CN105250343B - 一种白沙蒿提取物及其制备方法和在降糖方面的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种白沙蒿叶片有效成分的提取制备方法。本发明还提供将制备所得白沙蒿提取物用于降低葡萄糖苷酶活性及在糖尿病治疗中的应用。本发明的白沙蒿提取物作为植物源药物,有效降低葡萄糖苷酶活性的同时,副作用小,不仅为糖尿病治疗提供了新的治疗手段,而且对于科学合理和可持续地开发和利用白沙蒿资源具有非常重要的意义。本发明制备工艺简捷环保,开发成本低,经济效益明显。
Description
技术领域
本发明属于生物制药技术领域,具体涉及一种白沙蒿提取物及其制备方法和在糖尿病治疗中的应用。
背景技术
糖尿病是一种与胰岛素产生和作用异常相关、以高血糖症为主要特征的代谢性疾病,尚无根治办法。近来研究发现,糖尿病病发过程往往先出现餐后高血糖,而后发展成糖尿病,即前者是后者的先期征兆。对于糖尿病患者,特别是Ⅱ型病人,餐后高血糖对机体的危害远远超过空腹高血糖,餐后高血糖的出现刺激胰腺大量分泌胰岛素,可引起多种代谢异常和血管病变,同时是胰腺功能进一步受到损害。因此,降低餐后血糖对于治疗Ⅱ型糖尿病和预防该病,减少并发症和降低死亡率的重要措施之一。
α-葡萄糖苷酶抑制剂是二十世纪八十年代出现的一类新的抗糖尿病药物,它通过竞争性抑制小肠绒毛膜上的糖苷酶的作用来减少糖类的降解,延缓糖类的消化和吸收,从而有效地降低糖尿病人餐后血糖浓度的峰值。该抑制剂已被第三次亚太地区糖尿病治疗药物指南推荐为降餐后血糖的一线药物,被医学界列为第3类口服降糖药。然而目前已上市的该产品如阿卡波糖、伏格列波糖等多为合成产品,虽药效好但对人体毒副作用较大,如胃肠道反应、过敏反应等。以中草药为原料,寻找服用安全对于治疗和预防糖尿病具有重要意义,也是目前国内外研究α-葡萄糖苷酶抑制剂的一个热点。
白沙蒿Artemisia sphaerocephala Kraschen菊科蒿属植物,又名圆头沙蒿。在自然生境中,白沙蒿常年生长在干旱地区,克服着干旱、贫瘠和光照辐射强度高等多种不利因素,形成了自身独特的适应机制。文献报道,沙蒿种子中的沙蒿多糖具有明显的降糖作用。然而其体内的次生代谢物对α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究却未见报道。专利200510002228申请用沙蒿种子制备沙蒿多糖的办法,但种子资源非常有限,且该专利方法利用CO2超临界提取,工艺条件要求高,生产成本高,难于工业化。本专利对于白沙蒿叶片降糖作用的深入研究,不仅提高了对白沙蒿的利用率,而且工艺简单,生产成本低,易于工业化,对于白沙蒿资源的综合开发利用和保护具有重要意义。
发明内容
本发明提供了一种白沙蒿叶片提取物的制备方法,该提取物取材于白沙蒿叶片,突破了以往技术一直只能以沙蒿植物种子为原料,提取工艺条件苛刻等不足。本发明技术原料充足,工艺简单,可以实现工业化。
本发明的另外一个目的是提供白沙蒿提取物在治疗和预防糖尿病中的应用,为寻找安全可靠的α-葡萄糖苷酶抑制剂提供理论基础,对于科学综合地开发白沙蒿资源具有非常重要的意义。经过验证,该提取物能够有效地降低α-葡萄糖苷酶的活性,从而对于糖尿病的治疗有积极的意义。
以往对白沙蒿开发利用的研究相对较少,主要集中在白沙蒿的种子上,尤其是种子多糖,虽然种子营养价值高,可以食用亦可药用,然而白沙蒿主要生长在半干旱和干旱地区,种子产量小,而且它还是我国西北流动沙丘、半流动沙丘、固定沙丘的最重要的先锋固沙植物之一,大量采收种子对生态环境保护和治理影响较大。本发明的研究结果将有利于科学、综合和可持续地开发和利用白沙蒿资源,同时也能提高人们种植固沙植物的积极性,有利于生态环境的修复。
以下是白沙蒿叶片提取物的制备方法:
所述方法是采集白沙蒿成熟期叶片,阴干粉碎后,用5-50倍无水乙醇或其它有机溶剂,超声波或加热回流提取10-100分钟,重复提取2-4次,减压浓缩,阴干,得到白沙蒿提取物。将白沙蒿提取物用1-10体积的水溶解,先用与水溶液1-10体积的石油醚萃取1-10次,将石油醚部分合并,减压浓缩风干,制得石油醚部位;再用水溶液1-10体积的乙酸乙酯萃取剩余水溶液1-10次,将乙酸乙酯部分合并,减压浓缩风干,制得乙酸乙酯部位。剩余水溶液减压浓缩,风干,制得水相部位。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明,但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为自常规生化试剂商店购买得到的。
实施例1
本发明的白沙蒿提取物的制备方法如下:
采集于阿拉善地区白沙蒿成熟期(8月)新鲜叶片,阴干粉碎,通过100目筛子得细粉。将叶片细粉用20倍无水乙醇溶液,超声波提取60分钟后,重复提取3次,低于40℃温度下减压浓缩。在阴暗低温和通风较好的地方,晾干,制得提取物。提取物为黑色固体,4.76g。将白沙蒿提取物用10倍体积的水(30-40℃,50mL)溶解,用与水溶液2倍体积的石油醚(100mL)萃取3次,将上层石油醚部分在低于40℃温度下减压浓缩风干,制得石油醚部位。如果萃取过程中出现严重乳化现象,加入NaCl固体1-3g。石油醚部位为黑色固体,0.7666g,萃取得率16.11%。用水溶液2倍体积的乙酸乙酯(100mL)萃取剩余水溶液3次,将乙酸乙酯部分低于40℃温度下减压浓缩风干,制得乙酸乙酯部位。乙酸乙酯部位为黑色固体,2.4676g,得率51.84%。剩余水溶液低于40℃温度下减压浓缩,风干,制得水相部位。水相部位为黑褐色粘稠状固体,1.3318g,得率27.98%。
实施例2
本发明的白沙蒿提取物的制备方法如下:
采集白沙蒿成熟期新鲜叶片,阴干粉碎,通过100目筛子得细粉。将叶片细粉用20倍无水乙醇溶液,超声波提取30分钟后,重复提取2次,减压浓缩。在阴暗低温和通风较好的地方,晾干,制得提取物。将白沙蒿提取物用3倍体积的水溶解,先用与水溶液同体积的石油醚萃取1次,将石油醚部分减压浓缩风干,制得石油醚部位;用水溶液同体积的乙酸乙酯萃取剩余水溶液1次,将乙酸乙酯部分减压浓缩风干,制得乙酸乙酯部位。剩余水溶液减压浓缩,风干,制得水相部位。
实施例3
本发明的白沙蒿提取物的制备方法如下:
采集白沙蒿成熟期新鲜叶片,阴干粉碎,通过100目筛子得细粉。将叶片细粉用5倍无水乙醇溶液,超声波提取10分钟后,重复提取4次,减压浓缩。在阴暗低温和通风较好的地方,晾干,制得提取物。将白沙蒿提取物用2倍体积的水溶解,先用与水溶液2倍体积的石油醚萃取3次,将石油醚部分合并,减压浓缩风干,制得石油醚部位;用水溶液2倍体积的乙酸乙酯萃取剩余水溶液3次,将乙酸乙酯部分合并,减压浓缩风干,制得乙酸乙酯部位。剩余水溶液减压浓缩,风干,制得水相部位。
实施例4
本发明的白沙蒿提取物的制备方法如下:
采集白沙蒿成熟期新鲜叶片,阴干粉碎,通过100目筛子得细粉。将叶片细粉用50倍无水乙醇溶液,超声波提取90分钟后,重复提取3次,减压浓缩。在阴暗低温和通风较好的地方,晾干,制得提取物。将白沙蒿提取物用3倍体积的水溶解,先用与水溶液同体积的石油醚萃取5次,将石油醚部分合并,减压浓缩风干,制得石油醚部位;用水溶液同体积的乙酸乙酯萃取剩余水溶液5次,将乙酸乙酯部分合并,减压浓缩风干,制得乙酸乙酯部位。剩余水溶液减压浓缩,风干,制得水相部位。
实施例5
本发明的白沙蒿提取物的制备方法如下:
采集白沙蒿成熟期新鲜叶片,阴干粉碎,通过100目筛子得细粉。将叶片细粉用5倍无水乙醇溶液,加热回流提取10分钟后,重复提取2次,减压浓缩。在阴暗低温和通风较好的地方,晾干,制得提取物。将白沙蒿提取物用5倍体积的水溶解,先用与水溶液同体积的石油醚萃取2次,将石油醚部分合并,减压浓缩风干,制得石油醚部位;用水溶液同体积的乙酸乙酯萃取剩余水溶液2次,将乙酸乙酯部分合并,减压浓缩风干,制得乙酸乙酯部位。剩余水溶液减压浓缩,风干,制得水相部位。
实施例6
本发明的白沙蒿提取物的制备方法如下:
采集白沙蒿成熟期新鲜叶片,阴干粉碎,通过100目筛子得细粉。将叶片细粉用50倍无水乙醇溶液,加热回流提取90分钟后,重复提取3次,减压浓缩。在阴暗低温和通风较好的地方,晾干,制得提取物。将白沙蒿提取物用2倍体积的水溶解,先用与水溶液同体积的石油醚萃取6次,将石油醚部分合并,减压浓缩风干,制得石油醚部位;用水溶液2倍体积的乙酸乙酯萃取剩余水溶液6次,将乙酸乙酯部分合并,减压浓缩风干,制得乙酸乙酯部位。剩余水溶液减压浓缩,风干,制得水相部位。
实施例7
本发明的白沙蒿提取物的制备方法如下:
采集白沙蒿成熟期新鲜叶片,阴干粉碎,通过100目筛子得细粉。将叶片细粉用25倍无水乙醇溶液,加热回流提取50分钟后,重复提取4次,减压浓缩。在阴暗低温和通风较好的地方,晾干,制得提取物。将白沙蒿提取物用2倍体积的水溶解,先用与水溶液同体积的石油醚萃取4次,将石油醚部分合并,减压浓缩风干,制得石油醚部位;用水溶液2倍体积的乙酸乙酯萃取剩余水溶液4次,将乙酸乙酯部分合并,减压浓缩风干,制得乙酸乙酯部位。剩余水溶液减压浓缩,风干,制得水相部位。
实施例8本发明的白沙蒿叶片提取物及不同活性部位对α-葡萄糖苷酶抑制活性
8.1实验方法
α-葡萄糖苷酶抑制活性是α-葡萄糖苷酶(0.1单位/mL)和底物(p-NPG,1.0mM)溶解在磷酸缓冲液(0.1M,pH 6.7)中。所有的试验样品用DMSO溶解。样品和α-葡萄糖苷酶在37℃一起培养10min,加入底物反应30min。加入Na2CO3终止反应,测定在405nm下的紫外吸收值OD。所有的样品取5个不同浓度,分别重复3次,并计算IC50值。以市售降糖药物阿卡波糖为对照。
8.2数据处理
抑制率通过以下公式计算:
抑制率%=(OD对照-OD样品)/OD对照×100
表1不同部位抑制α-葡萄糖苷酶IC50值
注:(>2表示在浓度在2mg/mL以下没有活性)
饮食中的碳水化合物在葡萄糖苷酶的作用下,释放葡萄糖并经小肠吸收进入血液,是餐后血糖升高的主要原因。餐后血糖升高可引起胰岛素敏感性降低并导致严重的并发症。因此,α-葡萄糖苷酶活性的调节控制,可延缓碳水化合物的消化和吸收,起到降低餐后血糖和糖化血红蛋白,降低血糖波动,防治糖尿病并发症的作用。
从表1中可知,本发明所制备的白沙蒿提取物具有明显的抑制α-葡萄糖苷酶活性。其中通过活性跟踪分离发现,活性主要集中在乙酸乙酯部位,其活性与市售药品阿卡波糖效果接近。最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种白沙蒿叶片提取物在制备防治糖尿病药物中的应用,其特征在于,该提取物的制备方法由以下步骤完成:
一、采集白沙蒿成熟期叶片,阴干粉碎后,用5-50倍无水乙醇溶液,超声波或加热回流提取10-100分钟,重复提取2-4次,减压浓缩,阴干,得到白沙蒿初步提取物;
二、将所述白沙蒿初步提取物用1-10体积的水溶解,先用与水溶液1-10体积的石油醚萃取1-10次,将石油醚部分合并,减压浓缩风干,制得石油醚部位;
三、用水溶液1-10体积的乙酸乙酯萃取剩余水溶液1-10次,将乙酸乙酯部分合并,减压浓缩风干,制得乙酸乙酯部位,即为所述白沙嵩叶片提取物。
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