KR100572405B1 - 무독화 옻 추출물의 제조 방법 및 그 추출물의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 옻의 무독화 처리방법, 이 방법에 의해 제조된 무독화 옻 추출물 및 이 추출물의 다양한 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따른 옻의 무독화 방법은 옻 성분을 함유하는 배지에 라카아제(laccase)의 분비능이 있는 담자균류에 속하는 버섯 균주를 접종하는 단계 및 상기 옻 배지를 백색의 버섯 균사체가 육안으로 관찰될 때까지 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따르면 버섯 균류를 이용하여 옻의 독성 성분을 무독화 처리할 수 있을 뿐만 아니라 옻의 무독화 처리에 기여하는 버섯 균사를 옻배지와 함께 의약 또는 식품 성분으로 이용할 수 있는 장점이 있다.

Description

무독화 옻 추출물의 제조 방법 및 그 추출물의 용도{Process for preparing nontoxic Rhus Verniciflua extract, and the use of the extract}

도 1은 본 발명에 따른 옻의 무독화 처리과정을 나타낸 플로우도.

본 발명은 무독화 옻 추출물의 제조 방법, 이 방법에 의해 제조된 무독화 옻 추출물 및 이 추출물의 다양한 용도에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 버섯 균류를 이용하여 옻의 독성 성분을 분해·제거시켜 옻을 무독화시키는 방법, 이 방법에 의해 제조된 무독화 옻 함유 버섯 추출물 및 이 추출물의 다양한 용도에 관한 것이다.

일반적으로 옻은 옻나무과에 속하는 나무에 상처를 냈을 때 옻나무로부터 나오는 수액을 지칭한다. 옻나무과에는 아열대 또는 열대에 분포하는 60속 400종의 나무가 있고, 이중 한국에는 옻나무, 개옻나무, 붉나무 등 5종이 서식하고 있다.

이러한 옻은 한국, 중국, 일본 등에서는 오래 전부터 금속이나 목공의 도장용 도료로서 사용되어 왔을 뿐만 아니라, 인체의 기혈 순환을 촉진하는 효과, 강장 효과, 통경, 진해 등의 효과가 있어서 약재로서도 사용되어 왔다. 또한, 최근에는 옻에서 항암효과를 가진 물질(MU2)을 추출했다는 보고도 있었다.

이와 같은 다양한 약리 효과를 가지고 있는 옻을 수액상태로 직접 섭취하는 경우에는 우루시올(urshiol)이라는 독성 물질에 의해 발진, 가려움증 등 부작용이 나타난다.

옻의 약리 및 생리활성을 이용하기 위해 우르시올(urushiol)의 독성을 중화시키는 방법으로 옻을 고온에서 볶거나 밀폐된 가마에서 200℃ 이상의 고온으로 탄화하는 정제 과정을 사용하는데, 이러한 과정은 옻의 알레르기 유발 성분이면서 약리활성 주성분인 우르시올을 증발시켜 옻의 약리작용을 없애는 결과를 초래한다.

또한 민간에서 사용하는 바의 닭이나 오리에, 대추, 밤, 황기 등과 옻을 함께 넣고 조리하는 방법에 의하면 옻닭 또는 오리를 섭취한 3명 가운데 1명 꼴로 피부염을 비롯한 각종 부작용이 나타나는 것으로 밝혀져 옻 자체를 완벽하게 무독화하는 방법이 절실하게 요구되고 있다.

본 발명자들은 옻나무의 독성을 제거하고자 예의 연구한 결과, 옻나무 성분을 배지에 포함시켜 버섯류를 성장시켜 본 결과 옻의 독성 성분이 효율적으로 제거됨을 예기치 않게 발견하고, 이들 추출물이 위장관 질환의 개선용 의약조성물 및 건강 식품의 주성분으로 이용될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

따라서, 본 발명의 목적은 버섯균을 이용하여 옻을 무독화 처리하는 방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 무독화 처리된 옻과 버섯의 균사체 성분을 열수 또는 유기용매(예, 알코올) 추출하여 얻어진 성분들을 주성분으로 포함하는 위장관 질환의 개선용 의약 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 추출물을 포함하는 위장관 기능 개선용 식품 조성물 또는 음료용 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명은, 일면에 있어서, a) 옻 성분을 함유하는 배지에 라카아제(laccase)의 분비능이 있는 담자균류에 속하는 버섯 균주를 접종하는 단계 및 b) 상기 옻 배지를 실모양의 백색 버섯 균사체가 육안으로 약 3 내지 10cm 정도로 관찰될 때까지 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 옻의 독성을 제거하는 방법을 제공한다.

상기 무독화에 사용되는 균주로는 식용 및 약용 버섯의 인공재배용 담자균류를 이용할 수 있으며, 그러한 예로는 라카아제(laccase) 분비능을 가진 백색부후균류이면 특별한 제한은 없다. 버섯균의 예로서는 이들에 제한되지 않고, 영지 (Ganoderma lucidum), 운지 (Coriolus versicolpr), 노루궁뎅이(Hericium ernaceus), 상황 (Phellinus linteus), 느타리 (Pleurotus ostreatus), 표고(Lentinus edodes) 버섯균 등을 포함한다. 상기 균주들은 필요에 따라서 복합적으로 사용해도 좋으며, 약용 성분의 최대 효율화를 위해서는 복합 사용이 더욱 바람직한 결과를 초래할 수 도 있다. 이들의 선별은 통상적인 방법에 의해 수행할 수 있다.

이와 같이 특정 버섯 균주 또는 혼합 균주들을 옻 성분 함유 배지에 적절한 기간 동안 배양하면, 버섯균주는 실모양의 균사상태로 성장하게 되고, 성정과정에서 버섯균으로부터 방출되는 라카제(Laccase) 효소가 옻배지에 함유된 옻의 독성성분인 우루시올 성분을 퀴논 형태로 변환시키고 불안정한 퀴논 화합물은 중합되어 무독화된다.

따라서, 본 발명에 의해 최초로 p-디페놀산화효소인 라카아제(laccase)를 분비하는 담자균류를 옻나무 추출물에 배양함으로써 생물학적 전환(bio-conversion) 기법에 의해 알러지 반응이 완전히 없이 우르시올(urushiol)의 독성을 없애는 것이 가능하게 되었다. 더욱이, 본 발명에 의하면 간편한 생물학적 전환 방법에 의해 옻나무의 독성이 제거된 옻 성분을 제공할 수 있다.

이러한 옻의 무독화 처리 방법은 옻의 독성성분을 무독화 처리하는 것 뿐만 아니라 무독화 처리에 기여하는 버섯균사를 함께 약용으로 이용할 수 있는 장점이 있다. 또 다르게는 버섯균주 생장과정을 거친 옻 배지 자체만을 물에 끓여 추출된 용액을 약리 성분으로 이용할 수 있음은 물론이다.

따라서, 다른 일면에 있어서 본 발명의 상기 무독화 옻 추출물을 포함하는 위장관 질환의 치료용 의약 조성물 또는 기능성 식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 위장질환 치료용 조성물은

a) 옻 성분을 함유하는 배지에 라카아제(laccase)의 분비능이 있는 담자균류에 속하는 버섯 균주를 접종하는 단계,

b) 상기 옻 배지를 백색의 실모양의 버섯 균사체가 육안으로 약 10cm의 길이 로 자란 것을 확인될 때까지 배양하는 단계, 및

c) 상기 배양물을 물 또는 유기 용매에 의해 증류시켜 불용성 물질을 여과하고 추출물을 농축하는 단계에 의해 얻어짐을 특징으로 하는 무독화 옻 및 버섯 균사체의 혼합 추출물을 주성분으로 함유한다.

본 발명의 상기 추출물은 후술하는 실시예에서 확인할 수 있는 바와 같이 소화기능, 위궤양, 숙취해소, 항암작용 및 소화기 개선 작용을 나타내므로 위장관 질환의 개선 또는 소화 촉진을 위한 의약 조성물로서의 용도 이외에 식품 또는 음료수 조성물의 유효 성분으로서 유용하게 사용될 수 있다. 대상이 되는 질환의 예로는 이들에 제한되지는 않고, 위암, 소화불량, 위염 숙취 또는 위궤양 등의 기타 소화기 장애를 들 수 있다.

본 발명의 제약 조성물은 공지의 의약용 담체와 조합하여 제제화할 수 있다. 일반적으로는, 유효 성분을 약학적으로 허용할 수 있는 액상 또는 고체상의 담체와 배합하고, 또한 필요에 따라 용제, 분산제, 유화제, 완충제, 안정제, 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제 등를 가하고, 정제, 과립제, 산제, 분말제, 캡슐제 등의 고형제, 통상액제, 현탁제, 유제 등의 액제로 할 수 있다. 또한 이것을 사용전에 적당한 담체의 첨가에 의해 액상으로 만들 수 있는 건조품으로 할 수도 있다.

본 발명의 제약 조성물은 경구제나, 주사제, 점적용제 등의 비경구제중의 어떠한 것에 의해서도 투여할 수 있다.

의약용 담체는, 상기 투여형태 및 제형에 따라서 선택할 수 있고, 경구제의 경우는, 예를 들어 전분, 유당, 백당, 만니트, 카복시메틸셀룰로스, 콘 스타치, 무 기염 등이 이용된다. 또한 경구제의 조제에 있어서는 추가로 결합제, 붕괴제, 계면활성제, 윤택제, 유동성 촉진제, 교미제, 착색제, 향료 등을 배합할 수도 있다.

한편, 비경구제의 경우는 통상의 방법에 따라서 본 발명의 유효성분인 옻 버섯 추출물을 포함하는 조성물을 희석제로서의 주사용 증류수, 생리식염수, 포도당 수용액, 주사용 식물유, 참기름, 낙화생유, 대두유, 옥수수유, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜 등에 용해 내지 현탁시켜서 필요에 따라 살균제, 안정제, 등장화제, 무통화제 등을 가함으로써 조제된다.

본 발명의 의약 조성물은 제제 형태에 따른 적당한 투여경로로 투여된다. 투여방법은 특히 한정할 필요는 없고, 내용, 외용 및 주사에 의해 투여할 수 있다. 주사제는, 예를 들어 정맥내, 근육내, 피하, 피내 등에 투여할 수 있다.

본 발명의 의약 조성물의 투여량은, 그 제제형태, 투여방법, 사용목적 및 이것에 적용되는 환자의 연령, 체중, 증상에 따라서 적절히 설정되고, 일정하지 않지만 일반적으로는 제제중에 함유되는 유효성분의 양은 성인 1인당 예컨대 10 ㎍∼200 ㎍/㎏이다. 물론 투여량은, 각종 조건에 의해서 변동하기 때문에, 상기 투여량보다 적은 양으로 충분한 경우도 있고, 또는 범위를 초과하여 필요한 경우도 있다.

본 발명은, 추가의 일면에 있어서, 상기 무독화 옻나무 성분 및 버섯 배양물을 포함하는 기능성 식품 조성물, 및 음료 조성물을 제공한다.

무독화된 옻 성분 및 버섯의 추출물을 주성분으로 사용하여 옻을 이용한 소화기능, 위궤양, 숙취해소, 항암작용 및 소화기 개선 작용을 나타내는 다양한 약리 활성 및 생리 활성 물질을 포함하는 복용이 간편한 기능성 식품을 제공할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 숙취 해소제의 식품, 특히 음료 조성물로 사용될 수 있다.

식품의 보조 성분들, 이들의 배합비 등은 당업계에 통상적으로 사용되는 것들을 특별한 기술적 어려움이 없이 채용할 수 있다.

본 발명에 따른 식품 조성물은 원하는 조성물의 형태에 따라 통상의 보조제, 예를 들면 아스파탐, 사카린, 펙틴, 구아검, 탈지분유 및 올리고당으로 이루어진 군 중에서 선택되는 하나 이상의 성분을 추가해도 좋다.

본 발명의 식품 조성물에 있어서 감미료로는 통상적으로 사용되는 아스파탐, 사카린, 말리톨, 솔비톨, 자일리톨을 사용할 수 있다. 이들은 본 발명의 식품 조성물의 전체 중량을 기준으로 약 0.1-20 중량 %로 사용하는 것이 적절하다.

본 발명에 따른 식품 조성물은, 예를 들면 정제, 캡슐, 과자류 또는 드링크제 등의 음료수의 형태로 제공될 수 있다.

음료수는, 예를 들면, 상기 무독화 옻 성분 함유 버섯 추출물을 0.1-30% 중량으로 넣고 구연산을 0.01-2% 넣고 비타민 C, 비타민 B1, 바이오틴 등 비타민을 넣고 단맛은 아스파탐을 0.01-2%를 넣어 기능성 음료수를 제조한다.

이하, 첨부된 도면을 참조하면서 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 옻의 무독화 처리방법 등을 더욱 보다 상세하게 설명한다.

도 1은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 옻의 무독화 처리과정을 나타내 보인 플로우도이다.

먼저, 예비 단계로서 옻 함유 배지에서 무독화에 적합한 버섯균를 선발한다 (단계 110). 버섯 균주이 적절한 선발 조건은 상술한 바와 같다.

상기 옻 함유 배지는 옻나무의 껍질 즉, 옻나무 피를 그대로 또는 분말화하여 사용하거나 옻나무로부터 추출한 수액 또는 옻나무 껍질을 물(예를 들면, 10 배량) 또는 유기 용매에 넣고 증류시켜 추출한 수액에 통상의 한천 배지를 첨가하여 구성하는 것이 좋다.

옻 배지의 조성은 최적 배양온도, 수분 함량, 최적 pH, 배양기간 등을 고려하여 설정하는 것이 좋으며, 이러한 조건은 통상적으로 당업자가 용이하게 설정할 수 있다. 구체적으로, 옻 배지에 첨가되는 배양 기질로는 합성 배지, 반합성 배지, 천연 배지를 사용할 수 있다. 합성 배지는 탄소원, 질소원, 무기질, 비타민을 포함하도록 조성하는 것이 좋으며, 반합성 배지는 합성 배지를 기초로 하여 균사체 생산을 향상시키기 위해 적절한 천연물 성분을 첨가한 것을 말한다. 천연 배지로서는 옻, 감자, 당밀, 맥아, 탈지대두박, 기타 식물 추출물 등 균사 생장을 위한 성분을 포함할 수 있다.

상기 옻배지의 pH 조건은 실험 결과에 의하면 5.5∼7.5가 양호하였으며 pH 7에서 가장 양호한 결과가 나타났다.

이어서, 옻배지에 버섯균주를 접종하여 배양시킨다(단계 120). 배양 기간은 특별히 한정할 필요는 없으나, 버섯균주의 배양기간은 옻의 독성 성분을 균일하게 분해시킬 수 있는 기간이면 충분하며, 버섯 균주가 실모양으로 일정한 길이, 예를 들면, 약 3 내지 10cm 정도 자란 상태 정도가 가장 바람직하다. 따라서, 시간상으로는 구체적인 배양 조건에 따라 다르나 통상 3 일 내지 24일 정도 배양하는 것이 바람직하다. 버섯균주를 옻배지에 등간격으로 배치하여 배양하는 것이 더욱 바람직 할 수 있다. 버섯균주의 배양 기간이 너무 길면 무독화 하고자 하는 옻의 성분이 버섯의 양분으로 모두 이용되어 옻나무 껍질에 함유된 약리성분을 이용하기가 어렵다. 또한, 배양기간이 너무 짧으면, 옻나무 껍질에 함유된 독성성분이 버섯균사에 의해 충분히 제거되지 않는다.

상기 버섯균주는 15∼37℃ 내외로 배양시키는 것이 적절하며, 25℃에서 배양하는 것이 가장 바람직하다. 배양은 정치 배양, 진탕 배양, 발효기 배양, 병배양, 포트 배양 등 중에서 버섯균이 잘 성장할 수 있는 경우라면 어떠한 방식을 채용해도 특별한 상관은 없다.

바람직하게는 배양된 옻배지 및 버섯균사를 포함하는 옻배지체를 용매 예컨대 물에 넣고 소정 시간(85℃에서 1시간, 95℃에서 2시간, 100℃에서 3∼5시간) 끓인다(단계 130). 물 외에 추출 용매로서 메탄올, 에탄올, 아세톤 등이 유기용매를 사용하여도 좋으며, 통상 3일 정도 유기용매로 추출한다.

마지막으로, 불용성 물질을 여과하여 옻 성분 함유 추출 용액을 얻는다(단계 140). 바람직하게는 버섯균사가 옻 성분 함유 배지 내의 독성 성분을 균일하게 분해시킬 수 있는 정도에 대응되는 적절한 길이로 자라면, 그물망 처럼 옻배지를 감싸는 버섯균사에 의해 옻배지가 무독화 처리되고, 이렇게 무독화 처리된 옻배지를 버섯균사와 함께 상기한 바의 용매(예를 들면, 물)에 일정 시간 동안 끓인 다음 불용된 물질을 여과한 다음 추출된 용액 또는 건조 분말을 유효 성분으로 사용한다.

<실시예>

이하, 본 발명은 다음의 대표적인 실시예에 의하여 더욱 구체적으로 설명되나, 본 발명이 이들 실시예에 의해 어떤 식으로든 제한되는 것은 아니다. 먼저, 실시예들에서 적용되는 버섯균주는 버섯균을 감자한천배지(PDA; potato dextrose agar)에 증식하여 0 내지 5℃로 유지되는 냉장고에 보관한 균주를 공시균주로 사용하였다.

실시예 1: 옻나무 배지에서 버섯균의 배양

옻나무 껍질의 중량을 기준으로 10 배량의 증류수로 추출한 옻피 추출물을 디프코(Difco) 사에서 제조된 PDA 배지에 2%정도의 체적비로 첨가하고, 각종 식용 및 약용 버섯균을 증식하였다.

아래의 표 1은 이러한 조건에서 생육한 버섯 균사의 생육상태를 나타낸다.

실시예	1-1	1-2	1-3	1-4	1-5	1-6	1-7	1-8	1-9	1-10	1-11	1-12
배양일	표 고		영 지		상 황		노루궁뎅이		운 지		느타리
	무처리	2%	무처리	2%	무처리	2%	무처리	2%	무처리	2%	무처리	2%
4	2.6	2.7	2.0	3.0	2.3	2.3	2.3	2.1	3.5	3.2	2.3	2.2
7	4.7	4.9	5.1	5.7	4.8	4.5	4.0	4.3	5.8	5.7	4.2	4.1
11	5.5	6.2	8.0	8.2	6.5	6.4	6.7	6.5	8.5	8.5	6.5	6.0

표 1에서 무처리는 옻나무 껍질 추출액을 첨가하지 않은 배지를 말하고, 2%는 옻나무 껍질 추출액을 2%첨가한 배지를 말하며, 버섯균사의 성장길이의 단위는 cm이다.

위 표 1을 통해 알 수 있는 바와 같이 각종 식용 및 약용 버섯균들은 옻을 첨가한 배지에서도 잘 성장함을 알 수 있고, 그 중에서도 특히 나무를 양분기질로 살아가는 영지, 상황, 노루궁뎅이, 운지 버섯 등이 옻 함유 배지에서도 잘 생육함을 알 수 있다.

실시예 2: 옻나무 톱밥 배지 상의 버섯균의 성장

옻나무의 껍질 자체를 배지로 하여 버섯균의 생육도를 살펴보았다. 먼저, PDA 배지는 pH 6으로 조정하고, 균사 생육도 측정용 옻 배지는 옻피를 제분기로 파쇄하여 50 메쉬체를 통과한 옻피 톱밥을 수분이 65 내지 70% 되게 조절한 다음 시험관(직경 1.8 x 30cm)에 100ml씩 주입하였다. 그리고 나서 1.2Kg/cm²의 압력에서 15분간 살균처리 한 후 25±1℃ 항온기에서 버섯균주를 배양하면서 경시적으로 균사 생육 정도를 측정하였다. 버섯균사의 성장길이의 단위는 cm이다.

실시예	2-1	2-2	2-3	2-4	2-5	2-6
배양일	표 고	영 지	상 황	노루궁뎅이	운 지	느타리
3	0.6	0.7	1.8	1.9	0.8	0.7
6	2.0	2.2	2.5	2.8	2.6	1.9
12	4.8	5.5	4.9	5.3	5.7	4.4
17	7.2	8.3	7.7	7.8	9.1	6.6
24	10.3	11.8	10.5	10.9	12.0	9.5

위 표 2의 결과를 통해서도 알 수 있는 바와 같이 옻피 톱밥 배지 상에서도 실시예 1의 옻껍질 추출액이 투여된 한천 배지 상에서와 같이 영지, 상황, 노루궁뎅이, 운지 버섯 등이 생육상태가 우수하였다.

이러한 실시예 1 및 실시예 2의 결과는 옻피에 함유된 것으로 우루시올을 주로 포함하는 독성 화합물을 버섯균이 무독화시킴으로써 생육에 지장을 받지 않고 생육되는 것으로 판단할 수 있다.

실시예 3: 배양온도에 의한 영향

버섯균의 생육도를 배양 온도 조건을 달리하여 시험하였다. 실시예 2의 조건의 옻껍질 배지를 15 ℃ 부터 5 ℃ 간격으로 35 ℃ 까지 각각 배양 온도를 달리하여 24일간 배양시킨 후 버섯의 생육도를 조사하였다.

실시예	3-1	3-2	3-3	3-4	3-5	3-6
온 도(℃)	표 고	영 지	상 황	노 루	운 지	느타리
15	4.2	5.0	5.2	5.4	5.1	4.5
20	6.7	7.9	7.3	7.8	8.3	6.2
25	10.3	11.8	10.5	10.9	12.0	9.5
30	5.3	9.8	7.7	6.8	9.4	4.5
35	1.0	2.2	1,0	1.0	1.0	1.0

위 표 3의 결과는 버섯균주가 주로 상온에서 잘 자라며, 25℃ 정도에서 최적으로 성장함을 확인하였다.

실시예 4: pH 에 따른 성장 정도

옻피 배지상에서의 pH가 균사생육에 미치는 영향을 실험하였다. 옻피 수분조절용 물의 pH를 1N NaOH와 1N HCl용액으로 pH 4.5에서 8.0 까지 각각 조절한 후 상기용액으로 수분함량을 65% 되게 조제하였다.

옻피배지의 pH를 4.5 부터 8.0까지 pH를 각각 달리 적용하여 24일간 배양시킨 후 버섯균의 생육도를 조사하였다.

실시예	4-1	4-2	4-3	4-4	4-5	4-6
pH	표 고	영 지	상 황	노루궁뎅이	운 지	느타리
4.5	3.4	4.2	4.3	4.0	5.2	3.7
5.5	5.2	5.7	6.2	4.8	7.8	6.6
6.5	10.3	11.8	10.5	10.9	12.0	9.5
7.0	9.5	10.4	9.7	9.6	9.8	8.8
7.5	7.8	9.1	8.4	7.6	7.7	6.5
8.0	4.0	5.2	6.0	5.3	5.3	6.0

상기 표 4를 통해 알 수 있는 바와 같이, 옻배지 상에서 버섯류는 pH 5.5 내지 7.5의 약산성 또는 중성에서 잘 자라며, 최적 성장 pH는 6.5 정도인 것으로 나타났다. 이와 같이 옻피배지 또는 옻피 추출액을 첨가한 한천배지에 버섯균을 증식하게 되면, 실모양으로 버섯균사가 자라게 되고, 이 과정에서 버섯균사로부터 방출되는 라카제 효소가 옻의 독성성분을 분해 제거하는 것으로 판단된다. 따라서, 옻 배지에 버섯균주를 배양시킴으로써 옻의 독성성분을 분해·제거시키는 것이 가능하다.

실시예 5: 옻나무 추출물의 위장질환 개선 효과

실험동물은 생후 6-8주된 약 150g의 특이한 병변이 없는 수컷(specific pathogenic free male) 스프라그-다우리 래트(sprague-dawely rat)를 한국화학연구소 안정성 연구부로부터 구입하여 실험에 사용하였다. 사료와 물은 자유롭게 먹게 하며, 사육실의 온도는 21-24 ℃, 상대 습도는 40 - 60%로 유지하였다. 또한 사육실의 밤과 낮이 12시간마다 반복되도록 조절하였다.

래트(rat)는 흉부을 절개한 후 심장의 정맥을 이용해 PBS(인산염완충 식염수)로 체내의 혈액을 제거한 뒤 4% 파라포름알데히드(Para-formaldehyde)로 관류 고정하였다. 고정된 쥐의 위를 적출하여 동결절편기(microcryocut)를 이용하여 3-5㎛두께의 동결절편을 제작하였다. 준비된 위 절편은 PBS로 여러번 씻어주었다. 30% 과산화 수소(hydrogen peroxide)로 전처리하여 씻어준 후 벡타스테인 ABC 키트(vectstain ABC kit)의 정상 양 혈청(normal goat serum)을 0.5% BSA/PBS에 섞어 1시간 동안 반응시켜 비특이적 단백질의 결합을 막았다. TH 일차(primary) 항체와 0.5% BSA/PBS (1:10000) 희석하여 실온에서 1시간에서 2시간 정도 반응시켰다. 시료를 PBS로 3회 세척한 후, 이차 항체(biotinylated anti-rabbit IgG in 1% BSA/ PBS)를 이용하여 1시간 동안 반응시킨 다음 1% BSA/ PBS로 두 번 씻어냈다. 사용하기 30분 전에 벡타스테인 ABC 키트 (1:50)를 희석하여 50분 동안 반응시킨 후 PBS로 2번 씻고, 50ml DAB(diaminobenzidine) 용액과 0.2M PB 용액에 30% 과산화수소(hydrogen peroxide) 12㎕를 첨가한 용액으로 5분간 염색시켜 0.1M PB(인산염 완충액)로 5분간 반응을 동시에 정지시킨 다음, 광학 현미경으로 관찰하였다. 그리고 위에서의 세포 계수(counting)는 각각 처리된 4개의 염색된 절편을 선택하여 400 x에서 전 층을 대상으로 조직절편의 단위면적당 TH(tyrosine hydroxylase)가 발현된 세포의 수를 측정하였고 계수 결과는 윌콕슨의 순위합 검정 (Wilcoxson rank sum test)를 이용하였다.

아이젠호퍼(Eisenhofer) 등 (Eisenhofer E., Hansson G., Harta S., Hoffman G.. Non-neuronal dopamine in the gastrointestinal system. Clinical and Exp . Pharm. & Phys . Supplement 26:14-22, 1999.)에 따르면 위(Stomach)에서 도파민(dopamine)이 생성되고 TH 활성을 가진다고 보고하였다. 그리고 아이젠호퍼(Eisenhofer) 등이 위에서의 도파민(dopamine)은 위장관(gastrointestinal tract)의 보호물질로 작용하며 면역조직화학(Immunohistochemistry)과 웨스턴 블롯팅(western blotting)을 이용하여 위에서의 TH(tyrosine hydroxylase)-IR(immunoresponsive) 세포들이 존재함을 보고하였다.

실시예 4-2(pH 6.5)에 따른 무독화 옻나무 성분이 함유된 버섯 추출물을 복강에 처리했을 때 위에서의 TH 반응 양상 변화를 관찰하였다. 먼저 무처리 대조군을 살펴보면 TH-IR 세포들이 점막근판 (Muscularis mucosae)에서 주로 나타났으며 위선 (Gastric glands)에서는 갈색의 씨앗 모양을 하고 있는 한 두 개의 TH-IR 세포들을 관찰하였다.

반면에 시료를 처리한 조직들에서는 대조군에 비해 점막근판에서 더 많이 발현됨을 확인하였고 발현영역이 위선까지 더 넓어짐을 확인하였다. 그리고 위 조직에 나타난 TH-IR 세포를 일정한 단위면적에서 세포계수(cell counting)를 하여 비교해 본 결과, 대조군에 비한 실험군들의 TH-IR 세포들의 수가 더 많이 나타났으며 최대 3배 이상의 숫적 증가를 확인하였다. 위와 같은 결과는 본 발명의 추출물이 TH-IR 세포들의 증가된 생성을 유발함으로써 위벽의 강화물질로서 작용함을 의미한다.

실시예 6: 약학적 제제

제형의 형태(정제)

유효성분(실시예 1의 영지 추출물) 50 mg

락토오스 50 mg

전분 15 mg

스테아르산 마그네슘 2 mg

결정성 셀룰로오스 10 mg

정제들은 통상의 방법에 의해 제조하였으며 상기한 성분들을 한 정제에 원료로서 함유하였다. 정제들은 통상의 장용피(예, 히드록시프로필메틸세룰로오스 프탈레이트), 당 코팅 또는 필름(에틸 세룰로오스)를 필요시 가할 수 있다.

실시예 7: 음료수의 제조

물 1L에 실시예 4-2(pH 6.5)에서 얻은 무독화 옻 버섯 추출물 10g을 넣고, 여기에 구연산 3mg, 아스파탐 1.7g 및 비타민 C 30mg을 첨가하여 음료수를 제조하여 저온 살균하였다. 음료수의 대조군은 동충하초 (일양약품)을 사용하였다. 결과적으로 본 발명 음료수는 종래의 음료수 제품과 색깔, 풍미, 입안 감촉, 단맛 그리고 종합평가 면에서 차이가 없었다.

지금까지 설명된 바와 같이 본 발명에 따른 옻의 무독화 처리방법에 의하면, 버섯 균류를 이용하여 옻의 독성 성분을 무독화할 수 있을 뿐만 아니라 옻의 무독화 처리에 기여하는 버섯 균사를 옻배지와 함께 약용으로 이용할 수 있는 장점이 있다.

Claims (3)

1. a) 옻 성분을 함유하는 배지에 라카아제(laccase)의 분비능이 있는 담자균류에 속하는 버섯 균주를 접종하는 단계,

   b) 상기 옻 배지를 백색의 실모양의 버섯 균사체가 육안으로 약 10cm의 길이로 자란 것을 확인될 때까지 배양하는 단계, 및

   c) 상기 배양물을 물에 의해 증류시켜 불용성 물질을 여과하고 추출물을 농축하는 단계에 의해 얻어짐을 특징으로 하는

   무독화 옻 및 버섯 균사체의 혼합 추출물을 주성분으로 함유하는 위벽강화용 의약 조성물.
2. 제1항에 따른 무독화 옻 성분 및 버섯 추출물을 주성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
3. 제2항에 있어서, 상기 조성물이 캡슐, 정제, 과자류, 드링크제 또는 음료수의 형태로 제공되는 조성물.

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