CN105424920A - 一种古代羊毛织品双抗夹心法检测试纸的制备方法 - Google Patents

一种古代羊毛织品双抗夹心法检测试纸的制备方法 Download PDF

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苏孝鹏
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Abstract

本发明公开了一种古代羊毛织品双抗夹心法检测试纸的制备方法，采用以下步骤：采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出金纳米粒子；制备金标兔抗角蛋白抗体；组装试纸条，将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；取1g纺织品痕迹样，溶解于50-100ml、PH为8.2的Tris-HCl缓冲液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；5-10min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有角蛋白，该纺织品痕迹为羊毛织品的痕迹。相比现有技术，该方法简单快捷，灵敏度高，特异性强，结果直观，更适合考古现场分析。

Description

一种古代羊毛织品双抗夹心法检测试纸的制备方法
技术领域
本发明属于古代羊毛织品痕迹的检测领域,尤其涉及一种快速检测古代羊毛织品的双抗夹心法检测试纸的制备方法。
背景技术
古代在北方地区毛织品广泛应用于服饰和毛毯，而羊毛织物占绝大多数。出土的大量毛织物其精美程度不亚于出土的丝绸文物，这不仅是古代纺织技术演变的重要实物证据，也对研究古代社会环境和人文活动具有重要参考价值。而现有技术中缺乏对古代丝织品中羊毛角蛋白鉴定的深入研究。
羊毛角蛋白是一种硬化,不易溶解的蛋白质，其中既有含羧基等在内的酸性基，也有含胺基，亚胺基等在内的碱性基，所以在酸、碱、盐、氧化剂、还原剂、卤素等中羊毛都具有一定的不稳定性。在丝织品文物鉴定中，这对羊毛制品的鉴别造成了一定困难。现有技术中，基于Elisa法的原理，如何能够在考古现场快捷，方便，准确地鉴别出羊毛织品，为古代羊毛织品发展研究提供依据，是现有技术需要解决的问题。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种古代羊毛织品双抗夹心法检测试纸的制备方法，从而针对上述现有技术存在的问题提供一种直观的，快捷的检测方法。
为此，本发明所采用的技术方案是：一种古代羊毛织品双抗夹心法检测试纸的制备方法，其特征在于采用以下步骤：
A)制备金纳米粒子，采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液水浴加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5ml的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸7-10min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶；
B)制备金标兔抗角蛋白抗体，用0.1mol/l的K2CO3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.2，搅拌的加入兔抗角蛋白抗体20-50μl，所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为1%-10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000-11000r/min下离心40-60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20,1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖；于4℃下保存；
C)组装试纸条，用喷膜机将5-20μl、用PH8.2的Tris-HCl溶液稀释100-400倍的鼠抗角蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37℃烘干备用；将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH为8.2的Tris-HCl溶液稀释10-20倍的金标记的兔抗角蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37℃烘干备用；将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4mm宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；
D)取1g纺织品痕迹样，溶解于50-100ml、PH为8.2的Tris-HCl缓冲液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；5-10min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有角蛋白，该纺织品痕迹为羊毛织品的痕迹。
本发明的有益成果是：本发明采用双抗夹心免疫胶体金层析对古代羊毛织品进行检测，相比现有技术，该方法简单快捷，灵敏度高，特异性强，结果直观，更适合考古现场分析。
具体实施方式
实施例1采用以下步骤：
A)制备金纳米粒子，采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为25nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液水浴加热至沸腾，迅速加入1.0ml的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸7min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶；
B)制备金标兔抗角蛋白抗体，用0.1mol/l的K2CO3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.2，搅拌的加入兔抗角蛋白抗体20μl，所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为1%%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000r/min下离心60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20,1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖；于4℃下保存；
C)组装试纸条，用喷膜机将5μl、用PH8.2的Tris-HCl溶液稀释100倍的鼠抗角蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37℃烘干备用；将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH为8.2的Tris-HCl溶液稀释10倍的金标记的兔抗角蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37℃烘干备用；将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4mm宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；
D)取1g纺织品痕迹样，溶解于50ml、PH为8.2的Tris-HCl缓冲液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；5min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有角蛋白，该纺织品痕迹为羊毛织品的痕迹。
实施例2采用以下步骤：
A)制备金纳米粒子，采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为40nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液水浴加热至沸腾，迅速加入1.25ml的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸8min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶；
B)制备金标兔抗角蛋白抗体，用0.1mol/l的K2CO3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.2，搅拌的加入兔抗角蛋白抗体35μl，所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为5%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在0000r/min下离心50min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20,1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖；于4℃下保存；
C)组装试纸条，用喷膜机将12μl、用PH8.2的Tris-HCl溶液稀释250倍的鼠抗角蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37℃烘干备用；将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH为8.2的Tris-HCl溶液稀释15倍的金标记的兔抗角蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37℃烘干备用；将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4mm宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；
D)取1g纺织品痕迹样，溶解于75ml、PH为8.2的Tris-HCl缓冲液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；8min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有角蛋白，该纺织品痕迹为羊毛织品的痕迹。
实施例3采用以下步骤：
A)制备金纳米粒子，采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液水浴加热至沸腾，迅速加入1.5ml的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸10min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶；
B)制备金标兔抗角蛋白抗体，用0.1mol/l的K2CO3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.2，搅拌的加入兔抗角蛋白抗体50μl，所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在11000r/min下离心40min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20,1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖；于4℃下保存；
C)组装试纸条，用喷膜机将20μl、用PH8.2的Tris-HCl溶液稀释400倍的鼠抗角蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37℃烘干备用；将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH为8.2的Tris-HCl溶液稀释20倍的金标记的兔抗角蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37℃烘干备用；将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4mm宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；
D)取1g纺织品痕迹样，溶解于100ml、PH为8.2的Tris-HCl缓冲液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；10min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有角蛋白，该纺织品痕迹为羊毛织品的痕迹。

Claims (1)

1.一种古代羊毛织品双抗夹心法检测试纸的制备方法，其特征在于采用以下步骤：
A)制备金纳米粒子，采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液水浴加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5ml的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸7-10min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶；
B)制备金标兔抗角蛋白抗体，用0.1mol/l的K2CO3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.2，搅拌的加入兔抗角蛋白抗体20-50μl，所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为1%-10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000-11000r/min下离心40-60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20,1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖；于4℃下保存；
C)组装试纸条，用喷膜机将5-20μl、用PH8.2的Tris-HCl溶液稀释100-400倍的鼠抗角蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37℃烘干备用；将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH为8.2的Tris-HCl溶液稀释10-20倍的金标记的兔抗角蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37℃烘干备用；将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4mm宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；
D)取1g纺织品痕迹样，溶解于50-100ml、PH为8.2的Tris-HCl缓冲液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；5-10min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有角蛋白，该纺织品痕迹为羊毛织品的痕迹。
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