CN104447630A

CN104447630A - 从藏药俄色中提取分离的化合物及其方法和用途

Info

Publication number: CN104447630A
Application number: CN201410573928.9A
Authority: CN
Inventors: 李启发; 夏柯; 文焕松; 郭建华; 刘丁
Original assignee: Pusi Biological Science & Technology Co Ltd Chengdu
Current assignee: CHENGDU PUSH BIO-TECHNOLOGY CO., LTD.
Priority date: 2014-10-24
Filing date: 2014-10-24
Publication date: 2015-03-25
Anticipated expiration: 2034-10-24
Also published as: CN104447630B

Abstract

本发明提供了一种从藏药俄色中提取分离的具有药理活性的化合物及其方法和用途，属于植物化学技术领域。所述化合物具有以下的结构特征：

Description

从藏药俄色中提取分离的化合物及其方法和用途

技术领域

本发明涉及一种药物化合物及其提取方法和用途，具体涉及从藏药俄色中提取分离的具有药理活性的化合物及其方法和用途，属于植物化学技术领域。

背景技术

俄色是藏族民间的一味习用药材，来源于蔷薇科苹果属植物变叶海棠Malus toringoides (rehd) Hughes.或花叶海棠Malus tiansitoria (Batal.) Schneid.的干燥叶。藏医学专著《藏药晶镜本草》和《藏汉大辞典》载其具有保肝利胆、攻坚化积等功效，民间常用俄色治疗消化不良、脘腹胀痛、皮肤瘙痒等症，同时还用其与酥油茶同煮治疗高血压、高血脂及一些肝类疾病。近年来，仅有报道藏药俄色的几种提取物均还有一定的降血糖作用，如公开文献“藏药俄色不同提取物降血糖作用比较”（《中国实验方剂学杂志》2013年21期，李丹等），探讨了藏药俄色3种提取物对实验性糖脲病小鼠的影响。方法：建立链脲佐菌素（STZ，150mg·kg-1ip）诱导小鼠1型糖尿病模型和四氧嘧啶（ALX，200mg·kg-1ip）诱导小鼠1型糖尿病模型，分别灌胃俄色黄酮（180mg·kg-1）、俄色浸膏（900 mg·kg-1）和康珠甘露（360mg·kg-1），连续给药4d，于每次给药1h后测定小鼠空腹血糖，并在试验第4天测定血糖后测定小鼠胸腺和肝脏指数，测定血清胰岛素和C肽含量。结果：与正常组比较，模型组空腹血糖值明显升高、血清胰岛素和C肽含量明显降低、胸腺指数明显降低、肝脏指数明显升高（P0.01）；与模型组比较，3种提取物均能在一定程度上改善两个糖尿病模型小鼠的一般状态，明显降低空腹血糖和升高血清胰岛素、C肽含量（P0.05，P0.01)；俄色浸膏、康珠甘露还能降低肝脏指数（P0.05，P0.01）。结论：俄色3种提取物均有一定降血糖作用，以俄色浸膏作用较好，机制有待进一步研究。

可见，目前针对藏药俄色化学成分的研究还不够深入，有待进一步阐明其有效成分，明确其药理活性与有效成分的关系。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从藏药俄色中提取分离的具有药理活性的新的药用化合物及其方法和用途。

实现本发明目的所采用的具体技术方案如下：

一种从藏药俄色中提取分离的新的药用化合物，所述化合物具有以下的结构特征：

其化学名称为：1，2-环氧-1-（3，4-二羟基-苯基）-3-（2，4，6-三羟基-苯基）-丙烷，自命名为：俄色素。

所述药用化合物从藏药俄色中提取分离的具体工艺步骤是：

A．将俄色干燥叶子粉碎后用6-12倍重量浓度为40-95%（W/W）乙醇加热回流提取3-5次，减压浓缩至无醇后，将得到的浓缩液体按体积比1:5-10倍加水进行分散处理；

B．将水分散体依次用等体积乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3-5次，回收溶剂得乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物及水相部分；

C．将正丁醇萃取物用甲醇完全溶解，然后以0.45μm微孔滤膜过滤，滤液再经C18反相色谱填料高压制备分离，收集相对应的色谱峰，浓缩干燥后得灰白色粉末产物。

所述C18反相色谱填料高压制备分离：A：甲醇 B：0.2%V/V磷酸水，A：B 30:70 V/V为流动相；检测波长210nm。

本发明制得的灰白色粉末产物，其熔点m.p.为154-156℃；AlCl₃显色呈淡黄色，说明该产物为芳香类化合物。

在此基础上，进一步分析结果如下：

ESI-MS（e/z）：正离子 291.09[M+H]⁺，313.07[M+Na]⁺，329.05[M+K]⁺；负离子 289.07[M-H]^-，提示该化合物分子量为290。高分辨质谱给出的准分子离子峰为：313.1125[M+Na]⁺，计算值为（C₁₅H₁₄O₆ +Na）313.1118 ，可以确定其分子式为C₁₅H₁₄O₆。

¹HNMR δppm：6.89（1H，d, J=2.0 Hz）,6.71(1H，dd, J=8.4,2.0 Hz),6.68（1H，d, J=8.4 Hz）,5.87（1H，d, J=2.0 Hz）, 5.84（1H，d, J=2.0 Hz），均为芳香环上的氢，且6.71与6.68为邻位耦合，其余的为间位耦合，说明在一个芳香环上为间位三取代，另一个芳香环则为间对位二取代。在4.73（1H，s），4.09（1H，m），说明这个氢为连氧碳上的氢。在2.65（1H，dd，J=16.8,4.8）,2.78（1H，dd，J=16.8,4.8）为同一个碳上的氢原子。

¹³CNMR给出了12个芳香环上碳信号，其中有5个连氧碳信号：δppm: 156.6,156.2,155.9,144.5,144.3,在78.4,68.0为链上连氧碳信号，27.8为烷烃碳信号，与¹HNMR给出的结果相符。

DEPT 135^。在低场部分给出了5个次甲基信号：δ ppm 118.0，114.5，113.9，95.0，94.5，与氢谱在低场位置氢信号完全相符。78.4,68.0，为次甲基碳信号，27.8为亚甲基碳信号。

UVλ_max ^MeOH:210，295。

IR（KBr，cm^-1）：3384（羟基）,1625,1600,1518（苯环）

通过核磁二维HSQC，HMBC，NOESY等分析技术手段，对该化合物碳氢进行了全归属，并根据它们的相关性，确定了该化合物的相对构型，见下表1。

通过以上数据分析，鉴定该化合物为：1，2-环氧-1-（3，4-二羟基-苯基）-3-（2，4，6-三羟基-苯基）-丙烷，自命名为：俄色素，结构式如下：

经更深入的研究表明，所述药用化合物具有较好的抗菌活性，尤其对金黄色葡萄球菌S.aureus有很好的抑制作用，与阳性对照物硫酸卡那霉素相当，可作为在制备抗菌药物中的用途。

本发明的有益技术效果在于：

1、化合物结构确定，明确了其药理活性与俄色有效成分的关系。

芳香类化合物具有很强抗菌活性，尤其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌等具有很强的抑制作用，俄色素作为一种首次发现的芳香类化合物，是植物体内生物合成黄酮类化合物的前体物质。抗菌药理试验表明，与广谱抗生素硫酸卡那霉素对耐药性金黄色葡萄球菌的抑制效果相当，该化合物有可能是俄色在治疗皮肤瘙痒等症状方面的物质基础。

2、化合物产品提取分离容易，方法简单，得率高。

该化合物可由不同质量百分比浓度的乙醇，通过加热回流的方式，从药材中提取出来，经过有机试剂乙酸乙酯萃取除杂，正丁醇萃取富集，得到粗产品，再经过C18反相色谱填料高压制备分离，得到目标化合物，该提取分离方法简单，得率高，适用于工业化生产。

3、进一步发掘了藏药俄色新的药用作用，对于制备新型抗菌药物具有很好的参考价值。

俄色素作为一种首次报道其结构，并根据核磁二维等相关数据确定了其相对构型的新化合物，药理研究表明其对金黄色葡萄球菌具有很好的抑制效果，在研制新型抗菌药物方面，能够作为一种潜体结构进行开发利用。

具体实施方式

实施例1 化合物的提取分离

取俄色干燥叶子500g，粉碎后加入6倍重量浓度为80%（W/W）乙醇加热回流提取5次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得浓缩提取液700ml，加入4L水进行分散处理，然后将水分散体依次用等体积乙酸乙酯、正丁醇分别萃取4次，经回收溶剂得到乙酸乙酯萃取物15g，正丁醇萃取物8g以及水相部分。正丁醇萃取物用甲醇完全溶解，0.45μm微孔滤膜过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离，A：纯甲醇 B：0.2%磷酸水（V/V），A：B 30:70（V/V）为流动相；检测波长210nm，收集相对应的色谱峰，浓缩收集液至干，得到灰白色粉末0.86g。

实施例2 化合物的提取分离

取俄色干燥叶子500g，粉碎后加入10倍重量浓度为95%（W/W）乙醇加热回流提取4次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得浓缩提取液850ml，加入6L水进行分散处理，，然后将水分散体依次用等体积乙酸乙酯、正丁醇分别萃取5次，经回收溶剂得到乙酸乙酯萃取物17g，正丁醇萃取物8.5g以及水相部分。正丁醇萃取物用甲醇完全溶解，0.45μm微孔滤膜过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离，A：纯甲醇 B：0.2%磷酸水（V/V），A：B 30:70（V/V）为流动相；检测波长210nm，收集相对应的色谱峰，浓缩收集液至干，得到灰白色粉末0.88g。

实施例3 化合物的提取分离

取俄色干燥叶子500g，粉碎后加入12倍重量浓度为40%（W/W）乙醇加热回流提取3次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得浓缩提取液2500ml，加入15L水进行分散处理，然后将水分散体依次用等体积乙酸乙酯、正丁醇进行萃取3次，经回收溶剂得到乙酸乙酯萃取物13.8g，正丁醇萃取物7.8g以及水相部分。正丁醇萃取物用甲醇完全溶解，0.45μm微孔滤膜过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离，A：纯甲醇 B：0.2%磷酸水（V/V），A：B 30:70（V/V）为流动相；检测波长210nm，收集相对应的色谱峰，浓缩收集液至干，得到灰白色粉末0.78g。

实施例4 化合物（俄色素）抗菌活性实验

实验材料

1.1 药品

上述实施例1-3提取分离得到的灰白色粉末化合物。

1.2 人体病原菌

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC 51650由海南省药品检验所提供。

1.3 培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（NA）：牛肉膏3g，NaCl 5g，蛋白胨l0g，定容至1000ml，pH 为 7.4-7.6。

2. 实验方法

滤纸片琼脂扩散法测定化合物的抗菌活性；S.aureus采用NA培养基。

2.1 将S.aureus制成一定浓度的菌悬液（105-107cfu/ml），取100μl用棉签均匀涂布于供试无菌平板，制成含菌平板。

2.2 将测定的化合物配制成lmg/50μl溶液，取20μl分别滴加于灭菌滤纸片上(Φ=6mm)，待溶剂挥发干后将滤纸片贴于含菌平板上，每处理重复3次。

2.3 阳性对照液为硫酸卡那霉素0.08mg/ml(10/μl)，37℃下培养，24 h后观察结果，测量并记录抑菌圈直径。

3. 实验结果

药理活性结果见表2

注：甲醇为阴性对照，滤纸原片直径为6mm。

上述实验结果表明，分离得到的新化合物（俄色素）具有很好的抑制金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的效果。

Claims

1.一种从藏药俄色中提取分离的药用化合物，其特征在于：所述化合物具有以下的结构特征：

其化学名称为：1，2-环氧-1-（3，4-二羟基-苯基）-3-（2，4，6-三羟基-苯基）-丙烷。

2.如权利要求1所述的从藏药俄色中提取分离的药用化合物，其特征在于：所述化合物的熔点m.p.为154-156℃；AlCl₃显色呈淡黄色，即该化合物为芳香类化合物。

3.如权利要求1或2所述的从藏药俄色中提取分离的药用化合物，其特征在于：所述化合物的电喷雾电离质谱ESI-MS显示：正离子 291.09[M+H]⁺，313.07[M+Na]⁺，329.05[M+K]⁺；负离子 289.07[M-H]^-，即该化合物分子量为290；且高分辨质谱给出的准分子离子峰为：313.1125 [M+Na]⁺，计算值为313.1118[M+Na]⁺，分子式为C₁₅H₁₄O₆。

4.如权利要求1或2所述的从藏药俄色中提取分离的药用化合物的方法，其特征在于：具体工艺步骤是：

A．将俄色干燥叶子粉碎后用6-12倍重量浓度为40-95%W/W乙醇加热回流提取3-5次，减压浓缩至无醇后，将得到的浓缩液体按体积比1:5-10倍加水进行分散处理；

5.如权利要求4所述的从藏药俄色中提取分离的药用化合物的方法，其特征在于：所述C18反相色谱填料高压制备分离：A：甲醇 B：0.2%V/V磷酸水，A：B 30:70 V/V为流动相；检测波长210nm。

6.一种如权利要求1所述的从藏药俄色中提取分离的药用化合物在制备抗菌药物中的用途。