统适用性试验、对照品的制备、供试品的制备、检测。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述色谱条件与系统适用性试验为：色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18，以0.05％甲酸乙腈溶液为流动相A，以0.05％甲酸溶液为流动相B，；柱温为20℃；流速为每分钟0.9ml；检测器：二极管阵列检测器，定性鉴别检测条件：波长扫描范围：190-400nm，检测波长：236nm，278nm；定量测定检测条件：检测波长：0min，236nm，20min，278nm，理论板数按连翘苷峰计算不低于6000。
6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序见下表：
。
7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于所述供试品溶液的制备：
连翘药材：取药材1-2g，置锥形瓶中，加40％甲醇25-50ml，摇匀，称重，超声2小时，补重，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；或
含连翘产品：精密量取本品1ml(或0.5g)置5ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
8.根据权利要求4-7任一项所述的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
对照品溶液的制备：取五福花苷酸对照品适量，精密称定，加40％甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：
连翘药材：取药材1-2g，置锥形瓶中，加40％甲醇25-50ml，摇匀，称重，超声2小时，补重，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；或
含连翘产品：精密量取本品1ml(或0.5g)至5ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；
色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm i.d.，5μm)，配XDB-C18预柱；流动相：以0.05％甲酸乙腈溶液为流动相A，以0.05％甲酸溶液为流动相B，线性梯度洗脱程序见下表；流速：0.9ml/min；检测波长：0min 236nm，20min 278nm；柱温：20℃；进样量：5μl；
。
9.根据权利要求4-7任一项所述的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
对照品溶液制备：取连翘苷对照品适量，精密称定，加40％甲醇制成每1ml含200-260μg的溶液，即得；
对照药材溶液制备：取连翘对照药材0.1-0.5g至5ml量瓶中，精密称定，加40％甲醇至近5ml，密塞，超声处理2小时，功率250W，频率40kHz，放冷，加40％甲醇至刻度，摇匀，10000rpm离心10min，取上清液，再用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；
供试品溶液制备：
连翘药材：取药材1-2g，置锥形瓶中，加40％甲醇25-50ml，摇匀，称重，超声2小时，补重，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；或
含连翘产品：精密量取本品0.5-2ml(或0.5-2g)至5ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mmi.d.，5μm)，配XDB-C18预柱；流动相：(0.01％-0.4％)(甲酸、乙酸、磷酸)乙腈溶液(A)-(0.01％-0.4％)(甲酸、乙酸、磷酸)溶液(B)，按照线性梯度洗脱表运行41min，具体见下表；色谱图记录35min；流速：0.80-1.10ml/min；柱温：20-25℃；进样量：2-10μl，检测器：二极管阵列检测器，定性鉴别条件：波长扫描范围：190-400nm，检测波长：236nm，278nm；定量检测条件：检测波长：0min，236nm，20min，278nm；
。
10.权利要求1-9任一项所述的检测方法在检测连翘及含连翘产品的应用。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107525868A (zh) * | 2017-08-28 | 2017-12-29 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种测定＂妇炎灵＂洗剂中连翘苷含量的方法 |
| CN110794049A (zh) * | 2019-10-15 | 2020-02-14 | 广东一力集团制药股份有限公司 | 一种感冒颗粒的检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101040915A (zh) * | 2007-04-30 | 2007-09-26 | 黑龙江省珍宝岛制药有限公司 | 一种双黄连注射液的制备方法及其成分检测方法 |
| CN103675189A (zh) * | 2012-09-05 | 2014-03-26 | 亚宝药业集团股份有限公司 | 一种连翘叶药材的质量检测方法 |
| CN104181241A (zh) * | 2013-05-28 | 2014-12-03 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种连翘叶中连翘酯苷a和连翘苷含量的测定方法 |
-
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101040915A (zh) * | 2007-04-30 | 2007-09-26 | 黑龙江省珍宝岛制药有限公司 | 一种双黄连注射液的制备方法及其成分检测方法 |
| CN103675189A (zh) * | 2012-09-05 | 2014-03-26 | 亚宝药业集团股份有限公司 | 一种连翘叶药材的质量检测方法 |
| CN104181241A (zh) * | 2013-05-28 | 2014-12-03 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种连翘叶中连翘酯苷a和连翘苷含量的测定方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| PING-CHUNG KUO ET AL.: "Chemical Constituents from the Fruits of Forsythia suspensa and Their Antimicrobial Activity", 《BIOMED RESEARCH INTERNATIONAL》 * |
| 李晋 等: "高效液相色谱法同时测定中药连翘药用及非药用部位中7种有效成分含量", 《天津中医药》 * |
| 郭强 等: "连翘属药用植物化学成分研究进展", 《中国实验方剂学杂志》 * |
| 高淑丽 等: "高效液相色谱法同时测定不同产地 不同炮制时间连翘和连翘叶中5种活性成分的含量", 《中国医院药学杂志》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107525868A (zh) * | 2017-08-28 | 2017-12-29 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种测定＂妇炎灵＂洗剂中连翘苷含量的方法 |
| CN110794049A (zh) * | 2019-10-15 | 2020-02-14 | 广东一力集团制药股份有限公司 | 一种感冒颗粒的检测方法 |
| CN110794049B (zh) * | 2019-10-15 | 2022-07-15 | 一力制药股份有限公司 | 一种感冒颗粒的检测方法 |
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