CN104371944A - 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的菌株,其中,该菌株的保藏号为CGMCC NO.8040。另一方面,本发明还提供了一种菌剂,其中,所述菌剂含有如上所述的菌株的活菌体和培养基。另一方面,本发明还提供了如上所述的菌株和/或菌剂在防治果实真菌病害中的用途。再一方面,本发明还提供了一种防治果实真菌病害的方法,其中,该方法包括:将含有如上所述的菌株的活菌体的菌剂与果实接触。通过上述技术方案,本发明能够有效地实现对果实真菌病害的防治,并且不会有有害化学物质的残留。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术领域,具体地,涉及一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的菌株、含有该菌株的菌剂、该菌株和菌剂的用途以及一种防治果实真菌病害的方法。
背景技术
果品贮藏保鲜是农业生产的延续。随着生活水平的提高,大众对健康和环境问题日益重视,对果实品质的要求也越来越高,绿色食品迅速普及。因此,寻找安全有效的技术对果实进行采后防腐、杀菌,对果实保鲜十分重要。
真菌病害是诱发果实腐败的主要因素,因此防治果实真菌病害对果实的贮藏至为关键。目前用于防治果实真菌病害的方法大多通过化学药品浸泡法来实现,但是化学药品浸泡容易残留对人体有害的物质,因此存在不够安全有效的缺陷。
发明内容
本发明的目的是克服化学药品浸泡法来防治果实真菌病害时存在的不够安全有效的缺陷,提供一种更加安全有效的微生物生物防治果实真菌病害的方法。
为了实现上述目的,一方面,本发明提供一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)的菌株,其中,该菌株的保藏号为CGMCC NO.8040。
另一方面,本发明还提供了一种菌剂,其中,所述菌剂含有如上所述的菌株的活菌体和培养基。
另一方面,本发明还提供了如上所述的菌株和/或菌剂在防治果实真菌病害中的用途。
再一方面,本发明还提供了一种防治果实真菌病害的方法,其中,该方法包括:将含有如上所述的菌株的活菌体的菌剂与果实接触。
通过上述技术方案,本发明能够有效地实现对果实真菌病害的防治,并且不会有有害化学物质的残留。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
生物保藏
本发明的菌株,分类命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens),是本发明的发明人从新疆葡萄园区果实上分离的,于2013年08月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏号为CGMCC NO.8040。该菌株的生物学性状包括:菌落白色,半透明,光滑湿润菌落,稍隆起,圆形齐整菌落;革兰氏染色菌体紫色,为革兰氏阳性菌,杆状。
附图说明
附图是用来提供对本发明的进一步理解,并且构成说明书的一部分,与下面的具体实施方式一起用于解释本发明,但并不构成对本发明的限制。在附图中:
图1是本发明的解淀粉芽孢杆菌的典型的光学显微镜照片。
图2是本发明的解淀粉芽孢杆菌对葡萄灰霉病菌的典型的抑制效果图。
图3是本发明的解淀粉芽孢杆菌对桃褐腐病病斑大小的抑制效果图。其中,左侧的桃为施用了本发明的解淀粉芽孢杆菌的处理,右侧的桃为没有施用本发明的解淀粉芽孢杆菌的对照。
图4是本发明的解淀粉芽孢杆菌对番茄灰霉病病斑大小的抑制效果。左侧的番茄桃为没有施用本发明的解淀粉芽孢杆菌的对照,右侧的番茄为施用了本发明的解淀粉芽孢杆菌的处理。
图5是本发明的解淀粉芽孢杆菌对苹果青霉病病斑大小的抑制效果。左侧的苹果为施用了本发明的解淀粉芽孢杆菌的处理,右侧的苹果为没有施用本发明的解淀粉芽孢杆菌的对照。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是,此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明,并不用于限制本发明。
在本发明中,在未作相反说明的情况下,使用的液体的数值均为20℃下的数值。本发明中,YPD培养基、LB培养基和PDA培养基是微生物培养中常规使用的培养基,它们的组成可以为教科书(例如焦瑞身,微生物工程,化学工业出版社,2003)中的说明。
本发明提供了一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的菌株,其中,该菌株的保藏号为CGMCC NO.8040。
本发明还提供了一种菌剂,其中,所述菌剂含有如上所述的菌株的活菌体和培养基。
其中,如上所述的菌株的活菌体在所述菌剂中的含量可以为106-1011CFU/mL。
其中,所述培养基可以含有5-10g/L的酵母粉、5-20g/L的蛋白胨和5-10g/L的氯化钠。
本发明还提供了如上所述的菌株和/或菌剂在防治果实真菌病害中的用途。
本发明还提供了一种防治果实真菌病害的方法,其中,该方法包括:将含有如上所述的菌株的活菌体的菌剂与果实接触。
其中,如上所述的菌株的活菌体在所述菌剂中的含量可以为106-108CFU/mL。
其中,接触的方式可以为浸泡;浸泡的时间可以为30-60秒。
其中,该方法还可以包括,将接触后的果实置于贮藏条件下,所述贮藏条件可以为常规的贮藏条件,例如贮藏条件可以包括:温度为1-5℃,相对湿度为90-95%,光照强度为0.3勒克斯以下。
其中,所述果实可以包括苹果、梨、草莓、桃和葡萄中的至少一种;引起果实真菌病害的真菌可以包括葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、梨青霉病菌(Penicillium expansum)、苹果灰霉病菌(Botrytis cinerea)、苹果青霉病菌(Penicillium expansum(Link)Thom)、辣椒炭疽病菌(Gloeosporiumpiperatum)、桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、桃褐腐病菌(Monilinia laxa)、桃褐腐病菌(Monilinia fructigena)、樱桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、柑橘绿霉病菌(Penicillium digitatum)和柑橘青霉病菌(Penicillium italicum)中的至少一种。
以下将结合实施例进一步说明本发明。
实施例1
配制培养基,成分为5g/L的酵母抽提物、10g/L的蛋白胨和10g/L的氯化钠。
将保藏号为CGMCC NO.8040的解淀粉芽孢杆菌接种并培养在上述培养基中,直至菌体浓度为109CFU/mL,得到菌剂。显微镜下,该菌株的典型的光学显微镜照片如图1所示。
实施例2
使用保藏号为CGMCC NO.8040的解淀粉芽孢杆菌菌株,对葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、梨青霉病菌(Penicillium expansum)、苹果灰霉病菌(Botrytis cinerea)、苹果青霉病菌(Penicillium expansum(Link)Thom)、辣椒炭疽病菌(Gloeosporium piperatum)、桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、桃褐腐病菌(Monilinia laxa)、桃褐腐病菌(Monilinia fructigena)、樱桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、柑橘绿霉病菌(Penicillium digitatum)和柑橘青霉病菌(Penicillium italicum)进行抑菌效果的检测,得到如表1所示的结果。其中,对葡萄灰霉病菌的典型的抑制效果图如图2所示。对桃褐腐病病斑大小的抑制效果图如图3所示。其中,左侧的桃为施用了本发明的解淀粉芽孢杆菌的处理,右侧的桃为没有施用本发明的解淀粉芽孢杆菌的对照。对番茄灰霉病病斑大小的抑制效果如图4所示。左侧的番茄桃为没有施用本发明的解淀粉芽孢杆菌的对照,右侧的番茄为施用了本发明的解淀粉芽孢杆菌的处理。对苹果青霉病病斑大小的抑制效果如图5所示。左侧的苹果为施用了本发明的解淀粉芽孢杆菌的处理,右侧的苹果为没有施用本发明的解淀粉芽孢杆菌的对照。
其中,选择桃采后褐腐病病菌、苹果采后灰霉病菌、苹果采后青霉病菌为指示真菌,采用平板对峙培养法和果实体内人为打孔接种法。
平板对峙培养法具体操作如下:保藏号为CGMCC NO.8040的解淀粉芽孢杆菌菌株在LB培养基上28℃恒温培养48h。植物病原真菌在PDA平板上25℃恒温培养3-4天,自菌落边缘用直径0.7cm无菌不锈钢打孔器打制带菌琼脂片;用无菌接种针挑取病原菌菌片,菌丝面朝下接种于PDA平板中心处,同时在距病原真菌菌片两侧均约3.00cm处用无菌接种环划线保藏号为CGMCC NO.8040的解淀粉芽孢杆菌菌株,以仅接病原菌的平板为对照,每个处理三次重复,25℃恒温培养5-7天,测量病原真菌边缘与保藏号为CGMCC NO.8040的解淀粉芽孢杆菌菌株的菌落带宽中心之间的抑菌带宽度。
果实体内人为打孔接种法具体操作(以防治桃采后褐腐病为例进行说明)如下:
保藏号为CGMCC NO.8040的解淀粉芽孢杆菌菌株在LB液体培养基上28℃恒温培养48h,用蒸馏水调至菌液浓度为5×108CFU/ml,得到抗病菌液。桃褐腐病菌M.fructicola在PDA平板上25℃恒温培养5-7天,收集病孢子,用蒸馏水制成5×104CFU/ml的孢子悬浮液;成熟的桃子,先用0.5%次氯酸钠消毒之后,用灭过菌的移液器枪头,沿着桃的腰部插孔,每个果子扎孔3个,每个孔为30mm×30mm。每孔接种30μl抗病菌液,室温晾干,然后再接种30μl的病原菌孢子悬浮液。最后,处理的果子放置于25℃下,5-7天后,测定果实腐烂斑大小。腐烂斑小于10mm被视为不发病。根据腐烂病斑的占总接种孔数的多少,计算发病率,未发病的病斑数占总接种孔数的多少,计算病斑抑制率。
表1.CGMCC NO.8040的解淀粉芽孢杆菌对不同病原菌的抑制效果
对比例1
按照实施例1相同的方法制备菌剂,不同的是,将保藏号为CGMCC NO.8040的解淀粉芽孢杆菌替换为购自ATCC的货号为23350的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
测试实施例1
本测试实施例中,将不含菌体的空白培养基作为空白对照组,将对比例1的菌剂作为参比对照组,将实施例1的菌剂作为实验组。
将采摘后的苹果分为三组,分别经空白对照组、参比对照组和实验组的菌剂浸泡处理45秒,然后于温度为1-2℃,相对湿度为90-95%条件下,黑暗(光照强度为0.3勒克斯以下)贮藏。贮藏10个月后,空白对照组、参比对照组和实验组的腐烂率分别为40%、20%和15%。
将采摘后的梨分为三组,分别经空白对照组、参比对照组和实验组的菌剂浸泡处理45秒,然后于温度为1-2℃,相对湿度为90-95%条件下,黑暗(光照强度为0.3勒克斯以下)贮藏。贮藏6个月后,空白对照组、参比对照组和实验组的腐烂率分别为45%、35%和25%。
将采摘后的草莓分为三组,分别经空白对照组、参比对照组和实验组的菌剂浸泡处理45秒,然后于温度为1-2℃,相对湿度为90-95%条件下,黑暗(光照强度为0.3勒克斯以下)贮藏。贮藏4天后,空白对照组、参比对照组和实验组的腐烂率分别为80%、50%和40%。
将采摘后的桃分为三组,分别经空白对照组、参比对照组和实验组的菌剂浸泡处理45秒,然后于温度为1-2℃,相对湿度为90-95%条件下,黑暗(光照强度为0.3勒克斯以下)贮藏。贮藏14天后,空白对照组、参比对照组和实验组的腐烂率分别为40%、15%和10%。
将采摘后的葡萄分为三组,分别经空白对照组、参比对照组和实验组的菌剂浸泡处理45秒,然后于温度为1-2℃,相对湿度为90-95%条件下,黑暗(光照强度为0.3勒克斯以下)贮藏。贮藏14天后,空白对照组、参比对照组和实验组的腐烂率分别为60%、30%和25%。
从上述比较结果可见,本发明的解淀粉芽孢杆菌能够有效地实现对果实真菌病害的防治,并且相对与其它解淀粉芽孢杆菌具有更优异的防治效果。
以上结合附图详细描述了本发明的优选实施方式,但是,本发明并不限于上述实施方式中的具体细节,在本发明的技术构思范围内,可以对本发明的技术方案进行多种简单变型,这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是,在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征,在不矛盾的情况下,可以通过任何合适的方式进行组合,为了避免不必要的重复,本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外,本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合,只要其不违背本发明的思想,其同样应当视为本发明所公开的内容。
Claims (10)
1.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的菌株,其特征在于,该菌株的保藏号为CGMCC NO.8040。
2.一种菌剂,其特征在于,所述菌剂含有权利要求1所述的菌株的活菌体和培养基。
3.根据权利要求2所述的菌剂,其中,权利要求1所述的菌株的活菌体在所述菌剂中的含量为106-1011CFU/mL。
4.根据权利要求2或3所述的菌剂,其中,所述培养基含有5-10g/L的酵母抽提物、5-20g/L的蛋白胨和5-10g/L的氯化钠。
5.权利要求1所述的菌株和/或权利要求2-4中任意一项所述的菌剂在防治果实真菌病害中的用途。
6.一种防治果实真菌病害的方法,其特征在于,该方法包括:将含有权利要求1所述的菌株的活菌体的菌剂与果实接触。
7.根据权利要求6所述的方法,其中,所述的菌株的活菌体在所述菌剂中的含量为106-1011CFU/mL。
8.根据权利要求6或7所述的方法,其中,接触的方式为浸泡;浸泡的时间为30-60秒。
9.根据权利要求6所述的方法,其中,该方法还包括,将接触后的果实置于贮藏条件下,所述贮藏条件包括:温度为1-5℃,相对湿度为90-95%,光照强度为0.3勒克斯以下。
10.根据权利要求6所述的方法,其中,所述果实包括苹果、梨、草莓、桃和葡萄中的至少一种;引起果实真菌病害的真菌包括葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、梨青霉病菌(Penicillium expansum)、苹果灰霉病菌(Botrytis cinerea)、苹果青霉病菌(Penicillium expansum(Link)Thom)、辣椒炭疽病菌(Gloeosporium piperatum)、桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、桃褐腐病菌(Monilinia laxa)、桃褐腐病菌(Monilinia fructigena)、樱桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、柑橘绿霉病菌(Penicillium digitatum)和柑橘青霉病菌(Penicillium italicum)中的至少一种。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
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