JP2002238545A - クロレラの製造方法及びその製造方法によって得られた高度不飽和脂肪酸を含有する複合脂質、リン脂質または糖脂質、食品、食品添加物 - Google Patents
クロレラの製造方法及びその製造方法によって得られた高度不飽和脂肪酸を含有する複合脂質、リン脂質または糖脂質、食品、食品添加物Info
- Publication number
- JP2002238545A JP2002238545A JP2001039090A JP2001039090A JP2002238545A JP 2002238545 A JP2002238545 A JP 2002238545A JP 2001039090 A JP2001039090 A JP 2001039090A JP 2001039090 A JP2001039090 A JP 2001039090A JP 2002238545 A JP2002238545 A JP 2002238545A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- chlorella
- culture
- fatty acid
- food
- fatty acids
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Fats And Perfumes (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 高度不飽和脂肪酸を複合脂質の形態でより多
くクロレラ細胞内に蓄積させることができるクロレラの
製造方法及びその製造方法によって得られた高度不飽和
脂肪酸を含有する複合脂質、リン脂質または糖脂質、食
品、食品添加物を提供する。 【解決手段】 クロレラを製造するに当たり、高度不飽
和脂肪酸化合物を添加した培養液中で従属栄養的にクロ
レラを培養し、従属栄養的に培養したクロレラを光合成
によって培養する。
くクロレラ細胞内に蓄積させることができるクロレラの
製造方法及びその製造方法によって得られた高度不飽和
脂肪酸を含有する複合脂質、リン脂質または糖脂質、食
品、食品添加物を提供する。 【解決手段】 クロレラを製造するに当たり、高度不飽
和脂肪酸化合物を添加した培養液中で従属栄養的にクロ
レラを培養し、従属栄養的に培養したクロレラを光合成
によって培養する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、クロレラの製造方
法及びその製造方法によって得られた高度不飽和脂肪酸
を含有する複合脂質、リン脂質または糖脂質、食品、食
品添加物に関する。更に詳しくは、ドコサヘキサエン酸
やエイコサペンタエン酸等の高度不飽和脂肪酸を複合脂
質の形態でより多くクロレラ細胞内に蓄積させる（ある
いは取り込む、吸収させる）ことができるクロレラの製
造方法及びその製造方法によって得られた高度不飽和脂
肪酸を含有する複合脂質、リン脂質または糖脂質、食
品、食品添加物に関する。
法及びその製造方法によって得られた高度不飽和脂肪酸
を含有する複合脂質、リン脂質または糖脂質、食品、食
品添加物に関する。更に詳しくは、ドコサヘキサエン酸
やエイコサペンタエン酸等の高度不飽和脂肪酸を複合脂
質の形態でより多くクロレラ細胞内に蓄積させる（ある
いは取り込む、吸収させる）ことができるクロレラの製
造方法及びその製造方法によって得られた高度不飽和脂
肪酸を含有する複合脂質、リン脂質または糖脂質、食
品、食品添加物に関する。
【０００２】
【従来技術】ドコサヘキサエン酸（以下、主にＤＨＡと
いう）やエイコサペンタエン酸（以下、主にＥＰＡとい
う）などの高度不飽和脂肪酸は、グリーンランドエスキ
モー人の疫学的調査によって動脈硬化の進行を抑える働
きがあることが報告されて以来、その生理活性について
の研究が進み、食品や医薬品としての摂取に世界的な関
心が集まっている。
いう）やエイコサペンタエン酸（以下、主にＥＰＡとい
う）などの高度不飽和脂肪酸は、グリーンランドエスキ
モー人の疫学的調査によって動脈硬化の進行を抑える働
きがあることが報告されて以来、その生理活性について
の研究が進み、食品や医薬品としての摂取に世界的な関
心が集まっている。
【０００３】高度不飽和脂肪酸は、主に魚油などから精
製されるため、通常は中性脂質の形態となっている。し
かしながら、近年の高度不飽和脂肪酸化合物の研究によ
り、中性脂質の形態よりも、リン脂質や糖脂質などの複
合脂質の形態の方が生理活性が高いことが実証されてい
る。
製されるため、通常は中性脂質の形態となっている。し
かしながら、近年の高度不飽和脂肪酸化合物の研究によ
り、中性脂質の形態よりも、リン脂質や糖脂質などの複
合脂質の形態の方が生理活性が高いことが実証されてい
る。
【０００４】例えば「食品と開発」（VOL.34，NO.8，P4
1-43，1999，健康産業新聞社発行）には、中性脂質形態
の高度不飽和脂肪酸を含む魚油に比べ、イカの外套膜か
ら抽出したリン脂質形態の高度不飽和脂肪酸や、魚油を
与えた鶏で生産した卵黄から抽出したリン脂質形態の高
度不飽和脂肪酸の方が、脳卒中自然発症高血圧ラットを
長生きさせる効果が高いことが報告されている。そし
て、文献には「体内で直接作用するリン脂質の形態で高
度不飽和脂肪酸を補給することが、脳卒中等の疾患の改
善及び予防につながる。」と記載されている。
1-43，1999，健康産業新聞社発行）には、中性脂質形態
の高度不飽和脂肪酸を含む魚油に比べ、イカの外套膜か
ら抽出したリン脂質形態の高度不飽和脂肪酸や、魚油を
与えた鶏で生産した卵黄から抽出したリン脂質形態の高
度不飽和脂肪酸の方が、脳卒中自然発症高血圧ラットを
長生きさせる効果が高いことが報告されている。そし
て、文献には「体内で直接作用するリン脂質の形態で高
度不飽和脂肪酸を補給することが、脳卒中等の疾患の改
善及び予防につながる。」と記載されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、イカの
外套膜は海産物であるイカから採取するため、常に安定
して入手できるとは限らず、工業的な生産に向かないと
いう難点があり、また鶏卵からリン脂質形態の高度不飽
和脂肪酸を抽出することも、生産効率の面から工業的な
生産には不向きである。
外套膜は海産物であるイカから採取するため、常に安定
して入手できるとは限らず、工業的な生産に向かないと
いう難点があり、また鶏卵からリン脂質形態の高度不飽
和脂肪酸を抽出することも、生産効率の面から工業的な
生産には不向きである。
【０００６】ところで、本発明者らは、高度不飽和脂肪
酸を添加した培養液中でクロレラを培養することによ
り、細胞中に高度不飽和脂肪酸を吸収させて強化したク
ロレラの製造方法を提案し（特許公報第３０９６６５４
号）、工業的な実用化に成功している。
酸を添加した培養液中でクロレラを培養することによ
り、細胞中に高度不飽和脂肪酸を吸収させて強化したク
ロレラの製造方法を提案し（特許公報第３０９６６５４
号）、工業的な実用化に成功している。
【０００７】そこで、本発明者らは、クロレラに吸収さ
せた高度不飽和脂肪酸がどのような形態で存在している
のかを確認するため、通常、工業的な生産で採用されて
いる従属栄養的培養によって高度不飽和脂肪酸を強化し
たクロレラを分析した。その結果、高度不飽和脂肪酸
は、生理活性が高いとされている複合脂質の形態ではな
く、主に中性脂質の形態で細胞内に取り込まれているこ
とが明らかとなった。
せた高度不飽和脂肪酸がどのような形態で存在している
のかを確認するため、通常、工業的な生産で採用されて
いる従属栄養的培養によって高度不飽和脂肪酸を強化し
たクロレラを分析した。その結果、高度不飽和脂肪酸
は、生理活性が高いとされている複合脂質の形態ではな
く、主に中性脂質の形態で細胞内に取り込まれているこ
とが明らかとなった。
【０００８】したがって、本発明者らは、中性脂質の形
態ではなく複合脂質の形態で高度不飽和脂肪酸をより多
くクロレラに吸収させれば、生理活性が高い高付加価値
のクロレラを生産できるのではないかと考えた。
態ではなく複合脂質の形態で高度不飽和脂肪酸をより多
くクロレラに吸収させれば、生理活性が高い高付加価値
のクロレラを生産できるのではないかと考えた。
【０００９】本発明は上記事情に鑑みてなされたもので
あり、高度不飽和脂肪酸が複合脂質の形態でより多く吸
収されたクロレラを得るべく鋭意研究を進めた結果、本
発明者らは、従属栄養的な培養を行った後に、引き続き
光合成による培養を行うことが極めて有効な手段である
ことを見い出し、本発明を完成するに至った。
あり、高度不飽和脂肪酸が複合脂質の形態でより多く吸
収されたクロレラを得るべく鋭意研究を進めた結果、本
発明者らは、従属栄養的な培養を行った後に、引き続き
光合成による培養を行うことが極めて有効な手段である
ことを見い出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】そこで、本発明の目的は、高度不飽和脂肪
酸を複合脂質の形態でより多くクロレラ細胞内に蓄積さ
せる（あるいは取り込む、吸収させる）ことができるク
ロレラの製造方法及びその製造方法によって得られた高
度不飽和脂肪酸を含有する複合脂質、リン脂質または糖
脂質、食品、食品添加物を提供することにある。
酸を複合脂質の形態でより多くクロレラ細胞内に蓄積さ
せる（あるいは取り込む、吸収させる）ことができるク
ロレラの製造方法及びその製造方法によって得られた高
度不飽和脂肪酸を含有する複合脂質、リン脂質または糖
脂質、食品、食品添加物を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に講じた本発明の手段は次のとおりである。第１の発明
にあっては、高度不飽和脂肪酸化合物を添加した培養液
中で従属栄養的にクロレラを培養する工程と、従属栄養
的に培養した上記クロレラを光合成によって培養する工
程と、を含むことを特徴とする、クロレラの製造方法で
ある。
に講じた本発明の手段は次のとおりである。第１の発明
にあっては、高度不飽和脂肪酸化合物を添加した培養液
中で従属栄養的にクロレラを培養する工程と、従属栄養
的に培養した上記クロレラを光合成によって培養する工
程と、を含むことを特徴とする、クロレラの製造方法で
ある。
【００１２】第２の発明にあっては、第１の発明に係る
方法で得られたクロレラから抽出したことを特徴とす
る、高度不飽和脂肪酸を含有する複合脂質である。
方法で得られたクロレラから抽出したことを特徴とす
る、高度不飽和脂肪酸を含有する複合脂質である。
【００１３】第３の発明にあっては、第１の発明に係る
方法で得られたクロレラから高度不飽和脂肪酸を含有す
る複合脂質を抽出し、当該複合脂質から分離精製したこ
とを特徴とする、リン脂質または糖脂質である。
方法で得られたクロレラから高度不飽和脂肪酸を含有す
る複合脂質を抽出し、当該複合脂質から分離精製したこ
とを特徴とする、リン脂質または糖脂質である。
【００１４】第４の発明にあっては、第１の発明に係る
方法で得られたクロレラを含有することを特徴とする、
食品である。
方法で得られたクロレラを含有することを特徴とする、
食品である。
【００１５】第５の発明にあっては、第１の発明に係る
方法で得られたクロレラを含有することを特徴とする、
食品添加物である。
方法で得られたクロレラを含有することを特徴とする、
食品添加物である。
【００１６】
【発明の実施の形態】高度不飽和脂肪酸とは、炭素原子
数２０以上で、不飽和結合を１個以上有する脂肪酸をい
い、例えば、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサ
ペンタエン酸(ＥＰＡ)、ドコサペンタエン酸(ＤＰＡ)、
アラキドン酸(ＡＲＡ)等を挙げることができるが、特に
これらに限定するものではない。
数２０以上で、不飽和結合を１個以上有する脂肪酸をい
い、例えば、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサ
ペンタエン酸(ＥＰＡ)、ドコサペンタエン酸(ＤＰＡ)、
アラキドン酸(ＡＲＡ)等を挙げることができるが、特に
これらに限定するものではない。
【００１７】脂肪酸の由来に特に制限はなく、例えば魚
介類の油脂、牛脂、オリーブ油、米糠油等を用いること
ができるが、特にこれらに限定するものではない。
介類の油脂、牛脂、オリーブ油、米糠油等を用いること
ができるが、特にこれらに限定するものではない。
【００１８】高度不飽和脂肪酸化合物には、遊離の形
態、アルキルエステルの形態、塩の形態が含まれる。遊
離の形態の脂肪酸とは、飽和または不飽和の直鎖状また
は側鎖状の脂肪酸をいう。アルキルエステルの形態の脂
肪酸とは、上記遊離の脂肪酸とアルカノールとのエステ
ルをいう。エステルを形成することのできるアルカノー
ルとしては、例えば一価アルカノールのメタノール、エ
タノール等が挙げられる。塩の形態の脂肪酸とは、上記
遊離の脂肪酸の塩をいい、ナトリウム、カリウム等のよ
うなアルカリ金属、バリウム、カルシウム等のようなア
ルカリ土類金属の塩が含まれる。
態、アルキルエステルの形態、塩の形態が含まれる。遊
離の形態の脂肪酸とは、飽和または不飽和の直鎖状また
は側鎖状の脂肪酸をいう。アルキルエステルの形態の脂
肪酸とは、上記遊離の脂肪酸とアルカノールとのエステ
ルをいう。エステルを形成することのできるアルカノー
ルとしては、例えば一価アルカノールのメタノール、エ
タノール等が挙げられる。塩の形態の脂肪酸とは、上記
遊離の脂肪酸の塩をいい、ナトリウム、カリウム等のよ
うなアルカリ金属、バリウム、カルシウム等のようなア
ルカリ土類金属の塩が含まれる。
【００１９】使用するクロレラは、クロレラ属に属する
ものであれば、特に制限はない。クロレラの例として、
クロレラ・ブルガリス(Chlorella vulgaris)、クロレラ
・ピレノイドサ(Chlorella pyrenoidosa)、クロレラ・
サッカロフィラ(Chlorella saccharophila)、クロレラ
・レギュラリス(Chlorella regularis)、クロレラ・ソ
ロキニアーナ（Chlorella sorokiniana）等が挙げられ
る。これらクロレラは、当業者が容易に入手することが
できる。例えば、東京大学ＩＡＭカルチャーコレクショ
ンから入手することができる。
ものであれば、特に制限はない。クロレラの例として、
クロレラ・ブルガリス(Chlorella vulgaris)、クロレラ
・ピレノイドサ(Chlorella pyrenoidosa)、クロレラ・
サッカロフィラ(Chlorella saccharophila)、クロレラ
・レギュラリス(Chlorella regularis)、クロレラ・ソ
ロキニアーナ（Chlorella sorokiniana）等が挙げられ
る。これらクロレラは、当業者が容易に入手することが
できる。例えば、東京大学ＩＡＭカルチャーコレクショ
ンから入手することができる。
【００２０】本発明に係るクロレラの製造方法では、高
度不飽和脂肪酸化合物を添加した培養液中で、クロレラ
を従属栄養的に培養した後、引き続きクロレラを光合成
によって培養する。
度不飽和脂肪酸化合物を添加した培養液中で、クロレラ
を従属栄養的に培養した後、引き続きクロレラを光合成
によって培養する。
【００２１】（クロレラの従属栄養培養）従属栄養培養
時に使用する培養装置としては、クロレラを培養できる
装置で有れば制限はなく、培養スケールに応じて既知の
ものを用いることができる。例えば、小規模の培養に
は、小型ジャーファメンター、坂口フラスコ、振盪フラ
スコなどを用いることができる。大規模の培養（工業的
な大量培養）には、大型ジャーファメンターなどを用い
ることができる。
時に使用する培養装置としては、クロレラを培養できる
装置で有れば制限はなく、培養スケールに応じて既知の
ものを用いることができる。例えば、小規模の培養に
は、小型ジャーファメンター、坂口フラスコ、振盪フラ
スコなどを用いることができる。大規模の培養（工業的
な大量培養）には、大型ジャーファメンターなどを用い
ることができる。
【００２２】クロレラの培養に用いる培地としては、ク
ロレラが培養され得るものであれば特に制限されない。
培養には有機炭素の添加が必須であり、一般にはグルコ
ースや酢酸などが用いられるが、クロレラが利用できる
有機物であればその種類を問わず利用することができ
る。その他の培地成分として窒素、リン、カリウム、マ
グネシウムなどの多種類の元素が必要であるが、これら
もクロレラを培養できるものであれば制限はなく、例え
ばブリストール培地やソロキン・クラウス培地（「藻類
実験法」、田宮博、渡辺篤編集、南江堂、68〜104頁）
などを用いることができる。
ロレラが培養され得るものであれば特に制限されない。
培養には有機炭素の添加が必須であり、一般にはグルコ
ースや酢酸などが用いられるが、クロレラが利用できる
有機物であればその種類を問わず利用することができ
る。その他の培地成分として窒素、リン、カリウム、マ
グネシウムなどの多種類の元素が必要であるが、これら
もクロレラを培養できるものであれば制限はなく、例え
ばブリストール培地やソロキン・クラウス培地（「藻類
実験法」、田宮博、渡辺篤編集、南江堂、68〜104頁）
などを用いることができる。
【００２３】培養温度は、特に制限しないが、一般には
20〜40℃で行われる。
20〜40℃で行われる。
【００２４】従属栄養的な培養時に、照射装置によって
光を照射することも可能である。
光を照射することも可能である。
【００２５】脂肪酸をクロレラ培養液に添加する時期
は、脂肪酸の存在下にクロレラを培養できれば、特に制
限はなく、予め培養液に添加しておきクロレラを培養す
ることもできるし、培養の途中で添加することもでき、
また培養終了後の藻体に添加して再培養を行うこともで
きる。しかしながら、脂肪酸化合物を効率的に蓄積で
き、培養に要する作業を低減し、培養時間を短縮する観
点から、培養後期、具体的には、対数増殖期後半から対
数増殖期終了時に添加することが望ましい。
は、脂肪酸の存在下にクロレラを培養できれば、特に制
限はなく、予め培養液に添加しておきクロレラを培養す
ることもできるし、培養の途中で添加することもでき、
また培養終了後の藻体に添加して再培養を行うこともで
きる。しかしながら、脂肪酸化合物を効率的に蓄積で
き、培養に要する作業を低減し、培養時間を短縮する観
点から、培養後期、具体的には、対数増殖期後半から対
数増殖期終了時に添加することが望ましい。
【００２６】脂肪酸の添加量は、クロレラが取り込み得
る量であれば特に制限はないが、添加量が少なすぎると
取り込む効果が低くなり、添加量が多すぎると添加した
脂肪酸化合物の利用率が低下するので好ましくない。具
体的には、培養液中に存在するクロレラ藻体量に応じて
脂肪酸を調整するのが好ましく、実用的な範囲として
は、培養液のクロレラ藻体濃度が10g（乾燥重量）/Lの
とき、脂肪酸が0.05〜5g/Lである。
る量であれば特に制限はないが、添加量が少なすぎると
取り込む効果が低くなり、添加量が多すぎると添加した
脂肪酸化合物の利用率が低下するので好ましくない。具
体的には、培養液中に存在するクロレラ藻体量に応じて
脂肪酸を調整するのが好ましく、実用的な範囲として
は、培養液のクロレラ藻体濃度が10g（乾燥重量）/Lの
とき、脂肪酸が0.05〜5g/Lである。
【００２７】（クロレラの光合成培養）光合成培養の方
法としては、例えばプール（屋外培養池）を用いて太陽
光を利用する方法、透明な培養装置を用いて人工光を利
用する方法、培養槽内に光ファイバー等を設置して光を
照射する方法等を挙げることができるが、特にこれらに
限定するものではない。しかしながら、工業的な大量培
養の観点からプール（屋外培養池）を用いる方法が望ま
しい。
法としては、例えばプール（屋外培養池）を用いて太陽
光を利用する方法、透明な培養装置を用いて人工光を利
用する方法、培養槽内に光ファイバー等を設置して光を
照射する方法等を挙げることができるが、特にこれらに
限定するものではない。しかしながら、工業的な大量培
養の観点からプール（屋外培養池）を用いる方法が望ま
しい。
【００２８】培地成分として窒素、リン、カリウム、マ
グネシウムなどの多種類の元素が必要であるが、これら
はクロレラを培養できるものであれば制限はなく、例え
ばブリストール培地や上記したソロキン・クラウス培地
などを用いることができる。
グネシウムなどの多種類の元素が必要であるが、これら
はクロレラを培養できるものであれば制限はなく、例え
ばブリストール培地や上記したソロキン・クラウス培地
などを用いることができる。
【００２９】光合成培養のためには、二酸化炭素が必要
となる。空気からの二酸化炭素の溶解を期待することも
できるが、高い効果を得るためには人為的に二酸化炭素
を供給することが望ましい。使用できる二酸化炭素源の
種類は問わないが、例えば炭酸ガス、炭酸水素ナトリウ
ム、酢酸などを挙げることができる。炭酸水素ナトリウ
ムは、培養液のｐＨの上昇に伴って炭酸ガスを放出す
る。酢酸は、有機炭素としてクロレラに利用されるとき
に大量の炭酸ガスを放出する。
となる。空気からの二酸化炭素の溶解を期待することも
できるが、高い効果を得るためには人為的に二酸化炭素
を供給することが望ましい。使用できる二酸化炭素源の
種類は問わないが、例えば炭酸ガス、炭酸水素ナトリウ
ム、酢酸などを挙げることができる。炭酸水素ナトリウ
ムは、培養液のｐＨの上昇に伴って炭酸ガスを放出す
る。酢酸は、有機炭素としてクロレラに利用されるとき
に大量の炭酸ガスを放出する。
【００３０】培養温度は、特に制限はなく、屋外大量培
養プールでは制御することも困難であるが、一般には10
〜30℃の範囲が望ましい。培養期間が長期になるとクロ
レラに強化した高度不飽和脂肪酸の含有量が減少するた
め、適当な光合成培養の培養時間は10時間〜数日間程度
であり、培養方法や培養温度によって培養時間を調整す
ることが好ましい。
養プールでは制御することも困難であるが、一般には10
〜30℃の範囲が望ましい。培養期間が長期になるとクロ
レラに強化した高度不飽和脂肪酸の含有量が減少するた
め、適当な光合成培養の培養時間は10時間〜数日間程度
であり、培養方法や培養温度によって培養時間を調整す
ることが好ましい。
【００３１】また、クロレラから脂質を抽出し、更に精
製することによって、クロレラ由来の抽出脂質、精製複
合脂質、精製糖脂質、精製リン脂質などとして食品や医
薬品への利用も可能である。
製することによって、クロレラ由来の抽出脂質、精製複
合脂質、精製糖脂質、精製リン脂質などとして食品や医
薬品への利用も可能である。
【００３２】培養を終了したクロレラは、例えば遠心分
離などで収穫し、噴霧乾燥や凍結乾燥などによって粉末
とすることができる。得られたクロレラ粉末は、そのま
ま食品として利用でき、油脂を添加しにくい食品に高度
不飽和脂肪酸を強化できる食品添加物として利用でき、
動物や魚類用の飼料添加物、ワムシ等の動物性プランク
トン用餌料及び動物性プランクトン用餌料添加物として
利用することができる。また、クロレラを粉体に加工せ
ずに生のままでワムシ等の動物性プランクトン用餌料や
動物性プランクトン用餌料添加物として利用することも
できる。
離などで収穫し、噴霧乾燥や凍結乾燥などによって粉末
とすることができる。得られたクロレラ粉末は、そのま
ま食品として利用でき、油脂を添加しにくい食品に高度
不飽和脂肪酸を強化できる食品添加物として利用でき、
動物や魚類用の飼料添加物、ワムシ等の動物性プランク
トン用餌料及び動物性プランクトン用餌料添加物として
利用することができる。また、クロレラを粉体に加工せ
ずに生のままでワムシ等の動物性プランクトン用餌料や
動物性プランクトン用餌料添加物として利用することも
できる。
【００３３】
【実施例】以下、本発明を実施例により説明するが、本
発明はこれらに限定されるものではない。
発明はこれらに限定されるものではない。
【００３４】[実施例１] 小型ジャーファメンターと
扁平フラスコを用いた実験室レベルでのクロレラの培養 （従属栄養培養）まず、容量が2Lのジャーファメンター
を用いて、クロレラ（Chlorella vulgaris C-30,
東大IAMより入手）の従属栄養的な培養を行った。培地
は、水道水1L当たり、グルコース20g、尿素1.5g、リン
酸一カリウム1.2g、硫酸マグネシウム0.6g、EDTA-Na-Fe
0.015g、微量金属 A５溶液2ミリリットル（以下、ミリ
リットルを「mL」と表記し、リットルを「L」と表記す
る）を添加したものを用いた。培養は、上記培養液1L中
にクロレラ2×1010細胞を加え、温度30℃において通気
攪拌培養を行った。
扁平フラスコを用いた実験室レベルでのクロレラの培養 （従属栄養培養）まず、容量が2Lのジャーファメンター
を用いて、クロレラ（Chlorella vulgaris C-30,
東大IAMより入手）の従属栄養的な培養を行った。培地
は、水道水1L当たり、グルコース20g、尿素1.5g、リン
酸一カリウム1.2g、硫酸マグネシウム0.6g、EDTA-Na-Fe
0.015g、微量金属 A５溶液2ミリリットル（以下、ミリ
リットルを「mL」と表記し、リットルを「L」と表記す
る）を添加したものを用いた。培養は、上記培養液1L中
にクロレラ2×1010細胞を加え、温度30℃において通気
攪拌培養を行った。
【００３５】高度不飽和脂肪酸として、ＤＨＡ及びＤＰ
Ａを濃縮した遊離形態の脂肪酸（総脂肪酸に占めるＤＨ
Ａの割合が60重量％、同じくＤＰＡの割合が20重量％）
を用いた。クロレラの対数増殖期後期に、上記した高度
不飽和脂肪酸を培養液1L当たり1.1mL添加し、更に24時
間の培養を行った。培養を終了したクロレラは、遠心分
離によって濃縮、水洗いした。そして、水洗いしたクロ
レラの一部を凍結乾燥し、脂肪酸分析を行った。
Ａを濃縮した遊離形態の脂肪酸（総脂肪酸に占めるＤＨ
Ａの割合が60重量％、同じくＤＰＡの割合が20重量％）
を用いた。クロレラの対数増殖期後期に、上記した高度
不飽和脂肪酸を培養液1L当たり1.1mL添加し、更に24時
間の培養を行った。培養を終了したクロレラは、遠心分
離によって濃縮、水洗いした。そして、水洗いしたクロ
レラの一部を凍結乾燥し、脂肪酸分析を行った。
【００３６】脂肪酸分析は、全脂質をクロロホルム・メ
タノール混液で抽出後、粗抽出液をケン化し、酸性に
し、脂肪酸を回収した。更に脂肪酸をメチルエステル化
し、ガスクロマトグラフィー（島津製作所製）により分
析した。これについては、後述する脂肪酸分析について
同様である。
タノール混液で抽出後、粗抽出液をケン化し、酸性に
し、脂肪酸を回収した。更に脂肪酸をメチルエステル化
し、ガスクロマトグラフィー（島津製作所製）により分
析した。これについては、後述する脂肪酸分析について
同様である。
【００３７】（光合成培養）上記した従属栄養的な培養
を終え、遠心分離によって濃縮、水洗いしたクロレラ
を、容量が2.5Lの扁平フラスコを用いて、引き続き光合
成により培養した。
を終え、遠心分離によって濃縮、水洗いしたクロレラ
を、容量が2.5Lの扁平フラスコを用いて、引き続き光合
成により培養した。
【００３８】培地は、水道水1L当たり、尿素3.0g、リン
酸一カリウム2.4g、硫酸マグネシウム1.2g、EDTA-Na-Fe
0.03g、微量金属 A５溶液4mLを添加したものを用い
た。
酸一カリウム2.4g、硫酸マグネシウム1.2g、EDTA-Na-Fe
0.03g、微量金属 A５溶液4mLを添加したものを用い
た。
【００３９】培養は、上記培養液1L中にジャーファメン
ター培養終了時のクロレラ懸濁液1Lを加え、白色蛍光灯
にて約10000ルクスの照射を行い、30℃、2％の炭酸ガス
を含む空気を通気して10時間の培養を行った。光合成に
よる培養を終了したクロレラは、遠心分離によって濃
縮、水洗いした後、凍結乾燥し、脂肪酸分析を行った。
ター培養終了時のクロレラ懸濁液1Lを加え、白色蛍光灯
にて約10000ルクスの照射を行い、30℃、2％の炭酸ガス
を含む空気を通気して10時間の培養を行った。光合成に
よる培養を終了したクロレラは、遠心分離によって濃
縮、水洗いした後、凍結乾燥し、脂肪酸分析を行った。
【００４０】以下の表１に、従属栄養的な培養後のクロ
レラの脂肪酸を分析した結果と、光合成による培養後の
クロレラの脂肪酸を分析した結果を示す。
レラの脂肪酸を分析した結果と、光合成による培養後の
クロレラの脂肪酸を分析した結果を示す。
【００４１】
【表１】
【００４２】上記表１の結果から明らかなように、従属
栄養的な培養の終了時では、3.2重量％であった複合脂
質中のＤＨＡの含量が、光合成による培養を行うことに
よって14.6重量％と、４倍以上に増加した。また、同様
にＤＰＡについても、従属栄養的な培養の終了時では0.
6重量％であったものが、光合成による培養を行うこと
によって、2.9重量％と４倍以上に増加した。
栄養的な培養の終了時では、3.2重量％であった複合脂
質中のＤＨＡの含量が、光合成による培養を行うことに
よって14.6重量％と、４倍以上に増加した。また、同様
にＤＰＡについても、従属栄養的な培養の終了時では0.
6重量％であったものが、光合成による培養を行うこと
によって、2.9重量％と４倍以上に増加した。
【００４３】この理由は定かではないが、従属栄養的な
培養後に光合成による培養を行うことによって、クロレ
ラ細胞に取り込まれた高度不飽和脂肪酸は従属栄養培養
時に中性脂質に変換され、その後の光合成培養時に光合
成によるクロレラの代謝能によって複合脂質に効率良く
移行したものではないかと思われる。
培養後に光合成による培養を行うことによって、クロレ
ラ細胞に取り込まれた高度不飽和脂肪酸は従属栄養培養
時に中性脂質に変換され、その後の光合成培養時に光合
成によるクロレラの代謝能によって複合脂質に効率良く
移行したものではないかと思われる。
【００４４】[実施例２] 大型ジャーファメンターと屋
外プールを用いたクロレラの大量培養 （従属栄養培養）まず、容量が12000Lのジャーファメン
ターを用いて、クロレラ（Chlorella vulgaris C-30,
東大IAMより入手）の従属栄養培養を行った。培地は、
水道水1L当たり、グルコース20g、尿素1.5g、リン酸一
カリウム1.2g、硫酸マグネシウム0.6、EDTA-Na-Fe 0.01
5g/L、微量金属 A５溶液2mL/Lを添加したものを用い
た。培養は、上記培養液8000L中にクロレラ16×10１３
細胞を加え、温度30℃において通気攪拌培養を行った。
外プールを用いたクロレラの大量培養 （従属栄養培養）まず、容量が12000Lのジャーファメン
ターを用いて、クロレラ（Chlorella vulgaris C-30,
東大IAMより入手）の従属栄養培養を行った。培地は、
水道水1L当たり、グルコース20g、尿素1.5g、リン酸一
カリウム1.2g、硫酸マグネシウム0.6、EDTA-Na-Fe 0.01
5g/L、微量金属 A５溶液2mL/Lを添加したものを用い
た。培養は、上記培養液8000L中にクロレラ16×10１３
細胞を加え、温度30℃において通気攪拌培養を行った。
【００４５】高度不飽和脂肪酸として、ＤＨＡ及びＤＰ
Ａを濃縮した遊離形態の脂肪酸（総脂肪酸に占めるＤＨ
Ａの割合が60重量％、同じくＤＰＡの割合が20重量％）
を用いた。クロレラの対数増殖期後期に、上記した高度
不飽和脂肪酸を培養液1L当たり0.5mL添加し、更に24時
間の培養を行った。培養を終了したクロレラは、遠心分
離によって濃縮、水洗いした。そして、水洗いしたクロ
レラの一部を凍結乾燥し、脂肪酸分析を行った。
Ａを濃縮した遊離形態の脂肪酸（総脂肪酸に占めるＤＨ
Ａの割合が60重量％、同じくＤＰＡの割合が20重量％）
を用いた。クロレラの対数増殖期後期に、上記した高度
不飽和脂肪酸を培養液1L当たり0.5mL添加し、更に24時
間の培養を行った。培養を終了したクロレラは、遠心分
離によって濃縮、水洗いした。そして、水洗いしたクロ
レラの一部を凍結乾燥し、脂肪酸分析を行った。
【００４６】（光合成培養）上記した従属栄養培養を終
え、遠心分離によって濃縮、水洗いしたクロレラを、屋
外培養プールを用いて、引き続き光合成により培養し
た。
え、遠心分離によって濃縮、水洗いしたクロレラを、屋
外培養プールを用いて、引き続き光合成により培養し
た。
【００４７】培地は、水道水1L当たり、尿素1.5g、リン
酸一カリウム1.2g、硫酸マグネシウム0.6g、EDTA-Na-Fe
0.015g、微量金属 A5溶液2mLを添加したものを用い
た。
酸一カリウム1.2g、硫酸マグネシウム0.6g、EDTA-Na-Fe
0.015g、微量金属 A5溶液2mLを添加したものを用い
た。
【００４８】培養は、屋外培養プール（直径20m、培養
液深10cm、培養液量30000L）において、ジャーファメン
ターで培養したクロレラ全量を加え、太陽光による照射
の下、日中のみｐＨの上昇に合わせて酢酸を添加して行
った。培養温度は18〜27℃であった。培養１日目及び培
養２日目終了時のクロレラを遠心分離によって濃縮、水
洗いした後、凍結乾燥し、脂肪酸分析を行った。
液深10cm、培養液量30000L）において、ジャーファメン
ターで培養したクロレラ全量を加え、太陽光による照射
の下、日中のみｐＨの上昇に合わせて酢酸を添加して行
った。培養温度は18〜27℃であった。培養１日目及び培
養２日目終了時のクロレラを遠心分離によって濃縮、水
洗いした後、凍結乾燥し、脂肪酸分析を行った。
【００４９】以下の表２に、従属栄養的な培養後のクロ
レラの脂肪酸を分析した結果と、光合成による培養後の
クロレラの脂肪酸を分析した結果を示す。
レラの脂肪酸を分析した結果と、光合成による培養後の
クロレラの脂肪酸を分析した結果を示す。
【００５０】
【表２】
【００５１】上記表２の結果から明らかなように、従属
栄養的な培養の終了時では、3.3重量％であった複合脂
質中のＤＨＡの含量が、光合成による培養の終了時で
は、14.6重量％と、４倍以上に増加した。また、同様に
ＤＰＡについても、従属栄養的な培養の終了時では0.7
重量％であったものが、光合成による培養を行うことに
よって、2.9重量％と４倍以上に増加した。
栄養的な培養の終了時では、3.3重量％であった複合脂
質中のＤＨＡの含量が、光合成による培養の終了時で
は、14.6重量％と、４倍以上に増加した。また、同様に
ＤＰＡについても、従属栄養的な培養の終了時では0.7
重量％であったものが、光合成による培養を行うことに
よって、2.9重量％と４倍以上に増加した。
【００５２】なお、本明細書で使用している用語と表現
はあくまで説明上のものであって、限定的なものではな
く、上記用語、表現と等価の用語、表現を除外するもの
ではない。
はあくまで説明上のものであって、限定的なものではな
く、上記用語、表現と等価の用語、表現を除外するもの
ではない。
【００５３】
【発明の効果】（ａ）本発明に係るクロレラの製造方法
によれば、高度不飽和脂肪酸化合物を添加した培養液中
で従属栄養的にクロレラを培養した後、次いで光合成に
よって培養することにより、高度不飽和脂肪酸を複合脂
質の形態でより多くクロレラ細胞内に蓄積させたクロレ
ラを製造することができる。
によれば、高度不飽和脂肪酸化合物を添加した培養液中
で従属栄養的にクロレラを培養した後、次いで光合成に
よって培養することにより、高度不飽和脂肪酸を複合脂
質の形態でより多くクロレラ細胞内に蓄積させたクロレ
ラを製造することができる。
【００５４】（ｂ）本発明に係るクロレラの製造方法に
よって得られたクロレラから高度不飽和脂肪酸を含有す
る複合脂質を抽出し、更に精製することによって、クロ
レラ由来の抽出脂質、精製複合脂質、精製糖脂質、精製
リン脂質などとして食品や医薬品への利用が可能であ
る。
よって得られたクロレラから高度不飽和脂肪酸を含有す
る複合脂質を抽出し、更に精製することによって、クロ
レラ由来の抽出脂質、精製複合脂質、精製糖脂質、精製
リン脂質などとして食品や医薬品への利用が可能であ
る。
【００５５】（ｃ）本発明に係るクロレラの製造方法に
よって得られたクロレラを食品または食品添加物として
用いることにより、高度不飽和脂肪酸を高濃度に摂取す
ることができる。更にクロレラは、それ自体がクロレラ
エキス、タンパク質、ビタミン、ミネラル、食物繊維、
葉緑素等の有効性分を含有しているので、これら有効性
分を同時に摂取することもできる。
よって得られたクロレラを食品または食品添加物として
用いることにより、高度不飽和脂肪酸を高濃度に摂取す
ることができる。更にクロレラは、それ自体がクロレラ
エキス、タンパク質、ビタミン、ミネラル、食物繊維、
葉緑素等の有効性分を含有しているので、これら有効性
分を同時に摂取することもできる。
【００５６】（ｄ）本発明に係るクロレラの製造方法に
よって得られたクロレラを食品添加物として用いると、
油脂を添加しにくい食品に対しても高濃度に高度不飽和
脂肪酸を添加することができ、更に添加される食品に緑
の色付けを行うこともできる。
よって得られたクロレラを食品添加物として用いると、
油脂を添加しにくい食品に対しても高濃度に高度不飽和
脂肪酸を添加することができ、更に添加される食品に緑
の色付けを行うこともできる。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｐ 19/44 Ｃ１２Ｐ 19/44 //(Ｃ１２Ｎ 1/12 (Ｃ１２Ｎ 1/12 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:89） Ｃ１２Ｒ 1:89） (Ｃ１２Ｐ 9/00 (Ｃ１２Ｐ 9/00 Ｃ１２Ｒ 1:89） Ｃ１２Ｒ 1:89） (Ｃ１２Ｐ 19/44 (Ｃ１２Ｐ 19/44 Ｃ１２Ｒ 1:89） Ｃ１２Ｒ 1:89） (72)発明者 城戸 澄子 福岡県筑後市熊野1053−３ (72)発明者 安藤 洋太郎 愛知県春日井市下屋敷町61 (72)発明者 林 雅弘 宮崎県宮崎郡佐土原町下田島9246−９ Ｆターム(参考） 4B018 LB10 MD11 MD12 MD14 MD42 MD45 MD89 ME04 ME14 MF01 MF14 4B064 AE63 AF41 CA08 CC03 CC04 CC30 CD05 CD07 DA06 DA10 4B065 AA84X BB08 BB09 BC13 BC50 CA14 CA19 CA41 CA44 4H059 BA35 BA83 BB04 BB05 BB06 BB15 BB22 BB45 CA11
Claims (5)
- 【請求項１】 高度不飽和脂肪酸化合物を添加した培養
液中で従属栄養的にクロレラを培養する工程と、 従属栄養的に培養した上記クロレラを光合成によって培
養する工程と、を含むことを特徴とする、 クロレラの製造方法。 - 【請求項２】 請求項１記載の方法で得られたクロレラ
から抽出したことを特徴とする、 高度不飽和脂肪酸を含有する複合脂質。 - 【請求項３】 請求項１記載の方法で得られたクロレラ
から高度不飽和脂肪酸を含有する複合脂質を抽出し、当
該複合脂質から分離精製したことを特徴とする、 リン脂質または糖脂質。 - 【請求項４】 請求項１記載の方法で得られたクロレラ
を含有することを特徴とする、 食品。 - 【請求項５】 請求項１記載の方法で得られたクロレラ
を含有することを特徴とする、 食品添加物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001039090A JP2002238545A (ja) | 2001-02-15 | 2001-02-15 | クロレラの製造方法及びその製造方法によって得られた高度不飽和脂肪酸を含有する複合脂質、リン脂質または糖脂質、食品、食品添加物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001039090A JP2002238545A (ja) | 2001-02-15 | 2001-02-15 | クロレラの製造方法及びその製造方法によって得られた高度不飽和脂肪酸を含有する複合脂質、リン脂質または糖脂質、食品、食品添加物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002238545A true JP2002238545A (ja) | 2002-08-27 |
Family
ID=18901954
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001039090A Pending JP2002238545A (ja) | 2001-02-15 | 2001-02-15 | クロレラの製造方法及びその製造方法によって得られた高度不飽和脂肪酸を含有する複合脂質、リン脂質または糖脂質、食品、食品添加物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002238545A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009060807A (ja) * | 2007-09-04 | 2009-03-26 | Kurorera Kogyo Kk | 新規クロレラ及びその製造方法並びにそのクロレラを含有する健康食品 |
| CN103535824A (zh) * | 2013-09-29 | 2014-01-29 | 新疆叶希丽生物科技有限公司 | 纯天然沙漠绿藻饮液及其制备方法 |
| CN104356172A (zh) * | 2014-10-16 | 2015-02-18 | 广州海莎生物科技有限公司 | 一种糖脂分离纯化的方法 |
| JP2016501518A (ja) * | 2012-11-09 | 2016-01-21 | ヘリアエ デベロップメント、 エルエルシー | 非純粋培養混合栄養条件下で微生物を培養する方法 |
| JP2018126167A (ja) * | 2008-10-14 | 2018-08-16 | テラヴィア ホールディングス， インコーポレイテッド | 微細藻類バイオマスの食物組成物 |
| CN109628315A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-04-16 | 天津大学 | 一种培养小球藻并提升其生物量和油脂产率的方法 |
| CN114164116A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-03-11 | 海南大学 | 一种小球藻的培养方法 |
-
2001
- 2001-02-15 JP JP2001039090A patent/JP2002238545A/ja active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009060807A (ja) * | 2007-09-04 | 2009-03-26 | Kurorera Kogyo Kk | 新規クロレラ及びその製造方法並びにそのクロレラを含有する健康食品 |
| JP4642050B2 (ja) * | 2007-09-04 | 2011-03-02 | クロレラ工業株式会社 | 新規クロレラ及びその製造方法並びにそのクロレラを含有する健康食品 |
| JP2018126167A (ja) * | 2008-10-14 | 2018-08-16 | テラヴィア ホールディングス， インコーポレイテッド | 微細藻類バイオマスの食物組成物 |
| JP2016501518A (ja) * | 2012-11-09 | 2016-01-21 | ヘリアエ デベロップメント、 エルエルシー | 非純粋培養混合栄養条件下で微生物を培養する方法 |
| CN103535824A (zh) * | 2013-09-29 | 2014-01-29 | 新疆叶希丽生物科技有限公司 | 纯天然沙漠绿藻饮液及其制备方法 |
| CN104356172A (zh) * | 2014-10-16 | 2015-02-18 | 广州海莎生物科技有限公司 | 一种糖脂分离纯化的方法 |
| CN109628315A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-04-16 | 天津大学 | 一种培养小球藻并提升其生物量和油脂产率的方法 |
| CN114164116A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-03-11 | 海南大学 | 一种小球藻的培养方法 |
| CN114164116B (zh) * | 2021-12-15 | 2023-10-24 | 海南大学 | 一种小球藻的培养方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lebeau et al. | Diatom cultivation and biotechnologically relevant products. Part II: Current and putative products | |
| US8603488B2 (en) | Photoautotrophic growth of microalgae for omega-3 fatty acid production | |
| ES2362476T3 (es) | Proceso para preparar ácido docosahexanoico y ácido docosapentanoico. | |
| JP5096656B2 (ja) | 水生生物給餌用の海洋脂質組成物 | |
| JP2002125601A (ja) | 動物性プランクトン用餌料とその製造方法及び動物性プランクトンの培養方法 | |
| JP5899115B2 (ja) | ラウリン酸含有油脂の製造方法 | |
| AU2013295436A1 (en) | Method using micro-algae for high-efficiency production of astaxanthin | |
| JP2001149087A (ja) | ω−３高度不飽和脂肪酸を高濃度で含む微生物産物のヘテロトロピックな製造方法 | |
| JP2003304894A (ja) | ドコサヘキサエン酸およびドコサヘキサエン酸を含む化合物 | |
| Iba et al. | Microalgae in eastern pacific white shrimp, Litopenaeus vannamei (Boone 1931) hatcheries: a review on roles and culture environments | |
| CN102094061B (zh) | 一种利用微藻生产叶黄素的方法 | |
| Grubišić et al. | Potential of microalgae for the production of different biotechnological products | |
| FR2768744A1 (fr) | Procede de culture mixotrophique de spirulines pour la production d'une biomasse riche en acides gras polyinsatures omega 6 et/ou en sulfolipides | |
| Ishida et al. | A highly CO2-tolerant diatom, Thalassiosira weissflogii H1, enriched from coastal sea, and its fatty acid composition | |
| JP2002238545A (ja) | クロレラの製造方法及びその製造方法によって得られた高度不飽和脂肪酸を含有する複合脂質、リン脂質または糖脂質、食品、食品添加物 | |
| EP2040567B1 (en) | Zygomycetes for fish feed | |
| CN108431203B (zh) | 使原生生物富集富含多不饱和脂肪酸，更特别地ω3类别的多不饱和脂肪酸的脂质的方法，以及用于产生这些脂质的其实施 | |
| JP3096654B2 (ja) | 高度不飽和脂肪酸含有クロレラの製造方法 | |
| JP3302123B2 (ja) | 動物性プランクトン培養用飼料 | |
| JPH11290094A (ja) | アスタキサンチン脂肪酸エステルの製造方法 | |
| JPH06105659A (ja) | 動物性プランクトン用飼料、該飼料に用いられる鞭毛藻類の培養方法並びにｄｈａ高含有オイルの製造方法 | |
| JPH07147907A (ja) | 稚魚用生物飼料およびその製造方法 | |
| CN108587913A (zh) | 一种具有高ala含量的栅藻、其培养方法及其应用 | |
| JP4249828B2 (ja) | ビタミンｅ、カロチノイド、脂肪酸化合物を強化されたクロレラの製造方法 | |
| JPH04346760A (ja) | 動物性プランクトン用飼料 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20040210 |