CN105816533A - 一种提取茋类化合物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物化学领域，具体公开了一种提取大黄中茋类化合物的方法。本发明所述方法为富含茋类化合物的药材经粉碎后加入溶剂，用闪式提取器提取1次-4次，5分钟/次-20分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干；其中，按g/ml计，所述药材与所述溶剂的重量体积比为1:10-1:15。本发明所述提取方法操作简单，提取速度快，提取周期短，节约加热及冷却所需能耗，降低生产成本。同时本发明所述提取方法茋类化合物的纯度明显高于传统方法有利于后续的纯化，适合于茋类化合物的大规模工业化生产，具有较高的应用价值和开发前景。

Description

一种提取茋类化合物的方法
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及一种提取大黄中茋类化合物的方法。
背景技术
大黄是我国传统中药材之一，是多种蓼科大黄属的多年生植物的合称。大黄以根状茎及根供药用，其性味苦寒，归脾、胃、大肠、肝、心包经，具有凉血止血、泻火解毒、活血化瘀、利湿退黄、泻下通便等功效。大黄属植物约60种，分布在亚洲温带及亚热带的高寒山区。我国39种2变种，主要分布于西北、西南及华北地区，东北较少。在藏医药中，根据大黄泻下作用的强烈、温和、逊次，将大黄分为上、中、下三品，上品为大黄，中品为亚大黄，下品为小大黄。近年研究发现二苯乙烯类化合物是波叶组大黄组植物的特征成分。
茋类化合物，又称二苯乙烯类化合物，是广泛存在于蓼科大黄属中的活性成分。研究发现茋类化合物具有抗衰老作用、防治老年痴呆、提高学习和记忆作用、脑保护与神经保护作用、调节血脂、抗动脉粥样硬化、抗血栓作用、抗氧化清除自由基作用、保护神经系统的作用、抗肿瘤作用、降低胆固醇、肝保护作用、血管舒张与保护作用、皮肤保护作用、抗抑郁作用、心脏、心肌保护作用、对糖尿病的影响、促进毛发生长的作用、强骨作用等作用。其中抗血栓、皮肤保护作用、抗抑郁作用、心脏、心肌保护作用、对糖尿病的影响、促进毛发生长的作用、强骨作用等活性是近几年最新报道的。因此，开发利用大黄中的茋类化合物具有很好的社会效益和经济效益。因此寻找到一种快速、简便、廉价的提取大黄中的茋类化合物的方法成为大黄开发的关键。
闪式提取，也称为闪提，是近年来发展起来的一种新提取方法，它是依据组织破碎提取的原理，利用适当溶剂在闪式提取器里将物料快速破碎至适当粒度，同时具有高速搅拌、超强振动、负压渗滤等功能来达到提取目的。由于一次提取一般在数秒至几分钟之内即可完成，其提取速度为传统方法的百倍以上。但目前闪式提取仅能够提高提取速度，对有效成分含量影响较小。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种提取茋类化合物的方法，所述方法不仅能够提高提取速度，缩短提取周期，而且可以提高茋类化合物的纯度。
为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
一种提取大黄中茋类化合物的方法，以富含茋类化合物的药材为原料，经粉碎后加入溶剂，用闪式提取器提取1次-4次，5分钟/次-20分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干；其中，按g/ml计，所述药材与所述溶剂的重量体积比为1:10-1:15。
本发明所述提取大黄中茋类化合物的方法以富含茋类化合物的药材为原料。其中，在一些实施方案中，所述富含茋类化合物的药材为拉萨大黄、河套大黄、藏边大黄、丽江大黄中的一种或两种以上的混合物。
在一些实施方案中，本发明所述提取大黄中茋类化合物的方法中，所述溶剂为水、甲醇、乙醇、丙酮或它们任意比例的混合溶剂。
在一些优选实施方案中，本发明所述提取大黄中茋类化合物的方法中，所述溶剂为甲醇、乙醇或丙酮。
在一些实施方案中，本发明所述提取大黄中茋类化合物的方法中，所述溶剂温度为20℃-40℃。
在一些实施方案中，本发明所述提取大黄中茋类化合物的方法中，所述提取次数为1-3次。可以为1次，可以为2次，也可以为3次。
在一些实施方案中，本发明所述提取大黄中茋类化合物的方法中，所述提取时间为5分钟/次-10分钟/次。
由上述技术方案可知，本发明提供了一种提取大黄中茋类化合物的方法。本发明所述方法为富含茋类化合物的药材经粉碎后加入溶剂，用闪式提取器提取1次-4次，5分钟/次-20分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干；其中，按g/ml计，所述药材与所述溶剂的重量体积比为1:10-1:15。本发明所述提取方法操作简单，提取速度快，提取周期短，节约加热及冷却所需能耗，降低生产成本。同时本发明所述提取方法茋类化合物的纯度明显高于传统方法有利于后续的纯化，适合于茋类化合物的大规模工业化生产，具有较高的应用价值和开发前景。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1、拉萨大黄药材中茋类化合物的提取
材料：拉萨大黄药材(收购于西藏拉萨地区，批号20110308)，除去杂质，净制，粉碎为粗粉。
闪式提取：取拉萨大黄药材粗粉100g，加10倍体积(W/V，按g/ml计)(W/V，按g/ml计)乙醇，用闪式提取器提取3次，5分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，得拉萨大黄提取物约8.9g。
乙醇回流提取：取拉萨大黄药材粗粉100g，加10倍体积(W/V，按g/ml计)(W/V，按g/ml计)乙醇回流提取3次，1小时/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，得拉萨大黄提取物约9.2g。
超声波提取：取拉萨大黄药材粗粉100g，加10倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇超声提取3次，30分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，得拉萨大黄提取物约8.8g。
实施例2、丽江大黄药材中茋类化合物的提取
材料：丽江大黄药材(收购于云南迪庆地区，批号20120609)，除去杂质，净制，粉碎为粗粉。
闪式提取：取丽江大黄药材粗粉100g，加10倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇，用闪式提取器提取3次，5分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，得丽江大黄提取物约7.5g。
乙醇回流提取：取丽江大黄药材粗粉100g，加10倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇回流提取3次，1小时/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，得丽江大黄提取物约8.4g。
超声波提取：取丽江大黄药材粗粉100g，加10倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇超声提取3次，30分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，得丽江大黄提取物约7.8g。
实施例3、河套大黄药材中茋类化合物的提取
材料：河套大黄药材(收购于青海民和地区，批号20121208)，除去杂质，净制，粉碎为粗粉。
闪式提取：取河套大黄药材粗粉100g，加15倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇，用闪式提取器提取3次，5分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，得河套大黄提取物约6.9g。
乙醇回流提取：取河套大黄药材粗粉100g，加15倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇回流提取3次，1小时/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，得河套大黄提取物约7.6g。
超声波提取：取河套大黄药材粗粉100g，加15倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇超声提取3次，30分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，得河套大黄提取物约7.4g。
实施例4、藏边大黄药材中茋类化合物的提取
材料：藏边大黄药材(收购于西藏拉萨地区，批号20130511)，除去杂质，净制，粉碎为粗粉。
闪式提取：取藏边大黄药材粗粉100g，加10倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇，用闪式提取器提取3次，10分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，得藏边大黄提取物约7.3g。
乙醇回流提取：取藏边大黄药材粗粉100g，加10倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇回流提取3次，1小时/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，得藏边大黄提取物约7.7g。
超声波提取：取藏边大黄药材粗粉100g，加10倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇超声提取3次，30分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，得藏边大黄提取物约7.2g。
实施例5、茋类提取物的检测
仪器和试剂：岛津UV-2450紫外分光光度计，赛多利斯CP225D型分析天平，2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷照品(中国食品药品检定研究院，编号110844-201310)。
1、最大波长：茋类化合物均为二苯乙烯骨架结构的化合物，参照二苯乙烯苷检测方法，最大吸收波长选择306nm。
2、对照品溶液的制备：精密称取二苯乙烯苷对照品适量，加适量95％乙醇溶解制成浓度为0.05mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3、供试品溶液的制备：取实施例1-4各药材提取物约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入95％乙醇100ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率35kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用95％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml于25ml容量瓶中，以95％乙醇溶解并定容，作为供试品溶液。
4、线性关系考察：取二苯乙烯苷对照品，加95％乙醇制成浓度为0.1mg/ml的标准储备液，备用。分别吸取储备液0.5ml、1ml、2ml、5ml、7ml分别置于10ml容量瓶中，以95％乙醇溶解定容，配制成0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.05mg/ml、0.07mg/ml稀释液，分别取不同浓度二苯乙烯苷稀释液及储备液测定吸光度。并以二苯乙烯苷的浓度(mg/ml)为横坐标，以吸光度的平均值为纵坐标，进行线性回归计算，得到线性方程：Y＝6.9336X-0.0028，r＝0.9992(n＝6)。
5、稳定性试验：分别精密吸取同一份标准品溶液于制备后0h、0.5h、1h、2h、3h测定吸光度并以吸光度计算相对标准偏差，结果显示RSD＝3.68％(n＝5)，表明供试品溶液在3小时内是稳定可靠的。
6、重复性试验：以同一份供试品溶液连续测定7次吸光度并计算相对标准偏差，结果显示RSD＝0.93％，表明仪器重复性好。
7、重现性试验：取同一份药材提取物，同时称取6份，按照供试液制备的方法平行提取处理，测定茋类化合物的含量，结果显示RSD＝2.62％，表明上述提取方法重现性良好。
8、各样品中茋类化合物纯度测定：精密称取实施例1-4中制备的提取物各0.1g，按照供试品制备方法分别制备供试品溶液，测定茋类化合物纯度。数据结果见表1。
表1、各提取物中茋类化合物的纯度
从表1结果可见，在相同溶剂条件下，以不同提取方法对4中大黄药材进行提取，其茋类化合物纯度以闪式提取和回流提取的为高，综合加热、溶剂冷凝等产生的能耗，在提取率相同的情况下以闪式提取具有明显的优势。
实施例6、拉萨大黄药材提取溶剂选择
材料：拉萨大黄药材(收购于西藏拉萨地区，批号20110308)，除去杂质，净制，粉碎为粗粉。
分别取拉萨大黄药材粗粉100g，分别加10倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、水，用闪式提取器提取3次，5分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，分别取适量提取物照实施例5方法测定茋类化合物纯度，结果见表2。
表2拉萨大黄不同溶剂提取物中茋类化合物的含量
提取溶剂 纯度％ 提取物重量g 茋类化合物总量g
甲醇 29.2 8.9 2.6
乙醇 30.2 8.6 2.6
丙酮 27.8 7.9 2.2
水 22.4 9.8 2.2
乙酸乙酯 15.5 7.1 1.1
从表2结果可见，在不同溶剂提取条件下，茋类化合物以甲醇、乙醇、丙酮的提取率较高，水、乙酸乙酯的提取率偏低。
实施例7、拉萨大黄药材提取次数选择
材料：拉萨大黄药材(收购于西藏拉萨地区，批号20110308)，除去杂质，净制，粉碎为粗粉。
分别取拉萨大黄药材粗粉100g，加10倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇，分别用闪式提取器提取1次、2次、3次、4次、5次，5分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，分别取适量提取物照实施例5方法测定茋类化合物纯度，结果见表3。
表3拉萨大黄不同提取次数提取物中茋类化合物纯度
提取次数 纯度％ 提取物重量g 茋类化合物总量g
1次 28.9 7.9 2.28
2次 29.6 8.4 2.49
3次 29.4 8.4 2.47
4次 29.8 9 2.68
5次 29.5 8.9 2.63
从表3结果可见，在不同提取次数下，茋类化合物4次及以上提取率与1-3次提取差别不大，并且1-3次提取已基本提取完全。
实施例8、拉萨大黄药材提取时间选择
材料：拉萨大黄药材(收购于西藏拉萨地区，批号20110308)，除去杂质，净制，粉碎为粗粉。
分别取拉萨大黄药材粗粉100g，加10倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇，用闪式提取器提取3次，提取时间分别为1分钟/次、5分钟/次、10分钟/次、15分钟/次、20分钟/次，分别过滤，合并滤液，浓缩至干，分别取适量提取物照实施例5方法测定茋类化合物纯度，结果见表4。
表4拉萨大黄不同提取次数提取物中茋类化合物的纯度
提取时间 含量％ 提取物重量g 茋类化合物总量g
1分钟 18.8 8.3 1.56
5分钟 27.8 8.5 2.36
10分钟 28.6 8.7 2.49
15分钟 29.3 8.6 2.52
20分钟 30.1 8.7 2.62
从表4结果可见，不同提取时间提取的茋类化合物，茋类化合物总量以提取5分钟和提取10分钟的为高，提取1分钟的结果偏低。
实施例9、拉萨大黄药材提取溶剂温度选择
材料：拉萨大黄药材(收购于西藏拉萨地区，批号20110308)，除去杂质，净制，粉碎为粗粉。
分别取拉萨大黄药材粗粉100g，分别加温度为20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃提取的10倍体积(W/V，按g/ml计)乙醇，用闪式提取器提取2次，15分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干，分别取适量提取物照实施例5方法测定茋类化合物纯度，结果见表5。
表5拉萨大黄不同温度提取溶剂下提取物中茋类化合物的纯度
提取时间 纯度％ 提取物重量g 茋类化合物总量g
20℃提取 29.5 8.8 2.60
30℃提取 30.1 8.7 2.62
40℃提取 29.3 8.9 2.61
50℃提取 24.7 10.6 2.62
60℃提取 23.4 11.3 2.65
70℃提取 22.7 11.6 2.63
从表5结果可见，在提取条件相同情况下，溶剂温度在20-40℃时能够获得纯度较高的茋类化合物，但50℃以上温度则降低，可能是由于溶剂温度提高后，使各成分的溶解度提高，增加了各种杂质的引入。

Claims (6)

1.一种提取大黄中茋类化合物的方法，富含茋类化合物的药材经粉碎后加入溶剂，用闪式提取器提取1次-4次，5分钟/次-20分钟/次，过滤，合并滤液，浓缩至干；其中，按g/ml计，所述药材与所述溶剂的重量体积比为1:10-1:15。
2.根据权利要求1所述的方法，所述富含茋类化合物的药材为拉萨大黄、河套大黄、藏边大黄、丽江大黄中的一种或两种以上的混合物。
3.根据权利要求1所述的方法，所述溶剂为水、甲醇、乙醇、丙酮或它们任意比例的混合溶剂。
4.根据权利要求1所述的方法，所述溶剂温度为20℃-40℃。
5.根据权利要求1所述的方法，所述提取次数为1次-3次。
6.根据权利要求1所述的方法，所述提取时间为5分钟/次-10分钟/次。
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