CN104459118B - 一种古代丝织品双抗夹心法检测试纸的制备方法 - Google Patents
一种古代丝织品双抗夹心法检测试纸的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104459118B CN104459118B CN201410848069.XA CN201410848069A CN104459118B CN 104459118 B CN104459118 B CN 104459118B CN 201410848069 A CN201410848069 A CN 201410848069A CN 104459118 B CN104459118 B CN 104459118B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- solution
- fibroin albumen
- gold
- tris
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000004753 textile Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 45
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims abstract description 35
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims abstract description 35
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims abstract description 23
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 108010022355 Fibroins Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims abstract description 14
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims abstract description 12
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims abstract description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 56
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 claims description 15
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 15
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 10
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 10
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 10
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 10
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 10
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 10
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 10
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 10
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 10
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 10
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 10
- SJUCACGNNJFHLB-UHFFFAOYSA-N O=C1N[ClH](=O)NC2=C1NC(=O)N2 Chemical compound O=C1N[ClH](=O)NC2=C1NC(=O)N2 SJUCACGNNJFHLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229920002538 Polyethylene Glycol 20000 Polymers 0.000 claims description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 5
- NMWONDKHBZEDMY-UHFFFAOYSA-H [Au](Cl)(Cl)Cl.C(CC(O)(C(=O)[O-])CC(=O)[O-])(=O)[O-].[Na+].[Na+].[Na+] Chemical compound [Au](Cl)(Cl)Cl.C(CC(O)(C(=O)[O-])CC(=O)[O-])(=O)[O-].[Na+].[Na+].[Na+] NMWONDKHBZEDMY-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 5
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000005030 aluminium foil Substances 0.000 claims description 5
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 5
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 5
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5,6-trinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-3,5-dinitrooxy-6-(nitrooxymethyl)oxan-4-yl] nitrate Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O1)O[N+]([O-])=O)CO[N+](=O)[O-])[C@@H]1[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O[C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N 0.000 abstract description 12
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 abstract description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 5
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Treatments For Attaching Organic Compounds To Fibrous Goods (AREA)
Abstract
本发明公开了一种古代丝织品双抗夹心法检测试纸的制备方法，采用免疫胶体金层析技术的原理来检测古代墓葬中丝织品的痕迹，即将胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶解在胶体金结合垫上，将鼠抗丝素蛋白抗体和山羊抗兔IgG(H+L)抗体分别喷在硝酸纤维素薄膜上形成检测线和质控线。若检测线未显色，质控线显色，证明样品中不含有丝素蛋白；若检测线和质控线均显色，证明样品中含有丝素蛋白。本发明采用双抗夹心免疫胶体金层析技术的原理对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面，成本低，反应时间短，不需要专业人员操作，适合于考古现场检测。
Description
技术领域
本发明属于古代丝织品痕迹的检测领域，尤其涉及一种快速检测古代丝织品的双抗夹心法检测试纸的制备方法。
背景技术
丝织品由蚕丝编织而成，是中华民族智慧的结晶，是我国的宝贵遗产。但是蚕丝作为一种有机高分子材料，长期埋葬于墓葬环境中，必然会受到氧气、水、微生物等因素的影响而发生降解，以至于外观严重受到破坏而腐朽，肉眼根本无法识别。常规的检测方法有红外光谱分析，氨基酸分析，液相色谱分析等，但是由于糟朽丝织品杂质含量多，谱图解析困难，耗时长，灵敏度低，并且不能排除其它蛋白质的干扰，给研究工作者带来了一定的困难。
发明内容
本发明要解决的技术问题是:针对上述现有技术存在的问题提供一种快速、直观、简便的古代丝织品检测方法。
本发明所采取的技术方案是：一种古代丝织品双抗夹心法检测试纸的制备方法，其特征在于采用步骤如下：
A)金纳米粒子的制备：采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将100mL的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5mL的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸7-10min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶；
B)金标兔抗丝素蛋白抗体的制备：用0.1mol/L的K2CO3溶液将100mL的胶体金溶液调节pH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20-50μL，所述抗体浓度为3.15mg/mL；接着加入5mL的质量浓度为1%-10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000-11000r/min下离心40-60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/L的pH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液中还含有质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4℃下保存；
C)试纸条的组装：用喷膜机将5-20μL、用pH8.2的Tris-HCl溶液稀释100-400倍的鼠抗丝素蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37℃烘干备用；将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，pH为8.2的Tris-HCl溶液稀释10-20倍的金标记的兔抗丝素蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37℃烘干备用；将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4mm宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；
D)取1g纺织品痕迹样，溶解于50-100mL、pH为8.2的Tris-HCl溶液缓冲溶液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；5-10min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有丝素蛋白，该纺织品痕迹为丝织品的痕迹。
本发明采用免疫胶体金层析技术的原理来检测古代墓葬中丝织品的痕迹，即将胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶解在胶体金结合垫上，将鼠抗丝素蛋白抗体和山羊抗兔IgG(H+L)抗体分别喷在硝酸纤维素薄膜上形成检测线和质控线。样品加入样品吸收垫，样品中的液体首先溶解胶体金垫中含有的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体，同时，样品中待测抗原与胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体结合，形成胶体金标记兔抗丝素蛋白抗体-抗原复合物，并靠毛细作用向检测线移动。样品经过检测线时，样品中抗原的未结合位点与硝酸纤维素膜上的鼠抗丝素蛋白抗体结合。若样品中含有抗原，胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体-抗原复合物就会在硝酸纤维素膜上聚集，检测线显出红色。胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体-抗原-鼠抗丝素蛋白抗体复合物经过质控线，与山羊抗兔IgG(H+L)抗体反应，胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体聚集在质控线上，显出红色。即若检测线未显色，质控线显色，证明样品中不含有丝素蛋白；若检测线和质控线均显色，证明样品中含有丝素蛋白。
本发明的有益效果是:采用双抗夹心免疫胶体金层析技术的原理对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面，成本低，反应时间短，不需要专业人员操作，适合于考古现场检测。
具体实施方式
实施例1采用步骤如下：
A)金纳米粒子的制备：采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为25nm的金纳米粒子；即将100mL的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0mL的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸7min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶；
B)金标兔抗丝素蛋白抗体的制备：用0.1mol/L的K2CO3溶液将100mL的胶体金溶液调节pH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20μL，所述抗体浓度为3.15mg/mL；接着加入5mL的质量浓度为1%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000r/min下离心40min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/L的pH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液中还含有质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4℃下保存；
C)试纸条的组装：用喷膜机将5μL、用pH8.2的Tris-HCl溶液稀释100倍的鼠抗丝素蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37℃烘干备用；将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，pH为8.2的Tris-HCl溶液稀释10倍的金标记的兔抗丝素蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37℃烘干备用；将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4mm宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；
D)取1g纺织品痕迹样，溶解于50mL、pH为8.2的Tris-HCl溶液缓冲溶液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；5min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有丝素蛋白，该纺织品痕迹为丝织品的痕迹。
实施例2采用步骤如下：
A)金纳米粒子的制备：采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为35nm的金纳米粒子；即将100mL的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.3mL的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸8min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶；
B)金标兔抗丝素蛋白抗体的制备：用0.1mol/L的K2CO3溶液将100mL的胶体金溶液调节pH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体30μL，所述抗体浓度为3.15mg/mL；接着加入5mL的质量浓度为5%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在10000r/min下离心50min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/L的pH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液中还含有质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4℃下保存；
C)试纸条的组装：用喷膜机将15μL、用pH8.2的Tris-HCl溶液稀释200倍的鼠抗丝素蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37℃烘干备用；将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，pH为8.2的Tris-HCl溶液稀释15倍的金标记的兔抗丝素蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37℃烘干备用；将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4mm宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；
D)取1g纺织品痕迹样，溶解于70mL、pH为8.2的Tris-HCl溶液缓冲溶液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；8min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有丝素蛋白，该纺织品痕迹为丝织品的痕迹。
实施例3采用步骤如下：
A)金纳米粒子的制备：采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为50nm的金纳米粒子；即将100mL的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.5mL的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸10min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶；
B)金标兔抗丝素蛋白抗体的制备：用0.1mol/L的K2CO3溶液将100mL的胶体金溶液调节pH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体50μL，所述抗体浓度为3.15mg/mL；接着加入5mL的质量浓度为10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在11000r/min下离心60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/L的pH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液中还含有质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4℃下保存；
C)试纸条的组装：用喷膜机将20μL、用pH8.2的Tris-HCl溶液稀释400倍的鼠抗丝素蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37℃烘干备用；将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，pH为8.2的Tris-HCl溶液稀释20倍的金标记的兔抗丝素蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37℃烘干备用；将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4mm宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；
D)取1g纺织品痕迹样，溶解于100mL、pH为8.2的Tris-HCl溶液缓冲溶液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；10min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有丝素蛋白，该纺织品痕迹为丝织品的痕迹。
Claims (1)
1.一种古代丝织品双抗夹心法检测试纸的制备方法，其特征在于采用步骤如下：
A)金纳米粒子的制备：采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将100mL的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5mL的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸7-10min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶；
B)金标兔抗丝素蛋白抗体的制备：用0.1mol/L的K2CO3溶液将100mL的胶体金溶液调节pH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20-50μL，所述抗体浓度为3.15mg/mL；接着加入5mL的质量浓度为1%-10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000-11000r/min下离心40-60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/L的pH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液中还含有质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4℃下保存；
C)试纸条的组装：用喷膜机将5-20μL、用pH8.2的Tris-HCl溶液稀释100-400倍的鼠抗丝素蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37℃烘干备用；将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，pH为8.2的Tris-HCl溶液稀释10-20倍的金标记的兔抗丝素蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37℃烘干备用；将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4mm宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；
D)取1g纺织品痕迹样，溶解于50-100mL、pH为8.2的Tris-HCl溶液缓冲溶液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；5-10min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有丝素蛋白，该纺织品痕迹为丝织品的痕迹。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410848069.XA CN104459118B (zh) | 2014-12-31 | 2014-12-31 | 一种古代丝织品双抗夹心法检测试纸的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410848069.XA CN104459118B (zh) | 2014-12-31 | 2014-12-31 | 一种古代丝织品双抗夹心法检测试纸的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104459118A CN104459118A (zh) | 2015-03-25 |
| CN104459118B true CN104459118B (zh) | 2016-03-02 |
Family
ID=52905506
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410848069.XA Expired - Fee Related CN104459118B (zh) | 2014-12-31 | 2014-12-31 | 一种古代丝织品双抗夹心法检测试纸的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104459118B (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105424920A (zh) * | 2015-10-30 | 2016-03-23 | 浙江理工大学 | 一种古代羊毛织品双抗夹心法检测试纸的制备方法 |
| CN105717291A (zh) * | 2016-02-04 | 2016-06-29 | 浙江理工大学 | 一种古代羊毛织品间接竞争法检测试纸的制备方法 |
| CN105699660A (zh) * | 2016-02-24 | 2016-06-22 | 浙江理工大学 | 一种古代羊毛的特异性免疫检测方法 |
| CN105675884A (zh) * | 2016-02-24 | 2016-06-15 | 浙江理工大学 | 一种古代牛毛微痕迹荧光检测试纸的制备方法 |
| CN109187960A (zh) * | 2018-09-10 | 2019-01-11 | 浙江理工大学 | 一种基于免疫层析技术的检测古代丝织品的方法 |
| CN109270258A (zh) * | 2018-10-31 | 2019-01-25 | 武汉利恩达医疗科技有限公司 | 一种柴胡皂苷d检测试纸制备方法 |
| CN112986566A (zh) * | 2021-03-29 | 2021-06-18 | 浙江理工大学 | 一种识别丝织品的桑蚕单克隆抗体的胶体金标记方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102590482A (zh) * | 2011-12-27 | 2012-07-18 | 苏州大学 | 一种鉴别桑蚕雄蚕丝的方法 |
| CN103509107A (zh) * | 2013-08-07 | 2014-01-15 | 浙江大学 | 利用特征多肽制备家蚕丝素蛋白特异抗体的方法 |
| CN103509108A (zh) * | 2013-08-07 | 2014-01-15 | 浙江大学 | 利用特征十二多肽制备家蚕丝素蛋白特异抗体的方法 |
| CN104059131A (zh) * | 2014-07-04 | 2014-09-24 | 丝科普乐（北京）生物科技有限公司 | 抗丝素蛋白多克隆抗体及其制备方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0572205A (ja) * | 1991-09-14 | 1993-03-23 | Kanebo Ltd | 免疫測定方法及び装置 |
| US9029168B2 (en) * | 2010-06-28 | 2015-05-12 | The Trustees Of Princeton University | Use and making of biosensors utilizing antimicrobial peptides for highly sensitive biological monitoring |
-
2014
- 2014-12-31 CN CN201410848069.XA patent/CN104459118B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102590482A (zh) * | 2011-12-27 | 2012-07-18 | 苏州大学 | 一种鉴别桑蚕雄蚕丝的方法 |
| CN103509107A (zh) * | 2013-08-07 | 2014-01-15 | 浙江大学 | 利用特征多肽制备家蚕丝素蛋白特异抗体的方法 |
| CN103509108A (zh) * | 2013-08-07 | 2014-01-15 | 浙江大学 | 利用特征十二多肽制备家蚕丝素蛋白特异抗体的方法 |
| CN104059131A (zh) * | 2014-07-04 | 2014-09-24 | 丝科普乐（北京）生物科技有限公司 | 抗丝素蛋白多克隆抗体及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 利用丝素蛋白抗体鉴定古代丝织品;郑秦等;《蚕业科学》;20140615;第40卷(第3期);第520-526页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104459118A (zh) | 2015-03-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104459118B (zh) | 一种古代丝织品双抗夹心法检测试纸的制备方法 | |
| CN104459162B (zh) | 一种古代丝织品间接竞争法检测试纸的制备方法 | |
| Cao et al. | Portable colorimetric detection of copper ion in drinking water via red beet pigment and smartphone | |
| Qu et al. | Rapid lateral-flow immunoassay for the quantum dot-based detection of puerarin | |
| Choleva et al. | based assay of antioxidant activity using analyte-mediated on-paper nucleation of gold nanoparticles as colorimetric probes | |
| Su et al. | Recent advances in chemiluminescence | |
| CN104133070B (zh) | 一种环境雌激素无标记免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN103439496B (zh) | 大肠杆菌o157:h7富集和快速检测方法 | |
| CN104316707B (zh) | 一种基于CdS-Fe3O4电致化学发光传感器的制备方法及应用 | |
| CN204330778U (zh) | 一种碱性磷酸酶快速检测免疫试纸条 | |
| CN103439497A (zh) | 沙门氏菌富集和快速检测方法 | |
| CN105116148A (zh) | 一种检测五氯酚钠的试纸条及方法 | |
| CN103018438A (zh) | 一种检测毒死蜱农药残留的免疫传感器制备方法 | |
| Li et al. | Optical sensing techniques for rapid detection of agrochemicals: Strategies, challenges, and perspectives | |
| Liu et al. | Dye@ MOF composites (RhB@ 1): Highly sensitive dual emission sensor for the detection of pesticides, Fe3+ and ascorbate acid | |
| CN102426222A (zh) | 快速检测ttx的磁性免疫层析方法及检测试纸条的制备 | |
| CN106248894A (zh) | 一种检测牛奶中抗生素残留的纸芯片 | |
| CN104122215B (zh) | 一种可再生光度探针的制备和应用 | |
| Ye et al. | A dual-mode fluorescent probe based on perylene for the detection of Sn2+ | |
| Deng et al. | Capture antibody imitator MnO2 nanozyme-based dual-signal immunochromatographic assay for rapid detection of Salmonella enteritidis | |
| Wang et al. | Dosage-sensitive and simultaneous detection of multiple small-molecule pollutants in environmental water and agriproducts using portable SERS-based lateral flow immunosensor | |
| CN113640240B (zh) | 一种基于金银纳米星刻蚀的智能手机紫外检测so2的方法 | |
| Xie et al. | Terbium doping and energy level modification of zirconium organic frameworks as probes for the improved determination of histamine and visual inspection of food freshness | |
| CN103439482B (zh) | 一种基于n,n’-二(三甲氧基硅烷基丙基)-戊二亚胺的生物传感试纸的应用 | |
| CN201548546U (zh) | 一种单增李斯特菌胶体金试纸 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160302 Termination date: 20161231 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |