CN104483408A - 一种中药制剂心速宁胶囊的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种中药制剂心速宁胶囊的检测方法，该方法包括：Ⅰ、中药原料的鉴别：对黄连、枳实、人参、苦参、麦冬、甘草的鉴别；Ⅱ、中药有效成分黄连含量的测定。本发明采用高效液相色谱法与薄层色谱法提供了一种有效的检测方法，可以有效的控制心速宁胶囊的质量，有利于工业化生产。本发明的检测方法科学、可行，有较大的实用价值。

Description

一种中药制剂心速宁胶囊的检测方法

技术领域

本发明涉及中药制剂，具体涉及中药制剂的检测方法，尤其涉及一种中药制剂心速宁胶囊的检测方法。

背景技术

中药制剂心速宁胶囊是陕西摩美得制药有限公司与山东中医药大学合作研制而成的中国国家六类新药。该制剂的中药原料由黄连、半夏、茯苓、枳实、常山、莲子心、苦参、青蒿、人参、麦冬、甘草十一味中药材组成。在配方中，黄连、半夏、茯苓、枳实为主药，用以清心热，宁心定悸；常山、苦参、青蒿、莲子心有清热化痰作用；用人参、麦冬益气养阴相佐；甘草甘平，归心肺脾胃经，缓和药性，调和诸药为使药。黄连清心降火，半夏化痰安中，莲子心清心安神，常山善开痰结，枳实行气消痰，茯苓健脾化痰，苦参、青蒿宁心定悸，人参、麦冬益气，养阴、安神，甘草缓和药性，调和诸药。

因此，心速宁胶囊具有抗心律失常，改善血脂、血液流变学，耐缺氧、耐低温游泳及镇定安神四大作用。是中国唯一一个治疗轻、中度室性早搏实证患者(如痰热扰心证)的有效中成药。由于心速宁胶囊是由十一味药材组成的中药复方制剂，其中成分比较复杂，检测比较困难，产品的质量不易控制，因此，需要根据中药制剂心速宁胶囊配方特点，建立科学的质量检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，需要对中药制剂心速宁胶囊的质量进行有效、准确地控制，对其成品质量建立科学的、有效的检测方法。

中药制剂心速宁胶囊的配方中药原料由黄连、半夏、茯苓、枳实、常山、莲子心、苦参、青蒿、人参、麦冬、甘草十一味中药材组成。组成。

本发明提供了一种中药制剂心速宁胶囊的检测方法。

本发明采用高效液相色谱法与薄层色谱法对中药制剂心速宁胶囊的中药成分进行检测。

本发明的方法包括下列步骤：

Ⅰ、中药原料的鉴别：

(一)黄连的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物0.5-1g，研细加甲醇10-20ml，置水浴中加热回流15-30分钟，滤过，滤液浓缩至3-6ml，作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取黄连对照药材50mg，加甲醇10m1-20ml，置水浴中加热回流15-30分钟，滤过，滤液浓缩至3-6ml，制成对照药材溶液；

(3)盐酸小檗碱对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

(4)吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上(市售)，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(体积比为12∶6∶3∶3∶1)为展开剂，置氨蒸气预饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点为盐酸小檗碱；

(二)枳实的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物2-5g，研细，置50-100ml圆底烧瓶中，加甲醇20-40ml，置水浴中加热回流30-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml-50ml分三次加热溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用0.1mol/L盐酸调节PH至3，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml-30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml-5ml使溶解，作为供试品溶液；

(2)柚皮苷对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一含0.5％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(体积比为6∶2∶3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点为柚皮苷；

(三)人参的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物4-8g，研细，加三氯甲烷40-80ml，置水浴中加热回流1-1.5小时，弃去三氯甲烷提取液，药渣蒸干，加水饱和的正丁醇30-60ml，超声处理(功率250W，频率40kHz)30-60分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，用氨试液洗涤2次，每次30-60ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，作为供试品溶液；

(2)人参对照药材溶液制备：取人参对照药材1g，加三氯甲烷40-80ml，置水浴中加热回流1-1.5小时，弃去三氯甲烷提取液，药渣蒸干，加水饱和的正丁醇30-60ml，超声处理(功率250W，频率40kHz)30-60分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，用氨试液洗涤2次，每次30-60ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，制成对照药材溶液；

(3)人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rg1对照品溶液制备：取人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；

(4)吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(体积比为13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10﹪硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，Rf值偏小的为人参皂苷Re，Rf值偏大的为人参皂苷Rg1；

对照药材色谱和对照品色谱同时作对照，既保证了人参药材整体的质量控制又保证了作为人参特征性成分的检出。质量控制标准更全面科学。

(四)苦参的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物2-4g，研细，置50-100ml具塞瓶中，加0.1mol/L盐酸30-60ml，放置15分钟，混匀，滤过，滤液移至分液漏斗中，用1mol/L氢氧化钠溶液调PH至10，加氯化钠使饱和，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15-30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1ml-2ml使溶解，作为供试品溶液；

(2)苦参对照药材溶液制备：取苦参对照药材0.5g，置50-100ml具塞瓶中，加0.1mol/L盐酸30-60ml，放置15分钟，混匀，滤过，滤液移至分液漏斗中，用1mol/L氢氧化钠溶液调PH至10，加氯化钠使饱和，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15-30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1ml-2ml使溶解，制成对照药材溶液；

(3)槐定碱对照品溶液的制备：取槐定碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；

(4)吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一含2％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比2∶4∶2∶1)10℃以下放置的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点是苦参；在与对照品色谱相应的位置上，显一个相同的棕色斑点为槐定碱。

对照药材色谱和对照品色谱同时作对照，既保证了人参药材整体的质量控制又保证了作为人参特征性成分的检出。质量控制标准更全面科学。

(五)麦冬的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物4-8g，研细，加水20-40ml，加热至沸使溶解，放冷，滤过，滤液加盐酸0.5ml，加热煮沸，放冷，用三氯甲烷20-40ml振摇提取，分取三氯甲烷层，浓缩至约1-2ml，作为供试品溶液；

(2)麦冬对照药材溶液制备：取麦冬对照药材1g，加水20-40ml，煎煮10-20分钟，滤过，滤液加盐酸0.5ml，加热煮沸，放冷，用三氯甲烷20ml振摇提取，分取三氯甲烷层，浓缩至约1-2ml，作为对照药材溶液；

(3)吸取上述两种溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮(体积比4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

(六)甘草的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物2-4g，研细，加盐酸1-2ml和乙醚15-30ml，加热回流提取1-2小时，放冷，滤过，滤液用水洗涤3次，每次5-10ml，弃去水液，挥干乙醚溶液，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

(2)甘草次酸对照品溶液制备：取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10﹪磷钼酸乙醇溶液，于105℃加热约5分钟，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点为甘草次酸；

Ⅱ、中药有效成分黄连含量的测定：

黄连为本药品中君药，且黄连中小檗碱含量高，测定方法成熟，因此，选择检测黄连中小檗碱含量。

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛-水(体积比48∶52)(1000ml中含KH₂PO₄3.4g，十二烷基磺酸钠1.2g)为流动相；检测波长为270nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于3500；

(2)对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备取中药制剂心速宁胶囊1粒的内容物，研细，取0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸(体积比100∶1)的混合溶液25-40ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30-50分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得每粒中药制剂心速宁胶囊的内容物含黄连以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄·HCl)计，不得少于8.0mg。

本发明的优点：本发明对心速宁胶囊通过采用高效液相色谱法与薄层色谱法提供了一种有效的质量检测方法，本发明可以有效的检测中药制剂心速宁胶囊中的有效成分黄连、枳实、人参、苦参、麦冬、甘草，从而控制心速宁胶囊的质量，有利于工业化生产。本发明的检测方法科学、可行，有较大的实用价值。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制，本领域技术人员应该理解为，在不偏离本发明的范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1中药制剂心速宁胶囊的鉴别

(1)黄连的鉴别

取中药制剂心速宁胶囊内容物0.5g(陕西摩美得制药有限公司生产，批号：131001，131002，131003)，研细，加甲醇10ml，置水浴中加热回流15分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。取黄连对照药材50mg(黄连(120913-201109)，购自中国食品药品检定研究院)，加甲醇10m1，制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱(盐酸小檗碱(110713-201212，购自中国食品药品检定研究院)对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液1μl，对照药材溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上。以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(体积比12∶6∶3∶3∶1)为展开剂，置氨蒸气预饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点，鉴定为黄连，在与对照药材色谱色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点为盐酸小檗碱。

(2)枳实的鉴别

取中药制剂心速宁胶囊内容物(陕西摩美得制药有限公司生产，批号：131001，131002，131003)2g，研细，置50ml圆底烧瓶中，加甲醇20ml，置水浴中加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml分三次加热(60℃)溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用0.1mol/L盐酸调节PH至3，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。取柚皮苷对照品(柚皮苷(110722-201111)，购自中国食品药品检定研究院)，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一含0.5％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(体积比6∶2∶3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点为柚皮苷。

(2)人参的鉴别

取中药制剂心速宁胶囊内容物(陕西摩美得制药有限公司生产，批号：131001，131002，131003)4g，研细，加三氯甲烷40ml，置水浴中加热回流1小时，弃去三氯甲烷提取液，药渣蒸干，加水饱和的正丁醇30ml，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参对照药材(120917-201110)，购自中国食品药品检定研究院)1g，加三氯甲烷40ml，置水浴中加热回流1小时，弃去三氯甲烷提取液，药渣蒸干，加水饱和的正丁醇30ml，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Re对照品(110757-201324)，购自中国食品药品检定研究院)和人参皂苷Rg1对照品(110703-201128)，购自中国食品药品检定研究院)，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(体积比13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10﹪硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，鉴定为人参。

(3)苦参的鉴别

取中药制剂心速宁胶囊内容物(陕西摩美得制药有限公司生产，批号：131001，131002，131003)2g，研细，置50ml具塞瓶中，加0.1mol/L盐酸30ml，放置15分钟，混匀，滤过，滤液移至分液漏斗中，用1mol/L氢氧化钠溶液调PH至10，加氯化钠使饱和，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取苦参对照药材(苦参(121019-101006)，购自中国药品生物制品检定所)0.5g，加0.1mol/L盐酸30ml，放置15分钟，混匀，滤过，滤液移至分液漏斗中，用1mol/L氢氧化钠溶液调PH至10，加氯化钠使饱和，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，同法制成对照药材溶液。再取槐定碱对照品(槐定碱(110784-200804)，购自中国食品药品检定研究院)，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一含2％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比2∶4∶2∶1)10℃以下放置的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，鉴定为苦参；在与对照品色谱相应的位置上，显一个相同的棕色斑点，鉴定为槐定碱。

(4)麦冬的鉴别

取中药制剂心速宁胶囊内容物(陕西摩美得制药有限公司生产，批号：131001，131002，131003)4g，研细，加水20ml，加热至沸使溶解，放冷，滤过，滤液加盐酸0.5ml，加热煮沸，放冷至室温，用三氯甲烷20ml振摇提取，分取三氯甲烷层，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材(麦冬(121013-201009，购自中国药品生物制品检定所)1g，加水20ml，煎煮10分钟，滤过，滤液加盐酸0.5ml，加热煮沸，放冷，用三氯甲烷20ml振摇提取，分取三氯甲烷层，浓缩至约1ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮(体积比4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，鉴定为麦冬。

(5)甘草的鉴别

取中药制剂心速宁胶囊内容物(陕西摩美得制药有限公司生产，批号：131001，131002，131003)2g，研细，加盐酸1ml和乙醚15ml，加热回流提取1小时，放冷至室温，滤过，滤液用水洗涤3次，每次5ml，弃去水液，挥干乙醚溶液，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草次酸(甘草次酸110723-200612，购自中国药品生物制品检定所)对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(体积比10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10﹪磷钼酸乙醇溶液，于105℃加热约5分钟，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，鉴定为甘草次酸。

实施例2本发明心速宁胶囊中有效成分含量的测定

检测黄连成分

原标准中含量测定方法为薄层色谱扫描法测定处方中黄连的有效成分盐酸小檗碱，该方法相对较为落后，故研究选择采用高效液相色谱法对本品处方中黄连的有效成分的含量测定研究。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛-水(48∶52)(1000ml中含KH₂PO₄3.4g，十二烷基磺酸钠1.2g)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于3500。

对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备(样品由陕西摩美得制药有限公司生产，批号：131001，131002，131003)取本品10粒的内容物，研细，取约0.2g，研细，取0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶(25ml)中，精密加入甲醇-盐酸(100∶1)的混合溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)40分钟，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定结果：心速宁胶囊3批产品(批号：131001，131002，131003)，含量测定结果：三批产品每粒含黄连以小檗碱计均为11.3mg/粒。

实施例3本发明中药制剂心速宁胶囊的检测方法研究试验

一、系统适用性试验

取本品(131001批号，陕西摩美得制药有限公司生产)样品适量，照上述供试品溶液制备方法制成供试品溶液；再分别精密称取盐酸小檗碱对照品和盐酸巴马汀对照品分别配置成相应浓度的对照品溶液；再取缺黄连的阴性样品0.2047g，按上述供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。取上述四种溶液，分别精密吸取10μl注入色谱仪，照上述色谱条件测定。结果供试品溶液HPLC图谱中盐酸巴马汀色谱峰的保留时间为7.213min，盐酸小檗碱色谱峰的保留时间为8.140min，两成分色谱峰之间及其与相邻色谱峰之间均分离良好；盐酸小檗碱色谱峰峰形好，盐酸巴马汀色谱峰因含量比例较小而峰高较低，峰型较差；阴性样品色谱中，在与盐酸巴马汀和盐酸小檗碱色谱峰相对应的位置上未见色谱峰，阴性对照无干扰。因此，本品采用高效液相色谱法测定黄连中有效成分的含量，其中盐酸小檗碱照上述方法测定，方法可行；其中盐酸巴马汀因含量较低，色谱峰型差，故本研究暂不进行盐酸巴马汀含量测定方法学研究，只进行盐酸小檗碱含量测定方法学研究。

二、耐用性试验

取本品(131001批号样品，陕西摩美得制药有限公司生产)同一供试品溶液，照上述色谱条件测定，其中流动相分别按下列比例，分别测定对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，根据在流动相比例少量变化的情况下，供试品色谱峰中盐酸小檗碱主峰与相邻色谱峰的分离效果，以及盐酸小檗碱色谱峰峰型的好坏情况，确定本品含量测定流动相要求。流动相比例及试验结果如下：

流动相1：乙睛-水(48∶52)(1000ml中含KH2PO43.4g，十二烷基磺酸钠1.2g)

流动相2：乙睛-水(50∶50)(1000ml中含KH2PO43.4g，十二烷基磺酸钠1.2g)

流动相3：乙睛-水(52∶48)(1000ml中含KH2PO43.4g，十二烷基磺酸钠1.2g)

实验结果表明，本品按上述三个流动相比例测定，供试品色谱中盐酸小檗碱色谱峰峰型均较好，且与相邻色谱峰分离效果好，阴性对照色谱中，在与盐酸小檗碱色谱保留时间相对应的位置上未显色谱峰，不干扰本品含量测定(其中流动相1条件下测得的图谱参照系统适用性试验项下图谱)。故说明本品按上述色谱条件测定，在流动相比例少量变化的情况下，不影响含量测定结果。

三、供试品溶液制备方法考察

本品含量测定项下供试品溶液制备方法参照中国药典2010年版一部黄连药材项下含量测定供试品溶液制备方法，并结合本品制剂特点，选择对超声提取时间进行考察，选择最佳提取条件。具体制备方法如下：

取本品(131001批号样品陕西摩美得制药有限公司生产)的内容物，研细，分别称取6份，各取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸(100∶1)的混合溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟(其中两份超声处理40分钟，两份超声处理50分钟)，放冷，再称定重量，分别用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

分别取按上述三种制备方法制备的6份供试品溶液，照上述色谱条件测定，分别计算盐酸小檗碱含量，确定最佳制备方法。试验结果见表1。

表1 不同超声处理时间下含量测定结果

试验结果表明，本品按上述制备方法制备供试品溶液，在上述三种超声处理时间下，供试品中盐酸小檗碱含量差别不大，但在超声处理(功率250W，频率40kHz)40分钟条件下，测得的含量最高，故本品供试品溶液制备，选择超声处理时间为40分钟。

四、稳定性试验

取批号为131001的样品(陕西摩美得制药有限公司生产)0.2045g，按上述供试品溶液制备方法制成供试品溶液，并按上述测定方法立即测定，每隔2小时进样10μl，共测定6次，即分别于0、2、4、6、8、10小时进样测定，以峰面积计算相对标准偏差，考察供试品溶液的稳定性。试验结果见表2。

表2 供试品溶液稳定性试验结果

结果表明，本品6次测定峰面积平均值为7139324.5，RSD为0.23％，说明本品供试品溶液在10小时内稳定性良好。

五、线性关系考察

精密称取盐酸小檗碱对照品(市售)适量，加甲醇制成每1ml含0.022542mg的溶液，精密吸取该溶液2.5、5、7.5、10、12.5、15、20μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以盐酸小檗碱色谱峰面积值为Y，进样量为X(μg)，进行线性回归，得线性方程：y＝2×107x+253264，r＝0.9982。结果表明，按上述方法测定，盐酸小檗碱在0.0563μg～0.4508μg进样量范围内，进样量与峰面积值呈良好的线性关系。结果见表3。

表3 线性关系实验数据

六、精密度试验

取本品(131001批号样品，陕西摩美得制药有限公司生产)同一供试品溶液，照上述色谱条件测定，重复进样6次，进样量为10μl，以峰面积计算RSD％，结果见表4。

表4 精密度试验数据

结果表明，本品按上述色谱条件试验，精密度良好。

七、重复性试验

取同一批样品(批号：131001，陕西摩美得制药有限公司生产)6份，照上述供试品溶液制备方法制备，并按以上色谱条件测定，分别计算每份样品中盐酸小檗碱含量，并以含量计算RSD％，结果见表5。

表5 重复性试验数据

结果表明，本品按上述色谱条件试验重复性良好。

八、回收率试验

取已知含量的样品(批号：131001，陕西摩美得制药有限公司生产)，倾出内容物，研细，精密称取6份(每份约0.1g)，分别精密称定，置具塞三角瓶中，分别精密称取盐酸小檗碱对照品适量(约相当于样品中盐酸小檗碱含量)，加入上述样品中，按供试品溶液制备方法制备，并按上述色谱条件测试，照下式计算回收率，结果见表6。结果平均回收率为96.96％，RSD为0.58％。

回收率(％)＝(测得量—样品中含量)÷加入量×100

表6 回收率试验数据

上述回收率试验结果表明，本品按上述制备方法制备，并按上述色谱条件测定，回收率高。

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每粒含黄连以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄·HCl)计，不得少于8.0mg。

取本品十批样品(陕西摩美得制药有限公司生产，批号130101、130102、130301、130302、130401、130402、130601、131001、131002、131003)，分别按供试品溶液制备方法制备，用上述方法分别测定盐酸小檗碱的含量，结果见表7所示：

表7 含量测定结果

以上十批样品含量测定结果表明，本品盐酸小檗碱含量在9.10mg/粒至11.47mg/粒之间，平均值为10.06mg/粒，故参照原标准含量限度，规定本品每粒含黄连以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄·HCl)计，不得少于8.0mg。

Claims (1)

1.一种中药制剂心速宁胶囊的检测方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：

Ⅰ、中药原料的鉴别：

(一)黄连的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物0.5-1g，研细加甲醇10-20ml，置水浴中加热回流15-30分钟，滤过，滤液浓缩至3-6ml，作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取黄连对照药材50mg，加甲醇10m1-20ml，置水浴中加热回流15-30分钟，滤过，滤液浓缩至3-6ml，制成对照药材溶液；

(3)盐酸小檗碱对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

(4)吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液，体积比为12∶6∶3∶3∶1为展开剂，置氨蒸气预饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点为盐酸小檗碱；

(二)枳实的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物2-5g，研细，置50-100ml圆底烧瓶中，加甲醇20-40ml，置水浴中加热回流30-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml-50ml分三次加热溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用0.1mol/L盐酸调节PH至3，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml-30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml-5ml使溶解，作为供试品溶液；

(2)柚皮苷对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一含0.5％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水，体积比为6∶2∶3的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点为柚皮苷；

(三)人参的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物4-8g，研细，加三氯甲烷40-80ml，置水浴中加热回流1-1.5小时，弃去三氯甲烷提取液，药渣蒸干，加水饱和的正丁醇30-60ml，超声处理功率250W，频率40kHz 30-60分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，用氨试液洗涤2次，每次30-60ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，作为供试品溶液；

(2)人参对照药材溶液制备：取人参对照药材1g，加三氯甲烷40-80ml，置水浴中加热回流1-1.5小时，弃去三氯甲烷提取液，药渣蒸干，加水饱和的正丁醇30-60ml，超声处理功率250W，频率40kHz30-60分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，用氨试液洗涤2次，每次30-60ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，制成对照药材溶液；

(3)人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rg1对照品溶液制备：取人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；

(4)吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水，体积比为13∶7∶2，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10﹪硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，Rf值偏小的为人参皂苷Re，Rf值偏大的为人参皂苷Rg1；

(四)苦参的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物2-4g，研细，置50-100ml具塞瓶中，加0.1mol/L盐酸30-60ml，放置15分钟，混匀，滤过，滤液移至分液漏斗中，用1mol/L氢氧化钠溶液调PH至10，加氯化钠使饱和，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15-30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1ml-2ml使溶解，作为供试品溶液；

(2)苦参对照药材溶液制备：取苦参对照药材0.5g，置50-100ml具塞瓶中，加0.1mol/L盐酸30-60ml，放置15分钟，混匀，滤过，滤液移至分液漏斗中，用1mol/L氢氧化钠溶液调PH至10，加氯化钠使饱和，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15-30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1ml-2ml使溶解，制成对照药材溶液；

(3)槐定碱对照品溶液的制备：取槐定碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；

(4)吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一含2％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比2∶4∶2∶1，10℃以下放置的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点是苦参；在与对照品色谱相应的位置上，显一个相同的棕色斑点为槐定碱；

(五)麦冬的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物4-8g，研细，加水20-40ml，加热至沸使溶解，放冷，滤过，滤液加盐酸0.5ml，加热煮沸，放冷，用三氯甲烷20-40ml振摇提取，分取三氯甲烷层，浓缩至约1-2ml，作为供试品溶液；

(2)麦冬对照药材溶液制备：取麦冬对照药材1g，加水20-40ml，煎煮10-20分钟，滤过，滤液加盐酸0.5ml，加热煮沸，放冷，用三氯甲烷20ml振摇提取，分取三氯甲烷层，浓缩至约1-2ml，作为对照药材溶液；

(3)吸取上述两种溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮，体积比4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

(六)甘草的鉴别：

(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物2-4g，研细，加盐酸1-2ml和乙醚15-30ml，加热回流提取1-2小时，放冷，滤过，滤液用水洗涤3次，每次5-10ml，弃去水液，挥干乙醚溶液，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

(2)甘草次酸对照品溶液制备：取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10﹪磷钼酸乙醇溶液，于105℃加热约5分钟，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点为甘草次酸；

Ⅱ、中药有效成分黄连含量的测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛-水，体积比48∶52，1000ml中含KH2PO43.4g，十二烷基磺酸钠1.2g为流动相；检测波长为270nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于3500；

(2)对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备取中药制剂心速宁胶囊1粒的内容物，研细，取0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸，体积比100∶1的混合溶液25-40ml，密塞，称定重量，超声处理功率250W，频率40kHz，30-50分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得每粒中药制剂心速宁胶囊的内容物含黄连以盐酸小檗碱C₂₀H₁₇NO₄·HCl计，不得少于8.0mg。