CN114685578A - 从榜嘎中分离的以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
Description
技术领域
本发明属于植物化学技术领域,具体涉及一种从榜嘎中提取分离得到的以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物及其应用。
背景技术
榜嘎是藏医常用药,植物来源系毛茛科乌头属植物甘青乌头Aconitumtanguticum(Maxim.)Stapf 的干燥全草(“榜嘎”的另一基源为毛茛科乌头属植物船盔乌头Aconitum naviculare(Bruhl.)Stapf 的干燥全草)。始载于《月王药诊》,其性凉、味苦、有小毒,具清热解毒功效,多入藏成方制剂用于传染病发
热,流行性感冒,肝、胆热病,肺热,肠热和食物中毒等疾病的治疗。
乌头属植物全世界约350 种,主要分布在亚洲和欧洲及北美洲。我国是乌头属植物分布中心,共167 种,主要分布在西藏、云南、青海和四川等地。其中乌头属藏药约60 种15 变种。前期总结发现目前已从乌头属藏药植物铁棒锤A.pendulum,短柄乌头A.brachypodum,美丽乌头A.pulchellum 等植物
中已分离鉴定了生物碱、黄酮以及酚酸等330 余个化合物,现代药理活性研究表明,该属植物具有抗炎镇痛、抗肿瘤、降血压以免疫调节等方面具有活性。
榜嘎中主要含有二萜生物碱类、黄酮类、酚酸类等成分,现有针对藏药榜嘎化学成分研究的报道主要有:1)罗明等,“藏药榜嘎化学成分和药理作用的研究进展”(中国实验方剂学杂志,2012年6月,第18卷第12期,P298-302),文中总结了藏药榜嘎在化学、药理和临床方面的研究进展,迄今为止,从榜嘎中已分离得到了22个生物碱类和3个黄酮苷类化合物,并采用GC-MS鉴定了其挥发油的35个化学成分。目前,二萜类生物碱被认为是榜嘎抗炎镇痛的主要活性成分。2)刘梓晗,“藏药榜嘎化学成分分离及其薄层色谱定性鉴别研究”(中国中医科学院,2017年硕士论文)一文中对榜嘎药材的一个基原(甘青乌头Aconitumtanguticum(Maxim.) Stapf)进行了化学成分的分离与鉴定。分别采用不同的提取、分离方法对药材进行处理,将甘青乌头药材分为酸性和碱性两个分离部位。反复利用大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、反相ODS柱色谱、制备HPLC、半制备HPLC以及重结晶等分离纯化手段分别对甘青乌头酸性、碱性部位进行系统分离,从中共分离得到30个化合物。利用物质理化性质、现代光谱学手段(UV、MS、1H-NMR、13C-NMR、HMBC、HSQC、1H-1HCOSY、NOESY 等)共鉴定了 22个化合物。其中,从甘青乌头酸性部位分离鉴定了7个化合物,分别为:β-谷甾醇、5-methoxy-N-Salicylanthranilic acid methyl ester*、5-hydroxy-3',4',5',7-tetramethoxy flavone、麦角甾醇过氧化物、苯甲酸、邻羟基苯甲醇、阿魏酸;其中,1个为新化合物,4个为首次分离得到的化合物。从甘青乌头碱性部位分离鉴定了 15个化合物,分别为:红景天苷、guanfu-base H、二氢阿替新、syringin、苯甲醇-O-β-D-葡萄糖苷、对羟基苯甲酸、香草酸、对羟基苯乙醇、羟基酪醇、heterophyllidine、robinin、6-乙酰异叶乌头碱、异叶乌头碱、2β,9β,11α,13α-tetrahydroxy-2-O-2-methylbutyryl-13-O-acetyl he tisane*、2β,9β,11α,13α-tetrahydroxy-2-O-2-methylbutyryl-hetisane*;其中,2 个为新化合物,3个为首次分离得到的化合物。
由上可知,现有对榜嘎化学成分的研究主要集中于生物碱类成分,其他结构类型的化合物涉猎极少,同时药理方面的研究主要集中于抗压、抗病毒和抗肿瘤方面,且作用机制尚不深入,有待进一步深入研究。基于此,从榜噶中提取分离出新的黄酮苷类化合物,明确其药理作用,对于榜嘎化学成分的系统研究,具有一定的参考价值,进而可为研制出疗效确切,副作用小和能广泛应用于临床的藏药新药提供依据。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物,采用甲醇超声提取、AB-8大孔树脂柱层析分离纯化、C18反相色谱填料高压制备分离等步骤从榜噶中提取分离得到的一种具有新型结构及药理活性的黄酮苷类化合物,进一步发掘了榜嘎新的药用作用,并为榜嘎化学成分的系统研究提供了一定的参考价值。同时,该方法操作步骤简单易于控制,可确保以槲皮素为苷元的黄酮苷类化合物的纯度达99%以上,且整个生产流程耗时短,适用于工业化生产。
本发明的另一目的在于提供一种从榜嘎中提取分离的以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物在制备抗炎药物中的应用,为制备藏药新药提供可靠的依据。
实现上述发明目的,本发明采用的技术方案如下:
一种从榜嘎中分离的以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物,该黄酮苷类化合物是以干燥的榜嘎为原料,经甲醇超声提取、AB-8大孔树脂柱层析分离纯化、C18反相色谱填料高压制备分离而得到,所述黄酮苷类化合物具有(Ⅰ)所示的结构式:
(Ⅰ)
其中文名称为:山奈酚-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-(4-O-反式-香豆酰基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃半乳糖基]-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖苷,自命名为:榜嘎苷D;其分子量为1210,分子式为C54H66O31。
所述榜嘎为甘青乌头的干燥全草或船盔乌头的干燥全草。
一种从榜嘎中分离的以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物的方法,包括以下步骤:
A.以干燥的榜嘎为原料,粉碎后用浓度为70~80%的甲醇超声提取,提取液经减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至无醇后,再将浓缩后的提取液加水进行分散处理,得到水分散体;
B.将步骤A得到的水分散体湿法上样,用AB-8大孔树脂柱层析分离纯化,收集含总黄酮成分的层析液,再减压浓缩至无醇,得到浓缩液;
C.将步骤B得到的浓缩液过滤,滤液用C18反相色谱填料高压制备分离:A:乙腈 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 21:79 V/V为流动相;检测波长350nm;
收集对应色谱峰的分离液,再将分离液50℃减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至干,固体磨粉后45℃鼓风干燥,得到淡黄色粉末物,该淡黄色粉末物即榜嘎苷D,为以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物,并具有(Ⅰ)所示的结构式。
在步骤A中,所述原料粉碎后的粒径为60~80目。
在步骤A中,所述超声提取时,甲醇的重量为原料的8~10倍。
在步骤A中,所述超声提取为3~5次,每次1小时。
在步骤B中,所述浓缩提取液按体积比1:6~1:10倍加水进行分散处理。
在步骤C中,所述AB-8大孔吸附树脂柱层析分离使用的流动相为甲醇:水=50:50V/V。
本发明提取分离得到的淡黄色粉末物,HCl-Mg反应及Molish反应皆呈阳性,进一步证明其为黄酮苷类化合物。
在此基础上,进一步分析结果如下:
()所示结构式的黄酮类化合物的电喷雾电离质谱ESI-MS显示:m/z 1209.38 [M-H]-;1233.38 [M+Na]+,说明该化合物的分子量为1210,分子式为C54H66O31。IRνmax(KBr,cm-1):3371,2922,1653,1602,1513,1347,1171,1073,1028,891,833。
()1H-NMR (400MHz,DMSO)低场部分δ 6.51(1H,d,J=2.0 Hz),6.81(1H,d,J=2.0Hz)分别为黄酮A环的6-H和8-H的质子信号,δ 8.13(2H,d,J=8.4 Hz),6.90(2H,d,J=8.4Hz)为黄酮B环的2′,6′-H和3′,5′-H的质子信号,提示该化合物具有山奈酚的母核结构。除此之外,还有两组烯氢质子信号:δ 7.53(1H,d,J=16.0 Hz),6.34(1H,d,J=16.0 Hz)和δ7.54(2H,d,J=8.4 Hz),6.83(2H,d,J=8.4 Hz),根据它们间的耦合常数,可推测该化合物具有反式香豆酰基的结构单元。δ 5.60(1H,br s),δ 5.39(1H,d,J=7.6 Hz),5.57(1H,brs),,4.51(1H,d,J=7.6 Hz),δ 4.27(1H,d,J=7.6 Hz),为五个糖的端基氢信号,δ 3.85-2.90为糖的其它氢信号。在高场区,有两个甲基信号δ 1.17(3H,d,J=6.0 Hz),0.98(3H,d,J=6.0 Hz),为鼠李糖6位甲基氢的特征信号峰,说明该化合物有两个鼠李糖结构单元。
利用HSQC对该化合物的碳氢进行全归属,核磁数据与文献1)Bharat B. S. etal., New flavonoid glycosides from Aconitum naviculare (Brühl) Stapf, amedicinal herb from the trans-Himalayan region of Nepal. CarbohydrateResearch. 2006, 341, 2161-2165. 和文献2)Mariani C. et al., Flavonoidcharacterization and in vitro antioxidant activity of Aconitum anthora L.(Ranunculaceae). Phytochemistry. 2008, 69(5):1220-1226,报道的化合物中比较基本一致,提示其具有相同的糖结构单元和连接方式,各结构单元的连接顺序由HMBC进行确证。δH 5.39(H-1″)与δC 133.5(C-3)具有远程相关,提示半乳糖连接在黄酮苷元3位上,而δH5.60(H-1″″′)与δC 161.3(C-7)具有远程相关,说明鼠李糖连接在山奈酚7位上;δH 4.57(H-1″′)与δC65.4(C-6″)具有远程相关,提示鼠李糖连接在另一个半乳糖的六位上;δH 4.27(H-1″″)与δC76.2(C-3″′)具有远程相关,提示葡萄糖连接在鼠李糖的3位上;δH 5.01(H-4″′)与δC166.0(香豆酰基C=O),说明反式香豆酰基连接在鼠李糖的4位上。
综合以上分析,该化合物的结构鉴定为山奈酚-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-(4-O-反式-香豆酰基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃半乳糖基]-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖苷。经scifinder检索,未见有该化合物的相关报道,确定该化合物为新黄酮类结构,命名为榜嘎苷D。
1H-NMR和13C-NMR数据见下表1。
表1 式(Ⅰ)所示结构式的化合物核磁数据(400MHz, DMSO,δ ppm,J=Hz)
通过1H-NMR、13C-NMR以及DEPT135º和核磁二维HSQC,HMBC,H-HCOSY,NOESY等分析技术手段,确定了该化合物为:榜嘎苷D(以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物),结构式如(Ⅰ)所示。
经更深入的研究表明,所述黄酮类化合物(Ⅰ)具有一定的药物活性。
同时,药理实验证明,本发明提取分离得到的结构式如(Ⅰ)所示的黄酮苷类化合物,具有一定的抗炎活性,可应用于抗炎药物的制备中。
本发明的有益技术效果在于:
1、本发明提供的以槲皮素为苷元的黄酮苷类化合物为从干燥的榜嘎中提取分离而得到,该化合物具有(Ⅰ)所示的结构式,其结构确定,并明确了其药理活性与榜嘎有效成分的关系,进而为榜嘎化学成分的系统研究提供了一定的参考价值。
2、本发明以干燥的榜嘎为原料,经甲醇超声提取、AB-8柱层析分离纯化、C18反相色谱填料高压制备分离等工艺步骤得到黄酮苷类化合物,该方法操作步骤简单易于控制,可确保榜嘎苷D的纯度达99%以上,且整个生产流程耗时短,适用于工业化生产。
3、本发明为首次报道了榜嘎苷D的结构,并根据核磁二维等相关数据确定了其相对构型,为一种新型的黄铜苷类化合物;通过药理研究证明,其具有一定的抗炎活性,能够作为一种潜体结构进行开发利用,同时为大规模组织培养生产黄酮苷类物质、在黄酮类物质药用研究等方面以及为制备藏药新药也提供了可靠的依据。
附图说明
图1为榜嘎苷D对LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症因子IL-6释放量的影响结果图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。但有必要在此指出的是以下实施例不能理解为对本发明保护范围的限制,如果该领域的技术人员根据上述本发明内容作出的一些非本质的改进和调整,仍属于本发明的保护范围。
实施例1
取干燥的榜嘎(甘青乌头的干燥全草)10kg,粉碎至60目的粒径,加入8倍重量、浓度为70wt%的甲醇超声提取3次,每次1小时,合并提取液,将提取液减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至无醇,再将浓缩后的提取液按体积比1:6倍加水进行分散处理得水分散体20L;将水分散体湿法上样,用AB-8大孔吸附树脂柱层析分离(甲醇:水=50:50 V/V为流动相),收集含总黄酮成分的层析液,再减压浓缩至无醇,得浓缩液5L;将浓缩液过滤,滤液用C18反相色谱填料高压制备分离(A:乙腈 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 21:79 V/V为流动相;检测波长350nm),收集对应色谱峰的分离液,再将分离液50℃减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至干,固体磨粉后45℃鼓风干燥,得到淡黄色粉末物4g,即榜嘎苷D。
整个生产流程用时约5天;
通过更换流动相组分(A:甲醇 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 45:55 V/V为流动相;检测波长350nm),利用反相分析型液相色谱(RP-HPLC)复检产品纯度,测得该产物的纯度为99.12%。
实施例2
取干燥的榜嘎(船盔乌头的干燥全草)20kg,粉碎至70目的粒径,加入8.5倍重量、浓度为75wt%的甲醇超声提取4次,每次1小时,合并提取液,将提取液减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至无醇味,再将浓缩提取液按体积比1:7倍加水进行分散处理得水分散体36L;将水分散体湿法上样,用AB-8大孔吸附树脂柱层析分离纯化(甲醇:水=50:50 V/V为流动相),收集含总黄酮成分的层析液,再减压浓缩至无醇,得浓缩液12L;将浓缩液过滤,滤液用C18反相色谱填料高压制备分离(A:乙腈 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 21:79 V/V为流动相;检测波长350nm),收集对应色谱峰的分离液,再将分离液50℃减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至干,固体磨粉后45℃鼓风干燥,得到淡黄色粉末物10g,即榜嘎苷D。
整个生产流程用时约6天;
通过更换流动相组分(A:甲醇 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 45:55 V/V为流动相;检测波长350nm),利用反相分析型液相色谱(RP-HPLC)复检产品纯度,测得该产物的纯度为99.17%。
实施例3
取干燥的榜嘎(船盔乌头的干燥全草)30kg,粉碎至80目的粒径,加入9倍重量、浓度为80wt%的甲醇超声提取5次,每次1小时,合并提取液,将提取液减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至无醇味,再将浓缩提取液按体积比1:8倍加水进行分散处理得水分散体58L;将水分散体湿法上样,用AB-8大孔吸附树脂柱层析分离纯化(甲醇:水=50:50 V/V为流动相),收集含总黄酮成分的层析液,再减压浓缩至无醇,得浓缩液23L;将浓缩液过滤,滤液用C18反相色谱填料高压制备分离(A:乙腈 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 21::79 V/V为流动相;检测波长350nm),收集对应色谱峰的分离液,再将分离液50℃减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至干,固体磨粉后45℃鼓风干燥,得到淡黄色粉末物17g,即榜嘎苷D。
整个生产流程用时约7天;
通过更换流动相组分(A:甲醇 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 45:55 V/V为流动相;检测波长350nm),利用反相分析型液相色谱(RP-HPLC)复检产品纯度,测得该产物的纯度为99.20%。
实施例4
取干燥的榜嘎(甘青乌头的干燥全草)50kg,粉碎至60目的粒径,加入8倍重量、浓度为70wt%的甲醇超声提取3次,每次1小时,合并提取液,将提取液减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至无醇,再将浓缩提取液按体积比1:6倍加水进行分散处理得水分散体90L;将水分散体湿法上样,用AB-8大孔吸附树脂柱层析分离纯化(甲醇:水=50:50 V/V为流动相),收集含总黄酮成分的层析液,再减压浓缩至无醇,得浓缩液30L;将浓缩液过滤,滤液用C18反相色谱填料高压制备分离(A:乙腈 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 21:79 V/V为流动相;检测波长350nm),收集对应色谱峰的分离液,再将分离液50℃减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至干,固体磨粉后45℃鼓风干燥,得到淡黄色粉末物27g,即榜嘎苷D。
整个生产流程用时约7天;
通过更换流动相组分(A:甲醇 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 45:55 V/V为流动相;检测波长350nm),利用反相分析型液相色谱(RP-HPLC)复检产品纯度,测得该产物的纯度为99.15%。
实施例5
取干燥的榜嘎(船盔乌头的干燥全草)50kg,粉碎至70目的粒径,加入10倍重量、浓度为75wt%的甲醇超声提取5次,每次1小时,合并提取液,将提取液减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至无醇,再将浓缩提取液按体积比1:10倍加水进行分散处理得水分散体120L;将水分散体湿法上样,用AB-8大孔吸附树脂柱层析分离纯化(甲醇:水=50:50 V/V为流动相),收集含总黄酮成分的层析液,再减压浓缩至无醇,得浓缩液50L;将浓缩液过滤,滤液用C18反相色谱填料高压制备分离(A:乙腈 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 21:79 V/V为流动相;检测波长350nm),收集对应色谱峰的分离液,再将分离液50℃减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至干,固体磨粉后45℃鼓风干燥,得到淡黄色粉末物30g,即榜嘎苷D。
整个生产流程用时约9天;
通过更换流动相组分(A:甲醇 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 45:55 V/V为流动相;检测波长350nm),利用反相分析型液相色谱(RP-HPLC)复检产品纯度,测得该产物的纯度为99.36%。
实施例6
取干燥的榜嘎(船盔乌头的干燥全草)50kg,粉碎至80目的粒径,加入9倍重量、浓度为80wt%的甲醇超声提取4次,每次1小时,合并提取液,将提取液减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至无醇,再将浓缩提取液按体积比1:9倍加水进行分散处理得水分散体100L;将水分散体湿法上样,用AB-8大孔吸附树脂柱层析分离纯化(甲醇:水=50:50 V/V为流动相),收集含总黄酮成分的层析液,再减压浓缩至无醇,得浓缩液40L;将浓缩液过滤,滤液用C18反相色谱填料高压制备分离(A:乙腈 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 21:79 V/V为流动相;检测波长350nm),收集对应色谱峰的分离液,再将分离液50℃减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至干,固体磨粉后45℃鼓风干燥,得到淡黄色粉末物28g,即榜嘎苷D。
整个生产流程用时约8天;
通过更换流动相组分(A:甲醇 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 45:55 V/V为流动相;检测波长350nm),利用反相分析型液相色谱(RP-HPLC)复检产品纯度,测得该产物的纯度为99.29%。
实施例7
任意选取上述实施例4提取分离得到的淡黄色粉末物,即榜嘎苷D进行分析如下:
1)电喷雾电离质谱ESI-MS显示:m/z 1209.38 [M-H]-;1233.38 [M+Na]+,说明该化合物的分子量为1210,分子式为C54H66O31。
2)通过1H-NMR、13C-NMR1(H-NMR和13C-NMR数据(见表1)以及DEPT135º和核磁二维HSQC,HMBC,H-HCOSY,NOESY分析技术手段,可以确定该化合物为:山奈酚-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-(4-O-反式-香豆酰基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃半乳糖基]-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖苷,自命名:榜嘎苷D,并具有(Ⅰ)所示的结构式:
(Ⅰ)
实施例8
任意选取上述实施例4提取分离得到的具有(Ⅰ)所示结构式的淡黄色粉末化合物(即下列实验中所称的榜噶苷D)进行下述实验:
化合物抗炎活性实验:
(一)实验材料与仪器
材料:小鼠巨噬细胞株RAW 264.7(中国科学院上海生科院细胞资源中心);DMEM培养基,胎牛血清(美国Hyclone公司);青霉素、链霉素(北京索莱宝有限公司);小鼠IL-6ELISA试剂盒(欣博盛生物科技有限公司,M200624-004a);一氧化氮测试盒(南京建成生物工程研究所,A012-1-2)。
仪器:BB15 CO2细胞培养箱(美国Thermo公司);超净工作台(日本SANYO公司);TDZ5-WS台式低速离心机(湖南湘仪实验仪器开发有限公司);多功能酶标仪SpectraMax(美国Molecular Devices公司)。
(二)实验方法
1. 细胞培养
小鼠巨噬细胞株RAW264.7,在含有抗生素(100U/mL青霉素、100U/mL链霉素)和10%胎牛血清(FBS)的DMEM完全培养基中,于37℃,5%CO2的孵箱条件中培养。
2. ELISA法检测RAW 264.7细胞IL-6释放量
取对数期巨噬细胞RAW 264.7,并调整浓度后,以1×105个/mL的密度将细胞悬浊液接种于24孔细胞培养板上,每孔加入1mL细胞悬液,孵箱培养24h,小心吸去上清。空白组加入DMEM溶液1mL;LPS模型组加入含LPS(100ng/mL)的DMEM溶液1mL;LPS+榜嘎苷D组加入含LPS(100ng/mL)以及不同浓度(7.5、15、30、60μg/mL)榜嘎苷D的DMEM溶液1mL。放入细胞孵箱继续培养24h。按照ELISA试剂盒说明书进行实验操作后,于450nm处测定各OD值,根据OD值计算IL-6细胞因子释放水平。
3. 统计学处理
运用SPSS 26.0统计软件处理数据,结果用平均值±标准差表示(x±s)。多组之间比较采用单因素方差分析(One way-ANOVA),组间两两比较用最小显著性差异法(LSD)。使用GraphPad Prism 7进行绘图。
(三)实验结果
1. LPS+榜嘎苷D组(榜嘎苷D的浓度分别为7.5、15、30、60μg/mL)、加入DMEM溶液的空白组、加入含LPS(100ng/mL)的DMEM溶液的LPS模型组,各组的IL-6含量(pg/ml)如表2所示:
表2
分组 | IL-6含量(pg/ml)(x±s) |
空白 | 16.67±3.51 |
模型(LPS) | 109.67±4.51 |
榜嘎D 60μg/ml | 38.00±3.00 |
榜嘎D 30μg/ml | 59.00±9.85 |
榜嘎D 15μg/ml | 64.00±4.58 |
榜嘎D 7.5μg/ml | 69.67±3.78 |
2. 榜嘎苷D对LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症因子IL-6释放量的影响结果如图1所示。可以看出,经LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症因子IL-6的生成水平较空白组显著增高(P<0.001),说明LPS诱导的炎症模型造模成功。与模型LPS组相比,榜嘎D和LPS与RAW264.7细胞共孵育后,炎症因子IL-6的表达均显著降低(P<0.001),且15-60μg/mL浓度区段成剂量依赖性,当化合物浓度为60μg/mL时,IL-6的表达水平最低。
实验结果表明,榜嘎苷D能显著降低LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症因子IL-6释放量,对LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症反应有良好的保护作用,具有抗炎活性。
因此,本发明提取分离得到的结构式如(Ⅰ)所示的黄酮苷类化合物,可应用于抗炎药物的制备中。
Claims (8)
2.根据权利要求1所述的一种从榜嘎中分离的以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
A.以干燥的榜嘎为原料,粉碎后用浓度为70~80%的甲醇超声提取,提取液经减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至无醇后,再将浓缩后的提取液加水进行分散处理,得到水分散体;
B.将步骤A得到的水分散体湿法上样,用AB-8大孔树脂柱层析分离纯化,收集含总黄酮成分的层析液,再减压浓缩至无醇,得到浓缩液;
C.将步骤B得到的浓缩液过滤,滤液用C18反相色谱填料高压制备分离:A:乙腈 B:0.1%V/V磷酸水,A:B= 21:79 V/V为流动相;检测波长350nm;
收集对应色谱峰的分离液,再将分离液50℃减压到-0.08~-0.09MPa浓缩至干,固体磨粉后45℃鼓风干燥,得到淡黄色粉末物,该淡黄色粉末物为以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物,并具有(Ⅰ)所示的结构式。
3.根据权利要求2所述的一种从榜嘎中分离的以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物的制备方法,其特征在于:在步骤A中,所述原料粉碎后的粒径为60~80目。
4.根据权利要求2所述的一种从榜嘎中分离的以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物的制备方法,在步骤A中,所述超声提取时,甲醇的重量为原料的8~10倍。
5.根据权利要求2所述的一种从榜嘎中分离的以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物的制备方法,其特征在于:在步骤A中,所述超声提取为3~5次,每次1小时。
6.根据权利要求2所述的一种从榜嘎中分离的以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物的制备方法,其特征在于:在步骤B中,所述浓缩提取液按体积比1:6~1:10倍加水进行分散处理。
7.根据权利要求2所述的一种从榜嘎中分离的以槲皮素为苷元的黄酮苷类化合物的制备方法,其特征在于:在步骤C中,所述AB-8大孔吸附树脂柱层析分离使用的流动相为甲醇:水=50:50 V/V。
8.一种根据权利要求1所述的从榜嘎中分离的以山奈酚为苷元的黄酮苷类化合物在制备抗炎药物中的应用。
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CN111187323A (zh) * | 2019-12-20 | 2020-05-22 | 成都普思生物科技股份有限公司 | 一种玉簪花提取物及其提取方法和应用 |
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