CN104251889B - 复方感冒药片中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬三种成分含量的测定方法 - Google Patents

复方感冒药片中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬三种成分含量的测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种同时测定复方感冒药中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬的方法，包括以下步骤：分别制备盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬对照品溶液；备复方感冒药供试品溶液；用高效液相色谱法测定。其中，以十八烷基硅烷键合硅胶（250×4.0mm，5μm）为填充剂，以辛烷磺酸钠溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，柱温为35℃，流速为1ml/min，检测波长为264nm。

Description

复方感冒药片中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬三种成分含量的测定方法
技术领域
本发明涉及医药检测领域，具体涉及一种复方感冒药的测定方法。
背景技术
复方感冒药的主要成分有盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬，用于缓解由感冒引起的发热、头痛、鼻塞、打喷嚏等症状。商品名为Advil，该复方制剂于2012年在美国上市，目前并未在国内市售。现有技术中没有关于同时测定溶液中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬三种药物成分含量的方法公开，只有部分关于单成分或两成分的含量测定方法。现行标准分别使用碘滴定法、电位滴定法和酸碱滴定法来测定盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬3种成分的含量。董丽等用HPLC法同时测定复方锌布颗粒剂中布洛芬和马来酸氯苯那敏的含量（江苏药学与临床研究，2006，14（5）：307-309）；叶向阳等用HPLC法同时测定了幸福伤风咳素片中盐酸去氧肾上腺素和马来酸氯苯那敏的含量（广东药学，2004，14（2）：13-14）。由于复方感冒药3种主要组分之间的极性及溶解性等性质差别悬殊，建立一种方法同时测定复方感冒药中的盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬具有相当的难度。
本发明以HPLC法为基础，优化色谱条件，完成的本发明的技术方案。
发明内容
本发明的目的是提供一种同时测定复方感冒药中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬三种成分含量的方法，以更好的控制复方感冒药片产品质量。
本发明的技术方案为：
一种同时测定复方感冒药中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬的方法，包括以下步骤：
（1）分别制备盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬的对照品溶液；
（2）制备复方感冒药的供试品溶液；
（3）按以下高效液相色谱条件进行含量测定：
a.以十八烷基硅烷键合硅胶（250×4.0mm，5μm）为填充剂，以辛烷磺酸钠溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，柱温为25～40℃，流速为0.8～1.2ml/min，检测波长为264nm；
b.分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，获得得盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬的含量。
进一步地，上述步骤1所述的盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬对照品溶液的制备方法包括：分别取盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬对照品，精密称定，加溶剂制成每1mL溶液中分别含盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬分别为6.64mg、0.332mg、0.132mg的混合溶液。其中所述溶剂为体积为（50：50v/v）的流动相A和流动相B。
上述步骤2所述的复方感冒药供试品溶液的制备方法包括：取复方感冒药片，研细，精密称定，加溶剂制成浓度为4mg/1mL的溶液。其中所述溶剂为体积为（50：50v/v）的流动相A和流动相B。
上述步骤3所述的梯度洗脱条件为：以体积比计，0分钟时，流动相A为80%，流动相B为20%；20分钟时，流动相A为20%，流动相B为80%；22分钟时，流动相A为80%，流动相B为20%；27分钟时，流动相A为80%，流动相B为20%。
上述步骤3中所述辛烷磺酸钠溶液的浓度为3.25g/L，pH为2.6。
优选地，步骤3所述高效液相色谱条件为：
a.以十八烷基硅烷键合硅胶（250×4.0mm，5μm）为填充剂，以辛烷磺酸钠溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，柱温为35℃，流速为1ml/min，检测波长为264nm；
b.分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，计算得盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬的含量。
本发明的优点是通过优化的高效液相色谱法，对复方感冒药中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬含量同时进行测定，提供了一种稳定性、重复性好的复方感冒药中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬含量的测定方法，使复方感冒药的质量检测指标更加全面，利于更好地控制产品质量。
附图说明
图1显示复方感冒药中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬的保留时间；
其中，盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬的保留时间分别为6.3min、11.4min及19.4min。
具体实施方式
通过以下实施例可以进一步理解本发明的优点和特点，不应该理解为是对本发明范围的限制。
以下实施例中所用仪器和试剂，除特殊说明以外均为普通市售。
1.仪器与试剂
仪器：Agilent1260series高效液相色谱仪。
色谱柱：C18（Kromasil250*4.6mm5μm）。
对照品：盐酸去氧肾上腺素（中国药品生物制品检定所100261-200802）；马来酸氯苯那敏（中国药品生物制品检定所100047-2000606）；布洛芬（中国药品生物制品检定所100179-201105）。
供试品：深圳市海王生物工程股份有限公司生产的复方感冒药片
试剂：色谱级乙腈（Merck公司），辛烷磺酸钠（Fluka公司），磷酸（分析纯）。
溶剂：体积为（50：50v/v）的流动相A和流动相B。
【实施例1】对照品溶液的制备
分别取盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬对照品，精密称定，加溶剂制成每1ml溶液中分别含盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬分别为6.64，0.332，0.132mg的混合溶液，即得。
【实施例2】色谱条件与系统适用性的筛选
2.1流动相的选择
参照相关文献并结合试验具体情况，先后选用乙腈-磷酸盐缓冲液（0.04mol/L磷酸氢二钠，用磷酸调pH值为6.0）、乙腈-磷酸盐缓冲液（0.04mol/L磷酸氢二钠，用磷酸调pH值为2.6），乙腈-辛烷磺酸钠溶液（3.25g/L辛烷磺酸钠溶液，用磷酸调pH值为6.0）、乙腈-辛烷磺酸钠溶液（3.25g/L辛烷磺酸钠溶液，用磷酸调pH值为2.6），各流动相条件下的分离效果如下（见表1）
表1.流动相选择结果
2.2色谱柱的选择
试用不同品牌、不同型号的色谱柱，最后确定采用Kromasil（C18250×4.0mm，5μm），色谱柱选择结果见表2。
表2.色谱柱选择结果
最后确定以以辛烷磺酸钠溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，辛烷磺酸钠溶液（3.25g/L）的最佳pH值为2.6左右，照下表5进行梯度洗脱。流动相选择结果见下表2。
2.3流速的选择
选择流速为0.8ml/min、1ml/min和1.2ml/min进行考察，最后确定流速为1ml/min，流速选择结果见表3。
表3.流速选择结果
2.4柱温的选择
选择柱温为25℃、30℃、35℃和40℃进行考察，最后确定柱温为35℃，柱温选择结果见表4。
表4.柱温选择结果
色谱条件的确定：经上述选择试验，确定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶（250×4.0mm，5μm）为填充剂，以辛烷磺酸钠溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，柱温为35℃，流速为1ml/min，检测波长为264nm；所述的梯度洗脱条件为：以体积比计，0分钟时，流动相A为80%，流动相B为20%；20分钟时，流动相A为20%，流动相B为80%；22分钟时，流动相A为80%，流动相B为20%；27分钟时，流动相A为80%，流动相B为20%。
上述步骤3中所述辛烷磺酸钠溶液的浓度为3.25g/L，pH为2.6。
2.5系统适用性试验：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶（KromasilC18柱，250×4.0mm，5μm）为填充剂，以辛烷磺酸钠溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，柱温为35℃，流速为1ml/min，检测波长为264nm，照下表5进行梯度洗脱。
表5.流动相洗脱程序
【实施例3】供试品溶液的制备
取供试品复方感冒药片（批号20130416）精密称定，制成浓度为4mg/ml的溶液。具体步骤为取复方感冒药片，研细，取粉末约20mg，精密称定，置5ml容量瓶中，超声处理10分钟，放冷，加溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
【实施例4】稳定性、精密度和重复性试验
1.稳定性试验
精密吸取实施例3所述的供试品溶液20ul，分别于0、1、2、4、8小时注入液相色谱仪，记录峰面积，计算盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬的峰面积，RSD分别为1.21%，1.03%，1.16%，表明供试品溶液在8h内稳定。
2.精密度试验
精密吸取实施例1所述的对照品溶液20ul，重复进样6次，记录峰面积，计算盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬的峰面积，RSD分别为1.09%，0.98%，1.15%。
3.重复性试验
精密吸取实施例3所述的供试品溶液20ul，平行6份，按照实施例2所述的优选色谱条件测定每份供试品的含量，注入液相色谱仪，记录峰面积，平均每片分别含盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬为标示量的99.34%（RSD为=0.95%），98.22%（RSD为=1.20%），99.73%（RSD为=0.82%）。
【实施例5】供试品含量及回收率试验
1.供试品含量测定
按照实施例2所述的优选色谱条件，分别精密吸取实施例1所述的对照品溶液、实施例3所述的供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算供试品中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬含量，即得。
HPLC结果显示，盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬的保留时间分别为6.3min、11.4min及19.4min，如图1所示（其中8.9min是辅料没食子酸丙酯的色谱峰）。经测定复方感冒药片中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬含量分别为标识量的99.3%、98.2%及99.7%。
2.回收率试验
按处方比例，精密量取实施例1中的盐酸去氧肾上腺素对照品溶液、马来酸氯苯那敏对照品溶液和布洛芬对照品溶液1ml、1.5ml、2ml各3份，加入辅料，置10ml容量瓶中，按照实施例2所述的优选色谱条件进行测定，计算回收率。盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬平均回收率分别为99.13%（RSD为=0.88%），98.82%（RSD为=0.96%），99.34%（RSD为=1.03%）。
【实施例6】复方感冒药中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬的含量测定
采用实施例1所述方法制备对照品溶液，取复方感冒药片（批号20130416、20130422、20130425），研细，取粉末约20mg，精密称定，置5ml容量瓶中，超声处理10分钟，放冷，加溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用高效液相色谱测定：
a.以十八烷基硅烷键合硅胶（250×4.0mm，5μm）为填充剂，以辛烷磺酸钠溶液（浓度为3.25g/L，pH为2.6）为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，柱温为35℃，流速为1ml/min，检测波长为264nm；
b.分别精密吸取对照品溶液及含量测定项下供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，计算得盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬含量，结果如下：

Claims (6)

1.一种同时测定复方感冒药中盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬的方法，包括以下步骤：
(1)分别制备盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬的对照品溶液；
(2)制备复方感冒药的供试品溶液；
(3)按以下高效液相色谱条件进行含量测定：
a.以十八烷基硅烷键合硅胶250×4.0mm，5μm为填充剂，以辛烷磺酸钠溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，柱温为25～40℃，流速为0.8～1.2ml/min，检测波长为264nm；
所述的梯度洗脱条件为：以体积比计，0分钟时，流动相A为80％，流动相B为20％；20分钟时，流动相A为20％，流动相B为80％；22分钟时，流动相A为80％，流动相B为20％；27分钟时，流动相A为80％，流动相B为20％；
b.分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，获得盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬的含量。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述的盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏和布洛芬对照品溶液的制备方法包括：分别取盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬对照品，精密称定，加溶剂制成每1mL溶液中含盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬分别为6.64mg、0.332mg、0.132mg的混合溶液。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2所述的复方感冒药供试品溶液的制备方法包括：取复方感冒药片，研细，精密称定，加溶剂制成浓度为4mg/1mL的溶液。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3所述高效液相色谱条件为：
a.以十八烷基硅烷键合硅胶250×4.0mm，5μm为填充剂，以辛烷磺酸钠溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，柱温为35℃，流速为1ml/min，检测波长为264nm；
b.分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，
计算得盐酸去氧肾上腺素、马来酸氯苯那敏及布洛芬的含量。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中所述辛烷磺酸钠溶液的
浓度为3.25g/L，pH为2.6。
6.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述溶剂为体积为50：50v/v的流动相A和流动相B。
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