CN1939344A - 一种阿胶口服制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种阿胶口服制剂，它是含有由阿胶为原料，加入酶酶解，所得的酶解产物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的口服制剂，其中酶解产物主要是10KD以下的多肽。本发明还提供了该阿胶口服制剂的制备方法。本发明口服制剂与传统阿胶相比，保存了与阿胶相同的功效，同时克服了阿胶的口感问题，同时提高了可控性，便于临床使用，为临床提供了一种新的选择。
Description
技术领域
本发明涉及一种阿胶口服制剂，具体地说，是以阿胶为原料制备而成的口服制剂。
背景技术
阿胶，来源于马科动物驴Equus asinus Linnaeus去毛的皮经煎煮，浓缩制成的固体胶。主产于山东、浙江、湖北、北京、天津、辽宁。全年采收。其传统制备方法是将驴皮漂泡，去毛，切成小块，再漂泡洗净，分次水煎，滤过，合并滤液，用文火浓缩(或加适量黄酒、冰糖、豆油)至稠膏状，冷凝，切块，阴干。为长方形或方形块状，黑褐色，有光泽。质硬而脆，断面光亮，碎片对光照视呈棕色，半透明。以色乌黑、光亮、透明、无腥臭气，经夏季不软者佳。性味和功用：甘，平。归肺、肝、肾经。补血滋阴，安胎，润燥，止血。用于血虚萎黄，眩晕心悸，肌痿无力，心烦不眠，虚风内动，肺燥咳嗽，劳嗽咯血，吐血尿血，便血崩漏，妊娠胎漏。用法用量为：入汤剂，5～15g，烊化兑服。
由于阿胶性滋腻，有碍消化，胃弱便溏者慎用。目前含有阿胶的制剂较多，其中原料多由阿胶与其它药材组合的大处方，如阿胶补血口服液。由于阿胶来源于动物皮，其口感难于接受，因此，虽然以阿胶单味原料入药的产品较多，基本无直接饮用的口服液体制剂，为了克服其口感问题，有报道将阿胶原料药直接装胶囊，如福牌阿胶胶囊(山东福阿集团有限公司)，它是在速溶阿胶冲剂的基础上经剂型改造而成的胶囊剂，保持了阿胶的所有成份及全部疗效，阿胶含量100％，且性质稳定，剂量准确，服用方便，免去固体阿胶砸碎、烊化服用的麻烦，并克服了部分消费者对速溶阿胶口感不适的局限性，疗效迅速，安全可靠。用法用量：口服，一次3～9粒，一日2次。服用剂量较大，且由于剂型单一，不能满足临床的需求。目前尚无从阿胶原料出发解决其口感问题的报道。
发明内容
为了解决上述问题，本发明所要解决的技术方案是提供了一种阿胶口服制剂，具体地说，是以阿胶为原料制备而成的口服制剂。本发明的另一技术方案是提供了该口服制剂的制备方法。
本发明提供了一种阿胶口服制剂，它是含有由阿胶为原料，加入酶酶解，所得的酶解产物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的口服制剂，其中酶解产物主要是10KD以下的多肽。
其中，所述的原料还包括虫草菌丝体。
所述的酶是：胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、黑曲霉蛋白酶中的一种或其混合。
所述的口服制剂是口服液、片剂、口含片、胶囊剂或丸剂。
所述的口服液pH6.0-7.0。所述的口服液含有多肽类物质，其中多肽含量＞20mg/ml，总氮含量＞8mg/ml，游离氨基酸含量＞30mg/ml。
本发明还提供了该阿胶口服制剂的制备方法，它包括如下步骤：
将阿胶溶于磷酸缓冲液后，调整pH至7.0-7.5，加入碱性蛋白酶酶解，加热煮沸，再调整pH至5.0-5.5酸性蛋白酶，酶解，反应结束煮沸、冷却后反应液依次通过滤纸，0.45μ微孔滤膜，0.1μ微孔滤膜，10KD超滤膜，调整pH至6.0-7.0，即得酶解产物，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的口服制剂。
其中，步骤a所述的酶是：胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、黑曲霉蛋白酶中的一种或其混合。
本发明中蛋白原料采用专一性较差的蛋白酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶等生物酶解的方法对虫草菌丝中的虫草蛋白和阿胶中所含的胶原蛋白进行进一步降解，水解成没有抗原性的功能性短肽和氨基酸。酶解液通过截留分子量10KD的切向流超滤膜后，可以除去吸收性较差的大分子肽段，保存了小于10KD的生物活性成分：短肽、氨基酸、多糖、核苷酸及多种微量元素。采用纳滤技术对酶解液进行浓缩，即保证了溶液中活性成分的活性，又可根据不同规格，不同含量需要对过滤后的高浓度浓缩液进行稀释，方便配制，同时又有利于储备保存。本发明口服制剂尤其针对年老体弱、久病体虚的儿童与中老年人群，长期从事脑力劳动者，紧张学习的学生和长期处于各种压力下，处于亚健康状态的人群，提高免疫力、缓解体力疲劳和提高耐氧耐受力，并可促进皮肤胶原代谢，改善皮肤水分。
本发明口服制剂与传统阿胶相比，采用酶解、精制方法，保存了与阿胶相同的功效，同时克服了阿胶的口感问题，提高药物的可控性，便于临床使用，为临床提供了一种新的选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1 本发明阿胶口服液的制备
将1kg的阿胶溶于10L磷酸缓冲液后，调整pH至7.0-7.5，加入2％碱性蛋白酶于55℃下酶解4个小时，酶解期间不断搅拌并保持pH恒定。第1次酶解结束后加热煮沸5分钟以终止第一次酶解反应。调整pH至5.0-5.5并加入2％酸性蛋白酶，55℃反应4h，期间不断搅拌，并保持pH恒定。反应结束后，煮沸20分钟，冷却后加入0.2％阿巴斯甜搅拌均匀，反应液依次通过滤纸，0.45μ微孔滤膜，0.1μ微孔滤膜，10KD超滤膜(millpore公司产品，美国)，调整pH至6.8，装瓶，115℃蒸汽灭菌。
实施例2 本发明阿胶口服液的制备
将500g虫草菌丝体粉碎至100目，加入10L磷酸缓冲液，调节pH至8.0-8.5，加入1％胰蛋白酶于35℃下酶解5个小时，酶解期间不断搅拌并保持pH恒定。结束后加热煮沸5分钟以终止反应。将1kg阿胶溶于此酶解液中并调整pH至7.0-7.5，加入2％碱性蛋白酶于55℃下酶解4个小时，酶解期间不断搅拌并保持pH恒定。第1次酶解结束后加热煮沸5分钟以终止第一次酶解反应。调整pH至5.0-5.5并加入2％酸性蛋白酶，55℃反应4h，期间不断搅拌，并保持pH恒定。反应结束后，煮沸20分钟，冷却后加入0.2％阿巴斯甜搅拌均匀，反应液依次通过滤纸，0.45μ微孔滤膜，0.1μ微孔滤膜，10KD超滤膜(millpore公司产品，美国)，调整pH至6.8，装瓶，115℃蒸汽灭菌。
实施例3 本发明药物片剂的制备
按本发明实施例2的方法制得反应液后，通过喷雾干燥器制得淡黄色粉末，将150g粉末，加入70g乳糖、5g羧甲基淀粉钠混合均匀，加入45m12％羧丙甲纤维素水溶液制得软材，用14目筛制粒，65℃干燥，干燥时间30分钟，16目整粒，同时加入5g羧甲基淀粉钠和1g硬脂酸镁，混合均匀，测定含量后，压片。
实施例4 本发明药物胶囊的制备
按本发明实施例2的方法制得反应液后，通过喷雾干燥器制得淡黄色粉末，将150g粉末，加入70g乳糖、10g微粉硅胶，混合后装入1#胶囊中。
实施例5 本发明阿胶口服液的质量控制方法
将实施例1制备的阿胶口服液进行总氮测定，其中，总氮测定采用半微量凯氏定氮法；而多肽含量为：
多肽含量＝总氮含量×6.25-游离氨基酸含量
测定结果为：多肽含量＞20mg/ml，总氮含量＞8mg/ml，游离氨基酸含量＞30mg/ml。
实施例6 本发明药物分子量测定
取实施例1、2制备的阿胶口服液1ml置于100ml容量瓶中，加磷酸缓冲液(pH6.8)至刻度，取100μl，SDS-聚丙烯凝胶电泳测定最大分子量，考马斯亮蓝R250染色，与制标准曲线比对，结果显示此口服液中短肽最大分子量为9.8KD。
以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。
试验例1本发明阿胶口服液对小鼠免疫器官重量的影响(提高免疫力实验)
一、试验目的
小鼠经多次灌胃给予本发明口服液，观察该药物对小鼠免疫脏器重量的影响。
二、试验材料
1、受试物
本发明口服液，为淡黄色澄明液体，规格：250mg:20ml，批号：040213，按实施例1方法制备，由成都市药友科技发展有限公司提供。
阿胶原药材，规格：500g/盒，批号：040215，由山东东阿阿胶集团生产。
阿胶补血膏为棕褐色的半流体，规格：200g/瓶，批号：040124，由河南省四方药业有限公司提供。
人工虫草菌丝提取液，为淡黄色澄明液体，规格：1g/瓶，批号：040211，由成都市药友科技发展有限公司提供。
本发明口服液、阿胶补血膏，人工虫草菌丝提取液，临用时均用生理盐水稀释为试验所需浓度。阿胶原药材用粉碎机粉碎，过筛，临用时用生理盐水稀释为试验所需浓度。
2、试验动物
昆明种小鼠，体重18～22g，共70只，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物使用许可证号119。
3、仪器
电子天平
三、方法与结果
1、方法
将小鼠随机分为7组，每组10只，雌雄各半。分组及给药剂量见表1。按表1连续给药14天，于末次给药后1h，将小鼠脱颈椎处死，打开腹腔和胸腔分别摘取脾脏和胸腺，电子天平称重，计算脏器指数。
表1 试验分组和给药
| 组别 | 动物数(n) | 给药剂量 | 给药途径 | 给药体积 |
| 正常对照组 | 10 | - | i.g. | 0.2ml/10g |
| 阿胶原药材组阿胶补血膏组人工虫草菌丝提取液组高本发明口服液组 中低 | 101010101010 | 2g/kg3.34g/kg2g/kg0.4g/kg0.2g/kg0.1g/kg | i.g.i.g.i.g.i.g.i.g.i.g. | 0.2ml/10g0.2ml/10g0.2ml/10g0.2ml/10g0.2ml/10g0.2ml/10g |
2、结果
试验结果见表2。
表2 对小鼠免疫脏器重量指数的影响(
x±s)
| 组别 | 剂量 | 脏器指数(mg/g) | |
| 胸腺 | 脾脏 | ||
| 正常对照组 | - | 2.10±0.13 | 4.32±0.11 |
| 阿胶原药材组阿胶补血膏组人工虫草菌丝提取液组高本发明口服液组 中低 | 2g/kg3.34g/kg2g/kg0.4g/kg0.2g/kg0.1g/kg | 3.61±0.43**3.62±0.22**3.34±0.17*3.72±0.25**3.67±0.18**2.87±0.29* | 5.70±0.33**5.62±0.23**5.12±0.13*5.73±0.14**5.67±0.27**5.03±0.13* |
注：与正常对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01
四、结论
本发明口服液对小鼠免疫器官具有明显增重作用，与正常对照组比较具有极显著性差异，随剂量的增加有增强趋势，呈一定的量效关系。本发明口服液与阿胶原药材比较，两者无差异性，说明阿胶经过酶解、精制，有效成分完全保留，发挥了相同的功效。
实施例2 本发明阿胶口服液对小鼠游泳时间的影响(抗疲劳实验)
一、试验目的
小鼠经多次灌胃给予本发明口服液，以药物对小鼠游泳时间的影响，观察本发明口服液的抗疲劳作用。
二、试验材料
1、受试物
本发明口服液，为淡黄色澄明液体，规格：250mg：20ml，批号：040213，由实施例1制备。
阿胶原药材，规格：500g/盒，批号：040215，由山东东阿阿胶集团生产。
阿胶补血膏为棕褐色的半流体，规格：200g/瓶，批号：040124，由河南省四方药业有限公司提供。
人工虫草菌丝提取液，为淡黄色澄明液体，规格：1g/瓶，批号：040211，由成都市药友科技发展有限公司提供。
本发明口服液、阿胶补血膏，人工虫草菌丝提取液，临用时均用生理盐水稀释为试验所需浓度。阿胶原药材用粉碎机粉碎，过筛，临用时用生理盐水稀释为试验所需浓度。
2、试验动物
昆明种小鼠，体重18～22g，共70只，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物使用许可证号119。
3、仪器
50cm×30cm×25cm的玻璃缸，负重物(每个2g)，温度计。
三、方法与结果
1、方法
将小鼠随机分为7组，每组10只，雌雄各半。分组及给药剂量见表3。按表3连续给药14天，于末次给药后1h，并在尾部束一2g的重物。将小鼠分别放入玻璃缸内游泳(玻璃缸内加水，水深20cm，水温保持在20±0.5℃。)，并重新计时。当小鼠头部沉入水中10秒钟不能浮出水面者即为体力耗竭，即刻计时，从放入小鼠到体力耗竭完所用时间为小鼠游泳时间。
表3 试验分组和给药
| 组别 | 动物数(n) | 给药剂量 | 给药途径 | 给药体积 |
| 正常对照组 | 10 | - | i.g. | 0.2ml/10g |
| 阿胶原药材组阿胶补血膏组人工虫草菌丝提取液组高本发明口服液组 中低 | 101010101010 | 2g/kg3.34g/kg2g/kg0.4g/kg0.2g/kg0.1g/kg | i.g.i.g.i.g.i.g.i.g.i.g. | 0.2ml/10g0.2ml/10g0.2ml/10g0.2ml/10g0.2ml/10g0.2ml/10g |
2、结果试验结果见表4。
表4 对小鼠游泳时间的影响(
x±s)
| 组别 | 剂量 | 游泳时间(min) |
| 正常对照组 | - | 12.12±2.31 |
| 阿胶原药材组阿胶补血膏组人工虫草提取液组高本发明口服液组 中低 | 2g/kg3.34g/kg2g/kg0.4g/kg0.2g/kg0.1g/kg | 16.85±3.02**17.58±3.25**14.87±2.45*18.32±4.62**17.95±3.15**15.12±2.13* |
注：与正常对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01
四、结论
本发明口服液显著延长小鼠游泳时间，各剂量组与正常对照组比较具有极显著性和显著性差异，随剂量的增加游泳时间明显延长，说明本发明口服液具有抗疲劳作用。本发明口服液与阿胶原药材比较，两者无差异性，说明阿胶经过酶解、精制，有效成分完全保留，发挥了相同的功效。
实施例3 本发明阿胶口服液对小鼠耐常压缺氧作用(抗应激实验)
一、试验目的
小鼠经多次灌胃给予10KD本发明口服液，以药物对小鼠在常压缺氧条件下呼吸停止死亡时间为指标，观察本发明口服液的耐缺氧作用。
二、试验材料
1、受试物
本发明口服液，为淡黄色澄明液体，规格：250mg:20ml，批号：040213，按实施例1方法制备，由成都市药友科技发展有限公司提供。
阿胶原药材，规格：500g/盒，批号：040215，由山东东阿阿胶集团生产。
阿胶补血膏为棕褐色的半流体，规格：200g/瓶，批号：040124，由河南省四方药业有限公司提供。
人工虫草菌丝提取液，为淡黄色澄明液体，规格：1g/瓶，批号：040211，由成都市药友科技发展有限公司提供。
阿胶酶解口服液、阿胶补血膏，人工虫草菌丝提取液，临用时均用生理盐水稀释为试验所需浓度。阿胶原药材用粉碎机粉碎，过筛，临用时用生理盐水稀释为试验所需浓度。
2、试验动物
昆明种小鼠，体重18～22g，共70只，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物使用许可证号119。
3、仪器
200ml磨口广口瓶，秒表，钠石灰，凡士林。
三、方法与结果
1、方法
将小鼠随机分为7组，每组10只，雌雄各半。分组及给药剂量见表5。按表5连续给药14天，于末次给药后1h，将小鼠分别放入盛有15g钠石灰的广口瓶内(每瓶只放1只小鼠)，用凡士林涂抹瓶口盖严，使之不漏气，立即重新计时。以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。
表5 试验分组和给药
| 组别 | 动物数(n) | 给药剂量 | 给药途径 | 给药体积 |
| 正常对照组 | 10 | - | i.g. | 0.2ml/10g |
| 阿胶原药材组阿胶补血膏组人工虫草菌丝提取液组高本发明口服液组 中低 | 101010101010 | 2g/kg3.34g/kg2g/kg0.4g/kg0.2g/kg0.1g/kg | i.g.i.g.i.g.i.g.i.g.i.g. | 0.2ml/10g0.2ml/10g0.2ml/10g0.2ml/10g0.2ml/10g0.2ml/10g |
2、结果
试验结果见表6。
表6 对小鼠耐常压缺氧作用(
x±s)
| 组别 | 剂量 | 存活时间(min) |
| 正常对照组 | - | 23.65±3.25 |
| 阿胶原药材组阿胶补血膏组人工虫草菌丝提取液组高10KD本发明口服液组 中低 | 2g/kg3.34g/kg2g/kg0.4g/kg0.2g/kg0.1g/kg | 30.78±1.25**31.45±2.14**27.64±3.32*32.15±2.56**31.02±2.13**28.03±3.45* |
注：与正常对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01
四、结论
本发明口服液可显著延长小鼠在常压缺氧条件下的存活时间，各剂量组与正常对照组比较具有极显著性和显著性差异，且随剂量的增加存活时间明显延长，说明本发明口服液具有增强小鼠耐常压缺氧能力之功效。本发明口服液与阿胶原药材比较，两者无差异性，说明阿胶经过酶解、精制，有效成分完全保留，发挥了相同的功效。
实验例4 本发明口服液与原料药材阿胶的口感对比实验
“东阿”牌阿胶以优质纯驴皮，得天独厚的东阿优质地下水，采用精湛科学工艺熬制浓缩而成。据《汤液本草》记载，阿胶，味薄气厚。脾胃虚弱，消化不良者容易引起便溏。
本发明口服液：经本发明方法酶解、精制，加入少量阿巴斯甜娇味制备而成。本品味清甜，气微香。
选择20例志愿者，随机分成2组，每组10例。分别口服本发明口服液和阿胶(烊化，用温开水兑服)进行口感对比，连续口服7天，总结对比如下：
阿胶组：7/10志愿者在口服时不宜接受，主要表现为气味腥味较重，咽部不适，口服后易出现恶心、反胃、呕吐；3/10志愿者口服4天后，出现腹泻、便溏。
本发明口服液组：10例志愿者均易接受，认为气味微香清甜，无腥臭感。口服7天后，无一例出现胃肠道反应。
通过功能性研究和口感对比实验，证明本发明口服液疗效确切，口服容易被接受，且能克服传统阿胶的缺陷，为消费者提供了一种新的选择。
Claims (8)
1、一种阿胶口服制剂，其特征在于：它是含有由阿胶为原料，加入酶酶解，所得的酶解产物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的口服制剂，其中所述酶解产物主要是10KD以下的多肽。
2、根据权利要求1所述的阿胶口服制剂，其特征在于：所述的原料还包括虫草菌丝体。
3、根据权利要求1或2所述的阿胶口服制剂，其特征在于：所述的酶是：胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、黑曲霉蛋白酶中的一种或其混合。
4、根据权利要求1-3任一项所述的阿胶口服制剂，其特征在于：所述的口服制剂是口服液、片剂、胶囊剂、丸剂或口含片。
5、根据权利要求4所述的阿胶口服制剂，其特征在于：所述的口服液pH6.0-7.0。
6、根据权利要求5所述的阿胶口服制剂，其特征在于：所述的口服液含有多肽类物质，其中多肽含量＞20mg/ml，总氮含量＞8mg/ml，游离氨基酸含量＞30mg/ml。
7、一种制备权利要求1-6任一项所述的阿胶口服制剂的方法，它包括如下步骤：
将阿胶溶于磷酸缓冲液后，调整pH至7.0-7.5，加入碱性蛋白酶酶解，加热煮沸，再调整pH至5.0-5.5酸性蛋白酶，酶解，反应结束煮沸、冷却后反应液依次通过滤纸，0.45μ微孔滤膜，0.1μ微孔滤膜，10KD超滤膜，调整pH至6.0-7.0，即得酶解产物，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的口服制剂。
8、根据权利要求7所述的阿胶口服制剂的制备方法，其特征在于：所述的酶是：胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、黑曲霉蛋白酶中的一种或其混合。
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