CN111072735A - 一种从决明子中提取分离的蒽醌类化合物及其方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从决明子中提取分离的蒽醌类化合物及其方法和应用，其结构式如（Ⅰ）所示。该化合物是以干燥粉碎后的决明子为原料，经乙醇回流提取、乙酸乙酯萃取、AB‑8柱层析分离纯化、C18反相色谱填料高压制备分离等工艺步骤提取分离得到，为一种具有药理活性的新的药用化合物，对金黄色葡萄球菌具有很好的抑制效果，可作为在制备抗菌药物中的应用，并为制备新型抗菌药物、蒽醌类物质药用研究等方面提供了可靠的依据。

Description

一种从决明子中提取分离的蒽醌类化合物及其方法和应用

技术领域

本发明属于植物化学技术领域，具体涉及一种从决明子中提取分离的具有药理活性的蒽醌类化合物及其方法和用途。

背景技术

决明子为豆科植物决明或小决明的干燥成熟种子，性甘、苦、咸，微寒，归肝、肾、大肠经，具有清热明目，润肠通便的功效。主要用于目赤涩痛，羞明多泪，头痛眩晕，目暗不明，大便秘结等症状。决明子始载于《神农本草经》，列为上品。历代本草学及医学著作均收载有决明子，是一味应用频次高、药效显著、资源丰富的传统中药。新中国成立后，我国历版药典均收载有决明子，国家卫生部又将决明子列入“既是食品又是药品的物品”名单，由此可见决明子在医疗保健方面的重要作用。

决明子的化学成分复杂，药理作用和临床用途广泛。现代药理学研究表明，决明子药用有效成分主要有两大类，一类是蒽醌衍生物，有抗癌、抗菌和利尿作用；另一类主要是蒽醌苷类，有降血脂、降血压和解毒保肝等作用。决明子水浸液、醇浸液对大多数皮肤真菌和细菌有不同程度的抑制作用。醋炙能增强决明子对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、淡黄色念珠菌的抗菌作用；酒炙能增强决明子对大肠杆菌、福氏痢疾杆菌的抗菌作用。决明子蒽醌类对大肠杆菌金黄色葡萄球菌和青霉有较强的抑制作用。决明子内壳的主成分水溶性多糖可促进肠道有益菌的繁殖，竞争性抑制病原菌或肠道有害菌增殖，同时大大提高了机体的消化能力和抵抗力，有益于改善和恢复健康状态。另外，决明子乙醇、氯仿提取物对弯抱菌、金黄色葡萄球菌、镰刀菌、油菜菌、核病菌、棉花炭疽病菌种植物病原菌有一定抑制作用，其中对后两种病菌抑制效果最好。

蒽醌类物质药用研究己经成为一个非常活跃的领域，作为卫生部首批批准的药食共用的中药决明子，己被开发成商品化的袋泡茶、滴眼液等产品。但目前对于决明子蒽醌类药物的进一步研究，大部分都集中在对各种已知活性成分的提取、分离、纯化、检测等方面，相关专利文献如：

CN110101736A于2019.08.09公开了一种用于降糖降脂的决明子提取物及其制备与质量检测方法，提取物是以决明子为原料药材，经乙醇水溶液提取和大孔树脂纯化制得，每100mg决明子提取物中含决明子苷不少于4.4mg，含红链霉素-6-0-β-龙胆二糖苷不少于3.2mg，含橙黄决明素-6-0-葡萄糖苷不少于4.4mg，含决明子苷C不少于3.3mg，含橙黄决明素不少于2.2mg。该提取物的质量检测方法是包括性状和含量限定检测，含量限定检测采用高效液相色谱法同时测定决明子提取物中2中蒽醌类成分和3种萘并吡喃酮类成分的含量。

CN109142571A于2019.01.04公开了一种测定蒽醌类成分含量的方法，所述蒽醌类成分为橙黄决明素、黄决明素、决明蒽醌、大黄素；将蟹壳粉作为基质固相分散萃取的吸附剂与决明子粉末中的目标分子吸附结合，从而使得目标分子从决明子粉末中分离出来，然后使用绿色环保的离子液体作为洗脱剂，得到含有目标分子的洗脱液，洗脱液采用HLC进行分离检测。

CN102993247A于2013.03.27公开了一种用中低压制备柱分离决明子蒽醌成分的方法，其步骤：A.将干燥后的决明子种子粉碎，装入三角瓶，置入超声仪中超声，再将超声后的物质过滤，合并过滤液，回收过滤液中的乙醇，得到干浸膏；B.将乙醇提取决明子的干浸膏倒入三角瓶，用乙酸乙酯超声萃取，再将超声后的物质过滤回收，合并过滤液，回收过滤液中的乙酸乙酯；C.将萃取液用硅胶拌匀，蒸干至无乙酸乙酯气味，得到6个粗品；D.将中低压制备色谱上串联的硅胶柱子换成C18柱，将6个粗品用甲醇溶解，注入C18柱中，用55%甲醇-水洗脱，再以TCL检识辅助检测，得到决明子内脂-9-O-β-葡萄糖苷、橙黄决明素、决明素、美决明素、芦荟大黄素、大黄酚6个单品。

CN1733679A于2006.02.15公开了一种从中药决明子中提取蒽醌类化合物的方法，包括(1)分部提取、(2)不溶于95%乙醇的混合物的制备、(3)大孔树脂分离纯化不溶于95%乙醇的混合物、(4)硅胶柱分离纯化乙醇洗脱物和蒽醌类化合物的分离、纯化；得到降脂有效成分大黄素-1-O-β-龙胆二糖甙、大黄酚-1-O-β-龙胆二糖甙、大黄素甲醚-8-O-β-龙胆二糖甙、大黄酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖甙。

随着发根培养生产天然活性次生代谢物技术的兴起，有望大规模组织培养生产蒽醌类物质。因此，致力于在决明子天然产物和发根培养产物中新的蒽醌物质的发现与分离、合成决明子蒽醌的关键酶及其基因、构效关系、运用计算机技术进行蒽醌分子的修饰等方面的研究，对于设计新型高效具有抗菌消炎、抗癌、明目等药效的药物，推动中药现代化进程，具有十分必要的意义。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种从决明子中提取分离的蒽醌类化合物，通过从决明子药材中提取分离得到具有药理活性的新的药用化合物，进一步发掘了决明子新的药用作用，并为制备新型抗菌药物提供了很好的参考价值。

本发明的目的之二在于提供一种从决明子中提取分离蒽醌类化合物的方法，它是以干燥粉碎后的决明子为原料，经乙醇回流提取、乙酸乙酯萃取、AB-8柱层析分离纯化、C18反相色谱填料高压制备分离等工艺步骤获得一种具有药理活性的新的药用化合物，该方法操作步骤简单易于控制，可确保决明子苷N1的纯度达99%以上，且整个生产流程耗时短，适用于工业化生产。

本发明的目的之三在于提供一种决明子中提取分离的蒽醌类化合物在制备抗菌药物中的应用，为制备新型抗菌药物提供可靠的依据。

实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种从决明子中提取分离的蒽醌类化合物，所述蒽醌类化合物具有（Ⅰ）所示的结构式：

所述蒽醌类化合物为从干燥粉碎后的决明子中经提取分离得到，其化学名称为：1-[(3-methoxyl-8-hydroxyl-1-O-β-D-gentiobioside)-6-yl]propan-2-one，自命名为：决明子苷N1。

所述蒽醌类化合物的分子量为570，分子式为C₂₆H₃₄O₁₄。

一种从决明子中提取分离蒽醌类化合物的方法，包括以下工艺步骤：

A．将干燥的决明子粉碎，用浓度为90wt%的乙醇加热回流提取，减压浓缩至无醇后，再将浓缩提取液加水进行分散处理得到水分散体；

B．将水分散体用乙酸乙酯进行萃取，回收溶剂得乙酸乙酯萃取物及水相部分；

C．将水相部分湿法上样，先以AB-8柱层析分离，收集目标物层析液，减压浓缩至无有机试剂，所得浓缩液再以NM100聚合物柱层析分离，收集目标物层析液，减压浓缩干后，用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离，收集相对应的色谱峰，浓缩收集液至干得到淡黄色粉末产物，即（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类化合物。

在步骤A中，所述乙醇的用量为粉碎后的干燥决明子重量的8～10倍。

在步骤A中，所述回流提取为3～5次，每次2小时。

在步骤A中，所述浓缩提取液按体积比1:6～1:10倍加水进行分散处理。

在步骤B中，所述水分散体用等体积乙酸乙酯萃取3～5次。

在步骤C中，所述AB-8柱色谱分离，以乙醇:水=75:25 V/V为流动相。

在步骤C中，所述NM100聚合物柱层析分离，以甲醇:水= 35:65 V/V为流动相。

在步骤C中，所述C18反相色谱填料高压制备分离：A：乙腈 B：0.1%V/V磷酸水，A:B=24:76 V/V为流动相；检测波长284nm。

所述蒽醌类化合物为淡黄色粉末，1wt%氢氧化钠溶液中显红色或紫红色，即该化合物为蒽醌类化合物。

在此基础上，进一步分析结果如下：

（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类化合物的电喷雾电离质谱ESI-MS显示：正离子593.20[M+Na]⁺，1163.43[2M+Na]⁺；负离子 605.18[M-Cl]^-，1175.39[2M-Cl]^-，即该化合物分子量为570；且高分辨质谱给出的准分子离子峰为：593.1925 [M+Na]⁺，计算值为593.1918[M+Na]⁺，分子式为C₂₆H₃₄O₁₄。

¹H-NMR和¹³C-NMR数据见下表1。

表1 式（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类化合物核磁数据（101MHz，DMSO，TMS，δppm,J=Hz）

通过¹H、¹³C-NMR以及DEPT135º和核磁二维HSQC，HMBC，H-HCOSY，NOESY等分析技术手段，确定了该化合物为：决明子苷N1（蒽醌类化合物），结构式如（Ⅰ）所示。

经更深入的研究表明，所述蒽醌类化合物（Ⅰ）具有一定的抗菌活性，对金黄色葡萄球菌S.aureus有一定的抑制作用，可作为在制备抗菌药物中的用途。

本发明的有益技术效果在于：

1、本发明提供的（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类化合物为从干燥的决明子中提取分离而得到，该化合物结构确定，并明确了其药理活性与决明子有效成分的关系，具有一定的抗菌活性，对金黄色葡萄球菌具有一定的抑制作用。

2、现代药理学研究表明，决明子药用有效成分主要有两大类，一类是蒽醌衍生物，有抗癌、抗菌和利尿作用；另一类主要是蒽醌苷类，有降血脂、降血压和解毒保肝等作用。而本发明通过从决明子药材中提取分离得到的蒽醌类化合物，为一种新的药用化合物，抗菌药理试验表明，它对耐药性金黄色葡萄球菌的抑制效果与广谱抗生素硫酸卡那霉素相当。由此进一步发掘了决明子新的药用作用，对于制备新型抗菌药物具有很好的参考价值。

3、本发明以干燥的决明子为原料，经乙醇回流提取、乙酸乙酯萃取、AB-8柱层析分离纯化、C18反相色谱填料高压制备分离等工艺步骤得到蒽醌类化合物，该方法操作步骤简单易于控制，可确保决明子苷N1的纯度达99%以上，且整个生产流程耗时短，适用于工业化生产。

4、本发明为首次报道了决明子苷N1的结构，并根据核磁二维等相关数据确定了其相对构型的新化合物，药理研究表明其对金黄色葡萄球菌具有很好的抑制效果，对于新型高效抗菌药物的研制，能够作为一种潜体结构进行开发利用，同时为大规模组织培养生产蒽醌类物质、在蒽醌类物质药用研究等方面也提供了可靠的依据。

附图说明

图1为本发明决明子原料中决明子苷N1的色谱图。

图2为本发明提取分离得到的决明子苷N1的色谱图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。但有必要在此指出的是以下实施例不能理解为对本发明保护范围的限制，如果该领域的技术人员根据上述本发明内容作出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例1

一种从决明子中提取分离的蒽醌类化合物，该化合物为淡黄色粉末，1wt%氢氧化钠溶液中显红色或紫红色，分子量为570，分子式为C₂₆H₃₄O₁₄，具有（Ⅰ）所示的结构式：

所述蒽醌类化合物为从干燥粉碎后的决明子中经提取分离得到，具体工艺步骤如下：

A．将干燥的决明子粉碎，用浓度为90wt%的乙醇加热回流提取，减压浓缩至无醇后，再将浓缩提取液加水进行分散处理得到水分散体；

B．将水分散体用乙酸乙酯进行萃取，回收溶剂得乙酸乙酯萃取物及水相部分；

C．将水相部分湿法上样，先以AB-8柱层析分离，收集目标物层析液，减压浓缩至无有机试剂，所得浓缩液再以NM100聚合物柱层析分离，收集目标物层析液，减压浓缩干后，用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离，收集如附图1所示的相对应的色谱峰，浓缩收集液至干得到淡黄色粉末产物，即（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类化合物。

实施例2

一种从决明子中提取分离的蒽醌类化合物，具体工艺步骤如下：

A．将干燥的决明子粉碎，用8倍重量、浓度为90wt%的乙醇加热回流提取3次，每次2小时，减压浓缩至无醇后，再将浓缩提取液按体积比1:6倍加水进行分散处理得到水分散体；

B．将水分散体用等体积乙酸乙酯萃取3次，回收溶剂得乙酸乙酯萃取物及水相部分；

C．将水相部分湿法上样，先以AB-8柱层析分离（乙醇:水=75:25 V/V为流动相），收集目标物层析液，减压浓缩至无有机试剂，所得浓缩液再以NM100聚合物柱层析分离（甲醇:水=35:65 V/V为流动相），收集目标物层析液，减压浓缩干后，用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离（A：乙腈 B：0.1%V/V磷酸水，A:B= 24:76 V/V为流动相；检测波长284nm），收集如附图1所示的相对应的色谱峰，浓缩收集液至干得到淡黄色粉末产物，即（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类化合物。

实施例3

一种从决明子中提取分离的蒽醌类化合物，具体工艺步骤如下：

A．将干燥的决明子粉碎，用10倍重量、浓度为90wt%的乙醇加热回流提取5次，每次2小时，减压浓缩至无醇后，再将浓缩提取液按体积比1:10倍加水进行分散处理得到水分散体；

B．将水分散体用等体积乙酸乙酯萃取5次，回收溶剂得乙酸乙酯萃取物及水相部分；

C．将水相部分湿法上样，先以AB-8柱层析分离（乙醇:水=75:25 V/V为流动相），收集目标物层析液，减压浓缩至无有机试剂，所得浓缩液再以NM100聚合物柱层析分离（甲醇:水=35:65 V/V为流动相），收集目标物层析液，减压浓缩干后，用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离（A：乙腈 B：0.1%V/V磷酸水，A:B= 24:76 V/V为流动相；检测波长284nm），收集如附图1所示的相对应的色谱峰，浓缩收集液至干得到淡黄色粉末产物，即（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类化合物。

实施例4

一种从决明子中提取分离的蒽醌类化合物，具体工艺步骤如下：

A．将干燥的决明子粉碎，用9倍重量、浓度为90wt%的乙醇加热回流提取4次，每次2小时，减压浓缩至无醇后，再将浓缩提取液按体积比1:8倍加水进行分散处理得到水分散体；

B．将水分散体用等体积乙酸乙酯萃取4次，回收溶剂得乙酸乙酯萃取物及水相部分；

C．将水相部分湿法上样，先以AB-8柱层析分离（乙醇:水=75:25 V/V为流动相），收集目标物层析液，减压浓缩至无有机试剂，所得浓缩液再以NM100聚合物柱层析分离（甲醇:水=35:65 V/V为流动相），收集目标物层析液，减压浓缩干后，用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离（A：乙腈 B：0.1%V/V磷酸水，A:B= 24:76 V/V为流动相；检测波长284nm），收集如附图1所示的相对应的色谱峰，浓缩收集液至干得到淡黄色粉末产物，即（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类化合物。

实施例5

A. 取干燥的决明子50kg，粉碎后用8倍重量、浓度为90wt%的乙醇加热回流提取4次，每次2小时，减压浓缩至无醇后，得浓缩提取液20L，将得到的浓缩提取液按体积比1:6倍加水进行分散处理；

B. 将水分散体依次用等体积乙酸乙酯萃取4次，回收溶剂得乙酸乙酯萃取物及90L水相部分；

C. 将水相部分湿法上样，AB-8柱层析分离，以乙醇:水=75:25 V/V为流动相，收集目标物层析液，减压浓缩至无有机试剂；所得浓缩液再以NM100聚合物柱层析分离，以甲醇:水=35:65 V/V为流动相，收集目标物层析液，减压浓缩干后，用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离，以A：乙腈 B：0.1%V/V磷酸水，A:B= 24:76 V/V为流动相，检测波长284nm，收集如附图1所示的相对应的色谱峰，浓缩收集液至干得到（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类淡黄色粉末产物32g，即决明子苷N1，色谱图如图2所示。

整个生产流程用时约7天；

通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）复检产品纯度，测得结果为99.21%。

实施例6

A. 取干燥的决明子50kg，粉碎后用10倍重量、浓度为90wt%的乙醇加热回流提取5次，每次2小时，减压浓缩至无醇后，得浓缩提取液35L，将得到的浓缩提取液按体积比1:8倍加水进行分散处理；

B. 将水分散体依次用等体积乙酸乙酯萃取5次，回收溶剂得乙酸乙酯萃取物及120L水相部分；

C. 将水相部分湿法上样，AB-8柱层析分离，以乙醇:水=75:25 V/V为流动相，收集目标物层析液，减压浓缩至无有机试剂；所得浓缩液再以NM100聚合物柱层析分离，以甲醇:水=35:65 V/V为流动相，收集目标物层析液，减压浓缩干后，用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离，以A：乙腈 B：0.1%V/V磷酸水，A:B= 24:76 V/V为流动相，检测波长284nm，收集如附图1所示的相对应的色谱峰，浓缩收集液至干得到（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类淡黄色粉末产物38g，即决明子苷N1，色谱图如图2所示。

整个生产流程用时约9天；

通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）复检产品纯度，测得结果为99.34%。

实施例7

A. 取干燥的决明子50kg，粉碎后用9倍重量、浓度为90wt%的乙醇加热回流提取3次，每次2小时，减压浓缩至无醇后，得浓缩提取液25L，将得到的浓缩提取液按体积比1:10倍加水进行分散处理；

B. 将水分散体依次用等体积乙酸乙酯萃取3次，回收溶剂得乙酸乙酯萃取物及100L水相；

C. 将水相部分湿法上样，AB-8柱层析分离，以乙醇:水=75:25 V/V为流动相，收集目标物层析液，减压浓缩至无有机试剂，所得浓缩液再以NM100聚合物柱层析分离，以甲醇:水=35:65 V/V为流动相，收集目标物层析液，减压浓缩干后，用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离，以A：乙腈 B：0.1%V/V磷酸水，A:B= 24:76 V/V为流动相，检测波长284nm，收集如附图1所示的相对应的色谱峰，浓缩收集液至干得到（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类淡黄色粉末产物35g，即决明子苷N1，色谱图如图2所示。

整个生产流程用时约8天；

通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）复检产品纯度，测得结果为99.19%。

实施例8 化合物抗菌活性实验（大肠杆菌、枯草杆菌）

（一）实验材料

1.1 药品

上述实施例5～7提取分离得到的（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类淡黄色粉末产物。

1.2 人体病原菌

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC 51650由海南省药品检验所提供。

1.3 培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（NA）：牛肉膏5g，NaCl 7g，蛋白胨l5g，定容至1000ml，pH 为7.4～7.6。

（二）实验方法

滤纸片琼脂扩散法测定化合物的抗菌活性；S.aureus采用NA培养基。

2.1 将S.aureus制成一定浓度的菌悬液（105～107cfu/ml），取100μl用棉签均匀涂布于供试无菌平板，制成含菌平板。

2.2 将上述待测定的化合物配制成lmg/50μl溶液，取20μl分别滴加于灭菌滤纸片上(Φ=6mm)，待溶剂挥发干后将滤纸片贴于含菌平板上，每处理重复3次。

2.3 阳性对照液为硫酸卡那霉素0.08mg/ml(10/μl)，37℃下培养，24h后观察结果，测量并记录抑菌圈直径。

（三）实验结果

实施例5～7提取分离得到（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类淡黄色粉末产物、硫酸卡那霉素、甲醇（阴性对照），它们对于金黄色葡萄球菌S.aureus的抗菌活性结果详见表2。

表2 抗菌活性结果

注：甲醇为阴性对照，滤纸原片直径为6mm。

实验结果表明，（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类化合物对金黄色葡萄球菌S.aureus有一定的抑制作用，可作为在制备抗菌药物中的应用。

Claims (10)

1.一种从决明子中提取分离的蒽醌类化合物，其特征在于：所述蒽醌类化合物具有（Ⅰ）所示的结构式：

其化学名称为：

1-[(3-methoxyl-8-hydroxyl-1-O-β-D-gentiobioside)-6-yl]propan-2-one，自命名为：决明子苷N1。

2.如权利要求1所述的从决明子中提取分离蒽醌类化合物的方法，其特征在于：所述蒽醌类化合物为淡黄色粉末，1wt%氢氧化钠溶液中显红色或紫红色。

3.如权利要求1或2所述的从决明子中提取分离蒽醌类化合物的方法，其特征在于：所述蒽醌类化合物的电喷雾电离质谱ESI-MS显示：正离子593.20[M+Na]⁺，1163.43[2M+Na]⁺；负离子 605.18[M-Cl]^-，1175.39[2M-Cl]^-，即该化合物分子量为570，分子式为C₂₆H₃₄O₁₄。

4.制备如权利要求1或2所述的从决明子中提取分离蒽醌类化合物的方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：

A．将干燥的决明子粉碎，用浓度为90wt%的乙醇加热回流提取，减压浓缩至无醇后，再将浓缩提取液加水进行分散处理得到水分散体；

B．将水分散体用乙酸乙酯进行萃取，回收溶剂得乙酸乙酯萃取物及水相部分；

C．将水相部分湿法上样，先以AB-8柱层析分离，收集目标物层析液，减压浓缩至无有机试剂，所得浓缩液再以NM100聚合物柱层析分离，收集目标物层析液，减压浓缩干后，用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离，收集相对应的色谱峰，浓缩收集液至干得到淡黄色粉末产物，即（Ⅰ）所示结构式的蒽醌类化合物。

5.如权利要求4所述的从决明子中提取分离蒽醌类化合物的方法，其特征在于：在步骤A中，所述乙醇的用量为粉碎后的干燥决明子重量的8～10倍；所述回流提取为3～5次，每次2小时。

6.如权利要求4所述的从决明子中提取分离蒽醌类化合物的方法，其特征在于：在步骤A中，所述浓缩提取液按体积比1:6～1:10倍加水进行分散处理。

7.如权利要求1所述的从决明子中提取分离蒽醌类化合物的方法，其特征在于：在步骤B中，所述水分散体用等体积乙酸乙酯萃取3～5次。

8.如权利要求1所述的从决明子中提取分离蒽醌类化合物的方法，其特征在于：在步骤C中，所述AB-8柱色谱分离，以乙醇:水=75:25 V/V（为流动相；所述NM100聚合物柱层析分离，以甲醇:水= 35:65 V/V为流动相。

9.如权利要求1所述的从决明子中提取分离蒽醌类化合物的方法，其特征在于：在步骤C中，所述C18反相色谱填料高压制备分离：A：乙腈 B：0.1%V/V磷酸水，A:B= 24:76 V/V为流动相；检测波长284nm。

10.一种如权利要求1所述的从决明子中提取分离的蒽醌类化合物在制备抗菌药物中的应用。

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