CN104195052A - 一种猴头菌丝体及其培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种猴头菌丝体及其培育方法，含有较高含量的氨基酸、维生素，还含有7种环二肽、麦角甾醇及羧甲基纤维素酶活力，7种环二肽分别为：环(缬氨酸-酪氨酸)、环(亮氨酸-酪氨酸)、环(苯丙氨酸-酪氨酸)、环(苯丙氨酸-苯丙氨酸)、环(亮氨酸-亮氨酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(缬氨酸-丙氨酸)。培育方法包括母种菌株培养、原种菌株培养、栽培种菌株培养、一次“定向”生物转化和二次“定向”生物转化过程。培育出的猴头菌丝体具有较好的抗肿瘤疗效。

Description

一种猴头菌丝体及其培育方法

技术领域

本发明涉及微生物工程领域，特别是指一种含有7种环二肽、麦角甾醇及羧甲基纤维素酶活力的猴头菌丝体及其培育方法。

背景技术

猴头菌丝体是齿菌科真菌猴头菌Hericium erinaceus(Bull.)Pers.经定向生物转化而得到的菌丝体，用于治疗胃肠道疾病已经超过2000年的历史了，一系列小分子化合物如erinacines，被认为具有神经再生，并且可以透过血脑屏障修复受损神经组织，猴头菌还有抗溃疡，抗炎，抗微生物，免疫调节，提高肝功能，抗衰老，降低血糖和血脂，提高抗缺氧能力，增加心脏输出、和改善备注循环等作用，包含猴头菌的医用制剂在中国广泛使用。

猴头菌丝体的活性物质主要是菌类多糖。目前国内外对菌类多糖的药理作用研究综合起来有以下几方面：治疗慢性胃炎胃溃疡，增强机体免疫力，促进神经生长因子表达，抗癌等。研究表明，此种猴头菌丝体多糖具有多种生物活性和药理作用，能增强巨噬细胞的吞噬功能，促进溶血素的形成，抗白细胞下降，降血糖、抗凝血、抗血栓、抗突变和抗衰老等。因此，猴头菌丝体多糖备受人们关注，成为近年来分子生物学、医药、食品科学等领域研究和开发应用热点。

近年来，随着分离手段的不断完善和对猴头菌丝体作用机制深入研究的需要，人们从其子实体和菌丝体中纯化得到多种新化合物，并对单一物质具有的药理活性进行研究。其主要成分有：多糖、低聚糖、甾醇类、猴头菌丝体素、腺苷、酶等。药理作用有：对消化系统的保护、提高免疫功能及、抗突变、抗肿瘸、降血糖、抗氧化延缓衰老、神经保护作用，猴头菌丝体还有抗菌、抑制血小板聚集、保护肝脏、改善局部缺血脑损伤等作用。临床研究表明，猴头菌丝体制剂在临床上已被广泛用于治疗胃肠道消化系统的疾病，在治疗胃癌癌前病变和作为治疗肿瘤辅助用药方面也有较好的疗效。在治疗神经系统疾病(如Alzheimer s病、认知功能障碍)和糖脂代谢紊乱疾病(如高脂血症、糖尿病)等方面也有潜在的应用前景。

当前，从高等真菌及其培养物中筛选和发现活性成分，应用于抗肿瘤、抗癌，不仅已经成为国家研究新药的重点发展方向，也是当今世界各国开发生物医药的热点。

环二肽(cyclic dipeptides),又名2,5-二氧哌嗪(2,5-dioxopiperazines)或2,5-二酮哌嗪(2,5-diketopiperazines),由两个氨基酸通过肽键环合形成,是自然界中最小的环肽。自然界中存在的环二肽一般由A-氨基酸(常为L-氨基酸)形成相对稳定的六元环。许多环二肽是动植物中生来就有的,也有一些是通过发酵或者是在食品加工过程中形成的。随着人们对环二肽的深入研究,发现该类化合物具有多种生物活性,这引起了许多学者的极大兴趣。

麦角甾醇又称麦角固醇,是脂溶性维生素D2的前体，当受到紫外线照射时可转化为维生素D2。麦角甾醇是真菌细胞膜的重要结构组成成分,在真菌生活中起重要作用。一些不同类型的化合物通过作用于真菌麦角甾醇生物合成途径中不同环节的酶,干扰真菌麦角甾醇生物合成,发挥抗真菌作用。经药效实验表明，麦角甾醇在无毒剂量下，与化疗药物阿霉素联用，可以促进化疗药物在细胞内的积累而逆转肿瘤细胞的耐药性。有多篇文献报道，麦角甾醇具有抗肿瘤效果。

现有技术未有文献报导猴头菌、猴头菌丝体、猴头菇等含有环二肽，也未有文献报导猴头菌、猴头菌丝体、猴头菇等同时含有环二肽、麦角甾醇、纤维素酶。因此，一种同时含有环二肽、麦角甾醇、纤维素酶的猴头菌丝体的培育能够充分挖掘和利用猴头菌丝体的药用价值。而且，传统的固体发酵由于容易污染杂菌的难题，传统的固体发酵很难大规模、工业化、质量稳定地生产，这些都是需要解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种猴头菌丝体及其培育方法，该猴头菌丝体同时含有7种环二肽、麦角甾醇、纤维素酶，能够弥补此领域的空白。

基于上述目的本发明提供的一种猴头菌丝体，含有7种环二肽，分别为：环(缬氨酸-酪氨酸)、环(亮氨酸-酪氨酸)、环(苯丙氨酸-酪氨酸)、环(苯丙氨酸-苯丙氨酸)、环(亮氨酸-亮氨酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(缬氨酸-丙氨酸)，具体结构见表1：

表1  7种环二肽名称及其结构式

本发明提供的猴头菌丝体中7种环二肽的每种含量为0.01％～0.5％，麦角甾醇的含量为0.05％～0.5％，羧甲基纤维素酶活力为150～300U/克。

本发明也提供上述含有7种环二肽、麦角甾醇、纤维素酶的猴头菌丝体的培育方法，包含如下步骤：

(1)母种菌株培养：将猴头菌株接种到母种培养基中，20℃-28℃恒温培养8天-12天；所述母种培养基的成分为马铃薯75％-85％、卡拉胶5-10％、葡萄糖4％-8％、酵母浸膏1％-4％、蛋白胨1％-4％、磷酸二氢钾0-1％、磷酸氢二钾0-1％、硫酸镁0-1％、维生素B₁ 0-1％、维生素B₂ 0-1％；

(2)原种菌株培养：将步骤(1)培养得到的菌株接种到原种培养基中20℃-28℃培养25天-35天；所述原种培养基的成分为棉籽壳65％-75％、麦麸皮15％-25％、玉米粉5％-15％；

(3)栽培种菌株培养：将步骤(2)得到的菌株接种到栽培种培养基中20℃-28℃培养35天-45天；所述栽培种培养基成份为棉籽壳65％-75％、麦麸皮15％-25％、玉米粉5％-15％；

(4)一次“定向”生物转化：将步骤(3)得到的菌株接种到定向生物转化培养基中20℃-28℃培养45天-55天；所述定向生物转化培养基成份为麦麸皮65％-75％、玉米粉15％-25％、谷糠5％-15％；

(5)二次“定向”生物转化：将步骤(4)培养后的所述定向生物转化培养基转入两端通气的容器中在培养室培养5-15天，培养温度为20-28℃，取出，低于70℃烘干。

从上面所述可以看出，本发明采用定向生物转化，即培养基灭菌后，在无菌条件下接入菌种猴头菌菌株，在洁净区扩大培养，控制其他杂菌生长，由单一的微生物猴头菌吸收培养基营养，定向代谢、诱变、转化培养基，产生新的物质或有效成分7种环二肽、麦角甾醇等，促进了抗肿瘤的效果。

本发明采用分级扩大培养方法培养，第三级扩大培养即一次定向生物转化所使用的营养基直接可食用，最容易染菌，采用均可食用的农副产品(麦麸，玉米面，谷糠)作为营养基，与现有技术所采用的营养基有区别，菌种定向转化培养基，形成共生物，由于培养基采用可食用的农副产品，从而保证菌丝体的安全性，培育的猴头菌丝体可以直接入药。

本发明采用二次定向生物转化工艺使生物转化彻底。一次定向生物转化，因瓶内局部缺氧，特别是瓶底部分，菌丝未能将营养基彻底分解转化，为了使菌丝体彻底转化营养基，进行二次生物定向培养，即一次生物转化后，再转入两端通气的容器中，在洁净区培养约一周时间，彻底转化营养基，达到发酵终点。经过二次转化，猴头菌已将营养基彻底分解转化，与营养基形成不可分割的共生体，共同发挥药效作用。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进一步详细说明。

实施例1

(一)猴头菌丝体的培育

(1)母种菌株培养：配制母种培养基，成份为马铃薯400克、卡那胶42克、葡萄糖30克、酵母浸膏10克、蛋白胨10克、磷酸二氢钾2克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁1克、维生素B₁80毫克、维生素B₂40毫克，熬制母种培养基，装入试管中，将猴头菌菌株接种到母种培养基中，放置恒温箱培养，培养温度为25℃，培养10天，以试管斜面长满菌为止，即得母种菌株。所使用的猴头菌菌株购自福建三明真菌研究所。

(2)原种培养：配制原种培养基，成份为棉籽壳70克、麦麸皮20克、玉米粉10克，混匀，装瓶，塞好瓶口，灭菌，接入母种菌株，放置培养室培养，培养温度为25℃，培养30天，即得原种。

(3)栽培种培养：配制栽培种培养基，成份为：棉籽壳700克、麦麸皮200克、玉米粉100克，混匀，装瓶，密封，灭菌，接入原种，放入培养室培养，培养温度为25℃，培养40天，即得栽培种。

(4)一次“定向”生物转化：配制固体发酵培养基，成份为：麦麸皮7000克、玉米粉2000克、谷糠1000克，混匀，装瓶，密封，灭菌，接入栽培种，放入培养室培养，培养温度为25℃，培养50天，掏瓶。

(5)二次“定向”生物转化：为了使菌丝体彻底转化培养基，再进行二次培养。一次培养掏瓶后，再转入塑料袋中在培养室培养10天，培养温度为25℃，取出，65℃烘干，得到含有7种环二肽的猴头菌丝体。

经测定，得到的菌丝体中7种环二肽的含量为：环(缬氨酸-酪氨酸)0.1％，环(亮氨酸-酪氨酸)0.05％，环(苯丙氨酸-酪氨酸)0.35％，环(苯丙氨酸-苯丙氨酸)0.15％，环(亮氨酸-亮氨酸)0.08％，环(亮氨酸-丙氨酸)0.5％，环(缬氨酸-丙氨酸)0.12％。麦角杂醇的含量为0.25％，羧甲基纤维素酶活力为250U/克。

(二)抗肿瘤效果测定

猴头菌丝体功能鉴定试验-对荷SW620直结肠癌、HT-29直结肠癌、FaDu头颈癌、NCI-87胃癌、HepG2肝癌、Huh-7肝癌的SCID小鼠的抗肿瘤作用。

一、材料与方法

1、动物：8～12周的SCID雌鼠(重量18～22g)，来自Roswell ParkCancer Institute(Buffalo，NY)，并按协议饲养。

2、药物：猴头菌丝体提取物，分别标注为HTJ#1、HTJ#2和HTJ#3，HTJ#1是采用水提取浓缩干燥而成；HTJ#2是采用水提取浓缩醇沉，醇溶解部分回收乙醇浓缩干燥而成；HTJ#3是采用水提取浓缩醇沉，醇不溶部分回收乙醇浓缩干燥而成。三种样品均溶于含10％DMSO的无菌盐水，5-FU(50mg/ml)购于Hoffmann-La Roche，Inc(Nutley，NJ)以无菌盐水稀释。

3、肿瘤细胞：HepG2肝癌细胞，Huh-7肝癌细胞，SW620结直肠癌细胞，HT-29结直肠癌细胞，FaDu头颈癌细胞。移植瘤的建立首先注射约1000000个培养细胞并经过数代移植。

4、药物剂量与方案：猴头菌提取物口服或注射200-1000mg/kg/天，5-FU注射给药25-35mg/kg/天，一天一次，疗程5天。联合治疗时，首先口服HTJs然后立即注射5-FU。对照组口服或注射10％DMSO溶液，小鼠每20g体重给予200-400μl(与实验组相同)。每组5只小鼠，部分实验中，同一只鼠荷两种不同的移植瘤。

5、肿瘤测量：用游标卡尺测量肿瘤的轴线(L表示长轴，W表示短轴)肿瘤重量按下式计算：肿瘤重量＝1/2(L x W2)(mm).(1mg＝1mm3)，每天同一时间进行肿瘤测量，每周3-4次。

6、最大耐受量(MTD)和毒性评价：最大耐受量定义为小鼠体重减轻20％时，接受的不会导致小鼠药物相关死亡的药物剂量。接受药物治疗后的前十天，每天测量药代动力学，然后是每两天测量一次。

7、抗肿瘤活性：抗肿瘤活性以最大肿瘤生长抑制来评价，以治疗组的平均肿瘤重量(MTWTG)和对照组的肿瘤平均重量(MTWCG)来计算，(MTRI＝MTWTG–MTWCG)÷MTWCG x 100％)，肿瘤体积倍增时间(TDT)为肿瘤重量增长到最初重量的两倍所用的平均时间。当肿瘤尺寸减少至最初的50％以上时肿瘤响应值表示为部分肿瘤响应(PR)，当无法检测到肿瘤时表示为完全肿瘤反应(CR)，治愈定义为药物治疗后至少60天内检测不到肿瘤。

二、实验结果及试验数据

猴头菌丝体对荷SW620直结肠癌、HT-29直结肠癌、FaDu头颈癌、NCI-87胃癌、HepG2肝癌、Huh-7肝癌的SCID小鼠具有显著的抗肿瘤活性，具体数据见表2-表13。

表2：总结HTJ#1,HTJ#2和五氟尿嘧啶对SW620结直肠癌的抗瘤疗效和动物毒性

对照组每天按老鼠体重每20克给予0.2毫升的生理盐水含10％的DMSO。每个实验组使用5只老鼠。移植瘤移植7天到达了约190至220毫克后开始治疗。

如表2所示，五氟尿嘧啶、HTJ#1和HTJ#2均能显著抑制SW620结直肠癌的生长，最大抑制率分别为48.4％、61.4％和57.1％，倍增时间从对照组的3.1天，延长至4.8天、6.0天和5.2天，HTJ#1和HTJ#2的抗肿瘤活性优于阳性药五氟尿嘧啶，并且其毒副作用明显低于阳性药，HTJ#1的最大体重减轻为8.2％，HTJ#2的最大体重减轻为10.3％，而阳性药五氟尿嘧啶的最大体重减轻为22.5％，大大高于HTJ#1和HTJ#2。

表3：总结HTJ#2,HTJ#3和与五氟尿嘧啶对HT-29直结肠癌的抗瘤疗效和动物毒性

对照组每天按老鼠体重每20克给予0.2毫升的生理盐水含10％的DMSO。每个实验组使用5只老鼠。移植瘤移植7天到达了约180至200毫克后开始治疗。

如表3所示，五氟尿嘧啶、HTJ#2和HTJ#3均能显著抑制HT-29直结肠癌的生长，最大抑制率分别为42.7％、65.0％和66.2％，倍增时间从模型组的8.7天，延长至14.2天、19.3天和19.2天，HTJ#2和HTJ#3的抗肿瘤活性优于阳性药五氟尿嘧啶，并且其毒副作用明显低于阳性药，HTJ#2的最大体重减轻为9.7％，HTJ#3的最大体重减轻为8.9％，阳性药五氟尿嘧啶的最大体重减轻为19.6％，大大高于HTJ#2和HTJ#3。

表4：总结HTJ#5,HTJ#5A和与五氟尿嘧啶对HT-29直结肠癌的抗瘤疗效和动物毒性

对照组每天按老鼠体重每20克给予0.2毫升的生理盐水含10％的DMSO。每个实验组使用5只老鼠。移植瘤移植7天到达了约200至230毫克后开始治疗。

表4结果与表3结果一致，HTJ#2和HTJ#3抗肿瘤活性略优于阳性药五氟尿嘧啶，但毒副反应明显低于阳性药。不过与表3相比，HTJ#2和HTJ#3增大给药剂量其疗效并未见显著增加。

表5：总结HTJ#1,HTJ#2和与五氟尿嘧啶对FaDu头颈部癌的抗瘤疗效和动物毒性

对照组每天按老鼠体重每20克给予0.2毫升的生理盐水含10％的DMSO。每个实验组使用3-5只老鼠。移植瘤移植7天到达了约190至220毫克后开始治疗。

如表5所示，五氟尿嘧啶、HTJ#1和HTJ#2均能显著抑制FaDu头颈癌的生长，最大抑制率分别为74.6％、79.2％和88.8％，倍增时间从模型组的4.0天，延长至7.4天、14.0天和大于14.0天，HTJ#1和HTJ#2的抗肿瘤活性略优于阳性药五氟尿嘧啶，并且其毒副作用明显低于阳性药，HTJ#1的最大体重减轻为8.2％，HTJ#2的最大体重减轻为10.3％，阳性药五氟尿嘧啶的最大体重减轻为22.5％。

表6：总结HTJ#2,HTJ#3和与五氟尿嘧啶对FaDu头颈部癌的抗瘤疗效和动物毒性

对照组每天按老鼠体重每20克给予0.2毫升的生理盐水含10％的DMSO。每个实验组使用5只老鼠。移植瘤移植7天到达了约200至220毫克后开始治疗。

如表6所示，五氟尿嘧啶、HTJ#2和HTJ#3均能显著抑制FaDu头颈癌的生长，最大抑制率分别为67.0％、75.2％和75.4％，倍增时间从模型组的3.8天，延长至7.7天、11.2天和11.8天，HTJ#2和HTJ#3的抗肿瘤活性略优于阳性药五氟尿嘧啶，并且其毒副作用明显低于阳性药，HTJ#2的最大体重减轻为2.5％，HTJ#3的最大体重减轻为1.7％，阳性药五氟尿嘧啶的最大体重减轻为19.8％。

表7：HTJ#2和HTJ#3(1000毫克/公斤/天，口服5天)对NCI-187胃癌的疗效

对照组每天按老鼠体重每20克给予0.2毫升的生理盐水含10％的DMSO。每个实验组使用5只老鼠。移植瘤移植7天到达了约180至200毫克后开始治疗。

如表7所示，HTJ#2和HTJ#3能显著抑制NCI-187胃癌的生长，最大抑制率分别为78.7％和85.4％，倍增时间从模型组的12.8天，延长至29.5天和33.2天，HTJ#2的最大体重减轻为1.7％，HTJ#3的最大体重减轻为2.7％。

表8：HTJ#2和HTJ#3(1000毫克/公斤/天，口服5天)对NCI-187胃癌的疗效及与五氟尿嘧啶(30毫克/公斤/天，腹腔注射5天)的比较

对照组每天按老鼠体重每20克给予0.2毫升的生理盐水含10％的DMSO。每个实验组使用5只老鼠。移植瘤移植7天到达了约180至200毫克后开始治疗。

如表8所示，五氟尿嘧啶、HTJ#2和HTJ#3均能显著抑制NCI-187胃癌的生长，最大抑制率分别为69.2％、82.2％和81.5％，倍增时间从模型组的10.2天，延长至14.2天、30.3天和28.2天，HTJ#2和HTJ#3的抗肿瘤活性优于阳性药五氟尿嘧啶，并且其毒副作用明显低于阳性药，HTJ#2的最大体重减轻为3.0％，HTJ#3的最大体重减轻为1.6％，阳性药五氟尿嘧啶的最大体重减轻为21.1％。

表9：总结HTJ#1,HTJ#3和五氟尿嘧啶对HepG2肝癌的抗瘤疗效和动物毒性

对照组每天按老鼠体重每20克给予0.2毫升的生理盐水含10％的DMSO。每个实验组使用5只老鼠。移植瘤移植7天到达了约190至220毫克后开始治疗。

如表9所示，五氟尿嘧啶、HTJ#1和HTJ#3均能显著抑制HepG2肝癌的生长，最大抑制率分别为52.7％、71.1％和72.1％，倍增时间从模型组的7.6天，延长至11.3天、18.9天和18.6天，HTJ#1和HTJ#3的抗肿瘤活性优于阳性药五氟尿嘧啶，并且其毒副作用明显低于阳性药，HTJ#1的最大体重减轻为10.3％，HTJ#3的最大体重减轻为8.3％，阳性药五氟尿嘧啶的最大体重减轻为17.1％。

表10：总结HTJ#2,HTJ#3和五氟尿嘧啶对HepG2肝癌的抗瘤疗效和动物毒性

对照组每天按老鼠体重每20克给予0.2毫升的生理盐水含10％的DMSO。每个实验组使用5只老鼠。移植瘤移植7天到达了约180至200毫克后开始治疗。

如表10所示，五氟尿嘧啶、HTJ#2和HTJ#3均能显著抑制HepG2肝癌的生长，最大抑制率分别为71.4％、70.0％和77.6％，倍增时间从模型组的10.5天，延长至17.6天、21.0天和19.0天，HTJ#2和HTJ#3的抗肿瘤活性和阳性药五氟尿嘧啶相近，其毒副作用明显低于阳性药，HTJ#2的最大体重减轻为9.7％，HTJ#3的最大体重减轻为8.9％，阳性药五氟尿嘧啶的最大体重减轻为19.6％。

表11：总结HTJ#2,HTJ#3和五氟尿嘧啶对HepG2肝癌的抗瘤疗效和动物毒性

对照组每天按老鼠体重每20克给予0.2毫升的生理盐水含10％的DMSO。每个实验组使用5只老鼠。移植瘤移植7天到达了约180至200毫克后开始治疗。

与表10相似，表11显示HTJ#2和HTJ#3均能显著抑制HepG2肝癌的生长，且不明显的毒副反应，不过与表10相比，HTJ#2和HTJ#3增大给药剂量其疗效并未见显著增加。

表12：总结HTJ#2,HTJ#3和五氟尿嘧啶对Huh7肝癌的抗瘤疗效和动物毒性

对照组每天按老鼠体重每20克给予0.2毫升的生理盐水含10％的DMSO。每个实验组使用5只老鼠。移植瘤移植7天到达了约180至200毫克后开始治疗。

如表12所示，五氟尿嘧啶、HTJ#2和HTJ#3均能显著抑制Huh7肝癌的生长，最大抑制率分别为72.1％、80.4％和87.6％，倍增时间从模型组的7.6天，延长至7.8天、14.2天和15.2天，HTJ#2和HTJ#3的抗肿瘤活性优于阳性药五氟尿嘧啶，其毒副作用明显低于阳性药，HTJ#2的最大体重减轻为8.2％，HTJ#3的最大体重减轻为6.4％，阳性药五氟尿嘧啶的最大体重减轻为15.1％。

表13：总结HTJ#2,HTJ#3和五氟尿嘧啶对Huh-7肝癌的抗瘤疗效和动物毒性

对照组每天按老鼠体重每20克给予0.2毫升的生理盐水含10％的DMSO。每个实验组使用5只老鼠。移植瘤移植7天到达了约180至200毫克后开始治疗。

与表12相似，表13显示HTJ#2和HTJ#3均能显著抑制Huh7肝癌的生长，且不明显的毒副反应。

从上面所述可以看出，本发明采用定向生物转化，即培养基灭菌后，在无菌条件下接入菌种猴头菌菌株，在洁净区扩大培养，控制其他杂菌生长，由单一的微生物猴头菌吸收培养基营养，定向代谢、诱变、转化培养基，产生新的物质或有效成分7种环二肽、麦角甾醇和纤维素酶。与五氟尿嘧啶比较，具有较好的治疗HepG2肝癌细胞，Huh-7肝癌细胞，SW620结直肠癌细胞，HT-29结直肠癌细胞，FaDu头颈癌细胞的疗效。

此外，采用本方法培育的猴头菌丝体，氨基酸、维生素、含量高，可提高人体免疫力，辅助用于抗肿瘤，同时富含纤维素酶，在分解纤维素时起生物催化作用，能够促进消化，增强食欲，对治疗肠胃炎腹泻等症有很好的效果。通过广东省微生物分析检测中心、中科院海洋研究所分析测试中心、广州工业微生物检测中心、PONY谱尼测试公司等有检测资质的机构的测试，本发明培育出来的猴头菌丝体含有17种氨基酸、6种维生素、羧甲基酸性纤维素酶活力等，并比其他厂家生产的猴头菌丝体含量高。这些人体所需要的物质，对于防治癌症和消化道疾病，提高人体造血和免疫机能有十分重要的作用，特别是纤维素酶，能促进消化、消除炎症和溃疡面，起到保护和修复胃粘膜的作用。本发明培育的猴头菌丝体编号为HTJ-1，另在市场上购买的两种猴头菌丝体样品(分别购自荆州市天瑞生物科技有限公司、湖北欣凯生物科技有限公司)，分别编号为HTJ-2、HTJ-3，委托上述公司平行检测氨基酸、维生素、羧甲基酸性纤维素酶活力，具体检测结果如下表：

所属领域的普通技术人员应当理解：以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种猴头菌丝体，含有氨基酸和维生素，其特征在于，还含有7种环二肽、麦角甾醇及羧甲基纤维素酶，7种环二肽分别为：环(缬氨酸-酪氨酸)、环(亮氨酸-酪氨酸)、环(苯丙氨酸-酪氨酸)、环(苯丙氨酸-苯丙氨酸)、环(亮氨酸-亮氨酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(缬氨酸-丙氨酸)。

2.根据权利要求1所述的猴头菌丝体，其特征在于，所述7种环二肽的每种含量为0.01％～0.5％。

3.根据权利要求1所述的猴头菌丝体，其特征在于，所述麦角甾醇的含量为0.05％～0.5％。

4.根据权利要求1所述的猴头菌丝体，其特征在于，所述羧甲基纤维素酶活力为150～300U/克。

5.一种权利要求1所述的猴头菌丝体的培育方法，其特征在于，包含如下步骤：

(1)母种菌株培养：将猴头菌株接种到母种培养基中，20℃-28℃恒温培养8天-12天；所述母种培养基的成分为马铃薯75％-85％、卡拉胶5-10％、葡萄糖4％-8％、酵母浸膏1％-4％、蛋白胨1％-4％、磷酸二氢钾0-1％、磷酸氢二钾0-1％、硫酸镁0-1％、维生素B₁ 0-1％、维生素B₂ 0-1％；

(2)原种菌株培养：将步骤(1)培养得到的菌株接种到原种培养基中20℃-28℃培养25天-35天；所述原种培养基的成分为棉籽壳65％-75％、麦麸皮15％-25％、玉米粉5％-15％；

(3)栽培种菌株培养：将步骤(2)得到的菌株接种到栽培种培养基中20℃-28℃培养35天-45天；所述栽培种培养基成份为棉籽壳65％-75％、麦麸皮15％-25％、玉米粉5％-15％；

(4)一次“定向”生物转化：将步骤(3)得到的菌株接种到定向生物转化培养基中20℃-28℃培养45天-55天；所述定向生物转化培养基成份为麦麸皮65％-75％、玉米粉15％-25％、谷糠5％-15％；

(5)二次“定向”生物转化：将步骤(4)培养后的所述定向生物转化培养基转入塑料袋中在培养室培养5-15天，培养温度为20-28℃，取出，低于70℃烘干。

6.根据权利要求5所述的猴头菌丝体的培育方法，其特征在于，所述定向生物转化培养基成份为麦麸皮70％、玉米粉20％、谷糠10％。