CN1041785A

CN1041785A - 光活性3-苯基缩水甘油酸酯的制法

Info

Publication number: CN1041785A
Application number: CN89107005A
Authority: CN
Inventors: 柴谷武尔; 中道勝彦; 松前裕明
Original assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Current assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Priority date: 1988-09-02
Filing date: 1989-09-02
Publication date: 1990-05-02
Also published as: FI95931C; DE68919184D1; KR960004455B1; KR900004711A; EP0362556A1; IE65881B1; DK434889A; ATE113661T1; FI894022A0; FI95931B; EP0362556B1; HUT52162A; AU619890B2; HU203581B; ES2065957T3; DK434889D0; DE68919184T2; IE892817L; FI894022A; AU4097789A

Abstract

本发明提供了一种光活性的3-苯基缩水甘油酸酯化合物的一种制备方法，包括：使具有立体选择性水解酯键的能力的酶作用于外消旋3-苯基缩水甘油酸酯(在苯基上取代的或未取代的)，于是立体选择性地水解一种光活性异构体，然后从反应混合物中分离并收集它的对映体。

Description

本发明涉及光活性3-苯基缩水甘油酸酯的一种新制备方法。

作为地尔硫

氢氯化物（Dilthiazem hydrochlorede）（能用作寇状血管舒张药）和其它各种药用化合物的合成中间体的重要物质是光活性的3-苯基缩水甘油酸酯，在现有技术中，作为制备这种化合物的方法已有这样一种工艺，即将反式-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯水解成相应的羧酸，用光活性胺光学拆分该羧酸，然后进行酯化（日本公开专利13775/1985和13776/1985）。

然而，上述方法涉及这样一种缺点，即它要包括许多步骤，而至于所希望的光活性反式-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯只能得到一种低纯度的油状物。

为了克服这种缺点，本发明者作了深入的研究，结果发现了一种能够立即从外消旋的3-苯基缩水甘油酸酯的晶体形式获得所需光活性3-苯基缩水甘油酸酯化合物的方法，从而完成了本发明。

更具体地说，根据本发明提供的是以下化学式

[其中，环A是取代了的或未取代的苯基，R为酯基]的3-苯基缩水甘油酸酯化合物的光活性异构体的制造方法，该方法包括：

（a）使具有立体选择性水解酯键能力的酶作用于外消旋的3-苯基缩水甘油酸酯化合物（1），于是对其中的一种光活性异构体进行立体选择性水解;然后

（b）从反应混合物中分离出对映体并收集之。

图1是（2R，3S）-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的红外吸收光谱图;图2是该化合物的核磁共振光谱图;图3是该同样化合物的质谱图。

尽管（Ⅰ）式所示的3-苯基缩水甘油酸酯化合物在环A上可以有一个选自低级烷基、低级烷氧基和卤原子的取代基，但在环A上无取代基的情况下，本发明的方法也可被同样地应用。取代基的例子可包括处于4位上的甲基、甲氧基或氯原子。酯基R通常是低级烷基，例如甲、乙基、异丙基或叔丁基。

在本发明中，作为外消旋的3-苯基缩水甘油酸酯化合物[Ⅰ]的，不但可采用含有同量的（2S，3R）异构体和（2R，3S）异构体的化合物，也可采用含有这两种光活性异构体的任何化合物。

能够使用于本发明的酶的例子包括一组被称为脂肪酶或酯酶的水解酶类。这些酶既可以是来源于微生物的物质，又可以是来源于动物细胞，更进一步可来源于植物细胞的物质。它们还可以是根据已知方法从含有这些水解酶的微生物细胞、动物细胞或植物细胞中提取的物质或市售商品。特定的例子可包括碱性脂肪酶（来源于无色杆菌属chromobacter，由wako Junyaku公司制造）、脂肪酶（来源于色素杆菌（Chromobacterium viscosum），由Toyo Jozo公司制造）、脂肪酶B无花果假单孢菌（Pseudiminas fiagi 22-39B，由Wako Junyaku制造）、脂肪酶M（“Amdna”）10（来源于爪哇毛霉菌Mucor Javanicus）由Amano制药公司制造）、脂肪酶型Ⅺ（来源于少根霉菌Rhizopus assuizus由美国的Sigma公司制造）、棕榈淀粉酶（来源于根霉菌属（Rhizopus delemar），由Tanabe制药公司制造）、脂肪酶NK-116（来源于日本根霉菌属（Rhizopus japonicus），由Nagase Saugyc公司制造）、脂肪酶N（来源于白根霉菌（Rhizopus niveus），由Nagase Amano制药公司制造）、脂肪酶型Ⅶ（来源于柱念珠菌（Candida cylindracea），由美国的Sigma公司制造）、脂肪酶（衍生自猪胰腺（Porcine pancreas），由Wako Junyaku公司制造）、酯酶（来自猪肝，由美国的Sigma公司制造）胆固醇酯酶（衍生自念珠菌（Candida Jugosa），由Nagase Sangyo公司制造）等等。

在本发明中，产生上述酶的微生物的培养液、收集自所述培养液的微生物细胞和所述微生物细胞的处理后产物也可被用作酶源。

能够被用于本发明的微生物可以是那些具有能产生上述水解酶之能力的物质，例如，象霉菌，细菌、酵母和放线菌这类具有这种能力的微生物可被适当地使用。尤其是可包括作为霉菌的微生物，它们是曲霉（Aspergillus）属、镰刀菌（Fusarium）属、稻恶菌病菌（Gibberella）属、毛霉菌（Mucor）属、链孢霉（pora）属、木霉菌（Trich）属、根霉菌（Rhizopus）属;属于细菌的微生物，它们是无色杆菌（Achromobacter）属、产碱杆菌（Alcligenes）属、芽胞杆菌属、短钦细菌（Brevibacterium）属、棒状杆菌（Coryneba-cterium）属、普罗威登斯菌（Providencia）属、假单孢菌（Pseudomonas）属、沙霉菌（Serratia）属;作为酵母的微生物，它们是念珠菌（Candida）属或复膜泡酵母属（Succharomycopsis）;作为放线菌的微生物，它们是诺苄氏菌（Nocardia）属。这类微生物的特定例子可包括例如：犁头霉菌（Absidia corymbifera）IFO 4009（NRRL 2982）IFO 4010，棕曲霉（Aspergillus ochiaccus）IFO 4346，土麸霉（Aapergillus terreus）IFO 6123（ATCC 10020），Eusarium oxysporum IFO 5942和ATCC 659，茄病镰刀霉菌（Fusarium solani）IFO 5232，稻恶菌病菌（Gibberella rujikreoi）IFO 5268，Mucor angulimacrosporusIAM 6149，卷枝毛霉（Mucor circinelloides）IFO 6746（ATCC 42258），黄色毛霉菌（Mucor flavus）IAM 6143，易胞毛霉菌（Mucor fragilis）IFO 6449，日内瓦毛霉菌（Mucor genevensis）IAM 6091，球形毛霉菌（Mucor globosus）IFO 6745，冻土毛霉菌（Mucor hiemalis）OUT 1045和OUT 1047，詹氏毛霉菌（Mucor janssenil）OUT 1050和IFO 5398，爪哇毛霉菌（Mucor javanicus）IFO 4569、IFO 4570、IFO 4572和IFO 5382，闪孢毛霉菌（Mucor javanicus）IFO 6337，Mucor碎囊毛霉菌（petrinsularis）IFO 6751，密丛毛霉（Mucor plumbeus）IAM 6117，普雷恩毛霉（Mucor praini）IAM 6120，微小毛霉菌（Mucor pusillus）IAM 6122，总状毛霉菌（Mucor racemosus）IFO 4581，多分枝毛霉菌（Mucor ramannianus）IAM 6128，下弯毛霉（Mucor recurvus）IAM 6129，林生毛霉（Mucor silvaricus）IFO 6753，刺囊毛霉（Mucor spinescens）IAM6071，细孢毛霉（Mucor subcilissimns）IFO 6338，粗糙链孢霉菌（Neurospora crassa）IFO 6068（ATCC 10336），无根根霉菌（Rhizopus arphizus）IFO 5780（ATCC 11145），Rhizopusdelemar ATCC 34612，日本根霉菌（Rizopus telema）IFO 4758，绿色木霉菌（Trichoderm aviride）OUT 4200和IFO 4847，裂环无色杆菌（Achro romobaoter cycloeiastes）IAM 1013，粪产碱杆菌（Alcaligenefaecalis）OUT 8030（ATCC 106），球形芽孢杆菌（Bacillus sphacricus）IFO 3525（ATCC 10208），枯草杆菌（Bacillus subtilis）OUT 8104和OUT 8106，酮谷氨酸短杆菌（Brevibacterium ketoglutamicum）ATCC 15588，烷醇棒杆菌（Corynebacterium alkanolyticum）ATCC 21511，解烃棒杆菌（Corynebacterium hydrocarboclastum）ATCC 15592，Corynebacterium primorioxydans ATCC 31015，普罗威斯登斯菌（Providencia alcalifaciens）JCM 1673（ATCC 9886），Pseudomonas mutabilis ATCC 31014，恶臭假单孢菌（Pseudomonas putida）ATCC 17426，ATCC 17453和ATCC 33015，Serratia liquefaciens ATCC27592，粘质沙雷氏菌（Serratia mareescens）ATCC 13880、ATCC 14764、ATCC 19180、ATCC21074、ATCC 27117和ATCC 21212，假丝醋母菌（Candida parapsilosis）IFO 0585，复膜胞酵母菌（Saccharomycopsis lipolytica）IFO 0717，IFO 0746（NRRL Y-1095）、IFO 1195、IFO 1209（NRRL Y-1094）和IFO 1548，星形诺卡菌（Nocardia asterroides）IFO 3384、（ATCC 330），IFO 3424和IFO 3423，加德那诺卡氏菌（Nocardia gardneri）ATCC9604，等等。

这些可以是野生品种或突变菌种，也可以是来源于根据基因重组合、细胞融合等的生物工程方法所产生的微生物。

再者，上述微生物的培养液和微生物的细胞可通过在本领域中常用的培养基中培养微生物来获得，这种培养基例如为含有碳源、氮源和无机盐（常用的）的培养基，培养的条件为室温下或加热条件（最好为20-40℃），且pH为约5-8的需氧条件，如有必要可按照传统的方法从培养液中分离并收集细胞。

在培养过程中，也能够通过在培养基中加入0.001%或更多的量（最好为0.1-1%）在外消旋的苯基缩水甘油酸酯化合物（Ⅰ）来增进酶的活度。

作为这种微生物细胞的加工产物，也可以包括冷冻干燥的细胞，丙酮干燥的细胞、细胞的自体溶解产物，上述微生物的细胞萃取物、细胞粉末产物、近距离声波定位处理的产物。再者，微生物细胞或本发明的经处理产物可根据例如聚丙烯酰胺法、含有硫的多凝胶法（角叉菜胶法）、藻酸凝胶法、琼脂凝胶法等这类已知方法在使用前被固定。

根据本发明可通过在合适的溶剂中使外消旋的3-苯基缩水甘油酸酯化合物（Ⅰ）和酶作用来实施立体选择性水解反应。

基质的浓度较好地为0.05-20%，最好为0.5%-5%，而反应则以室温或加热条件下进行为宜，较好地为10-50℃，最好为25-40℃。在反应中，应使反应混合物的pH调整至5-10，最好为6-9。在这种情况下，由于大多数基质是难溶于水的，因此，最好是使该反应在水或水质溶剂与有机溶剂的两相溶剂系统中进行。这种有机溶剂的例子可包括四氯化碳、氯仿、二氯甲烷、三氯乙烯、氯苯、苯、甲苯、二甲苯、叔-丁基甲醚、二异丙基醚、二乙醚、甲基异丁酮、甲乙酮、醋酸乙酯、醋酸丁酯、正丙醇、异丙醇、正-丁醇、叔丁醇等，其中最好是醋酸乙酯、四氯化碳和甲苯。当培养液或微生物细胞被用作酶源时，最好是在表面活性剂的存在下进行上述反应，从而可缩短反应时间或增加光活性3-苯基缩水甘油酸酯化合物（Ⅰ）的得率。作为这种表面活性剂的，可以使用十六烷基吡啶鎓溴化物、十六烷基三甲基-溴化铵、聚乙二醇、聚氧乙烯辛苯基醚等，所加的量最好为大约0.0001-0.1（基于反应混合物）。

根据传统的方法可容易地从如此获得的反应混合物中分离出光活性3-苯基缩水甘油酸酯化合物。例如，当水解反应是在水-有机溶剂的两相系统中进行时，将3-苯基缩水甘油酸酯化合物（Ⅰ）的一种光活性异构体进行水解，并被移入到水层，而其它不反应的光活性异构体则留在有机溶剂中，于是就可通过分离出有机溶剂层并使之在减压条件下浓缩，从而以晶体形式收集到光活性3-苯基缩水甘油酸酯化合物。

根据本发明，光活性3-苯基缩水甘油酸酯化合物（Ⅰ）可在简短步骤中得到，并呈高纯度晶体，因此该方法可以说是商业上优异的制备方法。

实施例1

把含有0.5%葡萄糖、0.1%蛋白胨、1%肉汁、1.25%酵母浸膏和0.5%氯化钠的50ml的培养基（pH为7.0）放入500ml体积的摇瓶中使之在120℃下接受消毒达10分钟。然后往该培养基中接种粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）ATCC 27117的一白金接种环，并在30℃的摇动条件下进行培养达20小时。通过离心作用从5.4升的上述培养物中收集的微生物细胞被悬浮在生理盐水中，通过离心作用再收集微生物细胞。微生物细胞再被悬浮在1.8升10mM的含有0.01%十六烷基三甲基溴化铵的磷酸盐缓冲液（pH为7.5）中，然后被加入到1.8升的含有7.2g外消旋3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的四氯化碳中。接着在30℃下使该固体选择性水解反应进行3天，于是使（2S，3R）-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯得以完全水解。把四氯化碳层分离出以后，又在减压条件下使之浓缩，从而获得3.0g（2R，3S）-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯（一种粗晶）。把10ml的异丙醇加入到3.0g的粗晶之后，又通过在80℃下加热且搅拌20分钟使该混合物溶解。使之从80℃经历3小时逐渐冷却至20℃之后，再对该混合物用冰进行冷却达1小时，把沉淀了的晶体过滤出之后就获得了2.9g的（2R，3S）-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的晶体。

熔点：87-88℃

[α]：-207.08°（C＝甲醇）

纯度：100%

元素分析：计算C：63.45，H：5.81，O：30.74

实测C：63.44，H：5.80 O：30.76

红外光谱：图1

核磁共振谱：图2

质谱：图3

实施例2

在实施例1所示的培养基中接种表1所示的每一种细菌，并在30℃下培养20小时。经离心作用从45ml的上述培养基中收集的微生物细胞被悬浮在生理盐水中，然后再通过离心作用分离该细胞。所述细胞再被悬浮在含有0.01十六烷基三甲基溴化铵的10mM磷酸盐缓冲液（15ml）中，并被加入至15ml的含有60mg外消旋3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的四氯化碳中，从而在30℃下进行3天的立体选择性水解。反应之后，分离出四氯化碳层从而获得含有（2R，3S）-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的反应混合物。反应混合物中（2R，3S）异构体的含量如表1所示，反应混合物中基本上测不出构成其对映体的（2S，3R）-异构体。

上述光学异构体的量的测定是通过采用手性元件（OJφ4.6×250mm，由Dicel化学工业株式会社制造）的高效液相层析分析法进行的。

表1

所使用的微生物（2R，3S）异构

体含量（mg/ml）

裂环无色杆菌

（Achromobacter cycloclastes）IAM 1013 0.8

粪产碱杆菌

（Alcallgenes faecalis）OUT 8030 0.7

球形芽孢杆菌

（Bacillus sphaericus）IFO 3525 0.7

枯草杆菌

（Bacillus subtilis）OUT 8104 0.8

酮谷氨酸短杆菌

（Brevibacterium ketoglutamicum）ATCC15588 0.7

烷醇棒杆菌

（Corynebacterium alkanolyticum）ATCC21511 1.8

棒杆菌

（Corynebacterium primorioxidans）ATCC31015 1.8

普罗威登斯菌

（Providencia alcalifaciens）JCM 1673 1.8

易变假单孢菌

（Pseudomonas mutabilis）ATCC 31014 1.8

恶臭假单孢菌

（Pseumodonas putida）ATCC 17453 1.8

沙雷氏

（Serratia liquefaciens）ATCC 27592 1.6

粘质沙雷氏菌

（Serratia marcescens）ATCC 27117 1.8

实施例3

含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母浸膏、0.3%麦芽汁的50ml培养基（pH为6.2）被置于500ml体积的摇瓶中，然后在120℃下接受消毒达10分钟。接着在该培养基中接种表2所示的一白金环的霉菌或酵母，该霉菌在27℃的条件下接受摇瓶培养达68小时。然后往45ml的上述培养液中加入15ml的含有60mg外消旋3-（4-甲氧基）缩水甘油酸甲酯的四氯化碳，并进一步加入以能够在反应混合物中获得0.001%之浓度的十六烷基三甲基溴化铵，从而在30℃下使该立体选择性水解反应进行3天。反应之后，分离出该四氯化碳层，从而获得含（2R，3S）-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的反应混合物。反应混合物中（2R，3S）异构体的含量显示于表2，我们可看到，该反应混合物中基本上测定不出构成对映体的（2S，3R）-异构体。

表2

所使用的微生物（2R，3S）异构

体含量（mg/ml）

犁头霉菌

（Absidia corymbifera）IFO 4010 0.8

棕曲霉菌

（Asperigillus ochraceus）IFO 4346 0.8

土霉菌

（Asperigillus terreus）IFO 6123 1.3

氧孢镰刀霉菌

（Fusarium oxysporum）IFO 5942 0.8

茄病镰刀霉菌

（Fusarium solani）IFO 5232 0.7

恶苗病菌

（Gibberella fujikuroi）IFO 5268 0.8

球形毛霉菌

（Mucor globosus）IFO 6745 1.8

爪哇毛霉菌

（Mucor javanicus）IFO 4572 1.8

闪孢毛霉菌

（Mucor lamprosporus）IFO 6337 1.8

毛霉菌

（Mucor silvaticus）IFO 6753 1.8

链孢霉菌

（Neurospora crassa）IFO 6068 0.7

无根根霉菌

（Rhizopus arrhizus）IFO5780 1.8

日本根霉菌

（Rhizopus japonicus）IFO 4758 1.8

木霉菌

（Trichoderma viride）OUT 4208 0.7

近平滑假丝酵母菌

（Candida parapsilosis）IFO 0585 0.8

脂溶复膜孢子酵母

（Saccharomycopsis lipolytica）IFO 0717 1.8

实施例4

含有0.4%葡萄糖、0.4%酵母浸膏和1.0%麦芽汁的50ml培养基（pH7.3）被置于500ml体积的摇瓶中，于120℃下进行10分钟的消毒。然后在该培养基中接种表3所示一白金环状物的放线菌（actinomycetes），并在摇动条件且在27℃下进行培养达68小时。接着在上述45ml的培养液中加入15ml的含有60mg外消旋3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的四氯化碳，并且以能够在反应混合物中获得0.001%之浓度的量进一步加入十六烷基三甲基溴化铵，从而在30℃下进行该立体选择性水解反应达3天。反应之后，分离出该四氯化碳层以获得含有（2R，3S）-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的反应混合物。反应混合物中的（2R，3S）-异构体如表3所示，可看到该反应混合物中基本上测不出构成对映体的（2R，3S）-异构体。

表3

所使用的微生物（2R，3S）异构

体含量（mg/ml）

星形诺卡菌

（Nocardia asteroides）IFO 3384 1.3

加德那诺卡氏菌

（Nocardia gardneri）ATCC 9604 0.8

实施例5

在表4所示的每一种脂肪酶或脂酶被悬浮在1ml的10mM磷酸盐缓冲液（每一种酶已被调节至最佳pH）之后，加入1ml的含有4mg外消旋3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的四氯化碳，接着在30℃下进行该立体选择性水解反应达2天。反应之后，分离出四氯化碳层，从而获得含有（2R，3S）-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的反应混合物。反应混合物中（2R，3S）异构体的含量如表4所示，可看到反应混合物中基本上测定不出构成对映体的（2S，3R）-异构体。

表4

所使用的酶（100单位）（2R，3S）异构

体含量（mg/ml）

碱性脂肪酶来源于无色杆菌属

（Achromobacter），

由Wako Junyaku公司制造 0.7

脂肪酶来源于色杆菌

（Chromobacterium viscosum），

由Wako Iunyaku公司制造 0.7

脂肪酶来源于鞭毛假单孢菌

（Pseudomonas flagi）22-39 B，

由Wako Iunyaku公司制造 0.7

脂肪酶M 来源于爪哇毛霉菌“Amano”10

（Mucor javanieus），

由Amano Seiyake公司制造 1.6

脂肪酶型Ⅺ 来源于少根霉素

（Rhizopus arrhizus），

由美国Sigma公司制造 1.8

酯酶来源于根霉菌

（Rhizopus delemar），

由Tanabe Seiyaku制药公司制造 1.8

脂肪酶来源于日本根霉系

（Rhizopus japenicus），

由Nagase Sangyo公司制造 1.8

脂肪酶来源于Rhizopus nibius，

由Nagase Sangyo公司制造 1.8

脂肪酶型来源于假丝酵母菌

（Candida cylindracia）

由Sigma公司制造 1.6

脂肪酶来源于猪胰腺

（Porcine pancrea），

由Wako Junyaku公司制造 0.7

酯酶来源于猪肝（Porcine），

由美国Sigma公司制造 0.7

胆固醇酯酶来源于皱褶假丝酵母菌

（Candida rugosa），

由Nagase Sangyo公司制造 1.5

实施例6

在表5所示的每一种脂肪酶（10mg）被悬浮在1ml的100mM磷酸盐缓冲液中之后，并调节至每一种酶的最佳pH值，加入含有4mg外消旋3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的四氯化碳（1ml），接着在30℃下进行立体选择性水解反应达一天。反应之后，分离出四氯化碳层，从而获得含有基（2R，3S）-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的反应混合物。反应混合物中（2R，3S）异构体的含量显示在表5，可看到该反应混合物中基本上测定不出构成对映体的（2S，R）异构体。

表5

所使用的酶（10mg/ml）（2R，3S）异构

体含量（mg/ml）

Palatase A 来源于黑曲霉菌

（Aspergillus niger），

由Novo公司制造 1.2

脂肪酶 AY 来源于柱念珠菌

（Candida cylindracea），

由Amano制药公司制造 1.3

脂肪酶OF-360 来源于柱念珠菌

（Candida cylindracea），

由Meito Sangyo公司制造 1.8

脂肪酶来源于腐质霉属

（Humicola lannginosa），

由Amano制药公司制造 1.2

Palatase M 来源于米黑毛霉菌

（Mucor miehei），

由Novo公司制造 1.7

脂肪酶 P 由来源于荧光假单孢菌

（Pseudomonas fluorescens），

由Amano制药公司制造 1.6

脂肪酶 CES 来源于假单孢菌族

（Pseudomonas sp），

由Amano制药公司制造 1.7

脂肪酶 YS 来源于假单孢菌族

（Pseudomonas sp），

由Amano制药公司制造 1.3

脂肪酶来源于华根霉菌

（Rhizopus chinensis），

由Yukijirushi公司制造 1.2

脂肪酶（Saiken）100 来源于日本根霉菌

（Rhizopus japonicus），

由Nagase Sangyo公司制造 1.8

实施例7

在含有5g/L脂肪酶OF-360[来源于柱念珠菌（Candida Cylindracea），由Meifou Sangyo公司制造）的0.5M的磷酸盐缓冲溶液（pH为7.5）500ml中加入500ml的含有100g外消旋3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的甲苯，然后以600rpm的搅拌速率使水相和甲苯相进行混合，从而进行立体选择性水解反应达6小时。反应之后，分离出甲苯层，然后在减压下进行浓缩，从而获得了42.5克的（2R，3S）-3（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯（一种粗晶）。将140ml的异丙醇加入到42.5g的粗晶之后，再通过在80℃下加热且搅拌条件下溶解该混合物达20分钟。从80℃经历了3小时逐步地冷却至20℃之后，再用冰冷却该混合物达1小时，过滤出沉淀的晶体之后就获得了40.2g的（2R，3S）-3（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯的晶体。

熔点：87-88℃

[α]²⁰ _D：-206.4°（C＝1，甲醇）

纯度：99%

Claims

1、一种制备化学式(Ⅰ)

[其中环A是取代的或未取代的苯基，而R是酯基]的3-苯基缩水甘油酸酯化合物的光活性异构体的方法，包括：

(a)使具有立体选择性水解酯键能力的酶作用于外消旋3-苯基缩水甘油酸酯化合物(1)，于是对其中的一种光活性异构体进行立体选择性水解，

(b)从反应混合物中收集分离出对映体并收集之。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征是酶为酯酶或脂肪酶。

3、根据权利要求1所述的方法，其特征是要被分离和收集的对映体的构型为（2R，3S）。

4、根据权利要求1所述的方法，其特征是要被分离和收集的对映体为（2R，3S）-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸低级烷基酯。

5、根据权利要求1所述的方法，其特征是要被分离和收集的对映体是（2R，3S）-3-（4-甲氧基苯基）缩水甘油酸甲酯。

6、根据权利要求1所述的方法，其特征是立体选择性水解反应是通过在溶剂中使酶与外消旋3-苯基缩水甘油酸酯化合物进行接触来实施的。

7、根据权利要求2所述的方法，其特征是生成酶的微生物培养液、从所述培养液收集的微生物细胞或所述微生物细胞的处理后产物被用作酶源。

8、根据权利要求7所述的方法，其特征是微生物为属于以下属的微生物，它们是：

犁头霉属（Absidia）、曲霉属（Asperigillus）、链刀菌霉属（Fusarium）、恶苗菌属（Gibberella）、毛霉菌属（Mucor）、链孢霉属（Neurospora）、根霉菌属（Rhizopus）、木霉属（Trichoderma）、无色杆菌属（Achromobacter）、基碱杆菌属（Alcaligenes）、芽孢杆菌属（Bacillus）、短颈细菌属（Brevibacterium）、棒状杆菌属（Corynebacterium）、普鲁威斯登斯菌属（Providencia）、假单孢菌属（Pseudomonas）、沙雷氏菌属（Serratia）、念珠菌属（Candida）、复膜孢酵母属（Saccharomycopsis）或诺卡氏菌属（Nocardida）。

9、根据权利要求6所述的方法，其特征是基质浓度为0.05至20%。

10、根据权利要求6所述的方法，其特征是反应是在水或水溶液和有机溶剂的两相溶剂系统中进行的。

11、根据权利要求10所述的方法，其特征是有机溶剂选自以下所构成的一组，它们是四氯化碳、氯仿、二氯甲烷、三氯乙烯、氯苯、苯、甲苯、二甲苯、叔丁基甲醚、二异丙醚、二乙醚、甲基异丁酮、甲乙酮、醋酸乙酯、醋酸丁酯、正丙醇、异丙醇、正丁醇和叔丁醇。