CN104189109A

CN104189109A - 一种丹皮提取物在制备降糖药物中的应用

Info

Publication number: CN104189109A
Application number: CN201410388918.8A
Authority: CN
Inventors: 苗明三; 王灿; 苗艳艳
Original assignee: Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Current assignee: Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Priority date: 2014-08-09
Filing date: 2014-08-09
Publication date: 2014-12-10

Abstract

本发明涉及丹皮提取物在制备降糖药物中的应用，可有效解决制备降糖药物的问题，其解决的技术方案是，丹皮提取物在制备降糖药物中的应用，该丹皮提取物是，取丹皮药材，粉碎成粗粉，加NaCl水溶液，浸泡，再蒸馏提取，收集馏出液，冷却至室温后，冷藏，待丹皮酚晶体析出，滤过，得第一次结晶体；滤液再加NaCl，重蒸馏，收集滤液3倍量的蒸馏液，冷藏过夜，过滤，得第二次结晶体，合并两次结晶体，减压干燥，即得丹皮提取物，其中丹皮酚质量含量80%以上，本发明原材料丰富，制备方法简单，所得丹皮提取物有效用于制备降糖药物，实现丹皮提取物在制备降糖药物中的应用，而且还可以进一步实现制备治疗糖尿糖的用药问题，开拓了丹皮的药用价值及新用途。

Description

一种丹皮提取物在制备降糖药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种丹皮提取物在制备降糖药物中的应用。

背景技术

丹皮为毛茛科植物牡丹干燥根皮。产于安徽、四川、河南、山东等地。具有清热凉血、活血化淤、退虚热等功效。随着科技的发展和中药的进一步开发，丹皮的应用价值越来越被人们所重视，因此，对丹皮的研究广而有之，但至今未见有丹皮提取物在制备降糖药物中的应用的公开报导。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种丹皮提取物在制备降糖药物中的应用，可有效解决制备降糖药物的问题。

本发明解决的技术方案是，丹皮提取物在制备降糖药物中的应用，该丹皮提取物是，取丹皮药材，粉碎成粗粉，加NaCl水溶液，浸泡，再蒸馏提取，收集馏出液，冷却至室温后，冷藏，待丹皮酚晶体析出，滤过，得第一次结晶体；滤液再加NaCl，重蒸馏，收集滤液3倍量的蒸馏液，冷藏过夜，过滤，得第二次结晶体，合并两次结晶体，减压干燥，即得丹皮提取物，其中丹皮酚质量含量80％以上。

本发明原材料丰富，制备方法简单，所得丹皮提取物具有降糖作用，有效用于制备降糖药物，实现丹皮提取物在制备降糖药物中的应用，而且还可以进一步实现制备治疗糖尿糖的用药问题，开拓了丹皮的药用价值及新用途。

具体实施方式

以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。

本发明在具体实施中，一种丹皮提取物在制备降糖药物中的应用，该丹皮提取物是，取丹皮药材，粉碎成过20目筛的粗粉，加15倍重量的、质量浓度为5％的NaCl水溶液，室温浸泡2h，再水蒸汽蒸馏提取5h，控制蒸馏液流速按每300g药材为9ml/min，收集馏出液，冷却至室温后，将蒸馏液4℃冷藏24h，待丹皮酚晶体析出，滤过，得第一次结晶体；滤液再加15倍重量的、质量浓度为5％的NaCl，重蒸馏，收集滤液3倍量的蒸馏液，冷藏过夜，过滤，得第二次结晶体，合并两次结晶体，45℃减压干燥，即得丹皮提取物，其中丹皮酚质量含量80％以上。

本发明丹皮提取物具有降糖作用，可解决制备降糖药物，进而实现制备治疗糖尿病的用药问题，并经试验其降糖作用得到了有效证明，有关试验资料如下：

一、对肾上腺素致小鼠高血糖模型的影响

1实验材料

1.1药品试剂

本发明丹皮提取物；盐酸肾上腺素注射液，上海禾丰制药有限公司；盐酸二甲双胍，市售；生理盐水，郑州永和制药有限公司；浓硫酸，洛阳市化学试剂厂；血糖试剂盒，浙江东瓯生物工程有限公司；肝糖元试剂盒，南京建成生物工程研究所。

1.2仪器

UV-2000紫外可见分光光度计，尤尼柯(上海)仪器有限公司；恒温水浴锅，北京市光明仪器厂；离心机，北京医疗仪器修理厂；FA(N)/JA(N)系列电子天平，上海民桥精密仪器有限公司；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司。

1.3动物

小鼠：昆明种，雄性，体重：19～21g；由河北省实验动物中心提供，合格证号608155。

2实验方法与结果

取雄性小鼠60只，体重20-22g，随机均匀分为6组，分别灌服大、中、小剂量的丹皮提取物(400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml，0.2ml/10g)溶液，二甲双胍混悬液(0.208g/kg，0.104mg/ml，0.2ml/10g)，模型组和空白组灌服同体积的生理盐水液。每天给药1次，连续给药9天。于禁食后12h灌药后90min，除空白组外每鼠迅速腹腔注射肾上腺素240ug/kg，空白对照组注射同体积生理盐水，于给肾上腺素后30min、60min立即取血，分离血清测血糖值(按试剂盒说明操作)。处死小鼠后，精密称取肝脏50mg左右，按试剂盒说明测定，620nm处测各管OD值。结果见表1。

表1 丹皮提取物对肾上腺素所致小鼠高血糖模型血糖及肝糖原的影响(n＝10)

*表示与模型组比P<0.05，**表示与模型组比P<0.01

由上表可以看出，与空白组相比，模型组小鼠30min、60min血糖均显著增高(P<0.01)，肝糖原显著降低(P<0.01)，说明造高血糖模型成功。与模型组相比，大、中、小剂量丹皮提取物组和二甲双胍组均可显著降低30min血糖水平(P<0.01)；二甲双胍组均可显著降低60min血糖水平(P<0.01)，大、中、小剂量丹皮提取物组在60min仅有降糖的趋势；大、中、小剂量丹皮提取物组可显著提高肝糖原含量(P<0.01)，二甲双胍组可明显提高肝糖原含量(P<0.05)。

二、对四氧嘧啶所致小鼠高血糖模型的影响

1.1药品试剂

本发明丹皮提取物；四氧嘧啶，sigma公司；盐酸二甲双胍，市售；生理盐水，郑州永和制药有限公司；浓硫酸，洛阳市化学试剂厂；血糖试剂盒，浙江东瓯生物工程有限公司；肝糖元试剂盒，南京建成生物工程研究所。

1.2仪器

1.3实验动物

小鼠，昆明种，雄性，体重15～16g，由河北省实验动物中心提供，合格证号608155。

2实验方法与结果

取雄性小鼠60只，体重20～22g，随机均匀分为6组，分别灌服大、中、小剂量的丹皮提取物(400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml，0.2ml/10g)溶液，二甲双胍混悬液(0.208g/kg，0.104mg/ml，0.2ml/10g)，模型组和空白组灌服同体积的生理盐水液。每天给药1次，连续给药10天。于第7天禁食后12h灌药后90min，除空白组外每鼠尾静脉注射80mg/kg(0.05ml/10g)新配制的四氧嘧啶生理盐水液，注射后72h，取血测定分离血清测血糖值(按试剂盒说明操作)。处死小鼠后，精密称取肝脏50mg左右，按试剂盒说明测定，620nm处测各管OD值。结果见表2。

表2 丹皮提取物对四氧嘧啶所致小鼠高血糖模型的影响(n＝10)

*表示与模型组比P<0.05，**表示与模型组比P<0.01

由上表可以看出，与空白组比，模型组小鼠血糖显著增高(P<0.01)，肝糖原显著降低(P<0.01)，说明造高血糖模型成功。与模型组比，大、中、小剂量丹皮提取物组和二甲双胍组均可显著降低血糖水平(P<0.01)；大、中、小剂量丹皮提取物组和二甲双胍组均可明显提高肝糖原含量(P<0.05)。

三、对链脲佐菌素致小鼠糖尿病模型的影响

1实验材料

1.1药品试剂

本发明丹皮提取物；链脲佐菌素，sigma公司；盐酸二甲双胍市售；生理盐水，郑州永和制药有限公司；柠檬酸(分析纯)，湖北省医药公司化玻站；柠檬酸钠(分析纯)，天津市化学试剂批发部；浓硫酸，洛阳市化学试剂厂；血糖试剂盒，浙江东瓯生物工程有限公司；糖化血清蛋白(GSP)测定试剂盒、糖元试剂盒，南京建成生物工程研究所。

1.2实验仪器

UV-2000紫外可见分光光度计，龙尼柯(上海)仪器有限公司；恒温水浴锅，北京市光明仪器厂；离心机，北京医疗仪器修理厂；FA(N)/JA(N)系列电子天平，上海民桥精密仪器有限公司；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司；

1.3实验动物

小鼠：昆明种，雄性，体重：18～20g；由河北省实验动物中心提供，合格证号：611040。

2实验方法与结果

取雄性小鼠，正常饲养3天，禁食12h后，尾静脉注射链脲佐菌素(80mg/kg，0.02ml/10g)，于注射第11天禁食12h后，尾部采血测空腹血糖值，选取血糖值>11.1mmol/L并具有明显多饮、多食、多尿症状的小鼠50只，按血糖值随机均分为5组，即大、中、小剂量的丹皮提取物组，二甲双胍组和模型组，分别灌服大、中、小剂量的丹皮提取物(400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml，0.2ml/10g)混悬液，二甲双胍混悬液(0.208g/kg，10.4mg/ml，0.2ml/10g)及同体积生理盐水；在实验开始时另随机取10只小鼠作为空白对照组，注射同体积缓冲液、灌服同体积生理盐水。每天给药1次，连续给药30天。于给药第10、20、30天尾部取血测血糖值。第30天在禁食12h末次给药1h后，取血，测血糖(按试剂盒说明)、糖基化血清蛋白(按试剂盒说明)，处死小鼠，取肝测肝糖元(按试剂盒说明测)；取胰腺，福尔马林液固定，做病理切片。结果见表3、表4、表5。

表3 丹皮提取物对链尿佐菌素致小鼠糖尿病模型血糖水平的影响(mmol/L，n＝10)

*表示与模型组比P<0.05，**表示与模型组比P<0.01

由上表可以看出，在实验开始，与空白组比，各组血糖均显著升高(P<0.01)，说明造糖尿病模型成功；除空白组外，各组血糖值之间无显著性差异，说明分组均匀。与空白组比，模型组在给药10天、20天、30天血糖值均显著升高(P<0.01)，说明在实验时间内小鼠是糖尿病模型。与模型组相比，在第10天，各给药组血糖仅有降低趋势；在第20天，大剂量丹皮提取物组可明显降低血糖水平(P<0.05)，二甲双胍组组可显著降低血糖水平(P<0.01)；在第30天，大、中剂量丹皮提取物组和二甲双胍组均可显著降低血糖水平(P<0.01)，小剂量丹皮提取物组可明显降低血糖水平(P<0.01)。

表4 丹皮提取物对链尿佐菌素致小鼠糖尿病模型肝糖原及糖化血清蛋白水平的影响(n＝10)

*表示与模型组比P<0.05，**表示与模型组比P<0.01

由上表可以看出，与空白组比，模型组肝糖原显著降低(P<0.01)，糖化血清蛋白显著增高(P<0.01)，说明造糖尿病模型成功。与模型组比，大、中剂量丹皮提取物组和二甲双胍组均可显著升高肝糖原含量(P<0.01)，小剂量丹皮提取物组可明显升高肝糖原含量(P<0.05)；大、中剂量丹皮提取物组和二甲双胍组均可显著降低糖化血清蛋白值(P<0.01)。

表5 对链脲佐菌素致小鼠糖尿病模型胰脏组织形态的影响

组别	n	-	+	++	+++
						空白组	10	10	0	0	0

模型组	10	0	0	1	9
						二甲双胍组	10	0	2	8	0
大剂量丹皮提取物组	10	0	4	5	1
						中剂量丹皮提取物组	10	0	1	7	2
小剂量丹皮提取物组	10	0	0	7	3

“-”：胰岛细胞胞浆丰富，未出现萎缩，水肿和空泡变性均正常德；“+”：胰岛细胞呈现萎缩现象，而无水肿和空泡变性的；“++”：胰岛细胞大部分出现萎缩，细胞少数出现水肿而无空泡变性的；“+++”胰岛细胞出现萎缩，同时出现水肿和空泡变性明显者。

由上表可以看出，经Ridit检验，与空白组比，模型组胰脏出现显著病理变化(P<0.01)，说明造糖尿病模型成功。与模型组比，大剂量丹皮提取物组和二甲双胍组均可显著改善胰脏病理变化(P<0.01)，中、小剂量丹皮提取物组可明显改善胰脏病理变化(P<0.05)。

试验充分证明丹皮提取物具有降糖作用，有效用于制备降糖药物，并用于对糖尿病的治疗用药问题，开拓了丹皮的新用途，具有巨大的经济和社会意义。

Claims

1.一种丹皮提取物在制备降糖药物中的应用，该丹皮提取物是，取丹皮药材，粉碎成过20目筛的粗粉，加 15 倍重量的、质量浓度为5%的NaCl水溶液，室温浸泡2h，再水蒸汽蒸馏提取5h，控制蒸馏液流速按每300g药材为9ml/min，收集馏出液，冷却至室温后，将蒸馏液4℃冷藏24 h，待丹皮酚晶体析出，滤过，得第一次结晶体；滤液再加15倍重量的、质量浓度为5%的NaCl，重蒸馏，收集滤液3倍量的蒸馏液，冷藏过夜，过滤，得第二次结晶体，合并两次结晶体，45℃减压干燥，即得丹皮提取物，其中丹皮酚质量含量80%以上。