CN104356172B - 一种糖脂分离纯化的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种糖脂分离纯化的方法。本发明用正己烷将粗磷脂溶解，然后用乙醇水溶液萃取，最后收集乙醇水溶液，采用真空浓缩的方式除去乙醇水溶液，得出糖脂产品。本发明的优点是利用磷脂和糖脂在乙醇水溶液中溶解度的差异从粗磷脂分离纯化糖脂，所得糖脂经真空干燥成糖脂含量为80%以上的糖脂产品。一方面，方法简单高效，糖脂得率高；另一方面，解决了磷脂加工过程中美拉德反应对磷脂产品外观影响的问题。
Description
技术领域
本发明涉及大豆油脂下脚料的深加工领域，一种从大豆油脂下脚料中分离纯化糖脂的方法。
背景技术
糖脂为含糖的脂类,是由一个或多个单糖残基与脂类部分如单脂酰或二脂酰甘油、鞘氨醇、神经酰胺等相连形成的化合物。糖脂广泛存在于各种生物体中,自然界中的糖脂可按其组分中的醇基种类而分为两大类:甘油糖脂及鞘糖脂。糖基化的甘油醇脂类称为甘油糖脂。
糖类及其复合物是自然界广泛存在的一大类物质,是生物生命过程中的重要的物质基础和能量基础。而目前更为人们所关注的则是其作为生物信息的载体,糖类作为自然界的一大类生物活性分子,参与了很多重要的生理和病理过程。无论是在受精、发育、分化、神经系统、免疫系统恒态的维持方面,还是在炎症及自身免疫疾病、老化、癌细胞异常增殖及转移、病原体感染、植物与病原菌相互作用等过程中都涉及糖链的参与,糖链在这些生命过程中起到特异性的识别和介导的作用。甘油糖脂是细胞膜重要组成部分、具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、抗炎、抗菌等活性。有研究证明橄榄油内的甘油糖脂是橄榄油能防止动脉粥样硬化的原因。
植物油脱胶过程中糖脂常与磷脂等一起作为胶体物质从油中去除, 因此, 大豆磷脂中常含有一定量的糖脂，磷脂中的糖脂主要为半乳糖脂。糖脂加热易发生美拉德反应,产生棕褐色物质, 使大豆磷脂加工过程中颜色加深, 风味发生变化, 质量下降。 鉴于糖脂对于大豆磷脂生产的限制和糖脂具有多种生物活性，在大豆磷脂中提取糖脂对提高大豆磷脂的产品附加值，不断地挖掘其新的利用价值，具有重要的现实意义。
对糖脂化合物的分离纯化,尽管目前己有多种有效成分的提取分离方法,但都不同程度地存在着提取时间长，提取过程繁琐，分离纯化困难等不足。目前国内外普遍采用大孔吸附树脂法、高效薄层层析法和柱层析色谱法。大孔吸附树脂法主要用来样品的粗分离,获得的产物是糖脂混合物,很难得到单一化合物。高效薄层层析要分离得到糖脂单一组分通常需要大量反复提取,而且提取量少,很难满足糖脂结构鉴定和生物活性的进一步研究。柱层析色谱法近年来,柱层析色谱柱法是糖脂分离广泛采用的一种分离方法，柱层析色谱法虽然可以大量的处理样品,但是存在不可逆吸附严重、分离效率低、耗时长且溶剂消耗量大等缺点。
发明内容
为了解决上述存在的问题，本发明建产了一种新的从大豆磷脂中分离纯化糖脂的技术，以进一步挖掘大豆磷脂新的利用价值，提高糖脂提取率，同时降低糖脂对磷脂加工的影响。
本发明的目的在于提供一种糖脂分离纯化的方法。
本发明所采取的技术方案是：
一种糖脂的分离纯化的方法，该方法为：用正己烷将粗磷脂溶解，然后用乙醇水溶液作为萃取剂进行萃取，收集萃取液并除去萃取剂，即可获得糖脂。
进一步的，上述粗磷脂正己烷溶解的料液质量比为1：（1.2～1.8）。
进一步的，上述萃取的次数为3～4次。
进一步的，上述乙醇水溶液的体积为正己烷的1～1.5倍。
进一步的，上述乙醇水溶液为50～60%(v/v)的乙醇水溶液。
进一步的，上述除去萃取剂的方法采用真空浓缩法。
进一步的，上述除去萃取剂的具体操作为：将萃取液置于真空浓缩设备中，在真空度小于-0.08Mpa、温度为60℃～80℃的条件下，浓缩至干，使水分含量小于10%。
进一步的，上述真空浓缩设备为旋转蒸发器。
本发明的有益效果是：
本发明的利用磷脂和糖脂在乙醇水溶液中溶解度的差异从粗磷脂分离纯化糖脂，本发明分离纯化的糖脂产品中总糖含量可达26%，其中糖脂含量可占83%。
本发明方法不仅简单高效，糖脂得率高；还解决了磷脂加工过程中因糖脂的美拉德反应影响磷脂产品外观的问题。
具体实施方式
一种糖脂的分离纯化的方法，该方法为：用正己烷将粗磷脂溶解，然后用乙醇水溶液作为萃取剂进行萃取，收集萃取液并除去萃取剂，即可获得糖脂。
优先的，上述粗磷脂正己烷溶解的料液质量比为1：（1.2～1.8），最优选为1：1。
优先的，上述萃取的次数为3～4次，最优选为萃取3次。
优先的，上述乙醇水溶液的体积为正己烷的1～1.5倍，最优选为正己烷的1倍。
优先的，上述乙醇水溶液为50～60%(v/v)的乙醇水溶液。
优先的，上述除去萃取剂的方法采用真空浓缩法。
优先的，上述除去萃取剂的具体操作为：将萃取液置于真空浓缩设备中，在真空度小于-0.08Mpa、温度为60℃～80℃的条件下，浓缩至干，使水分含量小于10%。
进一步的，上述真空浓缩设备为旋转蒸发器。
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
实施例1：从粗磷脂中分离纯化糖脂
用量筒取粗磷脂（即大豆油脂下脚料）500ml（567g）于2000ml的大烧杯中，加入正己烷750ml，不断搅拌，直至粗磷脂完全溶解，然后转入2000ml的分液漏斗中。配制50%（w/w）的乙醇水溶液750ml，第一次倒入250ml乙醇水溶液至正己烷磷脂体系中，上下震动5min，然后静置分层，取上层乙醇水溶液；第二次倒入250ml乙醇水溶液至正己烷磷脂体系中，上下震动5min，然后静置分层，取上层乙醇水溶液；第三次倒入250ml乙醇水溶液至正己烷磷脂体系中，上下震动5min，然后静置分层，取上层乙醇水溶液。收集乙醇水溶液于1000ml的圆底烧瓶中，利用旋转蒸发器，真空度小于-0.08Mpa，温度60℃-80℃之间，浓缩至干，刮出粉末称重。
总糖及糖脂含量测定：称取0.01g试样于磨口圆底烧瓶中，移取 25mL1mol/l KOH-乙醇溶液(无醛乙醇)，水浴20min，滴加2 ml盐酸，水浴加热15min，加7ml 1 mol /l KOH溶液，定容，离心分离。精密移取上层清液2 ml于10 ml离心管，80℃以下蒸干，加蒸馏水2 ml溶解。向离心管中加2ml菲林试剂，沸水浴加热10min，离心5min，弃去上层清液，加2ml硫酸-钼酸铵显色剂，稀释，定容至100 ml，静置30 min，用紫外分光光度计测定吸光度，并在半乳糖标准曲线上查出半乳糖含量。由于磷脂中主要糖脂为半乳糖脂，本方法主要计算半乳糖脂含量。
总糖含量计算如下：
X =(a×b×V×100%)/m
式中：X 为总糖含量；a为根据标准曲线查出的半乳糖质量浓度，g/ml；b为糖脂干重（直接干燥法），%；V为定容体积，ml。
糖脂含量计算如下：
半乳糖脂=X×（4.41+2.99+2.73+2.5）/4
式中：X 为总糖含量；4.41=单半乳糖苷二酯相对分子质量/半乳糖相对分子质量；2.99=单半乳糖苷一酯相对分子质量/半乳糖相对分子质量；2.73=双半乳糖苷二酯相对分子质量/（半乳糖相对分子质量×2）；2.5=双半乳糖苷一酯相对分子质量/（半乳糖相对分子质量×2）。
按照上述试验步骤，得到汇总结果见下表。
从上表中可以看出，本发明分离纯化的糖脂产品中总糖含量达25.6%，其中糖脂含量占81%。本发明方法不仅简单高效，糖脂得率高。
实施例2：从粗磷脂中分离纯化糖脂
用量筒取粗磷脂500ml（550g）于2000ml的大烧杯中，加入正己烷750ml，不断搅拌，直至粗磷脂完全溶解，然后转入2000ml的分液漏斗中。配制60%（w/w）的乙醇水溶液750ml，第一次倒入250ml乙醇水溶液至正己烷磷脂体系中，上下震动5min，然后静置分层，取上层乙醇水溶液；第二次倒入250ml乙醇水溶液至正己烷磷脂体系中，上下震动5min，然后静置分层，取上层乙醇水溶液；第三次倒入250ml乙醇水溶液至正己烷磷脂体系中，上下震动5min，然后静置分层，取上层乙醇水溶液。收集乙醇水溶液于1000ml的圆底烧瓶中，利用旋转蒸发器，真空度小于-0.08Mpa，温度60℃-80℃之间，浓缩至干，刮出粉末称重。
总糖及糖脂含量测定：称取0.01g试样于磨口圆底烧瓶中，移取 25mL1mol/l KOH-乙醇溶液(无醛乙醇)，水浴20min，滴加2 ml盐酸，水浴加热15min，加7ml 1 mol /l KOH溶液，定容，离心分离。精密移取上层清液2 ml于10 ml离心管，80℃以下蒸干，加蒸馏水2 ml溶解。向离心管中加2ml菲林试剂，沸水浴加热10min，离心5min，弃去上层清液，加2ml硫酸-钼酸铵显色剂，稀释，定容至100 ml，静置30 min，用紫外分光光度计测定吸光度，并在半乳糖标准曲线上查出半乳糖含量。由于磷脂中主要糖脂为半乳糖脂，本方法主要计算半乳糖脂含量。
总糖含量计算如下：
X =(a×b×V×100%)/m
式中：X 为总糖含量；a为根据标准曲线查出的半乳糖质量浓度，g/ml；b为糖脂干重（直接干燥法），%；V为定容体积，ml。
糖脂含量计算如下：
半乳糖脂=X×（4.41+2.99+2.73+2.5）/4
式中：X 为总糖含量；4.41=单半乳糖苷二酯相对分子质量/半乳糖相对分子质量；2.99=单半乳糖苷一酯相对分子质量/半乳糖相对分子质量；2.73=双半乳糖苷二酯相对分子质量/（半乳糖相对分子质量×2）；2.5=双半乳糖苷一酯相对分子质量/（半乳糖相对分子质量×2）。
按照上述试验步骤，得到汇总结果见下表。
Claims (3)
1.一种糖脂的分离纯化的方法，其特征在于：该方法为：用正己烷将粗磷脂溶解，然后用乙醇水溶液作为萃取剂进行萃取，收集萃取液并除去萃取剂，即可获得糖脂；
粗磷脂正己烷溶解的料液质量比为1：（1.2～1.8）；
所述乙醇水溶液的体积为正己烷的1～1.5倍；
所述萃取的次数为3～4次；
所述乙醇水溶液为50～60%(v/v)的乙醇水溶液；
所述除去萃取剂的具体操作为：将萃取液置于真空浓缩设备中，在真空度小于-0.08Mpa、温度为60℃～80℃的条件下，浓缩至干，使水分含量小于10%。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述除去萃取剂的方法采用真空浓缩法。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述真空浓缩设备为旋转蒸发器。
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