CN104292170B - 具有抗肿瘤作用的喹唑啉-芳基脲衍生物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及具有抗肿瘤作用的通式（Ⅱ）表示的喹唑啉-芳基脲衍生物及其应用。通式（Ⅱ）中取代基的定义见说明书。本发明以索拉非尼和吉非替尼为先导化合物，保留索拉非尼的药效团——脲基；同时，保留吉非替尼等EGFR-TKIs中的喹唑啉环，合成并得到一系列喹唑啉-芳基脲衍生物，经体外活性测试，部分化合物表现出优异的抗肿瘤活性，此类衍生物具有较高的研究与实用价值。

Description

具有抗肿瘤作用的喹唑啉-芳基脲衍生物及其应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一类具有抗肿瘤作用的喹唑啉-芳基脲衍生物，以及它们的用途。

背景技术

癌症泛指所有的恶性肿瘤，是一系列以异常细胞失控增生和扩散为特征的疾病，是严重威胁人类生命健康的重大疾病。随着对肿瘤发生机制研究的深入，发现实体瘤的信号传导是一个复杂的、多因素的蛋白网络系统，抑制单一信号传导往往不足以遏制肿瘤的发展。目前为止人们已经发现了很多抗肿瘤靶点，如以肿瘤的新血管生成、细胞信号转导、环氧化酶-2(COX-2)等为靶点。其中Ras/Raf/MAPK/ERK信号通路调节了细胞的增殖、分化、存活、迁移的功能，这条通路的活化不仅可以导致细胞的恶性转化，还与肿瘤细胞的侵袭转移相关(McCubreyJA,SteelmanLS,ChappellWH,etal,RolesoftheRaf/MEK/ERKpathwayincellgrowth,malignanttransformationanddrugresistance.BiochimBiophysActa,2007,1773(8):1263-1284.)。

索拉非尼(Sorafenib)为双芳基脲类化合物，是由德国拜耳公司和ONYX公司共同研制的口服多靶点抗肿瘤药物，2005年12月20日在美国上市，被FDA批准用于治疗晚期肾癌，并于2006年11月29日在中国上市。索拉非尼具有双重抗肿瘤作用，一方面通过抑制Raf激酶从而阻断Ras/Raf/MAPK/ERK信号转导通路而直接抑制肿瘤生成，另一方面通过抑制几种与新生血管生成和肿瘤发展有关的酪氨酸激酶受体的活性，包括血管内皮生长因子(VEGFR-2)，VEGFR-3，血小板衍生的生长因子受体-β(PDGFR-β)和c-KIT原癌基因，阻断肿瘤新生血管生成，间接抑制肿瘤细胞的生长，从而起到抗肿瘤作用。在非小细胞肺癌中，由于K-Ras突变的增加，导致了Ras/Raf/MEK/ERK旁路增殖信号的增加，索拉非尼可以抑制这一信号传导途径，提示该药可能对非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗非常有效(TakezawaK,OkamotoI,YonesakaK,etal.Sorafenibinhibitsnon-smallcelllungcancercellgrowthbytargetingB-RAFinKRASwild-typecellsandC-RAFinKRASmutantcells.CancerRes,2009,69(16):6515-6521.)。

喹唑啉类化合物是含有嘧啶杂环的一类重要化合物,在抗肿瘤领域有着特殊的用途，是许多肿瘤靶标酶的抑制剂。自Fry等(FryDW,KrakerAJ，McMichaelA,etal.Aspecificinhibitoroftheepidermalgrowthfactorreceptortyrosinekinase.Science,1994,265(5175):1093-1095.)首次发现4-苯胺基喹唑啉是强效的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFRtyrosine-kinaseinhibitors，EGFR-TKIs)以来，喹唑啉类化合物迅速成为抗NSCLC药物研制的热点。目前已开发出一系列EGFR-TKIs，应用于临床的有吉非替尼、埃罗替尼、拉帕替尼,凡德他尼等。和传统抗肿瘤药物相比，新型抗肿瘤药物具有效果显著、副作用明显降低的优点。然而，越来越多的研究表明：EGFR-TKI仅对EGFR突变的患者有效，对EGFR无突变的患者无效；患者使用这些传统的喹唑啉衍生物后出现诸多副反应，如腹泻和皮疹等。而且，几乎所有的患者最终都将发展至耐药阶段(OxnardGR,ArcilaME,ChmieleckiJ,etal.Newstrategiesinovercomingacquiredresistancetoepidermalgrowthfactorreceptortyrosinekinaseinhibitorsinlungcancer.ClinCancerRes,2011,17(17):5530-5537.)。因此亟待寻找到有效且低毒副作用的药物。

CN102532103A公开了一类新型喹唑啉芳基脲衍生物，以及该类化合物在抗肿瘤药物中作为活性成分的用途。该新型喹唑啉芳基脲衍生物具有如下通式(I)：

具有通式(Ⅰ)结构的喹唑啉衍生物对VEGFR-2具有很强的酶抑制作用，同时对小鼠体内模型试验表明，此类化合物毒性较低。但是不清楚其是否可作为多靶点抗肿瘤药物，未见报道其对治疗晚期肾癌、非小细胞肺癌、胃癌等恶性肿瘤的作用效果；在细胞水平上的研究不够深入，如缺乏药物对肿瘤细胞株诱导凋亡，周期阻滞，胞内活性氧水平影响等基础实验数据支撑。

发明内容

本发明的目的是提供一类新型喹唑啉-芳基脲衍生物，该类化合物的制备方法，以及在抗肿瘤方面的用途。具体涉及通式(II)结构的喹唑啉-芳基脲衍生物或其药学上可接受的盐。从结构上看，通式(II)与上述的通式(I)明显不同；因此，药理活性及药效会呈现显著性差异。

其中R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地表示氢、甲基、甲氧基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、卤素或苄氧基；

R₅表示氢、氯、甲基、乙基或丙基；

R表示苯基、取代苯基、苄基、萘基、芳杂基或取代的芳杂基，以及丙基、烯丙基、正丁基、叔丁基、环戊基、环己基、十一烷基、十二烷基、十六烷基、十八烷基。

所述的取代苯基，其苯环上取代基为卤素、苄基、三氟甲基、甲氧羰基、叔丁氧羰基、乙酰基、乙酰氨基、苯甲酰基、苯基、硝基、氰基、C₁-C₆烷基、十一烷基、十二烷基、十六烷基、十八烷基、C₁-C₄烷氧基。

所述的芳杂基包括异噁唑基、噁唑基、噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、吡啶基、吡嗪基、呋喃甲基、喹啉基、喹唑啉基、嘧啶基。

所述的取代的芳杂基，其芳杂环上取代基为甲基、叔丁基、氯、溴、硝基。

上述所述的取代包括单取代、相同基团多取代或不同基团多取代。

具体地，卤素是指氟、氯、溴、碘。

C₁-C₆烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基。

C₁-C₄烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基。

本发明优选的喹唑啉-芳基脲衍生物，选自：

N-苯基-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3-甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2,4-二甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2,5-二甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3,4-二甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3,5-二甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-乙基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2,6-二乙基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-叔丁基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲氧基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3-甲氧基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-甲氧基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-氟苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-氟苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-氯苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3-氯苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-氯苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3,4-二氯苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2,5-二氯苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3-氯-4-氟苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3-三氟甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-三氟甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-苄基-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-[(2-甲氧羰基)苯基]-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-硝基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲基-5-硝基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(α-萘基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(5-叔丁基异噁唑基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-环戊基-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-环己基-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲基苯基)-N'-{3-[(2-甲基-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-甲基苯基)-N'-{3-[(2-甲基-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲氧基苯基)-N'-{3-[(2-甲基-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-甲氧基苯基)-N'-{3-[(2-甲基-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲基苯基)-N'-{3-[(2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-甲基苯基)-N'-{3-[(2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲氧基苯基)-N'-{3-[(2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-甲氧基苯基)-N'-{3-[(2-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-苯基-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3-甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2,4-二甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2,5-二甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3,4-二甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3,5-二甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-乙基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2,6-二乙基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-叔丁基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲氧基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3-甲氧基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-甲氧基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2,5-二氧甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-[(3,4,5-三甲氧基)苯基]-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-氟苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-氟苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-氯苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3-氯苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-氯苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2,4-二氯苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3,4-二氯苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-[(3-氯-4-氟)苯基]-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-[(3-氯-4-甲基)苯基]-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(3-三氟甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-硝基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-[(2-甲基-5-硝基)苯基]-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-三氟甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-苄基-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-[(2-甲氧羰基)苯基]-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(α-奈基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲。

N-(5-甲基异噁唑基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(5-叔丁基异噁唑基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-环戊基-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-环己基-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲基苯基)-N'-{3-[(2-甲基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-甲基苯基)-N'-{3-[(2-甲基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲氧基苯基)-N'-{3-[(2-甲基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-甲氧基苯基)-N'-{3-[(2-甲基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲基苯基)-N'-{3-[(2-氯喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-甲基苯基)-N'-{3-[(2-氯喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(2-甲氧基苯基)-N'-{3-[(2-氯喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲；

N-(4-甲氧基苯基)-N'-{3-[(2-氯喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲。

本发明所述的衍生物的药学上可接受的盐，包括：枸橼酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、草酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、三氟甲磺酸盐，以及氢卤酸盐、硫酸盐、磷酸盐。其中氢卤酸盐如氢溴酸盐、氢碘酸盐、氢氯酸盐。

本发明还提供一种药用组合物，其包含所述的具有通式(Ⅱ)的喹唑啉-芳基脲衍生物或其药学上可接受的盐，或包含通式(Ⅱ)的喹唑啉-芳基脲类衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成分，以及药学上可接受的赋型剂；所述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、辅助剂和载体。

用于本发明药物组合物的载体是药学领域中可得到的常见类型，包括：口服制剂用的黏合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、助流剂、矫味剂等；注射制剂用的防腐剂、溶剂、助溶剂、潜溶剂、稳定剂等；局部用药制剂的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可将其制成肠溶包衣片剂。

本发明还提供上述所述的衍生物或其药学上可接受的盐以及所述的药用组合物在制备抗肿瘤药物方面的应用，其中所述肿瘤包括：黑色素瘤、肝癌、肾癌、急性白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌、食管癌、胃肠道癌或间皮瘤。

所述的药物的剂型包括口服制剂、用于注射的制剂和局部用药制剂。口服制剂如片剂、胶囊剂、溶液或混悬液；用于注射的制剂如可注射的溶液或混悬液，或者是可注射的无菌粉末；局部用药制剂如软膏剂或乳膏剂。

通式(Ⅱ)的衍生物或其药学上可接受的盐以及上述所述的药用组合物在制备抗肿瘤药物方面的应用方面，具有通式(Ⅱ)所述的喹唑啉-芳基脲衍生物或其药学上可接受的盐可作为唯一的抗癌药物使用，或者可以与一种或多种其它抗肿瘤药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。

本发明中所述的喹唑啉-芳基脲衍生物制备方法如下：

步骤A：以2-氨基苯甲酸甲酯(或其衍生物)与甲酰胺为起始原料，两者反应得到喹唑啉-4-酮(或其衍生物)。2-氨基苯甲酸甲酯的衍生物，如2-氨基-4,5-二甲氧基苯甲酸甲酯、2-氨基-3,4,5-三甲氧基苯甲酸甲酯、2-氨基-3-甲基苯甲酸甲酯、2-氨基-3-硝基苯甲酸甲酯、2-氨基-4-苄氧基-5-甲氧基苯甲酸甲酯、2-氨基-5-溴苯甲酸甲酯、2-氨基-5-碘苯甲酸甲酯等。如用乙腈、丙腈、丁腈代替原料之一甲酰胺，则分别得到2-甲基喹唑啉-4-酮、2-乙基喹唑啉-4-酮、2-丙基喹唑啉-4-酮及其衍生物。

步骤B：在三氯氧磷(POCl₃)作用下，上述喹唑啉-4-酮或其衍生物的4-位被氯代化，得到4-氯喹唑啉或其衍生物。

步骤C：上述4-氯喹唑啉或其衍生物与3-氨基苄胺反应，得到关键中间体N-(3-氨基苄基)-喹唑啉-4-胺或其衍生物，N-(3-氨基苄基)-喹唑啉-4-胺的衍生物如N-(3-氨基苄基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(3-氨基苄基)-5,6,7-三甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(3-氨基苄基)-6-苄氧基-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(3-氨基苄基)-5-硝基喹唑啉-4-胺等。

步骤D：上述关键中间体N-(3-氨基苄基)-喹唑啉-4-胺或其衍生物与各种不同的异氰酸酯反应得到喹唑啉-芳基脲衍生物。上述A～D步骤的实施方案如Scheme1所示。

Scheme1合成喹唑啉-芳基脲衍生物的实施方案

最后，上述喹唑啉-芳基脲衍生物与有机酸或无机酸，如对甲苯磺酸反应，则得到相应的产品。

本发明喹唑啉-芳基脲衍生物都可以用上述或类似上述的制备方法得到，根据取代基的不同和取代基位置的不同选用相应的原料即可。如欲得到2-位氯代的喹唑啉-芳基脲衍生物，则采用下列方法得到：以邻氨基苯甲酸和尿素为原料，两者高温下反应得到喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(FarhanaS,AkashS,InshadAK,etal.Synthesisandantibacterialactivityofnewdiaryldiamines.JHeterChem,2012,49,(6):1391-1397.)；然后与POCl₃反应，得到2,4-二氯喹唑啉；继而与3-氨基苄胺缩合，再与异氰酸酯反应，最终可得到2-位氯代的喹唑啉-芳基脲衍生物。

本发明以索拉非尼和吉非替尼为先导化合物，保留索拉非尼的药效团——脲基；同时，保留吉非替尼等EGFR-TKIs中的喹唑啉环，合成并得到一系列喹唑啉-芳基脲衍生物，经体外活性测试，部分化合物表现出优异的抗肿瘤活性，此类衍生物具有较高的研究与实用价值。

经SciFinder搜索，本发明所合成的目标化合物均为新化合物。从数百个化合物中，筛选出了两个活性较好的化合物I-8和II-19，它们对人非小细胞肺癌和胃癌细胞的增殖抑制活性均优于索拉非尼。

附图说明

图1是化合物I-8的¹HNMR图谱。

图2是化合物I-8的¹³CNMR图谱。

图3是化合物I-15的¹HNMR图谱。

图4是化合物I-15的¹³CNMR图谱。

图5是化合物II-8的¹HNMR图谱。

图6是化合物II-8的¹³CNMR图谱。

图7是化合物II-4的高分辨率质谱图。

图8是化合物II-9的高分辨率质谱图。

图9是不同浓度化合物I-8同NCI-H460细胞株共孵化后细胞的形态学变化图(×100)。

图10是流式细胞术检测化合物I-8对非小细胞肺癌A549细胞周期影响图。

图11是不同浓度化合物I-8对A549细胞内活性氧水平的影响图。

具体实施方式

给出下列部分实施例，使本领域技术人员能够更清楚地理解和实施本发明。它们不应解释为限制本发明的范围，仅仅是其例证和代表。

生物评价方法

采用MTT法，对本发明中的喹唑啉-芳基脲衍生物进行肿瘤细胞体外增殖抑制活性检测，对化合物的细胞毒作用进行普筛，并筛选出数个活性较佳的化合物。

利用PI单染结合流式细胞术，检测活性较好的N-(4-叔丁基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-8)对非小细胞肺癌A549及NCI-H460细胞株的周期抑制能力。以DCFH-DA为探针，检测化合物I-8对细胞A549胞内活性氧水平的影响。

以上各种检测方法适用于本发明目标化合物——喹唑啉-芳基脲衍生物对一种或多种癌细胞体外活性的测定。

实施例1

异氰酸酯系列化合物的制备

对于不同的异氰酸酯，宜采用下列两种方法之一合成得到：如异氰酸酯的沸点较低，则采用通法一制备得到；而沸点较高的则采用通法二得到。制备得到的异氰酸酯容易吸收空气中潮气而水解，不宜进一步纯化，可干燥保存或直接用于反应中。

通法一：冰浴下，向250mL烧瓶中依次加入三光气(BTC,18mmol,0.5eqv.)和溶剂二氯乙烷(DCE,20mL)搅拌，待溶解后，向上述混合体系中缓慢滴加入苯胺或其衍生物(36mmol)的DCE溶液(10mL)，保持反应体系的温度0～5℃。滴加时间约1h，此时反应体系变混浊，滴加完毕后升至室温反应1h，再加热回流，直至反应体系变澄清，约5～8h。冷却至室温，抽滤，滤液蒸馏除去溶剂，残留物经减压蒸馏得到产品。

通法二：对于沸点较高的异氰酸酯，待反应毕，冷却至室温，抽滤，弃去滤渣，滤液加热(控制温度100～106℃)，蒸馏除去溶剂和未反应的BTC，冷却至室温，收集烧瓶中残余固体，即产品。

所采用的方法及得到的35种异氰酸酯性状、产率等结果如下：

(1)苯基异氰酸酯：采用通法一制备，减压蒸馏，收集65～66℃馏分，得到无色液体，产率81.23％。

(2)邻甲苯基异氰酸酯：采用通法一制备，减压蒸馏,收集91℃的馏分，得到无色液体，产率77.45％。

(3)间甲苯基异氰酸酯：采用通法一制备，减压蒸馏,收集75～76℃的馏分，无色液体，产率73.25％。

(4)对甲苯基异氰酸酯：采用通法一制备，减压蒸馏，收集78～84℃的馏分，黄色液体，产率79.10％。

(5)2,4-二甲基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到棕黄色液体，产率80.57％。

(6)3,4-二甲基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色液体，产率82.59％。

(7)3,5-二甲基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色液体，产率84.52％。

(8)2-乙基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色液体，产率85.32％。

(9)2,6-二乙基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到棕黄色液体，产率86.12％。

(10)对叔丁基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色液体，产率81.24％。

(11)2-甲氧基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色液体，产率84.91％。

(12)3-甲氧基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到棕黄色液体，产率87.25％。

(13)4-甲氧基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色液体，产率83.67％。

(14)2,5-二甲氧基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到棕黑色固体，产率83.27％。

(15)3,4,5-三甲氧基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到棕黑色固体,产率83.16％。

(16)2-氟苯基异氰酸酯：采用通法一制备，得到减压蒸馏，收集56～58℃的馏分，得到无色液体，产率75.34％。

(17)4-氟苯基异氰酸酯：采用通法一制备，得到减压蒸馏，收集58～60℃馏分，得到无色液体，产率78.26％。

(18)2-氯苯基异氰酸酯：采用通法一制备，减压蒸馏，收集83～84℃的馏分，得到无色液体，产率68.41％。

(19)3-氯苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到无色液体，产率72.29％。

(20)4-氯苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到无色液体，产率76.53％。

(21)2,4-二氯苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到白色固体，产率85.31％。

(22)3,4-二氯苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到白色固体，产率84.61％。

(23)2,5-二氯苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到白色固体，产率82.79％。

(24)3-氯-4-甲基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色液体，产率76.51％。

(25)3-氯-4-氟苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色液体，产率82.15％。

(26)3-(三氟甲基)苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色液体，产率72.16％。

(27)4-(三氟甲基)苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色液体，产率75.23％。

(28)苄基异氰酸酯：采用通法一制备，减压蒸馏，收集104～110℃的馏分，无色液体，产率69.53％。

(29)2-(甲氧羰基)苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到白色固体，产率79.15％。

(30)对硝基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色固体，产率86.39％。

(31)2-甲基-5-硝基苯基异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色固体，产率81.17％。

(32)α-萘基异氰酸酯：采用通法二制备，得到棕黑色液体，产率86.13％。

(33)5-甲基-3异噁唑异氰酸酯：采用通法二制备，得到黄色固体，产率81.64％。

(34)5-叔丁基-3异噁唑异氰酸酯：采用通法二制备，得到白色固体，产率80.09％。

(35)环己基异氰酸酯：采用通法一制备，减压蒸馏，收集82～83℃的馏分，无色液体，产率86.52％。

实施例2-39

喹唑啉-芳基脲衍生物中各个化合物的结构如表1所示，表1中包括两个系列的产物，系列I：N-取代苯基-N'-{3-[(6,7-二甲氧基-4-氨基喹唑啉)苄基]}脲，包括化合物I-1～化合物I-19；系列II：N-取代苯基-N'-{3-[(4-氨基喹唑啉)苄基]}脲，包括化合物II-1～化合物II-19。

实施例2-39所得到的两个系列产物结构式如下：

表1

实施例2-39具体如下。

实施例2

N-(2-甲氧基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-1)

步骤A：6,7-二甲氧基喹唑啉-4-酮的制备

依次向250mL的圆底烧瓶加入2-氨基-6,7-二甲氧基苯甲酸甲酯(20g,94.7mmol),甲酰胺(160mL),甲酸(4mL)，160℃下回流10h,TLC(V_乙酸乙酯:V_石油醚＝1:1)监测反应毕，将所得混合物迅速倒入盛有冰水中，搅拌，静置片刻，固体析出，抽滤，依次用蒸馏水洗涤(3×15mL),乙酸乙酯洗涤(3×15mL)，干燥，乙酸乙酯重结晶,干燥，得灰白色粒状结晶，即产品(16.44g，84.22％)。m.p.282.1～288.4℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.99(s,1H),7.45(s,1H),7.14(s,1H),3.91(s,3H),3.87(s,3H).ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₁₀H₁₀N₂O₃[(M+H)⁺],207.07250；found,207.07244.

步骤B：4-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉的制备

依次向100mL的圆底烧瓶加入干燥的6,7-二甲氧基喹唑啉-4-酮(10g,48.5mmol)，POCl₃(25mL),115℃下回流8h，TLC监测反应(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝1:4)完全。减压除去大部分POCl₃,稍冷，加入二氯甲烷(DCM)溶解，冷却至0℃，将反应得到的混合物倒入适量碎冰中,搅拌，加入适量碳酸氢钠溶液后，萃取三次，前两次保持溶液呈强酸性，第三次萃取时，pH值调至7，合并有机层，无水硫酸镁干燥，减压除去DCM，得黄色片状固体(9.69g，产率89.2％)。产品用薄层色谱(V_石油醚/V_乙酸乙酯＝4:1，R_f＝0.45)检测，纯度合格。无需进一步纯化，直接用于下一步的反应中。m.p.181.2～183.3℃。质谱ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₁₀H₉ClN₂O₂[(M+H)⁺],225.53231；found,225.53296.

步骤C：N-(3-氨基苄基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺的制备

向250mL烧瓶中依次加入3-氨基苄胺(19.2g,157.6mmol)，异丙醇(20mL)，并逐滴滴加4-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉(17.7g,78.8mmol)的异丙醇溶液(30mL)，三乙胺(20mL)，搅拌，80℃下反应12h,TLC(V_二氯甲烷：V_石油醚＝20:1，R_f＝0.28)监测反应完全,减压除去溶剂，用氯仿溶解固体残渣,并依次用水进行洗涤(3×50mL),无水乙醚洗涤(3×50mL)，有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩。硅胶柱层析分离(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝1:4)，得到黄色粉末(22.68g,产率92.56％)。mp.112.6～114.2℃,¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.33(s,1H),7.69(s,1H),7.11(s,1H),6.96(t,J＝7.7Hz,1H),6.56(s,1H),6.44(t,J＝8.0Hz,1H),6.26(s,1H),4.66(d,J＝5.8Hz,2H),3.89(d,J＝5.5Hz,6H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.76,154.19,154.05,149.12,148.77,146.55,140.82,129.22,115.24,113.00,112.90,108.96,107.47,102.49,56.47,56.13,44.09.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₁₇H₁₈N₄O₂[M+H]⁺,311.14633；found:311.15031.

步骤D：N-苯基-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-1)的制备

依次向50mL圆底烧瓶加入N-(3-氨基苄基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(0.35g,1.1mmol),氯仿(8mL)，搅拌均匀后，逐滴滴加苯基异腈酸酯(131mg,1.1mmol)的氯仿溶液(3mL),滴加完毕，再加入3滴三乙胺(TEA)，常温下反应8h。减压除去溶剂,固体残留物依次用蒸馏水洗涤(3×15mL),乙醚洗涤(3×15mL),无水乙醇重结晶，干燥，得到白色固体粉末，即产品(295mg，产率62.60％)。m.p.207.4～208.3℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.37(s,1H),7.71(s,1H),7.49–7.38(m,4H),7.25(dd,J＝17.7,9.1Hz,3H),7.13(s,1H),6.97(t,J＝7.4Hz,2H),4.78(d,J＝5.0Hz,2H),3.91(s,6H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.24,153.76,153.50,152.49,151.36,148.34,146.12,140.51,139.82,139.72,131.66,128.71,121.70,120.69,118.10,116.78,116.57,108.45,107.06,101.94,55.95,55.65,43.50.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₄H₂₃N₅O₃[M+H]⁺,430.18344；found:430.18666.

按照上述的方法，选择合适的原料和试剂，分别制得实施例3～39所示喹唑啉-芳基脲衍生物。

实施例3

N-(4-甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-2)

白色固体粉末，产率49.80％。m.p.205.6～208.1℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.36(s,1H),7.71(s,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),7.38(s,1H),7.33(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(t,J＝7.8Hz,1H),7.13(s,1H),7.07(d,J＝8.3Hz,2H),6.99(d,J＝7.6Hz,1H),4.78(d,J＝5.7Hz,2H),3.91(d,J＝2.8Hz,6H),2.24(s,3H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.23,153.76,153.56,152.48,151.33,148.34,146.13,140.52,139.85,137.07,130.56,129.12,128.70,120.64,118.19,116.49,108.45,107.05,101.93,55.98,55.66,43.47,20.29.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₅H₂₅N₅O₃[M+H]⁺:444.19909；found:444.20223.

实施例4

N-(2,4-二甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-3)

白色固体粉末，产率53.59％。m.p.222.4～224.6℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.36(s,1H),7.86(s,1H),7.77–7.60(m,2H),7.47(d,J＝7.7Hz,1H),7.37(s,1H),7.23(t,J＝7.5Hz,1H),7.13(s,1H),6.96(t,J＝8.2Hz,1H),6.80(t,J＝8.0Hz,1H),4.78(d,J＝4.4Hz,2H),3.91(s,6H),2.22(s,3H),2.18(s,3H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.24,153.76,153.54,152.70,151.61,148.34,146.12,140.50,140.07,134.74,131.51,130.65,128.74,127.70,126.52,121.36,120.50,116.39,108.44,107.03,101.87,55.94,55.66,43.49,20.28,17.76.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₆H₂₇N₅O₃[M+H]⁺:458.21474；found:458.21800.

实施例5

N-(2,5-二甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-4)

白色固体粉末，产率69.89％。m.p.216.5～217.1℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.36(s,1H),7.85(s,1H),7.70(d,J＝7.6Hz,2H),7.47(d,J＝7.8Hz,1H),7.38(s,1H),7.24(t,J＝7.8Hz,1H),7.13(s,1H),7.01(t,J＝7.5Hz,1H),6.75(d,J＝7.4Hz,1H),4.79(d,J＝4.8Hz,2H),3.91(s,6H),2.25(s,3H),2.17(s,3H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.24,153.76,153.48,152.56,151.73,148.35,146.12,140.53,139.98,137.15,135.01,129.91,128.74,124.16,123.17,121.43,120.60,116.37,108.44,107.04,101.93,55.95,55.66,43.49,20.89,17.42.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₆H₂₇N₅O₃[M+H]⁺:458.21474；found:458.21784.

实施例6

N-(2-乙基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-5)

白色固体粉末，产率42.52％。m.p.215.4～216.7℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.36(s,1H),7.90(s,1H),7.79(d,J＝8.1Hz,1H),7.71(s,1H),7.48(d,J＝7.9Hz,1H),7.37(s,1H),7.24(t,J＝7.8Hz,1H),7.15(dd,J＝6.6Hz,1H),7.06–6.95(m,2H),4.78(d,J＝5.3Hz,2H),3.91(d,J＝2.6Hz,6H),2.56-2.61(m,2H),1.15(t,J＝7.5Hz,3H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.24,153.76,153.57,152.79,151.39,148.35,146.12,140.53,140.00,136.50,133.65,128.76,128.35,125.98,123.07,121.91,120.58,116.44,108.44,107.03,101.87,55.96,55.66,43.49,23.74,14.23.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₆H₂₇N₅O₃[M+H]⁺:458.21474；found:458.21798.

实施例7

N-(2-甲氧基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-6)

白色固体粉末，产率66.21％。m.p.158.9～161.4℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.35(s,1H),7.70(s,1H),7.53(d,J＝7.8Hz,1H),7.45(d,J＝7.8Hz,1H),7.41(s,1H),7.34(s,1H),7.24(s,1H),7.12(t,J＝7.8Hz,1H),7.02–6.86(m,3H),4.77(d,J＝5.6Hz,2H),3.91(d,J＝4.2Hz,6H),3.86(s,3H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.23,153.76,153.50,152.31,151.33,148.35,147.53,146.07,140.54,139.86,128.79,121.73,120.67,120.50,118.13,116.35,116.26,110.62,108.41,107.01,101.83,55.97,55.66,55.38,43.45.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₅H₂₅N₅O₄[M+H]⁺:460.19401；found:460.19704.

实施例8

N-(4-甲氧基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-7)

白色固体粉末，产率52.70％。m.p.218.6～221.2℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.37(s,1H),7.71(s,1H),7.50–7.32(m,4H),7.22(t,J＝7.8Hz,1H),7.13(s,1H),6.98(d,J＝7.5Hz,1H),6.85(d,J＝8.6Hz,2H),4.77(d,J＝5.1Hz,2H),3.91(s,6H),3.71(s,3H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.24,154.35,153.75,152.69,151.72,148.34,146.12,140.46,140.02,132.75,128.67,120.50,119.91,116.66,116.47,113.91,108.45,107.03,101.94,55.97,55.65,55.12,43.51.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₅H₂₅N₅O₄[M+H]⁺:460.19401；found:460.19725.

实施例9

N-(4-叔丁基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-8)

白色固体粉末，产率43.32％。m.p.158.6～162.1℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.34(d,J＝6.4Hz,1H),7.70(s,1H),7.42(d,J＝7.9Hz,1H),7.39–7.31(m,3H),7.31–7.19(m,3H),7.13(s,1H),6.98(d,J＝7.4Hz,1H),4.77(d,J＝5.1Hz,2H),3.91(d,J＝3.1Hz,6H),1.26(s,9H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.22,153.75,153.70,152.47,148.34,146.11,144.06,140.52,139.83,136.98,134.80,128.71,125.33,120.64,120.30,117.94,116.65,108.43,108.10,107.04,101.92,55.95,55.63,43.47,33.83,31.20.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₈H₃₁N₅O₃[M+H]⁺:486.24604；found:486.24931.

实施例10

N-(4-氟苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-9)

白色固体粉末，产率78.73％。m.p.156.3～163.2℃.¹HNMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):8.36(s,1H),7.71(s,1H),7.53–7.36(m,4H),7.23(t,J＝7.7Hz,1H),7.20–7.06(m,3H),6.99(d,J＝7.3Hz,1H),4.78(d,J＝4.2Hz,2H),3.91(s,6H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.24,156.07,153.77,152.56,151.79,148.35,146.03,140.50,139.75,136.03,128.70,120.74,119.88,116.76,115.31,115.10,108.43,106.98,101.93,99.50,55.98,55.66,43.49.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₄H₂₂FN₅O₃[M+H]⁺:448.17402；found:448.17710.

实施例11

N-(2-氯苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-10)

白色固体粉末，产率60.91％。m.p.158～160℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.37(s,1H),7.71(s,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),7.44(dd,J＝8.0,1.3Hz,1H),7.37(s,1H),7.32–7.25(m,3H),7.13(s,1H),7.01(dd,J＝12.2,4.6Hz,2H),4.80(d,J＝5.6Hz,2H),3.91(d,J＝2.5Hz,6H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.24,153.77,153.56,152.04,151.84,148.36,146.11,140.66,139.49,135.91,129.16,128.85,127.52,123.19,121.79,121.15,116.54,108.43,107.02,101.84,55.94,55.63,43.45.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₄H₂₂ClN₅O₃[M+H]⁺:464.14737；found:464.14787.

实施例12

N-(3,4-二氯苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-11)

白色固体粉末，产率39.64％。m.p.161.2～164.2℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.35(s,1H),7.88(d,J＝2.4Hz,1H),7.70(s,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,1H),7.45–7.39(m,2H),7.32(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.24(t,J＝7.8Hz,1H),7.13(s,1H),7.01(d,J＝7.5Hz,1H),4.77(d,J＝5.6Hz,2H),3.91(d,J＝3.3Hz,6H).¹³CNMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):158.72,154.26,154.05,152.76,152.06,148.84,146.60,141.07,140.46,139.85,131.47,130.97,129.23,123.46,121.61,119.70,118.73,117.61,108.94,107.53,102.43,56.44,56.16,43.95.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₄H₂₁Cl₂N₅O₃[M+H]⁺:498.10844；found:498.10867.

实施例13

N-(2,5-二氯苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-12)

白色固体粉末，产率75.89％。m.p.233.4～237.8℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.36(s,1H),7.70(s,1H),7.47(d,J＝8.6Hz,2H),7.37(s,1H),7.28(t,J＝7.8Hz,1H),7.13(s,1H),7.09–7.02(m,3H),4.79(d,J＝5.6Hz,2H),3.91(d,J＝1.5Hz,6H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.23,153.77,153.56,151.83,148.36,146.12,140.73,139.14,137.21,131.88,130.45,128.88,122.48,121.35,119.90,119.80,116.80,108.43,107.05,101.90,99.50,55.94,55.66,43.42.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₄H₂₁Cl₂N₅O₃[M+H]⁺:498.10844；found:498.10896.

实施例14

N-(4-三氟甲基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-13)

白色固体粉末，产率42.95％。m.p.156.3～158.4℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.36(s,1H),7.71(s,1H),7.66(d,J＝8.6Hz,2H),7.60(d,J＝8.6Hz,2H),7.45(d,J＝9.3Hz,2H),7.24(t,J＝7.7Hz,1H),7.13(s,1H),7.02(d,J＝7.5Hz,1H),4.78(d,J＝5.4Hz,2H),3.91(d,J＝3.3Hz,6H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.23,153.76,153.56,152.24,148.34,146.12,143.51,140.58,139.42,128.74,125.98,123.18,121.75,121.44,121.07,117.73,117.03,116.84,108.44,107.05,101.94,99.50,55.97,55.66,43.46.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₅H₂₂F₃N₅O₃[M+H]⁺:498.17083；found:498.17399.

实施例15

N-苄基-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-14)

白色固体粉末，产率31.60％。m.p.214.1～214.8℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.35(s,1H),7.69(s,1H),7.39(d,J＝7.7Hz,1H),7.35(s,1H),7.30(dd,J＝10.3,7.7Hz,3H),7.24(d,J＝8.3Hz,1H),7.18(t,J＝7.8Hz,1H),7.12(s,1H),6.93(d,J＝7.3Hz,1H),6.61(t,J＝5.2Hz,1H),4.75(d,J＝4.8Hz,2H),4.28(d,J＝5.4Hz,2H),3.95–3.84(m,6H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.22,155.18,153.73,153.56,151.49,148.32,146.10,140.52,140.33,128.58,128.25,127.05,126.65,120.03,116.11,108.44,107.02,101.89,55.94,55.66,43.52,42.66.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₅H₂₅N₅O₃[M+H]⁺:444.19909；found:444.20247.

实施例16

N-[(2-甲氧羰基)苯基]-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-15)

白色固体粉末，产率51.18％。m.p.143.5～146.1℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.34(d,J＝6.0Hz,1H),7.93(dd,J＝8.0,1.3Hz,1H),7.71(s,1H),7.56(t,J＝7.9Hz,1H),7.52–7.45(m,3H),7.26(t,J＝7.8Hz,1H),7.13(s,1H),7.07(t,J＝7.6Hz,1H),7.02(d,J＝7.6Hz,1H),4.79(d,J＝5.6Hz,2H),3.90(t,J＝4.8Hz,6H),3.88(s,3H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):167.58,158.24,153.75,153.57,152.15,148.33,146.13,141.71,140.46,139.71,133.96,130.47,12866,121.13,120.24,117.25,115.00,108.46,107.05,101.95,79.18,55.63,52.25,43.54.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₆H₂₅N₅O₅[M+H]⁺:488.18892；found:488.19232.

实施例17

N-(4-硝基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-16)

黄色固体粉末，产率57.75％。m.p.257.1～258.5℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.35(s,1H),8.17(s,1H),8.14(s,1H),7.73(d,J＝8.9Hz,2H),7.68(d,J＝9.1Hz,2H),7.43(s,1H),7.26(t,J＝7.7Hz,1H),7.12(s,1H),7.05(d,J＝7.2Hz,1H),4.78(d,J＝4.2Hz,2H),3.91(s,6H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.29,153.89,153.62,151.92,151.68,148.45,146.37,145.81,141.48,141.02,140.65,139.09,133.58,124.97,124.89,121.48,117.97,117.44,111.07,108.52,102.14,55.69,43.52.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₄H₂₂N₆O₅[M+H]⁺:475.16852；found:475.17197.

实施例18

N-(2-甲基-5-硝基苯基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-17)

淡黄色固体粉末，产率17.45％。m.p.184.1～186.3℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.36(s,1H),7.91(d,J＝6.0Hz,1H),7.78(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.71(s,1H),7.49(d,J＝7.9Hz,1H),7.46–7.38(m,2H),7.28(t,J＝7.8Hz,1H),7.13(s,1H),7.05(d,J＝7.4Hz,1H),4.80(d,J＝5.6Hz,2H),3.91(s,6H),2.35(s,3H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.71,154.26,154.04,152.78,151.44,148.85,146.56,146.53,141.20,139.82,139.08,134.69,131.45,129.38,121.68,117.16,116.98,113.82,108.91,107.49,102.38,56.44,56.15,43.92,18.56.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₅H₂₄N₆O₅[M+H]⁺:489.18417；found:489.18742.

实施例19

N-(α-萘基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-18)

白色固体粉末，产率54.07％。m.p.209.1～211.4℃.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.37(d,J＝10.8Hz,1H),8.16–8.08(m,1H),8.02(d,J＝7.5Hz,1H),7.92(d,J＝7.6Hz,1H),7.73(s,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.55(dd,J＝15.1,8.2Hz,3H),7.50–7.44(m,2H),7.27(t,J＝7.6Hz,1H),7.14(s,1H),7.02(d,J＝7.2Hz,1H),4.81(d,J＝4.6Hz,2H),3.92(s,6H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):158.26,153.77,153.59,153.52,152.89,148.36,146.13,140.59,139.91,134.40,134.32,133.74,133.67,128.80,128.36,125.87,122.84,121.35,120.76,117.47,117.28,116.61,108.46,107.06,101.95,55.96,55.64,43.51.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₈H₂₅N₅O₃[M+H]⁺:480.19909；found:480.20244.

实施例20

N-(5-叔丁基异噁唑基)-N'-{3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物I-19)

白色固体粉末，产率19.73％。m.p.154～156℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.35(s,1H),7.72(s,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),7.25(t,J＝7.7Hz,1H),7.12(s,1H),7.03(d,J＝7.5Hz,1H),6.50(s,1H),4.76(d,J＝5.7Hz,2H),3.91(d,J＝2.1Hz,6H),1.29(s,9H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):180.57,158.70,157.79,154.25,153.92,151.81,150.69,148.83,146.41,141.13,139.50,129.28,121.88,117.54,117.22,112.95,108.90,107.38,102.42,92.88,56.48,56.14,45.95,32.91,28.79.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₅H₂₈N₆O₄[M+H]⁺:477.22056；found:477.22369.

实施例21

N-苯基-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-1)

TLC检测(V_石油醚/V_乙酸乙酯＝3:2，R_f＝0.05)，白色固体粉末，产率36.58％。m.p.241.3～242.5℃.¹HNMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.34(d,J＝8.2Hz,1H),7.80(t,J＝7.6Hz,1H),7.72(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(t,J＝7.5Hz,1H),7.43(d,J＝8.0Hz,2H),7.38–7.30(m,3H),7.25(m,2H),7.07–6.90(m,1H),6.80(t,J＝7.2Hz,2H),4.80(d,J＝5.8Hz,2H).¹³CNMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.30,154.94,152.34,149.10,140.01,139.64,139.53,132.42,128.58,127.40,125.53,122.53,121.66,120.62,118.08,116.65,116.54,114.83,43.44.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₂H₁₉N₅O[M+H]⁺:370.16232；found:370.16537.

实施例22

N-(3-甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-2)

白色固体粉末，产率55.87％。m.p.227.1～228.8℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.34(d,J＝8.3Hz,1H),7.79(t,J＝7.6Hz,1H),7.72(d,J＝8.3Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,1H),7.42(d,J＝7.9Hz,1H),7.37(s,1H),7.31(t,J＝6.5Hz,1H),7.27(s,1H),7.22(dd,J＝17.6,9.5Hz,2H),7.14(t,J＝7.7Hz,1H),6.98(d,J＝7.7Hz,1H),6.78(d,J＝7.6Hz,1H),4.79(d,J＝5.9Hz,2H),2.27(s,3H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.87,155.59,152.91,149.68,140.63,140.27,140.04,138.40,133.09,129.23,129.07,128.03,126.20,123.14,123.02,121.12,119.13,117.07,117.01,115.80,115.40,43.97,21.68.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₃H₂₁N₅O[M+H]⁺:384.17797；found:384.18077.

实施例23

N-(4-甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-3)

TLC检测(V_石油醚/V_乙酸乙酯＝1:1，R_f＝0.18)，硅胶柱层析分离，得白色固体，产率26.10％。m.p.266.1～267.4℃.¹HNMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.34(d,J＝8.1Hz,1H),7.80(t,J＝7.6Hz,1H),7.72(d,J＝8.2Hz,1H),7.56(t,J＝7.5Hz,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.37(s,1H),7.31(d,J＝8.3Hz,2H),7.27(t,J＝7.2Hz,1H),7.23(t,J＝7.8Hz,1H),7.07(d,J＝8.2Hz,2H),6.98(d,J＝7.5Hz,1H),4.79(d,J＝5.7Hz,2H),2.24(s,3H).¹³CNMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.31,154.91,152.39,148.99,139.96,139.75,136.96,132.46,130.51,128.98,128.56,127.32,125.56,122.55,120.52,118.19,116.60,116.48,114.81,43.46,20.17.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₃H₂₁N₅O[M+H]⁺:384.17797；found:384.18319.

实施例24

N-(3,4-二甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-4)

白色固体粉末，产率70.52％。m.p.196.8～197.5℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.34(d,J＝7.9Hz,1H),7.80(t,J＝8.2Hz,1H),7.72(d,J＝8.1Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,1H),7.41(d,J＝9.0Hz,1H),7.36(s,1H),7.31(t,J＝7.0Hz,1H),7.25–7.19(m,2H),7.14(d,J＝8.1Hz,1H),7.01(d,J＝8.2Hz,1H),6.97(d,J＝7.7Hz,1H),4.79(d,J＝5.8Hz,2H),2.18(s,3H),2.15(s,3H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.86,155.58,152.96,149.68,140.59,140.37,137.78,136.77,133.09,130.09,129.90,129.20,128.03,126.19,123.14,121.01,119.97,117.02,116.95,116.20,115.40,43.98,20.09,19.12.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₄H₂₃N₅O[M+H]⁺:398.19362；found:398.19687.

实施例25

N-(2,6-二乙基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-5)

白色固体粉末，产率28.23％。m.p.260.2～261.9℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.33(d,J＝8.2Hz,1H),7.82–7.76(m,1H),7.71(d,J＝8.2Hz,1H),7.61–7.51(m,2H),7.41(d,J＝8.2Hz,1H),7.35(s,1H),7.20(t,J＝7.8Hz,1H),7.16(dd,J＝8.0,7.0Hz,1H),7.09(d,J＝7.5Hz,2H),6.95(d,J＝7.6Hz,1H),4.77(d,J＝5.9Hz,2H),2.53-2.57(m,4H),1.11(t,J＝7.6Hz,6H).¹³CNMR(125MHz,CDCl₃)δ(ppm):159.84,155.59,154.24,149.68,142.39,140.86,140.54,134.39,133.08,129.18,128.03,127.20,126.43,126.18,123.14,120.64,116.68,115.40,43.98,24.90,15.06.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₆H₂₇N₅O[M+H]⁺:426.22492；found:426.22784.

实施例26

N-(3-甲氧基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-6)

白色固体粉末，产率34.08％。m.p.178.8～179.5℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(t,J＝6.9Hz,1H),7.72(dd,J＝8.3,0.9Hz,1H),7.55(t,J＝6.9Hz,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.37(s,1H),7.31(t,J＝6.5Hz,1H),7.24(t,J＝7.8Hz,1H),7.19–7.14(m,2H),6.99(d,J＝7.6Hz,1H),6.90(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),6.55(t,J＝2.5Hz,1H),4.79(d,J＝5.9Hz,2H),3.73(s,3H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):160.15,159.86,155.58,152.86,149.69,141.36,140.63,140.17,133.09,129.99,129.23,128.03,126.19,123.13,121.20,117.15,117.09,115.40,110.93,107.70,104.36,55.38,43.96.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₃H₂₁N₅O₂[M+H]⁺:400.17288；found:400.17582.

实施例27

N-(2,5-二氧甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-7)

灰色固体粉末，产率16.78％。m.p.211.8～212.6℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.34(d,J＝8.2Hz,1H),8.21(s,1H),7.84(d,J＝3.0Hz,1H),7.80(t,J＝7.6Hz,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.55(t,J＝7.5Hz,1H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),7.34(s,1H),7.24(t,J＝7.8Hz,1H),6.99(d,J＝7.5Hz,1H),6.90(d,J＝8.9Hz,1H),6.48(d,J＝11.9Hz,1H),4.79(d,J＝5.9Hz,2H),3.80(s,3H),3.68(s,3H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.86,155.59,153.78,152.72,149.69,142.27,140.66,140.27,133.10,130.03,129.28,128.03,126.21,123.14,121.16,116.83,115.39,111.89,105.85,105.47,56.79,55.71,43.95.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₄H₂₃N₅O₃[M+H]⁺:430.18344；found:430.18642.

实施例28

N-[(3,4,5-三甲氧基)苯基]-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-8)

白色固体粉末，产率6.10％。m.p.226.8～231.5℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.34(d,J＝7.7Hz,1H),7.80(t,J＝7.0Hz,1H),7.78–7.70(m,1H),7.55(t,J＝7.0Hz,1H),7.40(dd,J＝11.8,3.8Hz,2H),7.23(t,J＝7.8Hz,1H),6.99(d,J＝7.6Hz,2H),6.78(s,2H),4.79(d,J＝5.9Hz,2H),3.75(s,6H),3.61(s,3H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.87,155.58,153.33,152.95,150.39,149.70,140.62,140.20,136.27,133.08,132.96,129.20,128.04,126.14,123.14,121.17,117.21,117.11,115.41,96.45,60.58,56.16,43.98.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₅H₂₅N₅O₄[M+H]⁺:460.19401；found:460.19704.

实施例29

N-(4-叔丁基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-9)

白色固体粉末，产率28.23％。m.p.218.2～220.6℃.¹HNMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.28(d,J＝8.4Hz,1H),7.80(d,J＝7.4Hz,1H),7.72(d,J＝8.2Hz,1H),7.56(m,1H),7.42(t,J＝8.0Hz,1H),7.37(s,1H),7.34(d,J＝8.6Hz,2H),7.28(d,J＝8.7Hz,2H),7.23(t,J＝7.8Hz,1H),6.98(d,J＝7.5Hz,1H),4.80(d,J＝8.1Hz,2H),1.26(s,9H).¹³CNMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.30,154.96,152.39,149.13,144.05,140.00,139.74,136.88,132.42,128.56,127.42,125.53,125.18,122.53,120.51,117.95,116.57,116.46,114.84,43.44,33.72,31.12.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₆H₂₇N₅O[M+H]⁺:426.22492；found:426.22784.

实施例30

N-(2-氟苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-10)

白色固体粉末，产率49.35％。m.p.243.5～245.2℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.32(d,J＝8.0Hz,1H),8.14(dd,J＝8.3,1.6Hz,1H),7.80(t,J＝7.0Hz,1H),7.72(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.55(t,J＝7.0Hz,1H),7.44(dd,J＝8.1,1.1Hz,1H),7.36(s,1H),7.28–7.19(m,2H),7.13(t,J＝7.8Hz,1H),7.01(t,J＝4.2Hz,2H),6.85(t,J＝6.0Hz,1H),4.80(d,J＝5.9Hz,2H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.87,155.59,153.36,152.58,149.71,140.76,139.99,133.09,129.33,128.05,126.20,124.98,124.96,123.13,122.87,121.42,120.91,116.97,115.46,115.40,115.31,43.95.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₂H₁₈FN₅O[M+H]⁺:388.15289；found:388.15584.

实施例31

N-(4-氯苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-11)

TLC检测，用V_石油醚/V_乙酸乙酯＝1.5:1(R_f＝0.1)，硅胶柱层析分离，得白色固体245mg，产率60.79％。mp.283.4～284.5℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.33(d,J＝8.3Hz,1H),7.79(t,J＝7.6Hz,1H),7.72(d,J＝7.5Hz,1H),7.55(t,J＝8.2Hz,1H),7.48–7.44(m,2H),7.42(d,J＝8.1Hz,1H),7.37(s,1H),7.33–7.29(m,2H),7.23(d,J＝7.9Hz,1H),7.00(d,J＝7.6Hz,1H),6.38(d,J＝6.0Hz,1H),4.79(d,J＝5.9Hz,2H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.87,155.58,152.84,149.66,140.66,140.06,139.15,133.09,129.24,129.07,128.01,126.20,125.78,123.14,121.33,120.14,117.22,117.17,115.40,43.96.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₂H₁₈ClN₅O[M+H]⁺:404.12629；found:404.12645.

实施例32

N-[(3-氯-4-甲基)苯基]-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-12)

白色固体粉末，产率59.95％。m.p.250.8～252℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.34(d,J＝7.7Hz,1H),7.80(t,J＝6.9Hz,1H),7.74–7.70(m,1H),7.67(d,J＝2.1Hz,1H),7.55(t,J＝7.0Hz,1H),7.41(d,J＝8.1Hz,1H),7.38(s,1H),7.27–7.20(m,2H),7.16(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),7.00(d,J＝7.7Hz,1H),6.80(d,J＝7.0Hz,1H),4.79(d,J＝5.9Hz,2H),2.25(s,3H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.86,155.58,152.84,149.68,140.65,140.04,139.32,133.56,133.09,131.60,129.23,128.67,128.02,126.19,123.14,121.33,118.56,117.38,117.20,115.40,43.96,19.25.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₃H₂₀ClN₅O[M+H]⁺:418.14164；found:418.14179.

实施例33

N-(4-三氟甲基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-13)

白色固体粉末，产率18.99％。m.p.276.5～277.4℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.33(d,J＝7.6Hz,1H),7.80(t,J＝6.9Hz,1H),7.74–7.70(m,1H),7.65–7.59(m,4H),7.55(t,J＝7.0Hz,1H),7.43(d,J＝8.1Hz,1H),7.39(s,1H),7.25(t,J＝7.8Hz,1H),7.02(d,J＝7.9Hz,1H),6.80(d,J＝6.0Hz,1H),4.80(d,J＝5.9Hz,2H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.87,155.58,152.68,149.68,143.91,140.72,139.84,133.09,129.27,128.03,126.54,126.51,126.20,123.95,123.13,122.31,122.06,121.56,118.26,117.36,115.40,43.94.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₃H₁₈F₃N₅O[M+H]⁺:438.14970；found:438.15240.

实施例34

N-[(2-甲氧羰基)苯基]-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-14)

白色固体粉末，产率16.39％。m.p.208.1-209.3℃.¹HNMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.33(d,J＝7.2Hz,1H),7.98–7.90(m,1H),7.80(t,J＝7.6Hz,1H),7.72(d,J＝8.2Hz,1H),7.56(dd,J＝13.8,6.7Hz,2H),7.51–7.40(m,2H),7.25(t,J＝7.8Hz,2H),7.07(t,J＝7.5Hz,1H),7.01(d,J＝7.5Hz,1H),6.80(d,J＝6.0Hz,1H),4.80(d,J＝5.8Hz,2H),3.86(s,3H).¹³CNMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):167.45,159.30,154.96,152.06,149.13,141.58,139.94,139.60,133.76,132.41,130.33,128.49,127.41,125.51,122.55,121.00,120.20,117.24,117.12,115.08,114.85,52.12,43.49.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₄H₂₁N₅O₃[M+H]⁺:428.16779；found:428.17080.

实施例35

N-(4-硝基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-15)

黄色固体，产率12.07％。m.p.243.8～245.1℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.47(t,J＝6.0Hz,2H),8.33(d,J＝7.6Hz,1H),8.20–8.15(m,2H),7.80(t,J＝7.6Hz,1H),7.72(d,J＝8.3Hz,1H),7.67(d,J＝9.3Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,1H),7.44(d,J＝8.1Hz,1H),7.41(s,1H),7.26(t,J＝7.8Hz,1H),7.03(d,J＝7.7Hz,1H),4.80(d,J＝5.9Hz,2H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.86,155.58,152.39,149.68,146.87,141.42,140.76,139.60,133.10,129.30,128.03,126.21,125.60,123.13,121.83,117.88,117.53,117.48,115.39,43.93.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₂H₁₈N₆O₃[M+H]⁺:415.14739；found:415.15028.

实施例36

N-(2-甲基-5-硝基苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-16)

淡黄色固体，产率46.72％。m.p.234.2～236.5℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.95(d,J＝2.5Hz,1H),8.37(d,J＝7.7Hz,1H),8.31(s,1H),7.83(t,J＝7.0Hz,1H),7.79(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),7.73(d,J＝7.5Hz,1H),7.62–7.57(m,1H),7.48–7.42(m,3H),7.28(t,J＝7.8Hz,1H),7.04(d,J＝7.7Hz,1H),4.83(d,J＝5.9Hz,2H),2.35(s,3H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):160.02,155.11,152.83,148.23,146.57,140.48,139.90,139.13,134.80,133.55,131.50,129.39,127.02,126.58,123.34,121.63,117.23,117.18,116.99,115.15,113.90,44.14,18.64.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₃H₂₀N₆O₃[M+H]⁺:429.16304；found:429.16617.

实施例37

N-(2,4-二氯苯基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲

白色固体粉末，产率28.14％。m.p.259.9-261.1℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.37(d,J＝8.0Hz,1H),8.19(d,J＝9.0Hz,1H),7.80(t,J＝7.0Hz,1H),7.72(dd,J＝8.3,0.9Hz,1H),7.61(d,J＝2.5Hz,1H),7.55(t,J＝7.0Hz,1H),7.45(dd,J＝8.1,1.2Hz,2H),7.37(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.35(s,1H),7.27(t,J＝7.9Hz,1H),7.03(d,J＝7.7Hz,1H),4.80(d,J＝5.9Hz,2H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):159.86,155.59,152.38,149.69,140.79,139.80,135.67,133.12,129.38,128.99,128.09,128.05,126.49,126.23,123.13,122.97,122.45,121.63,117.11,117.04,115.38,43.92.ESI-HRMS(m/z):calcdforC₂₂H₁₇Cl₂N₅O[M+H]⁺:438.08702；found:438.08733.

实施例38

N-(5-甲基异噁唑基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-18)

黄色固体，产率14.43％。m.p.73.5～75.1℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.83(s,1H),8.33(d,J＝7.0Hz,1H),8.01(d,J＝7.1Hz,1H),7.78(dd,J＝7.0,1.2Hz,1H),7.71(d,J＝7.1Hz,1H),7.55(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),7.42(s,1H),7.25(dd,J＝16.0,8.0Hz,1H),7.02(d,J＝7.6Hz,1H),6.51(s,1H),4.79(d,J＝5.9Hz,2H),2.35(s,3H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):169.48,159.85,159.19,155.56,151.90,149.68,140.71,139.69,133.08,129.25,128.02,126.19,123.15,121.72,120.00,117.37,115.40,96.07,43.99,12.57.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₀H₁₈N₆O₂[M+H]⁺:375.15248；found:375.15571.

实施例39

N-(5-叔丁基异噁唑基)-N'-{3-[(喹唑啉-4-氨基)甲基]苯基}脲(化合物II-19)

黄色稠状固体，产率8.65％。m.p.35.2～36.7℃.¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.89(s,1H),8.49(s,1H),8.1(d,J＝2.4Hz,1H),7.80–7.76(m,1H),7.73(d,J＝7.3Hz,1H),7.56–7.50(m,1H),7.43(d,J＝1.8Hz,1H),7.28–7.23(m,1H),7.04(d,J＝7.6Hz,1H),6.50(s,1H),4.80(d,J＝5.1Hz,2H),1.28(s,9H).¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):180.62,172.58,159.89,155.56,151.80,149.63,140.77,139.50,133.08,129.30,127.97,126.19,123.15,121.89,117.38,115.41,112.88,92.90,44.00,32.90,28.79.ESI-HRMS(m/z):calcd.forC₂₃H₂₄N₆O₂[M+H]⁺:417.19943；found:417.20226.

实施例40

系列I各化合物对肿瘤细胞增殖抑制活性实验

从喹唑啉-芳基脲衍生物中，采用下列实验筛选具有最佳活性的化合物。本实验中所用的细胞株包括：人肝癌细胞株(HepG2和BEL-7404)、人胃癌细胞株MGC-803、人宫颈癌细胞株HeLa、人非小细胞肺癌细胞株(NCI-H460和A549)及人正常肝细胞株HL-7702。

抑制肿瘤细胞增殖测定方法：采用溴化四氮唑蓝(MTT)法。MTT是一种黄色的染料。在活细胞线粒体中,琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT,使其tetrazolium环开裂,生成蓝紫色的结晶甲瓒,并沉积在细胞中。在一定细胞数范围内,甲瓒结晶的生成量仅与活细胞的数目成正比(由于死细胞中不含有琥珀酸脱氢酶，因此加入MTT不会有甲瓒生成)。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在570nm波长处检测其光吸收值，可间接反映活细胞数量。因而，采用MTT法可测定目标化合物抑制细胞的增殖能力，同时利用本领域熟知的方法，可以对任意癌细胞使用相似的测定方法。

实验方法：细胞接种于含10％胎牛血清的DMEM细胞培养液中，培养皿置于37℃，含5％CO₂的细胞培养箱中，每2～3天换液一次，传代和收集细胞。将对数生长期细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养液配制成所需浓度的细胞悬液，按每孔4000细胞(180μL)加入到96孔细胞培养板中，待细胞贴壁后每孔加入20μL样品的DMEM培养液(样品先用DMSO溶解，然后用不含血清的DMEM培养液稀释为一系列浓度梯度的溶液)，样品作用的终浓度分别为1μM、5μM、10μM、15μM、30μM、45μM，每个浓度有3个平行孔。培养2天后，每孔加入10μL，浓度为5mg/mLMTT溶液，继续培养4h，终止培养，弃去培养液。每孔加入100μL的DMSO，置于摇床上低速振荡8min，使结晶充分地溶解。酶联免疫检测仪检测波长为570nm下各孔的OD值。同时设置调零孔(只加入培养基、MTT、DMSO)。根据所得的OD值，计算抑制率和平均抑制率。平均抑制率计算公式：平均抑制率＝(对照组平均OD值－给药组平均OD值)/对照组平均OD值×100％。同时根据各浓度的生长抑制率，采用SPSSv18.0软件计算IC₅₀值。

检测结果：

N-取代苯基-N'-{3-[(6,7-二甲氧基-4-氨基喹唑啉)苄基]}脲(系列I)体外肿瘤细胞增殖抑制活性结果如表2所示。各化合物的IC₅₀值如表3所示。

表2系列I各化合物对肿瘤细胞的平均抑制率(n＝3)

表3系列I各化合物对NCI-H460和HepG2细胞株的IC₅₀值

由表2和表3可知，第一个系列部分化合物对NCI-H460和HepG2细胞均表现较好的增殖抑制活性；其中对上述两种细胞株增殖抑制活性均最佳的化合物是I-8，IC₅₀值分别为4.60μM和6.85μM。

实施例41

系列II各化合物对肿瘤细胞增殖抑制活性实验

N-取代苯基-N'-{3-[(4-氨基喹唑啉)苄基]}脲(系列II)体外肿瘤细胞增殖抑制活性结果如表4所示。各化合物的IC₅₀值如表5所示。

表4系列II各化合物对肿瘤细胞的平均抑制率(n＝3)

表5系列II各化合物对NCI-H460和HepG2细胞株的IC₅₀值

由表4和表5可知，第二个系列部分化合物对NCI-H460和HepG2细胞均表现较好的增殖抑制活性；其中对上述两种细胞株增殖抑制活性均最佳的化合物是II-19，IC₅₀值分别为12.03μM和13.38μM。

实施例42

化合物I-8和II-19对数种细胞的IC₅₀值

通过上述测试，筛选出对肿瘤细胞增殖抑制活性较好的两个化合物I-8和II-19，并考察其对六种肿瘤细胞株(NCI-H460、HepG2、HeLa、BEL-7404、MGC-803和A549)和一种正常细胞株(人正常肝细胞株HL-7702)的体外增殖抑制活性。利用SPSS软件获取IC₅₀值。

结果如表6所示。由表6可知，化合物I-8对上述六种肿瘤细胞的增殖抑制活性均优于阳性对照药物索拉非尼。而且，化合物I-8对MGC-803非常敏感，其次是NCI-H460和A549细胞株。化合物II-19除了对HepG2细胞株的增殖抑制活性弱于对照药物索拉非尼外，对其它五种肿瘤细胞株的增殖抑制活性也强于对照药物索拉非尼。

表6化合物I-8和II-19对数种细胞的IC₅₀值

从上述试验结果可以清楚地看出，本发明所要保护的通式(II)的喹唑啉-芳基脲衍生物，对六种肿瘤细胞株(NCI-H460、HepG2、HeLa、BEL-7404、MGC-803和A549)的增殖具有较好的抑制作用，部分化合物对某些特定细胞株表现出优异的增殖抑制活性，比如化合物I-8对MGC-803、NCI-H460和A549细胞的增殖抑制活性明显优于阳性对照药物索拉非尼，化合物I-8可显著抑制上述肿瘤细胞的生长，其IC₅₀值明显低于索拉非尼。

实施例43

细胞形态学观测

化合物I-8作用于NCI-H460和A549细胞24、48、72h后，显微镜下观察细胞死亡和碎片增多，细胞密度下降，细胞固缩融合，图9表示不同浓度化合物I-8作用NCI-H460细胞株24h后，细胞形态学的变化。由此说明化合物I-8能明显抑制两种细胞的生长，并随着时间的延长和剂量的增加，抑制作用逐渐增强，呈时间和浓度依赖性。

实施例44诱导细胞凋亡实验

将A549细胞以2×10⁶/mL的密度接种于直径6cm的培养皿，每孔3mL。分别用不同浓度化合物I-8(0、5、15、30μM)和索拉非尼(15μM)同细胞共孵化48h。离心收集悬浮细胞和贴壁细胞，并调整细胞浓度为1×10⁶/ml，加入AnnexinV-FITC试剂，室温避光孵育20min，再加入碘化丙啶(PI)染液，室温避光孵育5min，流式细胞仪检测细胞凋亡率。实验重复3次。结果以均值±标准差表示。显著性检验采用单因素方差分析和配对t检验。所有数据采用SPSS18.0统计软件包进行统计分析，p<0.05为有统计学差异(以下实验同)。检测结果如表7所示。由检测结果可知，同阳性对照药物索拉非尼一样，在48h内，化合物I-8并未明显地诱导A549细胞发生凋亡，两组间无显著性差异(p＞0.05)。因此化合物I-8在上述浓度范围内，共孵化48h并不诱导A549细胞发生凋亡；但是随着浓度的增加，细胞坏死率增加，当浓度增加至30μM时，与阴性对照组间有显著性差异(p＜0.05)。同时，选取其它几种化合物，如化合物I-6，I-19及II-19，在相同条件下进行试验，也得到与之完全相同的结论。这就证明在上述实验条件下，通式(II)的喹唑啉-芳基脲衍生物(包括化合物I-8)并非通过诱导凋亡的机制对A549细胞产生增殖抑制活性。

表7化合物I-8对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响(n＝3)

^a与对照组相比，p＜0.05。

实施例45

阻滞细胞周期实验

将A549细胞接种于培养皿。细胞密度、加入药物的浓度及共孵化时间同于上述的诱导细胞凋亡实验。细胞消化后，用PBS洗涤2次，制成细胞悬液，加入-20℃预冷的70％乙醇溶液，-20℃固定过夜。离心弃去固定液，用PBS洗涤2次，加入RNaseA，室温避光染色30min，再加入PI染液，流式细胞仪进行检测，每个样品进样1.0×10⁴个细胞。采用ModFit软件分析细胞周期分布。实验重复3次。A549细胞周期阻滞实验的检测结果如图10和表8所示。

流式细胞术检测结果显示，化合物I-8能够诱导A549细胞周期G₀/G₁期阻滞，并呈浓度依赖性。15μmol·L^-1化合物I-8作用48h后，A549细胞G₀/G₁期比率增高，S期和G₂/M期的比率下降：G₀/G₁期比率由(69.71±2.89)％上升到(91.78±3.21)％；同时S期比率由(22.61±2.33)％下降到(7.59±0.29)％，G₂/M期则由(7.68±0.54)％下降到(0.63±0.23)％，差异有统计学意义(p＜0.05)。同样，化合物I-8与NCI-H460细胞共孵化24h后，也可诱导NCI-H460细胞周期G₀/G₁期阻滞，并呈浓度依耐性(结果略)。上述结果表明化合物I-8能诱导A549和NCI-H460细胞产生浓度依赖性G₀/G₁期阻滞。

表8化合物I-8对非小细胞肺癌A549细胞周期的影响(n＝3)

^a与对照组相比，p＜0.05。

实施例46

化合物I-8对胞内活性氧水平的影响

参照文献(AzadGK,SinghV,MandalP,etal.Ebseleninducesreactiveoxygenspecies(ROS)-mediatedcytotoxicityinSaccharomycescerevisiaewithinhibitionofglutamatedehydrogenasebeingatarget.FEBSOpenBio,2014,4:77-89.)报道的方法,用荧光探针DCF-DA测定细胞内活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)水平。DCF-DA进入细胞后,经酯酶作用脱去二酯生成2′,7′-二氯氢化荧光素(DCFH),DCFH被超氧阴离子和过氧化氢等氧化,生成发荧光的2′,7′-二氯荧光素(DCF),通过DCF水平的变化即可反映ROS水平的变化。将A549细胞接种于培养皿。细胞密度、加入药物的浓度及共孵化时间同于上述的诱导细胞凋亡实验。细胞消化后，用PBS洗涤2次，制成细胞悬液密度为每毫升1×10⁶个，加入10μmol·L^-1DCFH-DA，37℃避光孵育30min。其后用PBS洗涤细胞2遍以充分去除残留的DCFH-DA工作液，流式细胞检测荧光强度，激发波长488nm，发射波长525nm。实验重复3次。检测结果如图11和表9所示。

表9化合物I-8对A549细胞内活性氧水平的影响(n＝3)

^a与对照组相比，p＜0.05。

从流式细胞检测结果可见,细胞内DCF荧光强度呈浓度-效应关系，随着浓度的增加，p1的比率上升，而p2区的比率下降。与阳性对照索拉非尼相同，化合物I-8并非诱导细胞内ROS的产生，而是清除ROS，降低胞内ROS的水平，说明化合物I-8具有较强的自由基清除能力。上述药理学检测结果为化合物I-8或以其为先导化合物进行结构改造，得到活性更好的芳基脲类化合物，并用于非小细胞肺癌等恶性肿瘤的预防和治疗提供了良好的实验依据。本发明所制备得到的喹唑啉-芳基脲衍生物具有良好的工业应用前景。

Claims (7)

1.以下通式所示的喹唑啉-芳基脲衍生物或其药学上可接受的盐：

其中：

在R表示甲氧基时，Ar表示：苯基、4-甲基苯基、2,4-二甲基苯基、2,5-二甲基苯基、2-乙基苯基、2-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、4-叔丁基苯基、4-氟苯基、2-氯苯基、3,4-二氯苯基、2,5-二氯苯基、4-三氟甲基苯基、苄基、(2-甲氧羰基)苯基、4-硝基苯基、2-甲基-5-硝基苯基、α-萘基或5-叔丁基-3-异噁唑基；

在R表示氢时，Ar表示：苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、3,4-二甲基苯基、2,6-二乙基苯基、3-甲氧基苯基、2,5-二甲氧基苯基、(3,4,5-三甲氧基)苯基、4-叔丁基苯基、2-氟苯基、4-氯苯基、(3-氯-4-甲基)苯基、4-三氟甲基苯基、(2-甲氧羰基)苯基、4-硝基苯基、2-甲基-5-硝基苯基、2,4-二氯苯基、5-甲基-3-异噁唑基或5-叔丁基-3-异噁唑基。

2.权利要求1所述的衍生物的药学上可接受的盐，为：枸橼酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、草酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、三氟甲磺酸盐，以及氢卤酸盐、硫酸盐、磷酸盐。

3.一种药用组合物，包含权利要求1所述的具有通式所示的喹唑啉-芳基脲衍生物或其药学上可接受的盐。

4.根据权利要求3所述的药用组合物，其特征在于包含权利要求1所述的具有通式所示的喹唑啉-芳基脲衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成分，以及药学上可接受的赋型剂；

所述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、辅助剂和载体。

5.权利要求1所述的衍生物或其药学上可接受的盐以及权利要求3所述的药用组合物在制备抗肿瘤药物方面的应用，其中所述肿瘤为：肝癌、非小细胞肺癌、宫颈癌、胃肠道癌。

6.权利要求5所述的应用，其中药物的剂型包括口服制剂、可注射的制剂和局部用药制剂。

7.权利要求1所述的衍生物的制备方法，包括：

步骤A：以2-氨基苯甲酸甲酯或其衍生物与甲酰胺为起始原料，两者反应得到喹唑啉-4-酮或其衍生物；

步骤B：在三氯氧磷作用下，上述喹唑啉-4-酮或其衍生物的4-位被氯代化，得到4-氯喹唑啉或其衍生物；

步骤C：上述4-氯喹唑啉或其衍生物与3-氨基苄胺反应，得到中间体N-(3-氨基苄基)-喹唑啉-4-胺或其衍生物；

步骤D：上述中间体N-(3-氨基苄基)-喹唑啉-4-胺或其衍生物与异氰酸酯反应得到所述喹唑啉-芳基脲衍生物；

其中：

异氰酸酯为Ar-NCO，2-氨基苯甲酸甲酯衍生物为：

R、Ar与权利要求1中相同。