CN104458945A - 一种盐酸贝西沙星及其异构体的分离测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种盐酸贝西沙星及其异构体的分离测定方法，其特征在于，采用以环糊精为填充剂的手性色谱柱，以缓冲盐溶液-有机溶剂组成流动相系统。采用本发明的方法，可有效分离贝西沙星及其对映异构体，使两者的分离度达到3.5以上，可以准确有效控制盐酸贝西沙星的质量。与现有的专利和文献相比，总体来说该方法不需要复杂的衍生过程以及昂贵的衍生试剂，样品前处理过程简单，分析时间短，可操作性强。本方法能简单、快速、准确的分离检测出贝西沙星及其光学异构体。

Description

一种盐酸贝西沙星及其异构体的分离测定方法

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体涉及用液相色谱法分离测定盐酸贝西沙星及其光学异构体的方法。

背景技术

盐酸贝西沙星化学名称为(R)-7-(3-氨基六氢-1H-氮杂-1-基)-8-氯-1-环丙基-6-氟-1，4-二氢-4-氧代-3-羧酸喹啉盐酸盐,其结构如式(I)所示，是一种用于治疗细菌性结膜炎的新一代氟喹诺酮类药物，在临床中显示出优越的杀菌效果。盐酸贝西沙星的结构式如(I)所示：

在盐酸贝西沙星的结构中，7位上连接了一个带有一个手性中心的七元环侧链，手性中心的构型为R型，因此盐酸贝西沙星存在一个构型为S型的对映异构体，本发明称(S)-盐酸贝西沙星，其结构式如式(II)所示:

通常在手性药物及其制剂产品的制备和生产过程中，需要对其对映异构体的含量进行研究和控制。现代色谱分离分析技术在对映体的分离与测定方面显示出巨大的优越性。常用的手性药物测定技术有手性高效液相色谱法、手性毛细管电泳法和手性气相色谱法等，其中以手性高效液相色谱法最为常用。手性高效液相色谱法又包括手性固定相法和手性流动相添加剂法和手性衍生化法。

Zhangting WANG等在CHIRALITY 24:526–531(2012)中对大量的手性色谱柱进行了筛选以及可能的手性分离技术进行考察，但是未能找到能够直接分离盐酸贝西沙星和其对映异构体的方法；中国专利申请CN201110326752.3采用将盐酸贝西沙星衍生后，再用手性色谱柱(RP-HPLC)方法进行定量检测，但是该方法可操作性不强，需要进行复杂的前处理过程且也需要复杂的衍生过程，分析对映异构体整个的分析时间较长。

发明内容

在本发明上下文中，无论是否使用“大约”或“约”等字眼，所有在此公开了的数字均为近似值。每一个数字的数值有可能会出现1％、2％、5％、7％、8％、10％、15％或20％等差异。每当公开一个具有N值的数字时，任何具有N+/-1％,N+/-2％,N+/-3％,N+/-5％,N+/-7％,N+/-8％,N+/-10％,N+/-15％ or N+/-20％值的数字會被明確地公开,其中“+/-”是指加或减。每当公开一个数值范围中的一个下限，R^L，和一个上限，R^U，时，任何处于该公开了的范围之内的数值會被明確地公开。特别是，包含了该范围内的以下数值：R＝R^L+K^*(R^U-R^L)，其中k是一个按1％的增量增加的从1％到100％的变量。如：1％、2％、3％、4％、5％...50％、51％、52％...95％、96％、97％、98％、99％或100％。另外，还特别包含了在此公开了的上述以两个R数字定义的数值范围。

术语“分离度”又称分辨率,为了判断分离物质对色谱柱在色谱柱中的分离情况,常用分离度作为柱的总分离效能指标。用R表示，R等于相邻色谱峰保留时间之差与两色谱峰峰宽均值之比。

为了更好更准确的控制产品中对映异构体的含量，保证原料药以及制剂产品的质量，我们经过反复试验以及研究，自主开发了适合于盐酸贝西沙星原料药的对映异构体含量测定的分析方法。本发明的方法能简单、快速、准确地分离、检测出盐酸贝西沙星及其对映异构体杂质。

一种用液相色谱法分离测定盐酸贝西沙星及其对映异构体的方法，其特征在于，采用以环糊精为填料的手性色谱柱，以缓冲盐溶液-有机溶剂组成流动相系统。

所述环糊精为填料的手性色谱柱为单键合β-环糊精手性柱或多键合环糊精手性柱，如MCDP多键合环糊精手性柱。在某些实施例中，所述的手性色谱柱为MCDP-II。

在一些实施例中，所述缓冲盐为磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、醋酸钠、醋酸钾、柠檬酸钾、或其组合；在另一些实施例中，所述缓冲盐为磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、四氟硼酸钠、六氟硼酸钠、六氟硼酸钾、高氯酸钠、高氯酸钾、磷酸、三乙胺、或其组合；在一些实施例中，所述的缓冲盐为磷酸二氢钾、高氯酸钠、磷酸、三乙胺这些成分的组合；在某些实施例中，将所述的缓冲盐加入水中，配置成缓冲盐溶液；在某些实施例中，所述缓冲盐溶液的配置方法包括：将大约2.0g至大约4.0g的磷酸二氢钾，大约4.0g至大约21.0g的一水合高氯酸钠和大约1ml的磷酸加入1000ml水中，混匀后，再用三乙胺调节pH至3.5-5.5。所述的有机溶剂为乙腈、甲醇、乙醇、或其组合，在一些实施例中为甲醇。

所述的流动相系统中:缓冲盐溶液(A相)与有机溶剂(B相)的体积比(V:V)为35：45至75:25，在某些实施例中为55：45。

本发明所述的分离检测方法，可按照以下步骤实现:

(1)用流动相溶解盐酸贝西沙星原料药或制剂，配制成每1ml含有盐酸贝西沙星1.0mg-2.0mg的样品溶液；

(2)设置流动相流速为0.3ml/min-1.3ml/min，检测波长为280nm-320nm，色谱柱柱温为25℃-40℃；

(3)取(1)的样品溶液4μl-20μl注入色谱仪，记录色谱图。

采用本发明的方法，可有效分离贝西沙星及其对映异构体，使两者的分离度达到3.5以上，可以准确有效控制盐酸贝西沙星的质量。与现有的专利和文献相比，总体来说该方法不需要复杂的衍生过程以及昂贵的衍生试剂，样品前处理过程简单，分析时间短，可操作性强。本方法能简单、快速、准确的分离检测出贝西沙星及其光学异构体。

附图说明

图1示实施例2中空白溶液的高效液相色谱图。

图2示实施例2盐酸贝西沙星的高效液相色谱图。

图3示实施例3盐酸贝西沙星的高效液相色谱图。

图4示实施例4盐酸贝西沙星滴眼液的高效液相色谱图。

具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施例对本发明作进一步的详细说明。

本发明所使用的试剂均可以从市场上购得或者可以通过本发明所描述的方法制备而得。

本发明中，min表示分钟，g表示克，ml表示毫升，nm表示纳米，μl表示微升。

实施例1

仪器与条件

美国Agilent 1260型高效液相色谱系统及工作站；自动进样；

实施例2

实验步骤

稀释剂或空白溶液为流动相A相/B相＝55/45(V:V)；

取盐酸贝西沙星原料药(根据中国专利CN 200880003118公开的方法制备)约20mg，精密称定至10mL棕色量瓶，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

分别取空白溶液和供试品溶液，按实施例1的条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1、图2。图2表明本发明的分离检测方法可以把盐酸贝西沙星及其对映异构体分开，高效液相色谱仪显示分离度为3.56。

实施例3

取盐酸贝西沙星原料药(按照CN 201310479217.0的方法制备)供试品约20mg，精密称定至10mL棕色容量瓶中，用稀释剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

取供试品溶液，照实例1的条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3。

图3证明，本法可以用于盐酸贝西沙星的质量监测，高效液相色谱仪显示分离度为3.74。

实施例4

取盐酸贝西沙星滴眼液适量(贝西沙星滴盐液购买自博士伦(Bausch&Lomb)公司)，约相当于盐酸贝西沙星20mg，置10ml棕色容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，滤液作为供试品溶液。取供试品溶液，照实例1的条件进行高效液相色谱分析，结果见图4。

图4证明，本法可以用于含盐酸贝西沙星制剂的质量监测，高效液相色谱仪显示分离度为4.75。

本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。

Claims (9)

1.一种用液相色谱法分离测定盐酸贝西沙星及其对映异构体的方法，其特征在于，采用以环糊精为填料的手性色谱柱，以缓冲盐溶液-有机溶剂组成流动相系统。

2.如权利要求1所述的方法，所述以环糊精为填料的手性色谱柱为单键合β-环糊精手性柱或多键合环糊精手性色谱柱。

3.如权利要求1所述的方法，所述的手性色谱柱为MCDP-II。

4.如权利要求1所述的方法，所述的缓冲盐溶液的缓冲盐为磷酸二氢钾、一水合高氯酸钠、磷酸、三乙胺、或其组合。

5.如权利要求1所述的方法，所述缓冲盐溶液的配置方法包括：将大约2.0g至大约4.0g的磷酸二氢钾，大约4.0g至大约21.0g的一水合高氯酸钠和大约1ml的磷酸加入1000ml水中，混匀后，再用三乙胺调节pH至3.5-5.5。

6.如权利要求1所述的方法，所述有机溶剂为乙腈、甲醇、乙醇、或其组合。

7.如权利要求1所述的方法，所述的流动相系统中缓冲盐溶液与有机溶剂的体积比(V:V)为35：45至75:25。

8.如权利要求1所述的方法，所述的流动相系统中缓冲盐溶液与有机溶剂的体积比(V:V)为55：45。

9.如权利要求1所述的分离检测方法，可按照以下步骤实现:

(1)用流动相溶解盐酸贝西沙星原料药或制剂，配制成每1mL含有盐酸贝西沙星1.0mg-2.0mg的样品溶液；

(2)设置流动相流速为0.3ml/min-1.3ml/min，检测波长为280nm-320nm，色谱柱柱温为25℃-40℃；

(3)取(1)的样品溶液4μl-20μl注入色谱仪，记录色谱图。