CN104313095A - 一种活性肽组合物、其制备方法和包含其的胶囊 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种活性肽组合物、其制备方法和包含其的胶囊。所述方法包括用蛋白酶和木瓜蛋白酶将乳清蛋白、大豆蛋白、牛奶和鸡蛋酶解而获得所述活性肽组合物，其，大豆蛋白、乳清蛋白、鸡蛋和牛奶的比例为40～75重量份：5～30重量份：5～25重量份：10～35重量份，优选为50～65重量份：5～20：5～15重量份：15～25重量份，最优选为55重量份:15重量份:10重量份:20重量份，其中鸡蛋和牛奶以干物质计。本发明活性肽组合物，有利于机体的迅速吸收，提供能量供应，促进机体蛋白质合成和肌肉增长，清除体内自由基，提高机体抗氧化性，增强机体免疫能力和延缓疲劳。

Description

一种活性肽组合物、其制备方法和包含其的胶囊

技术领域

本发明涉及一种活性肽组合物、其制备方法和包含其的胶囊，属于医疗保健领域。 

背景技术

现代营养学研究发现，人类摄食蛋白质经消化道的酶作用后，大多以低肽形式被吸收，以游离氨基酸形式吸收的比例很小。进一步的试验证实了肽比游离氨基酸消化更快、吸收更多，表明肽的生物效价和营养价值比游离氨基酸更高，这也正是活性肽的无穷魅力所在，而活性肽在我国的研究与开发还未起步。 

生物活性肽是蛋白质中20个氨基酸,以不同组成和排列方式构成的二肽到复杂的线形和环形的不同肽类的总称。活性肽具有多种人体代谢和生理调节功能,易消化吸收,有调节免疫、平衡激素、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等作用，食用安全性极高，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。 

活性肽可按原料来源及保健功能分类，如乳肽、大豆肽、玉米肽、豌豆肽、卵白肽、畜产肽、水产肽、丝蛋白肽等；按功能分类有抗菌肽、抑制胆固醇作用肽、促进矿物质吸收肽、促消化吸收肽等。 

CN101801209A提供了一种用于生成乳清蛋白水解物的方法，包括：a)提供包含β-乳球蛋白和α-乳清蛋白的乳清蛋白的水性组合物；b)使所述组合物受到在精氨酸或赖氨酸的羧基端一侧进行特异性切割的微生物内肽酶的作用；c)使所述内肽酶失活。 

CN102178028A提供了一种大豆肽生产方法，是以发酵豆粕为原料，再利用动物源性的蛋白酶生产大豆多肽的一种生产方法，包括：1)液体酶解：将发酵豆粕与水按重量比为1:4－8混合，加入胰蛋白酶，保温酶解；2)高温灭酶；3)过滤：将酶解液过滤分离得到大豆蛋白粗品；4)脱色除味；5)精炼；6)喷雾干燥，灭菌制成成品。 

但是，目前，大部分研究往往集中在单一来源的活性肽的研究，如动物蛋白来源的活性肽和植物蛋白来源的活性肽。但是，动物蛋白来源的肽往往含过量饱和脂肪、 胆固醇，长期进食后，易使人血管粥样硬化、血压升高、诱发脑溢血和心肌梗塞等疾病。而植物蛋白来源的肽其所含氨基酸种类和相对数量与人体的要求有一定差距，缺乏免疫球蛋白，吸收要比动物蛋白的吸收相对来说要困难一些。 

因此，目前迫切需要一种结合二者优点，同时避免二者缺点的产品，以显著提高的蛋白质的营养价值。 

发明内容

本发明提供了满足上述要求的活性肽组合物，其具有良好的增强机体免疫力和抗疲劳作用，适合于免疫功能低下者和运动员，特别是运动员在专业运动训练的长期过程。 

本发明的一个目的在于提供一种活性肽组合物的制备方法，所述方法包括用蛋白酶和木瓜蛋白酶将乳清蛋白、大豆蛋白、牛奶和鸡蛋酶解而获得所述活性肽组合物，其中，大豆蛋白、乳清蛋白、鸡蛋和牛奶的比例为40～75重量份：5～30重量份：5～25重量份：10～35重量份，优选为50～65重量份：5～20：5～15重量份：15～25重量份，最优选为55重量份:15重量份:10重量份:20重量份，其中鸡蛋和牛奶以干物质计。 

本发明的另一目的在于提供一种活性肽组合物，所述活性肽组合物通过上述方法制备。 

本发明的又一目的在于提供一种胶囊，所述胶囊包括上述活性肽组合物。 

有益效果 

现有的生物活性肽原料主要采用单一的乳源蛋白、大豆蛋白、乳清蛋白等。由于各种蛋白源均有各自特有的结构组成，所形成多肽结构相对比较单一，功能也相对较为简单，而本发明以多种蛋白作为原料，经酶解后所形成的多肽结构组成有较大的不均一性。由于结构不同，所发挥的生物活性功能也呈现多样化。 

另外，由于蛋白酶和木瓜蛋白酶等复合酶对蛋白底物的酶解位点不同，所产生的多肽分子大小、组成、结构均不同，其生物活性功能也呈现多样化。 

此外，由于各种酶的作用时间、温度、酶解位点不同，采用复合酶处理工艺，产品的组成结构多样化，生物活性功能也更趋完善。 

经验证，通过本发明方法制备的活性肽组合物，有利于机体的迅速吸收，提供能 量供应，促进机体蛋白质合成和肌肉增长，清除体内自由基，提高机体抗氧化性，增强机体免疫能力和延缓疲劳，适合于免疫功能低下者和运动员，特别是运动员在专业运动训练的长期过程。 

此外，如果将本发明的活性肽组合物进一步冷冻干燥，得到干粉，可以无需添加任何赋形剂即可制成胶囊，从而减少了工艺步骤，降低了成本。 

附图说明

图1：不同蛋白原料的配比的水解曲线。 

图2：原料酶解前后凝胶电泳结果对比，其中泳道1为酶解前样品1，泳道2为样品1酶解后，泳道3为酶解前样品2，泳道4为样品2酶解后，泳道5为蛋白标记。 

具体实施方式

本发明人对生物活性肽的进行了多年研究，致力于发现一种能够兼具动物蛋白源肽和植物源肽优点的活性肽。但是，如果仅仅将乳清蛋白、大豆蛋白混合进行酶解，发现产生了不同程度的豆腥味和苦涩味。据推测，豆腥味可能来源于大豆中的脂肪氧化酶氧化大豆不饱和脂肪酸后生成的多种低分子醇、醛和酮等挥发性成份，而苦涩味可能来源于低分子苦味肽。如果要除去豆腥味和苦涩味，需要额外的工艺，从而增加了成本，还降低了产率。发明人经过进一步研究，发现如果在乳清蛋白和大豆蛋白的混合物中加入合适量的牛奶和鸡蛋进行酶解，可消除上述豆腥味和苦涩味，从而形成了本发明。 

以下对本发明进行详细描述 

1.活性肽组合物的制备方法 

本发明的活性肽组合物通过用蛋白酶和木瓜蛋白酶将乳清蛋白、大豆蛋白、牛奶和鸡蛋酶解而制备。 

乳清蛋白 

乳清蛋白主要由α-乳球蛋白、β-乳白蛋白、牛血清蛋白、免疫球蛋白组成，此外还含有一些具有生物活性的微量成分，包括乳铁蛋白、乳过氧化物酶、溶菌酶、酪蛋白巨肽、脂肪球膜蛋白、生长因子等。正是这些成分提供了乳清蛋白卓越的价值。乳清蛋白可促消化吸收，促双歧杆菌增殖，抗病原菌感染。 

大豆蛋白 

大豆蛋白含有大量生理活性物质，包括有低聚糖类、磷脂、维生素类、异黄酮、大豆皂苷等。大豆蛋白具有促消化吸收，降胆固醇，降血压，增强免疫，抗肥胖，降血糖，抗氧化，抗疲劳，抗过敏，促进微生物发育等优良的生理功能。 

鸡蛋 

鸡蛋具有促消化吸收，抗氧化，抗过敏等优良的生理功能。 

牛奶 

牛奶中的酪蛋白含有10％的磷，对促进幼儿的大脑发育起至关重要的作用。牛奶中含有钾使动脉血管壁在血奔流高时保持稳定，使中风危险减少一半。牛奶可以阻止人体吸收食物中有毒的金属铅和铬，具有轻度的解毒功能。牛奶中含有将近5％的乳糖，可促进人体对钙和铁的吸收，增强肠蠕动，促进排泄。 

蛋白酶 

主要来源于枯草芽孢杆菌，酶切位点比较广。最适pH为7.0-7.5，最适作用温度为45-60℃。 

木瓜蛋白酶 

主要来源于木瓜提取物，主要特异性的水解多肽、酰胺及酯中连接碱性氨基酸Leu、Gly的链，最适pH为5.0-7.5，最适作用温度为60-75℃。 

本发明的制备方法中，大豆蛋白、乳清蛋白、鸡蛋和牛奶的比例为40～75重量份：5～30重量份：5～25重量份：10～35重量份，优选为50～65重量份：5～20：5～15重量份：15～25重量份，最优选为55重量份:15重量份:10重量份:20重量份，需要指出的是鸡蛋和牛奶以干物质计。通常，鸡蛋中的干物质占鸡蛋重量的25％，牛奶中的干物质占牛奶重量的10％。如果大豆蛋白的添加比例过高，则酶解产物中不可避免地带有豆腥味和苦涩味，如果大豆蛋白的添加比例过低，则达不到植物蛋白活性肽与动物蛋白活性肽的良好平衡。反之，如果牛奶和鸡蛋的添加比例过高，会导致大豆蛋白的添加比例降低，如果牛奶和鸡蛋的添加比例过低，将无法消除酶解产物的豆腥味和苦涩味。 

基于所述乳清蛋白、大豆蛋白、牛奶和鸡蛋的总重量，蛋白酶和木瓜蛋白酶的加入总量为0.5～2重量％，优选1重量％。如果蛋白酶和木瓜蛋白酶的加入总量过低，反应时间变长，无法充分酶解；如果总量过高，则容易造成过度酶解，而且增加总体 成本。 

在蛋白酶和木瓜蛋白酶中，蛋白酶和木瓜蛋白酶的比例为80％～60％:40％～20％，优选为75％～65％:35％～25％，最优选为70％:30％。蛋白酶是生物体内的一类酵素酶，它们能够分解蛋白质。分解方法是打断那些将氨基酸连结成多肽链的肽键。如果蛋白酶的比例过低会延长反应时间并且导致水解蛋白质不彻底，反之会过度酶解。 

以下给出本发明方法的一个具体实施方式，但这并不意图将本发明限定为该具体实施方式。 

将大豆蛋白和乳清蛋白按比例混匀，以以1:5～1:6，优选1：5的比例加水浸泡20～30min，优选20min后加牛奶、鸡蛋搅拌均匀，在70℃～80℃，优选80℃保温1h～1.5h，优选1h，降温至60℃～70℃，优选55℃，调节pH至6.0～7.5，优选7，加入所述蛋白酶和木瓜蛋白酶，酶解5h～6h，优选5h，得到酶解产物。 

为了便于长期贮存，减少环境对本发明的活性肽组合物的活性的影响，本发明的方法还优选包括将所述酶解产物进一步进行冷冻干燥，得到干粉。冷冻干燥可以最大程度地减少工艺对活性的影响，避免恒温干燥、真空干燥、喷雾干燥等方法造成产品氧化，从而使产品颜色变深。 

本发明的最优选产品为胶囊形式，其可以通过将上述干粉直接填充为胶囊即可制备。这是因为上述干粉的流动性、飞散性、黏附性良好，粉末颗粒形状大小均匀、外形美观，制得的胶囊的崩解性、溶解性也良好。由于无需添加赋形剂，因此减少了工艺步骤，也节省了成本。 

经测定，本发明的活性肽组合物中分子量5000D以下的小分子多肽的重量比为90％以上，并且分子量3000D以下的小分子多肽的重量比为40％以上。因此，非常有利于机体的迅速吸收，提供能量供应，促进机体蛋白质合成和肌肉增长。 

此外，还发现本发明的活性肽组合物能够清除体内自由基，提高机体抗氧化性，增强机体免疫能力和延缓疲劳，适合于免疫功能低下者和运动员，特别是运动员在专业运动训练的长期过程。 

为了更好的理解本发明，下面借助于实施例对本发明进一步说明。但本发明绝不限于所述实施例 

实施例1 

1、原、辅料的鉴别、鉴定 

乳清蛋白来源于深圳市标青健美用品有限公司(蛋白含量为80％以上)，本品符合GB11674-2005标准。 

大豆蛋白来源于上海深远食品(集团)有限公司(蛋白含量为80％以上)，本品符合企业标准附录B.2标准。 

鸡蛋来源于市售无公害鸡蛋，本品符合GB2748-2003标准。 

牛奶来源于西安现代农业综合开发总公司畜牧开发公司，本品符合GB19301-2003标准。 

蛋白酶来源于广西南宁庞博生物工程有限公司，本品符合(FCC，Ⅳ)标准，其来源于枯草芽孢杆菌。 

木瓜蛋白酶来源于广西南宁庞博生物工程有限公司，本品符合(DX440000×413--1987)标准。 

2、助剂及质量等级 

药用明胶硬胶囊，符合中华人民共和国国标GB13731-2000《药用明胶硬胶囊》的要求。 

3、投料名称及投料量见表1： 

表1 投料明细表 

大豆蛋白	乳清蛋白	牛奶	鸡蛋	蛋白酶	木瓜蛋白酶
						8.25(kg)	2.25(kg)	3.0(kg)	1.5(kg)	105(g)	45(g)

4、酶解 

酶解设备：陕西三原美乐昌泰公司通用机械厂产DJG-C型反应釜。 

将大豆蛋白和乳清蛋白按比例混匀，以1：5的比例加水浸泡20min后加牛奶、鸡蛋搅拌均匀，80℃保温1h，降温至55℃加酶酶解5h(加入1重量％的酶，pH7.0)，得到酶解产物，进入下一步工艺。 

其中蛋白原料比例(大豆蛋白：乳清蛋白：鸡蛋：牛奶)＝55重量份:15重量份:10重量份:20重量份；酶比例(蛋白酶：木瓜蛋白酶)＝70％:30％。其中鸡蛋和牛奶以干物质计，并且鸡蛋干物质按25％计，牛奶干物质按10％计。 

5、干燥 

干燥：采用真空冷冻干燥法 

设备：上海长江制冷公司产J-300D型冷冻干燥机 

操作方法：冷冻室温度-30℃，加热板温度为45℃，压力为3.99×10-3Pa，冷冻干燥时间为24小时，产品水份低于5％。 

6、成型工艺 

设备：TJF1300胶囊分装机(哈飞) 

PG7000胶囊抛光机(朝阳天亿制药厂) 

将冷冻干燥的多肽粉移至中转站贮存，分装成胶囊，检验，包装，入库。 

胶囊重量、数量及日服量： 

日服量：每日2次，每次2粒，0.3g/粒，12粒/板。 

7、生产环境、灭菌方法 

本品在30万级洁净度生产车间生产；灭菌方法采用60Co辐照灭菌法(3KG_y)。 

8、包装 

本品包装符合食品容器及包装材料的卫生标准的规定或药品包装的相关要求。 

直接接触药品的包装材料和容器的选择情况： 

根据本发明的生物活性肽胶囊的剂型、性质、经济性、贮存方便及美观实用等原则，按照国家药品监督管理局国药管注[2000]519号文件精神，对本品的内包材进行了比较选择，确定以聚氯乙烯固体药用硬片为其内包材料。 

内包装：聚氯乙烯固体药用硬片分装，其上应有品名、规格、产品批号、企业名称、用法用量等内容。 

中包装：彩色印刷纸盒，其上应有品名、成分、功能主治、用法用量、规格、贮藏、产品批号、生产日期、有效期、注册商标、批准文号、企业名称、地址、电话等内容。 

外包装：采用优质瓦楞纸作为外包装箱。箱表面涂有防雨油墨。并注明防雨、防潮、防热等贮藏运输标志及品名、批准文号、注册商标、规格、数量、重量、生产日期、产品批号、有效期、企业名称、地址、电话等内容。 

9、产品检验、入库 

按企业标准方法进行检验，按每批次产品的1％随机抽取样品，但最低不少于10个小包装，检验合格后方可入库。 

实施例2 

以大豆蛋白165g、乳清蛋白45g、牛奶60g、鸡蛋30g、蛋白酶2.1g、木瓜蛋白酶0.9g为原料以与实施例1相同的方法，使用制成1000粒胶囊，内容物含量为0.3 g/粒。 

实施例3～10 

以与实施例1相同的方法进行实施例3-10，其中原料配比如表2所示，表2中的单位为质量份，其中鸡蛋和牛奶以干物质计，并且鸡蛋干物质按25％计，牛奶干物质按10％计。 

表2 

实施例11 

该实施例描述了本发明功效成分的确定 

A.1 多肽含量测定 

A.1.1 仪器 

美国联合碳化公司3000D的透析袋 

美国联合碳化公司5000D的透析袋 

A.1.2 测定方法 

采用美国联合碳化公司3000D的透析袋，取各批次样品分别处理后4℃透析24小时。美国Beckman公司CX3生化自动分析仪分析透析前后及透出液中的蛋白质含量。由透析前蛋白含量与透出液中的蛋白含量相比,求出分子量在3000D以下的多肽 总含量。 

采用美国联合碳化公司5000D的透析袋，取各批次样品分别处理后4℃透析24小时。美国Beckman公司CX3生化自动分析仪分析透析前后及透出液中的蛋白质含量。由透析前蛋白含量与透出液中的蛋白含量相比,求出分子量在5000D以下的多肽总含量。 

A.2 多肽分子量分布检测 

A.2.1 仪器 

美国Beckman公司CX3生化自动分析仪 

美国Bio-Rad公司凝胶图像分析仪Del Doc2000 

日本岛津集团公司基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪AXIMA-CFR TM plus 

美国BIO-RAD公司微型电泳仪 

A.2.2 试剂 

考马斯亮兰R250染液。 

乙醇：分析纯。 

A.2.3 测定方法 

A.2.3.1 SDS-PAGE凝胶电泳法 

取各批次样品，沸水浴5分钟。经SDS-PAGE凝胶电泳3-4小时，考马斯亮兰R250染色2-3小时，脱色直到背景清晰，7％乙醇固定。电泳完成后由美国Bio-Rad公司凝胶图像分析仪Del Doc2000扫描分析。 

A.2.3.2 质谱法 

采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪AXIMA-CFR TM plus测定各批次多肽的分子量分布状况，图谱显示按Mass/charge范围分为以下3种：100～1000，500～3000，1000～10000。 

以下是对实施例1～3的产品进行检测的结果 

表3 三批弭阳活性肽胶囊样品测定结果 

实施例12 

生产工艺优化筛选 

根据活性肽的有效成分、理化性质，从剂型要求、生产可行性、安全性以及成本等方面入手，进行工艺路线的设计。 

1、不同蛋白原料的配比确定 

在蛋白酶：木瓜蛋白酶＝1:1、加酶量1％、pH7、温度50℃、水解作用时间5h的条件下，以底物蛋白水解度DH为指标，对不同蛋白原料的配比进行单因素分析，确定最佳原料配比。 

各蛋白原料的配比(以干物质计算)如下： 

原料配比1：大豆蛋白：乳清蛋白：鸡蛋：牛奶＝50％:20％:15％:15％； 

原料配比2：大豆蛋白：乳清蛋白：鸡蛋：牛奶＝55％:15％:10％:20％； 

原料配比3：大豆蛋白：乳清蛋白：鸡蛋：牛奶＝60％:10％:5％:25％； 

原料配比4：大豆蛋白：乳清蛋白：鸡蛋：牛奶＝65％:5％:5％:25％。 

最终确定最佳原料配比为原料配比2，即大豆蛋白：乳清蛋白：鸡蛋：牛奶＝55％:15％:10％:20％，见图1。 

2、酶解工艺条件确定结果 

在底物原料配比确定的条件下，以所选择的2种不同酶比例(蛋白酶：木瓜蛋白酶)，复合酶量、酶解温度、pH、酶解时间为试验因素，具体见表2。按L16(45)正交实验表(表3)进行配比组合，以制得的多肽产品水解度(DH)为指标，确定最佳工艺参数。 

表4 不同因素水平表L₁₆(4⁵) 

表5 酶作用效果正交试验与结果L₁₆(4⁵) 

直观分析结果： 

正交表某个因素极差越大，说明这个因素的水平改变对试验结果的影响越大，极差最大的那个因素，就是最主要的因素。 

因此，由正交试验结果可知，因素主次关系为B>C>E>D>A，即酶量对多肽产品水解度(DH)影响最大，其他的依次为温度、pH、酶解时间、酶配比。 

最优组合： 

以制得的多肽产品水解度(DH)为指标，最优组合为A2B2C2D2E2。 

即在以制取的多肽产品水解度(DH)为指标的情况下，最佳酶解工艺条件如下： 

酶配比(蛋白酶：木瓜蛋白酶＝70％/30％)， 

酶量([E]/[S]＝1％)，温度(55℃)，时间(5h)，pH(7.0)。 

3、产物酶解前后凝胶电泳分析 

原料酶解前及酶解后凝胶电泳图谱对照见图2。由图2可见，原料中大分子蛋白多数已被降解为分子量5000D以下的小分子多肽。 

4、最佳干燥工艺的确定 

采用英国lovibond色差仪(modelE)检测色度，测定红色、蓝色、黄色三者之和。数值越大，表示样品颜色越深。结果见表4。 

表6 四种不同干燥工艺对产品色度的影响 

恒温干燥和真空干燥方法，尽管设备简单，但产品色泽明显加深，操作劳动强度大，不易机械化操作，长时间高温对产品生物活性有较大的影响；喷粉干燥工艺操作简单、色泽适中，适合大规模工业化生产，但其产品生物活性会受到一定影响；冷冻干燥设备昂贵、生产成本较大，但产品生物学活性保存最好，优于其它干燥方法得到的产品，因而确定采用冷冻干燥作为产品的干燥工艺。 

工艺过程的质量控制措施 

为使本产品卫生学指标和质量指标达到企业标准的要求，我们采取以下措施： 

a生产环境设在洁净区：如制备胶囊用活性肽粉、胶囊填充均在30万级净化条件下进行；成品经辐照灭菌；b员工按药品生产管理规范要求进行生产操作，技术规范，能确保生产过程中无污染；c活性肽粉在加工过程中经冷冻真空干燥等处理，避免了活性肽有效成分的破坏和丢失。 

以上提供了生产环境、消毒、灭菌方法等的优选及依据；阐明了影响产品质量的关键环节及质量控制措施；提供相关的数据以说明产品质量的稳定性。 

中试数据 

按照工艺筛选结果，按照处方量放大50倍进行中试试验，试制中试产品三批， 批号：20041105、20041212、20041225，中试实验数据及中间参数见表5。 

表7 本发明的生物活性肽胶囊三批中试数据 

以上中试数据表明：本品工艺生产可行、质量稳定，且使用方便，利于贮存和运输。 

中试生产检验 

按企业标准方法进行检验，均符合规定，见表6。 

表8 三批样品中试生产自验结果 

实施例13 

本实验观察了实施例1的胶囊对水上运动员促进训练恢复和抗疲劳的作用。 

1 实验对象和方法 

1.1 实验原料 

实施例1的胶囊。 

1.2 实验对象 

皮艇、轻量级赛艇和皮划艇各类专业水上运动员20名,平均年龄24.24±1.00岁、身高174.33±4.42cm、体重66.90±5.47kg,运动等级为1.00±0.84级。受试者身体健康状况良好，无心血管系统和呼吸系统疾病，测试期间无运动系统损伤。 

1.3 实验设计 

将运动员随机分组:对照组和补肽组。实验共进行5周,每周训练7天,每天训练5～6小时,要求各组受试对象在5周大强度训练中的计划基本相同。实验期间,除正常饮食和服用胶囊外,受试者不使用其他营养保健品。 

1.4 实验时间 

40天 

1.5 实验地点 

陕西省水上运动中心 

1.6 血液生化指标测试 

实验前和实验后安静状态下各进行一次测试,肘静脉取血,一部分抗凝处理用于血象测试,另一部分制备血清,具体测试由陕西省体育运动科学研究所完成。 

1.6.1 蛋白质合成分解代谢评定指标的测试 

采用放射免疫法测定血睾酮(T),试剂盒购自天津DPC公司,使用仪器为BEC KMANGama5500型γ计数仪；使用日立7020型全自动生化分析仪测定尿素氮(BUN),试剂盒由上海荣盛公司提供。 

1.6.2 骨骼肌组织损伤评定指标的测试 

使用日立7020型全自动生化分析仪测定肌酸激酶(CK),试剂盒由上海荣盛公司提供。 

1.6.3 血象测试 

使用瑞典MEDONICCA530型全自动血细胞分析仪测试红细胞(RBC)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞比积(HCT)、血小板(PLT)、血色素(Hb)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)。 

1.7 素质指标和体能测试 

1.7.1 测试时间安排 

第1天上午测定运动员的最大力量；第2天上午测试3000m运动成绩；第3天上午测试10000m运动成绩。测试在陕西省体育水上运动中心进行。 

1.7.2 测试指标 

形态及素质指标:身高，体重，皮褶厚度(体脂)，最大力量，柔韧性，协调性 

测功仪专项运动测试指标:距离，成绩(时间)，血乳酸，心率，功率 

1.7.3 最大力量测试 

正式测试前进行20min充分准备活动，3人1小组。起始重量约为90％体重，可根据实际适当调整。能负重完成动作即增加重量，卧拉、卧推每次加5kg。接近最大时，每次加2kg。各项目测试间歇10-15min，充分拉伸。测试结束后充分拉伸。 

2 实验结果与分析 

2.1 生物活性肽对水上运动员训练期生化指标的影响 

2.1.1 生物活性肽对皮艇运动员训练期生化指标的影响 

由表1，表2和表3显示,与对照组相比，皮艇运动员实验组各血液生化指标有显 著性差异，血睾酮提高了近46.91％，血色素水平提高了近3.23％，而尿素氮下降达1.98％，同时肌酸激酶水平明显下降，下降达100.94％。 

表9 皮艇对照组生化指标对比 

表10 皮艇实验组生化指标对比 

表11 皮艇对照组与实验组生化指标对比 

分析： 

血睾酮：相对于皮艇对照组，皮艇实验组有大幅度提高，增幅达46.91％。 

血色素：相对于皮艇对照组，皮艇实验组有大幅度提高，增幅达3.23％。 

尿素氮：相对于皮艇对照组，皮艇实验组有大幅度降低，降幅达1.98％。 

肌酸激酶：相对于皮艇对照组，皮艇实验组有大幅度降低，降幅达100.94％ 

2.1.2 生物活性肽对划艇运动员训练期生化指标的影响 

由表4，表5和表6显示,与对照组相比，划艇运动员实验组各血液生化指标有显著性差异，提高了近75.81％，血色素水平提高了近8.23％，而尿素氮下降达6.25％， 同时肌酸激酶水平明显下降，下降达69.64％。 

表12 划艇对照组生化指标对比 

表13 划艇实验组生化指标对比 

表14 划艇对照组与实验组生化指标对比 

分析： 

血睾酮：相对于皮艇对照组，划艇实验组有大幅度提高，增幅达75.81％。 

血色素：相对于皮艇对照组，划艇实验组有大幅度提高，增幅达8.23％。 

尿素氮：相对于皮艇对照组，划艇实验组降幅为6.25％。 

肌酸激酶：相对于皮艇对照组，划艇实验组有大幅度降低，降幅达69.64％。 

2.1.3 生物活性肽对轻量级赛艇运动员训练期生化指标的影响 

由表7，表8和表9显示,与对照组相比，轻量级赛艇运动员实验组各血液生化指标有显著性差异，提高了近40.9％，血色素水平提高了近4.37％，而尿素氮明显下降,下降达22.43％，同时肌酸激酶水平也明显下降，下降达51.77％。 

表15 轻量级赛艇对照组生化指标对比 

表16 轻量级赛艇实验组生化指标对比 

表17 轻量级赛艇对照组与实验组生化指标对比 

分析： 

血睾酮：相对于皮艇对照组，赛艇实验组有大幅度提高，增幅达40.9％。 

血色素：相对于皮艇对照组，赛艇实验组有大幅度提高，增幅达4.37％。 

尿素氮：相对于皮艇对照组，赛艇实验组有大幅度降低，降幅达22.43％。 

肌酸激酶：相对于皮艇对照组，赛艇实验组有大幅度降低，降幅达51.77％。 

2.2 生物活性肽对水上运动员体能素质指标的影响 

水上运动员的力量素质包括最大力量、速度力量和力量耐力。在起航阶段和冲刺阶段，运动员要达到较快的速度，需要有较大的力量；在途中划阶段，运动员既要有较强的速度力量以保证有较高的速度，又要有较强的耐力力量以把较高的船速维持下 去。在这三种力量中，最大力量是速度力量的基础。由于条件所限，我们只测试了运动员的卧推和卧拉2项最大力量(深蹲、高翻等最大力量与专项运动关系不够密切，直接转化成水上专项运动力量的效率不高)。测试结果见表10和表11。 

由数据直接可以看出， 

(1)对照组： 

最大卧推：成绩提高9人，提高率为100％；提高率10％以上达4人，占44％。 

最大卧拉：成绩提高4人，成绩不变5人，提高率为44％；提高率5％以上达2人，占22％。 

(2)实验组： 

最大卧推：成绩提高9人，成绩不变1人，提高率为90％；提高率10％以上达7人，占70％。 

最大卧拉：成绩提高8人，成绩不变2人，提高率为80％；提高率5％以上达8人，占80％。 

表18 对照组运动员实验前后体能素质指标变化 

表19 实验组运动员实验前后运动素质指标变化 

2.3 生物活性肽对水上运动员跑步成绩的影响 

水上运动员专项运动成绩见表12和表13。 

由数据直接可以看出， 

对照组： 

3000米：成绩提高8人，成绩降低2人。成绩提高百分率为80％。 

10000米：成绩提高2人，成绩降低7人，成绩不变1人。成绩提高百分率为20％。 

(2)实验组： 

3000米：成绩提高7人，成绩降低2人。成绩提高百分率为77.8％。 

10000米：成绩提高6人，成绩降低3人。成绩提高百分率为66.7％。 

表20 水上运动员对照组实验前后跑步成绩变化 

表21 水上运动员实验组实验前后跑步成绩变化 

3 结论 

3.1 生物活性肽对水上运动员训练期生化指标的影响 

3.1.1 生物活性肽对水上运动员训练期血睾酮的影响 

实验组实验后血睾酮水平显著性提高,说明活性肽可抑制或缩短因运动而引起的体内“负氮平衡”的副作用,维持或促进体内正常蛋白质的合成,减轻或延缓由运动引起的其它生理改变,从而达到抗疲劳的作用。 

3.1.2 生物活性肽对水上运动员训练期血色素的影响 

相对于对照组，实验组血色素水平有显著性提高。血色素水平提高，说明活性肽可促进红细胞复原，提高红细胞携氧能力，从而可以提高运动员的耐力水平。 

3.1.3 生物活性肽对水上运动员训练期尿素氮的影响 

相对于对照组，实验组尿素氮水平有显著性降低。尿素氮水平降低，说明补充活性肽抑制或缩短体内“负氮平衡”，减少肌肉蛋白质降解,促进肌肉快速修复和运动疲劳的消除产生良好作用,而且不增加胃肠负担。 

3.1.4 生物活性肽对水上运动员训练期肌酸激酶的影响 

相对于对照组，实验组肌酸激酶水平有显著性降低。血清肌酸激酶水平的降低,说明了活性肽有促进骨骼肌损伤组织的修复以及减少细胞内肌酸激酶外渗的作用，可以疲劳恢复加快。 

3.1.5 由生物活性肽对水上运动员训练期生化指标的影响可以看出，本发明的活性肽能促进机体蛋白质合成和肌肉增长，清除体内自由基，提高机体抗氧化性，增强机体免疫能力和延缓疲劳，具有较好的抗疲劳和加速疲劳恢复的功能。 

3.2 生物活性肽对水上运动员体能素质的影响 

由实验结果可知，活性肽在很大程度上提高了运动员的力量水平和速度，体能水平得到了较大的提高，尤其是力量水平提高显著，10000米成绩明显高于对照组，表明运动员耐力水平有大幅度的提高。 

3.3 本发明的活性肽胶囊对水上运动员有很好的促进训练恢复和抗疲劳的作用，体能水平和耐力水平得到了大幅度的提高。 

Claims (10)

1.一种活性肽组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括用蛋白酶和木瓜蛋白酶将乳清蛋白、大豆蛋白、牛奶和鸡蛋酶解而获得所述活性肽组合物，其中，大豆蛋白、乳清蛋白、鸡蛋和牛奶的比例为40～75重量份：5～30重量份：5～25重量份：10～35重量份，优选为50～65重量份：5～20：5～15重量份：15～25重量份，最优选为55重量份:15重量份:10重量份:20重量份，其中鸡蛋和牛奶以干物质计。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶为枯草芽孢杆菌蛋白酶。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，基于所述乳清蛋白、大豆蛋白、牛奶和鸡蛋的总重量，所述蛋白酶和木瓜蛋白酶的加入总量为0.5～2重量％，优选1重量％。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶和木瓜蛋白酶的重量比为80％～60％:40％～20％，优选为75％～65％:35％～25％，最优选为70％:30％。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

将大豆蛋白和乳清蛋白按比例混匀，以1:5～1:6，优选1：5的比例加水浸泡20～30min，优选20min后加牛奶、鸡蛋搅拌均匀，在70℃～80℃，优选80℃保温1h～1.5h，优选1h，降温至60℃～70℃，优选55℃，调节pH至6.0～7.5，优选7，加入所述蛋白酶和木瓜蛋白酶，酶解5h～6h，优选5h，得到酶解产物。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括将所述酶解产物进一步进行冷冻干燥，得到干粉。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括将所述干粉填充为胶囊。

8.一种活性肽组合物，其特征在于，所述活性肽组合物通过权利要求1～7中任一项所述的方法制备。

9.如权利要求8所述的活性肽组合物，其特征在于，所述活性肽组合物中分子量5000D以下的小分子多肽的重量比为90％以上，并且分子量3000D以下的小分子多肽的重量比为40％以上。

10.一种胶囊，其特征在于，所述胶囊包括权利要求8所述的多肽组合物。