CN104458949B

CN104458949B - 小儿扶脾颗粒中橙皮苷和芸香柚皮苷含量的检测方法

Info

Publication number: CN104458949B
Application number: CN201410734211.8A
Authority: CN
Inventors: 唐纯玉; 唐代凤; 彭艳梅; 黄晓燕; 邱云芳
Original assignee: HUNAN TIME SUN PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: HUNAN TIME SUN PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2014-12-04
Filing date: 2014-12-04
Publication date: 2017-03-08
Anticipated expiration: 2034-12-04
Also published as: CN104458949A

Abstract

本发明公开了一种小儿扶脾颗粒中橙皮苷和芸香柚皮苷含量的一测多评法。选择价廉易得，又相对稳定的橙皮苷作为对照品，采用一测多评的方法，同时定量测定价格昂贵且难以购买的芸香柚皮苷。在提升含量测定方法的同时，既能有效地控制产品质量，又不增加产品的检测成本。通过对一测多评方法在小儿扶脾颗粒制剂中的运用，探索科学合理的控制方法和指标，全面提升产品质量。

Description

小儿扶脾颗粒中橙皮苷和芸香柚皮苷含量的检测方法

技术领域

本发明属于中药制剂与分析技术领域，具体涉及一种小儿扶脾颗粒中橙皮苷和芸香柚皮苷的一测多评含量测定方法。

背景技术

针对目前儿童专用药稀缺的市场现状，加速推进儿童专用药的开发成为国内外研究的重点。小儿厌食症为儿科多发病、常见病，造成患儿个子矮小、面黄肌瘦，严重者可影响生长发育。现代医学多采用补锌剂、助消化及赖氨基肌醇维生素B₁₂等方法治疗，但从这类药物远期临床疗效来看，不及中医补脾益气方剂疗效持久、显著。厌食症主要由于脾胃功能失调，多由喂养不当、饮食不节所造成。中医认为“脾胃为后天之本，气血生化之源”，“脾主运化”“胃为水谷之海、主受纳”，目前，针对本病症市场上有醒脾养儿颗粒、复方太子参颗粒等中成药，均以健胃消食为主要功效。如醒脾养儿颗粒用于脾胃气虚所致的儿童厌食，腹泻便溏，烦躁盗汗，遗尿夜啼；复方太子参颗粒用于消化不良，食欲不振，厌食偏食，腹胀腹痛，头晕乏力，四肢酸软及各种久病体弱、体虚盗汗、气阴两虚之病症。由湖南时代阳光药业股份有限公司独家研制的品种——小儿扶脾颗粒，产品批准文号为国药准字20025916。由白术、山楂、莲子、陈皮、党参、茯苓组方，以健脾为本，兼顾理气化湿，能使补而不滞，特别针对性解决小儿厌食症，标本兼治，在治疗现代儿童消化不良、厌食、挑食上的疗效显著。

为了保证复方制剂的安全性与有效性，中药复方制剂质量控制的方法与手段成为中药现代化的最重要研究之一。指标成分的含量作为评价中药复方制剂质量的重要指标之一，因遇到指标成分对照品难得等问题，由王智民等人提出的“一测多评法”，利用中药有效成分内在的函数关系和比例关系，通过只测定一个易得的成分，来实现其他等多个成分的同步测定，该方法已逐渐应用于中成药的质量检测领域。因此，本发明在用高效液相法测定小儿扶脾颗粒制剂中橙皮苷的含量以及用薄层扫描法鉴别原料药陈皮、白术的基础上，以既能更有效地保证质量，又尽可能地不增加检测成本的目标，提升检测方法，将一侧多评法运用于小儿扶脾颗粒中橙皮苷和芸香柚皮苷的同时测定。

发明内容

首次在中成药产品中运用一测多评技术以橙皮苷为内参物同时测定芸香柚皮苷的含量的方法，确保了小儿扶脾颗粒用药的安全、有效。

本发明提供了一种小儿扶脾颗粒中橙皮苷和芸香柚皮苷含量的检测方法，包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：用甲醇将橙皮苷配制成每1mL含25～50μg橙皮苷的对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：取5～10g小儿扶脾颗粒，加入甲醇20～60mL，称定重量，加热回流0.5～1小时，混匀，配制成供试品溶液；

(3)高效液相色谱分析：分别精密吸取等量的对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪色谱分离柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇：水，按照一定的体积比和流速进行洗脱，用紫外检测器进行检测。

(4)以橙皮苷对照品的峰面积为对照，利用校正因子计算芸香柚皮苷和橙皮苷的含量。

其中，步骤(1)是用甲醇将橙皮苷配制成每1mL含40μg橙皮苷的对照品溶液。

步骤(2)是取5g小儿扶脾颗粒，加入甲醇25mL，称定重量，加热回流0.5～1小时，混匀，配制成供试品溶液。

步骤(3)中，所述色谱柱规格为250mm×4.6mm，5μm粒径；流动相甲醇和水的体积比为32:(65—70)；流速为0.8—1.2mL/min；柱温为30—40℃；紫外检测波长为283nm。

步骤(4)中，所述芸香柚皮苷相对于橙皮苷的相对校正因子为0.992，芸香柚皮苷相对于橙皮苷的相对保留时间为0.769，相对保留时间偏差为±8％以内。

附图说明

图1为芸香柚皮苷和陈皮苷对照品溶液紫外光谱图；

图2为对照品图谱；

图3为芸香柚皮苷、橙皮苷的一测多评研究中供试品图谱；

图4为阴性样品图谱；

图5为芸香柚皮苷标准曲线图；

图6为橙皮苷标准曲线图；

图7为检测限图。

具体实施方式

实施例1

色谱条件Waters e2695高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱：Waters SymmetryC₁₈(250mm×4.6mm×5μm)、Agilent TC(2)C₁₈(250mm×4.6mm×5μm)、Ultimate XB C₁₈(250mm×4.6mm×5μm)；流动相为甲醇-水(32∶68)，柱温35℃，检测波长283nm，流速1mL/min。

对照品溶液制备

分别称取芸香柚皮苷对照品、橙皮苷对照品适量，精密称定，配制成如表17的对照品储备液。

表17对照品储备溶液配制表

分别吸取上述2个对照品溶液储备液适量，混合，定容，配制成如表18所示的5组浓度的混合对照品溶液。

表18对照品溶液表(mg/mL)

编号	橙皮苷	芸香柚皮苷
			1	0.103	0.1027
2	0.0206	0.02054
			3	0.00206	0.002054
4	0.103	0.02054
			5	0.0206	0.1027

供试品溶液的制备

取装量差异项下的小儿扶脾颗粒，混匀，研细，取5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇25mL，称定重量，加热回流1小时，放冷，用甲醇补足减失的重量，混匀，即得供试品溶液。

相对校正因子和相对保留时间的测定

对相对校正因子(relative correction factor，RCF)及相对保留时间的各影响因素进行了考察，确定了相对校正因子(relative correction factor，RCF)及相对保留时间。

内参物的选择

由于橙皮苷对照品价廉易得，比较稳定，且在样品溶液中含量明显高于其他成分，故选择橙皮苷为内参物，建立内参物与其他待测成分间的相对校正因子。

相对校正因子和相对保留时间的影响因素考察

分别考察了流速、流动相、柱温、不同对照品的比例、不同对照品浓度、不同品牌色谱柱等影响因素。分别吸取对照品配制项下的5组对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪进行分析，考察上述因素对校正因子及相对保留时间的影响。

不同仪器考察

考察了Agilent 1200、Waters e2695两个品牌的高效液相色谱仪测定相对校正因子与相对保留时间，结果见表19。

表19不同仪器测定的芸香柚皮苷相对校正因子(RCF)与相对保留时间(RRT)

结果表明，不同的液相色谱仪对校正因子和相对保留时间的影响不大，方法的适应性强。

不同流速的考察

分别考察了Waters Symmetry C₁₈(250mm×4.6mm×5μm)流速为0.8mL/min、1.0mL/min下校正因子与相对保留时间，结果表20。

表20不同流速的芸香柚皮苷校正因子(RCF)与相对保留时间(RRT)

结果表明，不同的流速对校正因子和相对保留时间的影响不大，方法的耐用性好。

不同流动相比例考察

分别考察了甲醇-水(32∶68)、甲醇-水(30∶70)不同流动相比例对校正因子与相对保留时间的影响，结果见表21。

表21不同流动相比例的芸香柚皮苷校正因子(RCF)与相对保留时间(RRT)

结果表明，极性略有差异的流动相对校正因子和相对保留时间的影响不大，方法的稳定性好。

不同柱温的考察

分别考察了柱温分别为30℃、35℃时对校正因子与相对保留时间的影响，结果见表22。

表22不同流动相比例的芸香柚皮苷校正因子(RCF)与相对保留时间(RRT)

结果表明，30℃、35℃的柱温对校正因子和相对保留时间的影响不大，30℃的柱温更稳定。

不同色谱柱考察

分别考察了Waters Symmetry C₁₈(250mm×4.6mm×5μm)、Agilent TC(2)C₁₈(250mm×4.6mm×5μm)、Ultimate XB C₁₈(250mm×4.6mm×5μm)对校正因子与相对保留时间的影响，结果见表23。

表23不同色谱柱相对校正因子(RCF)与相对保留时间(RRT)结果

结果表明，不同色谱柱对校正因子和相对保留时间的影响不大，方法的重现性较好。

综合以上考察结果，可以看出在不同高效液相色谱仪(Agilent1200、Waterse2695)、不同流速(0.8mL/min、1.0mL/min)、不同流动相比例[甲醇-水(32∶68)、甲醇-水(30∶70)]、不同柱温(30℃、35℃)、不同色谱柱考察[Waters Symmetry C₁₈(250mm×4.6mm×5μm)、Agilent TC(2)C₁₈(250mm×4.6mm×5μm)、Ultimate XB C₁₈(250mm×4.6mm×5μm)]等因素对相对校正因子与相对保留时间，结果相对校正因子的RSD均小于5％，相对保留时间的RSD均小于5％。因此，以上述结果的平均值确定各成分相对于橙皮苷的相对校正因子以及相对保留时间，相对校正因子为芸香柚皮苷0.992，相对保留时间为芸香柚皮苷0.769。

样品测定与结果验证

分别对不同时间生产的21批样品按上述方法分别测定样品中芸香柚皮苷、橙皮苷的含量。并将测定的结果与用一测多评法计算的结果比较，结果如表24。

表24样品含量测定结果

结果表明采用一测多评测定的结果与两种对照品直接测定的结果基本一致，表明一测多评法可以用于小儿扶脾颗粒的质量控制，既更有效地控制产品质量，又能节省检验成本。

Claims

1.一种小儿扶脾颗粒中橙皮苷和芸香柚皮苷含量的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备：用甲醇将橙皮苷配制成每1mL含25～50μg橙皮苷的对照品溶液；

（2）供试品溶液的制备：取5～10g小儿扶脾颗粒，加入甲醇20～60mL，称定重量，加热回流0.5～1小时，混匀，配制成供试品溶液；

（3）高效液相色谱分析：分别精密吸取等量的对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪进行洗脱；色谱色谱柱型号为Waters Symmetry C₁₈，250mm ×4.6mm×5μm；或AgilentTCC₁₈ （2），250mm× 4.6mm×5μm；或Ultimate XB C₁₈，250mm ×4.6mm×5μm；流动相为甲醇和水，流动相甲醇和水的体积比为32: 65—70，洗脱流速为0.8-1.2mL/min，洗脱后用紫外检测器进行检测；

（4）利用一测多评法，以橙皮苷为内参物，同时测定小儿扶脾颗粒中橙皮苷和芸香柚皮苷的含量；所述芸香柚皮苷相对于橙皮苷的相对校正因子为0.992，芸香柚皮苷相对于橙皮苷的相对保留时间为0.769，相对保留时间偏差为±8%以内。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）是用甲醇将橙皮苷配制成每1mL含40μg橙皮苷的对照品溶液。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）是取5g小儿扶脾颗粒，加入甲醇25mL，称定重量，加热回流0.5～1小时，混匀，配制成供试品溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述色谱柱柱温为30-40℃；紫外检测波长为283nm。