CN104189891A

CN104189891A - 一种不含人血清蛋白的重组人促红素制剂

Info

Publication number: CN104189891A
Application number: CN201410403438.4A
Authority: CN
Inventors: 程度胜; 韩明娣; 龙应国; 桑建彬; 薛霞; 郭峰
Original assignee: Beijing Sihuan Biopharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Beijing Sihuan Biopharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2014-08-15
Filing date: 2014-08-15
Publication date: 2014-12-10
Anticipated expiration: 2034-08-15
Also published as: CN104189891B

Abstract

本发明公开了一种不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，其特征在于，由以下组分组成：药用量的人红细胞生成素；氨基酸及其盐类衍生物0.1-2％(W/V)；非离子表面活性剂0.001-0.01％(V/V)；生理上可相溶的缓冲液，其可控制所述制剂的pH值在5.0-8.0之间；等渗剂：1-5％(W/V)的甘露醇或0.1-0.9％(W/V)的氯化钠；余量为水。该制剂避免了使用人血清白蛋白带来的潜在病毒威胁和蛋白过敏的危险，保证了重组人促素注射剂的精确含量，并且拥有良好的高温贮存稳定性。

Description

一种不含人血清蛋白的重组人促红素制剂

技术领域

本发明涉及生物制药领域，特别是一种不含人血清蛋白的重组人促红素制剂。

背景技术

重组人促红素(EPO)是一种糖蛋白，其主要生理作用是刺激骨髓中血红蛋白或红细胞的形成，主要由肾脏生成并通过循环血进入骨髓而发挥作用。重组人促红素具有与天然促红素相同的结构及生理作用，临床重组人促红素注射液广泛用于肾性贫血、外科围手术期的红细胞动员、肿瘤化疗及各种原因引起的贫血等，是一种良好的血液替代品。

EPO在体内的工作浓度非常低，人体对于EPO水平的微小变化非常敏感，所以依赖于EPO的治疗必须建立在一个能够保证这种痕量的外源激素能够精确给药的制剂的基础之上。但是已知EPO在水溶液中及其不稳定(美国专利US4806524中披露)，并且大分子蛋白由于容器的吸附原因，很难保证其含量。所以常常在溶液中加入一种或多种保护剂以增加稳定性并防止其被吸附在容器的内壁上。例如授权公告号为CN1247257C的专利文件中披露的一种稳定的重组人红细胞生成素制剂，采用甘露醇、L-组氨酸盐酸盐作为保护剂和稳定剂，提高了重组人红细胞生成素制剂的低温稳定性，在4℃下保存2年活性和纯度均无明显下降，但是该制剂的高温稳定性较差，在37℃下贮存3个月活性下降明显。CN1832754A披露的一种不含清蛋白的红细胞生成素制剂，在药用量的EPO中添加羟乙基淀粉(HES)，配以谷氨酸、谷氨酰胺和/或甘氨酸，进一步提高了制剂在高温贮存状态下的稳定性，在40℃下贮存2星期后，EPO残留率可维持在96％左右，此外，当制剂中不添加上述特定氨基酸时，需将羟乙基淀粉浓度控制在1-3％才能获得较高的高温贮存稳定性。但是，近年来有证据表明，HES存在肾毒性的危害，《美国医学会杂志》[JAMA2013，309(7)：678]披露了HES增重症患者急性肾衰和死亡风险，因此羟乙基淀粉目前在使用过程中存在着较大的风险和争议，为了提高制剂的安全可靠性，在不必要的情况下应尽量避免使用。

发明内容

针对上述现有技术中存在的不足，本发明提供了一种不含人血清蛋白的重组人促红素制剂。该制剂避免了血液制品人血蛋白带来的潜在的病毒及交叉感染的风险，且具有良好的高温贮存稳定性。

本发明提供的一种不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，由以下组分组成：

药用量的人红细胞生成素；

氨基酸及其盐类衍生物0.1-2％(W/V)；

非离子表面活性剂0.001-0.01％(V/V)；

生理上可相溶的缓冲液，其可控制所述制剂的pH值在5.0-8.0之间；

等渗剂：1-5％(W/V)的甘露醇或0.1-0.9％(W/V)的氯化钠；

余量为水。

所述氨基酸及其盐类衍生物为精氨酸及其盐类衍生物、亮氨酸及其盐类衍生物、异亮氨酸及其盐类衍生物、脯氨酸及其盐类衍生物、甘氨酸及其盐类衍生物、丙氨酸及其盐类衍生物中一种或几种的混合物。

所述氨基酸及其盐类衍生物为L-精氨酸、L-异亮氨酸、L-异亮氨酸叔丁酯盐酸盐和反式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯盐酸盐的混合物，所述混合物中各组分的重量配比为：L-精氨酸：L-异亮氨酸：L-异亮氨酸叔丁酯盐酸盐：反式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯盐酸盐＝(1～1.5):(1～2)：(2～3)：(1～2)。

所述混合物中各组分的重量配比为：L-精氨酸：L-异亮氨酸：L-异亮氨酸叔丁酯盐酸盐：反式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯盐酸盐＝1:2:3:2。

所述人红细胞生成素含量为2000～40000国际单位/毫升。

所述人红细胞生成素为重组人促红素或长效重组人促红素，特别是重组人促红素(rHuEPO)。

优选地，氨基酸及其盐类衍生物的含量为0.85-1.6％(W/V)。

所述非离子表面活性剂为聚山梨酯20或聚山梨酯80(又称吐温20、吐温80)。

所述生理上可相溶的缓冲液为磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、盐酸缓冲液和/或构橼酸缓冲液，当氨基酸及其盐类衍生物中含有碱性氨基酸时，优选使用盐酸缓冲液或构橼酸缓冲液。上述缓冲液的作用是将制剂的pH值稳定控制在5.0-8.0之间，本领域技术人员有能力根据上述pH值要求选择相应的缓冲液种类及用量。

所述制剂为注射剂，组分中的水采用注射用水。

上述各组分均可由本领域技术人员通过市售直接购得，原料来源充足稳定。

本发明提供的一种不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，在各个浓度范围内均具有良好的常温稳定性和高温稳定性(45℃保存14天活性基本不变)，在优选的氨基酸及盐类衍生物的配伍和配比下，可将制剂(特别是高浓度制剂)在45℃下的稳定性延长到3个月以上，此外制剂当中不含HES等存在副作用风险的组分，安全可靠。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。

实施例1

本实施例中重组人促红素制剂的组分及配比为:

准确称量上述各组分保持常温混合均匀，用注射用水补足至1000ml定容，置于灭菌容器中。

实施例2

本实施例与实施例1的区别在于，重组人促红素(rHuEPO)浓度为2000IU/ml。

实施例3

本实施例与实施例1的区别在于，重组人促红素(rHuEPO)浓度为20000IU/ml。

实施例4

本实施例与实施例1的区别在于，重组人促红素(rHuEPO)浓度为5000IU/ml。

实施例5

本实施例中重组人促红素制剂的组分及配比为:

实施例6

本实施例与实施例5的区别在于，重组人促红素(rHuEPO)浓度为2000IU/ml。

实施例7

本实施例与实施例5的区别在于，重组人促红素(rHuEPO)浓度为20000IU/ml。

实施例8

本实施例与实施例5的区别在于，重组人促红素(rHuEPO)浓度为5000IU/ml。

实施例9

实施例10

本实施例与实施例9的区别在于，重组人促红素(rHuEPO)浓度为2000IU/ml。

实施例11

本实施例与实施例9的区别在于，重组人促红素(rHuEPO)浓度为20000IU/ml。

实施例12

本实施例与实施例9的区别在于，重组人促红素(rHuEPO)浓度为5000IU/ml。

实施例13

本实施例中重组人促红素制剂的组分及配比为:

反式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯盐酸

实施例14

本实施例与实施例13的区别在于，重组人促红素(rHuEPO)浓度为2000IU/ml。

实施例15

本实施例与实施例13的区别在于，重组人促红素(rHuEPO)浓度为20000IU/ml。

实施例16

本实施例与实施例13的区别在于，重组人促红素(rHuEPO)浓度为5000IU/ml。

试验例1

按实施例1分装配置了4000IU/0.8ml/支(预注射器)共3批产品，并与某市售白蛋白处方产品(对照组)进行稳定性按《中国药典2010》中规定对比考察，各项检测项目是在25℃下保存6个月后测定。结果如下：

由上表可见，实施例1提供的人促红制剂产品在常温下贮存稳定，6个月后体内外活性无明显下降，各项检测指标与含蛋白处方产品无明显区别。

试验例2

按照实施例2、3提供的人促红制剂产品，试制了2000IU/ml/瓶、20000IU/ml//瓶2种规格产品各3批，主要为考察高浓度和低浓度产品的稳定性。按照药典2010版要求进行稳定性试验，25度下保存6月后产品活性符合规定。而单纯的以非离子表面活性剂为保护剂的制剂，影响因素试验完毕后活性会降低。

试验例3

按照实施例4和实施例8试制样品，5000IU/瓶，每配方试制300瓶，分别对两个配方进行45度的高温试验20天，32度加速试验6个月，证实两个配方在高温下的稳定性均稳定性良好。

试验例4

按照实施例4、实施例8、实施例12、实施例16试制样品，5000IU/瓶，每配方试制300瓶，分别对两个配方进行45度的高温试验90天，检测结果如下：

结果显示，实施例4、8、12提供的人促红制剂在45℃下的长期稳定性不够理想，90天后活性发生明显下降，而实施例16的人促红制剂基本仍能保持原有的活性。

试验例5

按照实施例3、实施例7、实施例11、实施例15试制样品，5000IU/瓶，每配方试制300瓶，分别对两个配方进行45度的高温试验90天，检测结果如下：

由结果可见，实施例3、7、11制剂在高浓度(20000IU/ml)下进行高温贮存90天后，活性下降明显，超过50％，试验例4中显示，实施例3、7、11配方对应的中等浓度制剂(实施例4、8、12)高温贮存90天后活性下降不到40％，由此比对可发现在长期的高温贮存条件，制剂的稳定性随EPO浓度增加而降低。而实施例15、16对应配方无论在高、低浓度下进行长期高温贮存，都显示出良好的稳定性。

以上对本发明所提供的一种不含人血清蛋白的重组人促红素制剂进行了详细介绍。本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰。这些改进和修饰也应当落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims

1.一种不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，其特征在于，由以下组分组成：

药用量的人红细胞生成素；

氨基酸及其盐类衍生物0.1-2％(W/V)；

非离子表面活性剂0.001-0.01％(V/V)；

等渗剂：1-5％(W/V)的甘露醇或0.1-0.9％(W/V)的氯化钠；

余量为水。

2.根据权利要求1所述的不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，其特征在于，所述氨基酸及其盐类衍生物为精氨酸及其盐类衍生物、亮氨酸及其盐类衍生物、异亮氨酸及其盐类衍生物、脯氨酸及其盐类衍生物、甘氨酸及其盐类衍生物，丙氨酸及其盐类衍生物中一种或几种的混合物。

3.根据权利要求2所述的不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，其特征在于，所述氨基酸及其盐类衍生物为L-精氨酸、L-异亮氨酸、L-异亮氨酸叔丁酯盐酸盐和反式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯盐酸盐的混合物，所述混合物中各组分的重量配比为：L-精氨酸：L-异亮氨酸：L-异亮氨酸叔丁酯盐酸盐：反式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯盐酸盐＝(1～1.5):(1～2)：(2～3)：(1～2)。

4.根据权利要求3所述的不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，其特征在于，所述混合物中各组分的重量配比为：L-精氨酸：L-异亮氨酸：L-异亮氨酸叔丁酯盐酸盐：反式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯盐酸盐＝1:2:3:2。

5.根据权利要求1所述的不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，其特征在于，所述人红细胞生成素含量为2000～40000国际单位/毫升。

6.根据权利要求5所述的不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，其特征在于，所述人红细胞生成素为重组人促红素或长效重组人促红素。

7.根据权利要求1所述的不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，其特征在于，氨基酸及其盐类衍生物的含量为0.85-1.6％(W/V)。

8.根据权利要求1所述的不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，其特征在于，所述非离子表面活性剂为聚山梨酯20或聚山梨酯80。

9.根据权利要求1所述的不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，其特征在于，所述生理上可相溶的缓冲液为磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、盐酸缓冲液和/或构橼酸缓冲液。

10.根据权利要求1-9任一所述的不含人血清蛋白的重组人促红素制剂，其特征在于，所述制剂为注射剂。