CN102641396A - 一种肠胃疾病用药的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种肠胃疾病用药的制备方法。该方法采用了创新工艺，即采用无菌培养、二次培养、低温干燥、低温灭菌，保存了纤维素酶活性，提高了药品疗效。

Description

一种肠胃疾病用药的制备方法

技术领域

本发明涉及一种肠胃疾病用药的制备方法。

背景技术

猴头健胃灵是国家药典品种，它的功能主治是：舒肝和胃，理气止痛。用于肝胃不和，胃脘胁肋胀痛，呕吐吞酸；慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡属上述证候者；是一种治疗胃病的特效药。特别是对胃幽门螺旋杆菌有较强的抑杀作用，长期服用对消化道癌变有一定的预防作用，并且能缓解其症状，无毒副作用，是目前市场上治疗胃病的新特药。

猴头健胃灵胶囊质量标准被收载入《中国药典》2010年版一部，药典上规定的猴头健胃灵胶囊处方为：猴头菌培养物160g、海螵蛸80g、醋延胡索40g、酒白芍40g、醋香附40g、甘草40g，生产工艺为：以上六味，取猴头菌培养物80g，加水煎煮二次，每次2小时，滤过，合并滤液减压浓缩至适量，加入剩余的猴头菌培养物，混匀，干燥，粉碎成细粉；其余海螵蛸等五味粉碎成细粉，过筛，与上细粉及适量的淀粉混匀，灭菌，装入胶囊制成1000粒，即得。

猴头健胃灵疗效好、知名度高、美誉度好、市场潜力大，是一个非常有特色的产品，是生物技术药与传统医药完美结合的产物，主要原料猴头菌培养物发挥了重要的药效活性。

猴头菌培养物性平，味甘，能利五脏助消化，具有抗溃疡、抗炎症、抗肿瘤、抗衰老、保肝护肝、降血糖、降血脂和降血压等疗效，并具有抑杀幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等作用，药用价值高，市场使用潜力大。

猴头菌培养物富含纤维素酶，而纤维素酶作用于消化道，在分解纤维素时起生物催化作用，可改善消化道环境，增加酸度，激活胃蛋白酶，增加胃肠道酶分泌量和活性，降低消化道内容物粘度，有利于胃肠道对食物的消化吸收，可配伍其他中药用于腹胀、不消化、食欲不振等症状，其活力的强弱直接关系到产品的疗效。作为一种复合蛋白质，其稳定性及活性的发挥受到很多因素的影响，如何保持灭菌前后活性不变，成为关键性核心技术。

但猴头健胃灵按照现行的生产工艺，其疗效并未达到最佳，猴头菌培养物的生物活性物质特别是蛋白质类的纤维素酶，经过湿热灭菌、高温加热而被灭活，因而还需要进行进一步改进，以达到最佳效果。通过检测，猴头菌培养物中羧甲基纤维素酶活力为133U/g，二次猴头菌培养物（猴头菌菌质）中羧甲基纤维素酶活力为183U/g，猴头健胃灵按原生产工艺生产后纤维素酶活力几乎为0。

发明内容

为了克服现有技术中存在的纤维素酶失活的问题，本发明提供一种新的肠胃疾病用药的制备方法，采用本发明的制备方法使药物中的纤维素酶活力最大限度地保存下来，其酸性羧甲基纤维素酶活力达到20-40U/g，有效地提高了药品的疗效。

本发明是按照如下技术方案实现的：

一种肠胃疾病用药的制备方法，包含如下步骤：

（1）无菌培养：猴头菌培养物通过培养基灭菌，10万级洁净区内接种、无菌条件下培养40-50天，温度为20℃-30℃，防止污染；

（2）二次培养：一次培养掏瓶后即得猴头菌培养物，再转入塑料袋中在培养室培养5-10天，培养温度为20-30℃，取出；

（3）低温干燥：在温度未超过60℃的条件下干燥；

（4）低温灭菌：在温度未超过60℃的条件下灭菌；

（5）制备清膏：取经上述步骤（1）（2）（3）（4）制备的二次猴头菌培养物，加水煎煮，滤过，滤液减压浓缩成相对密度为1.0-1.5（70℃）的清膏；

（6）加入粉末：将上述制备的清膏与海螵蛸粉末、酒白芍粉末、醋延胡索粉末、醋香附粉末、甘草粉末混合均匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，灭菌，加入经上述步骤（1）（2）（3）（4）制得的二次猴头菌培养物粉末，混匀，制成药品剂型。

上述的肠胃疾病用药的制备方法，其中所述的步骤（5）中滤液减压浓缩成相对密度为1.15（70℃）的清膏。

上述的肠胃疾病用药的制备方法，其中步骤（5）取用的二次猴头菌培养物质量与步骤（6）取用的二次猴头菌培养物粉末质量相同。

上述的肠胃疾病用药的制备方法，其中步骤（6）添加的二次猴头菌培养物粉末、海螵蛸、酒白芍、醋延胡索、醋香附、甘草粉末的质量比为2∶2∶1∶1∶1。

上述的肠胃疾病用药的制备方法，其中所述的步骤（3）采用微波干燥或者真空低温连续干燥技术干燥。

上述的肠胃疾病用药的制备方法，其中所述的步骤（4）采用Co60照射灭菌、紫外照射灭菌中的一种。

上述的肠胃疾病用药的制备方法，其中所述的步骤（6）中海螵蛸、酒白芍、醋延胡索、醋香附、甘草粉末均经过灭菌处理。

上述的肠胃疾病用药的制备方法，其中制成药学上任何药物剂型，包括胶囊、片剂、颗粒剂、丸剂等。

采用本发明的制备方法制备的产品，保留了纤维素酶活性，提高了药效。具体如下：

1、本发明所述的中药组合物中纤维素酶活性高，适用于肠胃疾病，促消化作用好，明显区别于其他中成药产品。纤维素酶作用于消化道，可改善消化道环境，增加酸度，激活胃蛋白酶，增加胃肠道酶分泌量和活性，降低消化道内容物粘度，有利于胃肠道对食物的消化吸收，其活力的强弱直接关系到产品的疗效。

2、采用真空低温连续干燥技术，保存活性成分。猴头菌培养物含有酶、蛋白质等生物活性成分及多种挥发性成分，属热敏感性药材，加热易变性失活，且其经提取浓缩制得的浸膏粘度高，不易干燥，如何保持干燥、灭菌前后活性不变，成为关键性的技术难关，采用全自动真空低温连续干燥技术，既可以最大化地保留有效活性成分，发挥药材最好的疗效，又使猴头菌培养物及其浸膏充分干燥，外观色泽好，同时全封闭自动化，具有一定的杀菌作用。

3、本发明采用二次固体发酵培养物，更有利于菌丝体转化成有效成分，这样产生了质的改变，药效更好，拟将二次猴头菌培养物准确表述为猴头菌菌质。一次固体发酵培养后，因瓶内局部缺氧，特别是瓶底部分，菌丝未能将培养基彻底分解转化，颜色较深，为了使菌丝体彻底转化培养基，进行二次培养。一次培养掏瓶后，再转入塑料袋中在培养室培养一定时间，取出，烘干，即得。通过对猴头菌培养物与二次猴头菌培养物进行检测比较，结果如下：

猴头菌培养物与二次猴头菌培养物的羧甲基纤维素酶活力比较

4、采取全面严格的防控措施，消除杂菌污染，控制微生物限度。猴头菌培养物采用固体发酵工艺，经过培养基配置、装瓶、接种、培养、掏瓶、烘干等多步过程，难免受到杂菌污染，且所用培养基主要由棉籽壳、麦麸皮、谷糠等农副产品构成，本身极易滋生杂菌，而杂菌污染一直是制约固体发酵应用的严重问题之一。猴头菌培养物通过采取将配置好的培养基填装于经洗烘联动机组处理的耐高温玻璃瓶中进行高压灭菌，接种人员穿着无菌工作服，佩戴口罩，使用酒精棉擦手消毒操作，装配自动化掏瓶、全自动真空低温连续干燥设备，建设100000级空气洁净度的发酵培养室等一系列无菌控制措施，海螵蛸、白芍等其他五味中药粉经湿热高温、Co60照射灭菌、紫外灭菌等灭菌方法灭菌处理后与猴头菌培养物无菌对接入药，保证猴头健胃灵细菌数每1g不超过100000cfu，霉菌和酵母菌数每1g不超过500cfu，符合中国药典微生物限度标准规定。

5、药粉无菌对接混合提高羧甲基纤维素酶活力，增强疗效。猴头健胃灵原工艺将混合药粉在制剂最终成型前采用118℃灭菌处理4小时，以使微生物限度达到国家药典规定，但高温长时间操作，使君药猴头菌培养物这种特殊生物药用菌质中的挥发性成分、酶及蛋白质等多种药效物质被破坏，尤其是酸性羧甲基纤维素酶活力，严重影响了猴头健胃灵的疗效发挥。为此，采用将海螵蛸、白芍等其他药粉灭菌处理后与无菌培养获得的猴头菌培养物直接进行无菌对接混合。经检验测定，结果表明药粉无菌对接猴头健胃灵不仅微生物限度符合国家药典相关规定，而且酸性羧甲基纤维素酶活力大大提高。

原工艺猴头健胃灵与无菌对接猴头健胃灵酸性羧甲基纤维素酶活力比较

酸性羧甲基纤维素酶活力检测方法如下：

对照品溶液的制备：取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含1mg的溶液，即得。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，各加水至刻度，摇匀。分别精密量取上述溶液1.5ml，置25ml具塞刻度试管中，各精密加pH4.8柠檬酸盐缓冲液0.5ml，混匀，立即精密加入DNS试剂1.5ml，摇匀，置沸水浴中保温15分钟，取出，迅速自来水冷却10分钟，再加水至刻度，摇匀，静置1.5小时，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录V A），在540nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，葡萄糖量为横坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备：取猴头菌培养物或二次猴头菌培养物细粉（过二号筛）约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水200ml，密塞，称定重量，振摇3小时，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，即得。本液应临用新制。

测定法：精密量取1%羧甲基纤维素钠溶液1.5ml置25ml具塞刻度试管中，精密加供试品溶液0.5ml，混匀，置50℃水浴中保温30分钟，取出，照标准曲线的制备项下的方法，自“立即精密加入DNS试剂1.5ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中还原糖的重量（mg）。空白管加1%羧甲基纤维素钠溶液1.5ml，置50℃水浴中保温30分钟，取出，精密加供试品溶液0.5ml，混匀，照标准曲线的制备项下的方法，自“立即精密加入DNS试剂1.5ml”起，依法进行。按下式计算：

U=A×1/0.5×n×2

式中U——每1g含酸性羧甲基纤维素酶活力单位，U/g；

A——吸光度在标准曲线上查得的还原糖重量，mg；

n——样品稀释倍数；

2——时间换算系数。

1g固体酶在50±1℃、pH4.8条件下，1小时水解1%羧甲基纤维素钠底物，产生出相当于1mg葡萄糖的还原糖量为一个酸性羧甲基纤维素酶活力单位，以U/g表示。

二次猴头菌培养物中每1g酸性羧甲基纤维素酶活性应不低于150U，猴头健胃灵中每1g酸性羧甲基纤维素酶活性应不低于20U。

附图说明

1、图1为本发明所述的肠胃疾病用药组合物中酶促反应温度对酶活力测定的影响。

具体实施方式

实施例1

1、无菌培养：培养基通过灭菌，10万级洁净区内接种、无菌条件下培养45天，温度为25℃，防止污染；

2、二次培养：一次培养掏瓶后即得猴头菌培养物，再转入塑料袋中在培养室培养7天，培养温度为25℃，取出；

3、低温干燥：在温度为45℃的条件下，采用真空低温连续干燥技术干燥；

4、低温灭菌：在温度为45℃的条件下采取紫外灭菌的方式灭菌；

5、制备清膏：取上述步骤4制备的二次猴头菌培养物80克，加水煎煮，滤过，滤液减压浓缩成相对密度为1.15（70℃）的清膏；

6、加入粉末：将上述制备的清膏与海螵蛸粉末80克、酒白芍粉末40克、醋延胡索粉末40克、醋香附粉末40克、甘草粉末40克混合均匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，灭菌，加入二次猴头菌培养物粉末80克，混匀，装入胶囊制成1000粒。

Claims (8)

1.一种肠胃疾病用药的制备方法，其特征在于包含如下步骤：

（1）无菌培养：培养基通过灭菌，10万级洁净区内接种、无菌条件下培养40-50天，温度为20℃-30℃，防止污染；

（2）二次培养：一次培养掏瓶后即得猴头菌培养物，再转入塑料袋中在培养室培养5-10天，培养温度为20-30℃，取出；

（3）低温干燥：在温度未超过60℃的条件下干燥；

（4）低温灭菌：在温度未超过60℃的条件下灭菌；

（5）制备清膏：取经上述步骤（1）（2）（3）（4）制备的二次猴头菌培养物，加水煎煮，滤过，滤液减压浓缩成相对密度为1.0-1.5（70℃）的清膏；

（6）加入粉末：将上述制备的清膏与海螵蛸粉末、酒白芍粉末、醋延胡索粉末、醋香附粉末、甘草粉末混合均匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，灭菌，加入经上述步骤（1）（2）（3）（4）制得的二次猴头菌培养物粉末，混匀，制成药品剂型。

2.如权利要求1所述的肠胃疾病用药的制备方法，其特征在于所述的步骤（5）中滤液减压浓缩成相对密度为1.15（70℃）的清膏。

3.如权利要求1所述的肠胃疾病用药的制备方法，其特征在于步骤（5）取用的二次猴头菌培养物质量与步骤（6）取用的二次猴头菌培养物粉末质量相同。

4.如权利要求1所述的肠胃疾病用药的制备方法，其特征在于步骤（6）添加的二次猴头菌培养物粉末、海螵蛸、酒白芍、醋延胡索、醋香附、甘草粉末的质量比为2∶2∶1∶1∶1。

5.如权利要求1所述的肠胃疾病用药的制备方法，其特征在于所述的步骤（3）采用微波干燥或者真空低温连续干燥技术干燥。

6.如权利要求1所述的肠胃疾病用药的制备方法，其特征在于所述的步骤（4）采用Co60照射灭菌、紫外照射灭菌中的一种。

7.如权利要求1所述的肠胃疾病用药的制备方法，其特征在于所述的步骤（6）中海螵蛸、酒白芍、醋延胡索、醋香附、甘草粉末均经过灭菌处理。

8.如权利要求1所述的肠胃疾病用药的制备方法，其特征在于制成药学上任何药物剂型，包括胶囊、片剂、颗粒剂、丸剂等。

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