CN104087638A - 一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法 - Google Patents

一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104087638A
CN104087638A CN201410363673.3A CN201410363673A CN104087638A CN 104087638 A CN104087638 A CN 104087638A CN 201410363673 A CN201410363673 A CN 201410363673A CN 104087638 A CN104087638 A CN 104087638A
Authority
CN
China
Prior art keywords
rice
fermentation
bacillus subtilis
subtilis
slag
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201410363673.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104087638B (zh
Inventor
廖卢艳
蒋立文
吴卫国
张喻
胡肖容
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hunan Zhishengyuan Biotechnology Co.,Ltd.
Original Assignee
Orient Science & Technology College Of Hunan Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Orient Science & Technology College Of Hunan Agricultural University filed Critical Orient Science & Technology College Of Hunan Agricultural University
Priority to CN201410363673.3A priority Critical patent/CN104087638B/zh
Publication of CN104087638A publication Critical patent/CN104087638A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104087638B publication Critical patent/CN104087638B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法,该方法是先制备枯草芽孢杆菌种子培养液,再接入发酵培养基中,进行摇床发酵培养以得到发酵液;将发酵液灭酶,冷却至室温,离心去除菌体和未发酵的米渣残渣,得到的发酵上清液过滤,滤液浓缩,冷冻干燥。本发明以米渣为原料制备抗氧化肽,来源广泛,价格低廉,不仅降低制备抗氧化肽的生产成本,而且有效地综合利用副产物米渣,提高米渣的附加值,拓展其应用范围,实现米渣抗氧化肽的大批量工业化生产。利用本发明方法制备的产品米渣蛋白抗氧化肽的品质好,抗氧化活性高,还原能力强。

Description

一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法
技术领域
本发明属于食品工程及生物技术领域,具体涉及一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法。
背景技术
长期以来,稻米生产及其副产物的综合利用一直受到高度关注。稻米经生产加工后剩下的大量副产物如米渣、稻壳、米糠、碎米等可进一步深加工处理,国内外有大量有关大米副产物综合利用的文献报道。以大米为原料生产淀粉糖、谷氨酸、柠檬酸、乳酸及生化药品等产品时,大米经液化或糖化后会产生副产物——米渣,由于大量淀粉已被利用,米渣中蛋白质含量高,其蛋白质干基含量高达40%-60%,是宝贵的蛋白质资源,实际生产中一般都是当作饲料被廉价处理掉,没有实现副产物的加工增值。据资料显示在大米淀粉糖的生产过程中每消耗7吨大米就要产出1吨米渣。若能将这些米渣充分用于大米蛋白活性肽、浓缩蛋白、分离蛋白等产品的开发,将极大地提高大米加工的附加值,带来可观的经济效益。
目前,常规的大米蛋白抗氧化活性肽的生产方法是以大米分离蛋白为原料,使用多种商品酶制剂酶解大米蛋白来制备。但是这种生产方法有着明显的不足:一是作为主要原料的大米分离蛋白成本较高;二是规模化生产时所需商品酶制剂用量大且价格昂贵,使得生产成本显著增加。如果能够筛选到一些可以直接利用米渣中的蛋白质发酵生产大米抗氧化肽的微生物菌种,再选择适宜的发酵工艺,就能以低廉的米渣大规模地制备大米抗氧化肽,这样原料廉价生产成本低。 
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:针对上述现有技术的不足,提供一种大规模、低成本生产具有天然芳香味、适口性好等特点的利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法,该方法可降低制备抗氧化肽的生产成本,有效地综合利用副产物米渣,提高米渣的附加值,拓展其应用范围,实现米渣抗氧化肽的大批量工业化生产。
为了解决上述技术问题,本发明所采用的技术方案为:一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法,该方法步骤如下:
1)制备枯草芽孢杆菌种子培养液:是将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于斜面培养基(现有常规培养基),于30-35℃培养20-24h活化得到枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落,再将活化好的枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落接入灭菌后的种子培养基中,于旋转摇床180-200r/min、30-35℃恒温振荡培养20-24h,即可。该枯草芽孢杆菌种子培养液含菌量为107-108cfu/mL。
上述种子培养基pH值为7.2,是按1000mL水加30g蛋白胨、5gNaCl、5g牛肉膏及1g葡萄糖的比例,于水中加入蛋白胨、NaCl、牛肉膏及葡萄糖,于121℃下灭菌20min,冷却,即可。
2)将枯草芽孢杆菌种子培养液以5-8%的接种重量接入发酵培养基中,在30-35℃、转速180-200r/min下摇床发酵培养48-60h,得到发酵液;其中,该发酵培养基pH值为5.5,是按300ml水加100g米渣粉、1.5gNaCl及0.3g葡萄糖的比例,于水中加入米渣粉、NaCl及葡萄糖,121℃下灭菌20min,冷却得到;
3)将发酵液于90-110℃灭酶8-12min,冷却至室温,以3800-4200r/min离心8-12min去除菌体和未发酵的米渣残渣,得到发酵上清液;
4)将上清液采用0.45μm 微孔滤膜过滤,滤液浓缩,冷冻干燥。
本发明使用的原料米渣是大米制作淀粉糖所产下的下脚料,其蛋白质含量高达60%以上(干基),有良好的氨基酸组成配比,且来源广泛,价格低廉;以米渣为原料制备抗氧化肽,使米渣得到了综合利用,为充分开发米渣生产高附加值的功能食品和生物制品奠定了基础。利用本发明方法制备的产品米渣蛋白抗氧化肽的品质好,抗氧化活性高,还原能力强。现有抗氧化肽的400umol/L天然抗坏血酸还原力为0.648,其还原力只与本方法中制备的0.68mg/mL米渣抗氧化肽还原力相当。
本方法利用米渣结合微生物(枯草芽孢杆菌)发酵法制备大米蛋白抗氧化活性肽,与现有的酶制剂直接酶解法制备抗氧化肽相比,具有如下优点:一是直接利用大米加工中的废弃物米渣为原料,不但成本低廉,而且变废为宝,防止环境污染;二是以枯草芽孢杆菌替代大量昂贵的商品酶制剂制备抗氧化肽,节省了大量酶制剂;三是微生物(枯草芽孢杆菌)发酵法制备的多肽通常没有苦味或苦味很低,解决了酶制剂生产中控制水解度防止苦味肽的生成,而且发酵过程中还会产生大量的风味物质,使发酵后得到的多肽具有天然芳香味,适口性较好。
具体实施方式:
以下结合实施例对本发明作进一步说明。
制备种子培养基:于1000mL水中加入30g蛋白胨、5gNaCl、5g牛肉膏及1g葡萄糖,pH值为7.2,121℃下灭菌20min,冷却。
制备发酵培养基:于3000ml水加1000g米渣粉、15gNaCl及3g葡萄糖,pH值为5.5,121℃下灭菌20min,冷却;
实施例1
   将保藏完好的枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于斜面培养基,32℃培养22h进行菌种活化;将活化好的枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落接入灭菌后的种子培养基中,于旋转摇床190r/min、32℃恒温振荡培养22h,得到含菌量为108cfu/mL的枯草芽孢杆菌种子培养液;将得到的种子培养液以5%的接种重量接入装有300mL发酵培养基的三角瓶中,三角瓶采用棉塞塞住瓶口,在32℃、转速200r/min摇床培养48h,得到发酵液,发酵液在100℃下灭酶10min,待发酵液冷却至室温以4000r/min离心10min去除菌体和未发酵的米渣残渣,得到发酵上清液,将上清液经 0.45μm 微孔滤膜过滤,将滤液进行浓缩,冷冻干燥,得到的粉末状产品即为米渣蛋白抗氧化肽。
本实施例得到的米渣蛋白抗氧化肽2mg/mL时还原力达1.907,400umol/L抗坏血酸还原力为0.648,与0.68mg/mL米渣抗氧化肽的还原力相当。表明此实施例得到的米渣蛋白抗氧化肽的抗氧化活性很强。
实施例2
将保藏完好的枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于斜面培养基,30℃培养24h,进行菌种活化;将活化好的枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落接入灭菌后的种子培养基中,于旋转摇床200r/min、30℃恒温振荡培养24h,得到含菌量为107cfu/mL的枯草芽孢杆菌种子培养液;将得到的种子培养液以8%的接种重量接入装有200mL发酵培养基的三角瓶中,三角瓶采用胶塞塞住瓶口,在35℃、转速180r/min摇床培养60h,得到发酵液,发酵液在100℃下灭酶10min,待发酵液冷却至室温以4000r/min离心10min去除菌体和未发酵的米渣残渣,得到发酵上清液,将上清液经 0.45μm 微孔滤膜过滤,滤液进行浓缩,冷冻干燥,得到的粉末状产品即为米渣蛋白抗氧化肽。本实施例得到的米渣蛋白抗氧化肽2mg/mL时还原力达1.898。
实施例3
   将保藏完好的枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于斜面培养基,35℃培养20h进行菌种活化;将活化好的枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落接入灭菌后的种子培养基中,于旋转摇床180r/min、35℃恒温振荡培养20h,得到含菌量为108cfu/mL的枯草芽孢杆菌种子培养液;将得到的种子培养液以7%的接种重量接入装有280mL发酵培养基的三角瓶中,三角瓶采用棉塞塞住瓶口,在30℃、转速190r/min摇床培养54h,得到发酵液,发酵液在110℃下灭酶8min,待发酵液冷却至室温以3800r/min离心12min去除菌体和未发酵的米渣残渣,得到发酵上清液,将上清液经 0.45μm 微孔滤膜过滤,将滤液进行浓缩,冷冻干燥,得到的粉末状产品即为米渣蛋白抗氧化肽。本实施例得到的米渣蛋白抗氧化肽2mg/mL时还原力达1.901。
本发明中,还原力的测定方法:用蒸馏水将米渣蛋白抗氧化肽制成 1 mg/mL 的水溶液。取发酵产物水溶液2mL,加入磷酸盐缓冲溶液(0.2 mol/L, pH=6.6) 5mL 和1%铁氰化钾5mL,置于50℃水浴中反应20min,然后加入10%的三氯乙酸10mL,经充分混合后以3000r/min 离心10min。吸取上清液5mL,加入5mL 蒸馏水和1mL 0.1%的三氯化铁溶液,在700nm 处测定吸光值,吸光值越大表明还原力越强。由于抗氧化剂是通过自身的还原作用给出电子而清除自由基的,还原力越强,抗氧化性越强,因此可通过测定还原力来说明抗氧化活性的强弱。

Claims (8)

1.一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法,其特征在于,该方法步骤如下:
1)制备枯草芽孢杆菌种子培养液;
2)将枯草芽孢杆菌种子培养液以5-8%的接种重量接入发酵培养基中,在30-35℃、转速180-200r/min下摇床发酵培养48-60h,得到发酵液;其中,该发酵培养基pH值为5.5,是按300ml水加100g米渣粉、1.5gNaCl及0.3g葡萄糖的比例,于水中加入米渣粉、NaCl及葡萄糖,灭菌,冷却得到;
3)将发酵液灭酶,冷却至室温,离心去除菌体和未发酵的米渣残渣,得到发酵上清液;
4)将上清液过滤,滤液浓缩,冷冻干燥。
2.如权利要求1所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法,其特征在于,步骤1)中的枯草芽孢杆菌种子培养液是将活化好的枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落接入灭菌后的种子培养基中,于旋转摇床180-200r/min、30-35℃恒温振荡培养20-24h,即可。
3.如权利要求2所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法,其特征在于,所述活化好的枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落是将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于斜面培养基,于30-35℃培养20-24h活化得到。
4.如权利要求2所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法,其特征在于,所述种子培养基pH值为7.2,是按1000mL水加30g蛋白胨、5gNaCl、5g牛肉膏及1g葡萄糖的比例,于水中加入蛋白胨、NaCl、牛肉膏及葡萄糖,于121℃下灭菌20min,冷却,即可。
5.如权利要求1所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法,其特征在于,所述步骤1)中枯草芽孢杆菌种子培养液含菌量为107-108cfu/mL。
6.如权利要求1所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法,其特征在于,所述步骤3)中灭酶温度为90-110℃,时间为8-12min。
7.如权利要求1所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法,其特征在于,所述步骤3)中离心转速为3800-4200r/min,时间为8-12min。
8.如权利要求1所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法,其特征在于,所述步骤4)中上清液过滤是采用0.45μm 微孔滤膜。
CN201410363673.3A 2014-07-29 2014-07-29 一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法 Active CN104087638B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410363673.3A CN104087638B (zh) 2014-07-29 2014-07-29 一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410363673.3A CN104087638B (zh) 2014-07-29 2014-07-29 一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104087638A true CN104087638A (zh) 2014-10-08
CN104087638B CN104087638B (zh) 2017-06-16

Family

ID=51635397

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410363673.3A Active CN104087638B (zh) 2014-07-29 2014-07-29 一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104087638B (zh)

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104543396A (zh) * 2015-01-13 2015-04-29 香红星 一种采用固态发酵生产大米多肽的方法
CN104962493A (zh) * 2015-06-24 2015-10-07 贵州大学 水解米渣蛋白的枯草芽孢杆菌hp90的发酵培养基及培养方法
CN105361168A (zh) * 2015-12-02 2016-03-02 绥化学院 一种复合型抗氧化肽及制备方法
CN105506039A (zh) * 2016-02-01 2016-04-20 浙江工业大学 米曲霉发酵虾壳制备抗氧化肽的方法
CN105821101A (zh) * 2016-06-01 2016-08-03 中南林业科技大学 一种发酵制备米渣蛋白抗氧化活性肽的方法
CN107440929A (zh) * 2017-07-06 2017-12-08 长沙湘资生物科技有限公司 一种含小肽‑锶的美白护肤产品
CN109337775A (zh) * 2018-11-15 2019-02-15 安徽省领航动物保健品有限责任公司 一种桂花竹叶香酒
CN109554428A (zh) * 2019-01-28 2019-04-02 江南大学 一种发酵法高效制备低苦味抗氧化玉米低聚肽的方法
CN110812302A (zh) * 2019-10-31 2020-02-21 山东花物堂生物科技有限公司 一种护肤品用大米发酵产物的制备方法
CN112195212A (zh) * 2020-10-15 2021-01-08 华中农业大学 一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法
CN113475672A (zh) * 2021-07-08 2021-10-08 北京工商大学 一种大米发酵物、大米发酵抗氧化肽及制备方法
CN113718005A (zh) * 2021-09-27 2021-11-30 齐齐哈尔易翔食品有限公司 一种高活性玉米降血压肽的制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101608205A (zh) * 2009-06-19 2009-12-23 东北农业大学 微生物发酵法猪血清蛋白抗氧化肽的方法及其产品
CN102488137A (zh) * 2011-11-16 2012-06-13 江南大学 一种枯草芽孢杆菌氨肽酶在风味功能性营养米制备工艺中的应用
CN102517367A (zh) * 2011-12-15 2012-06-27 河南科技大学 利用猪皮制备胶原蛋白抗氧化肽的方法
CN103103242A (zh) * 2013-01-11 2013-05-15 广西大学 一种抗氧化活性肽及其制备方法
CN103478441A (zh) * 2013-07-29 2014-01-01 长沙学院 一种大米活性菌肽鱼饲料及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101608205A (zh) * 2009-06-19 2009-12-23 东北农业大学 微生物发酵法猪血清蛋白抗氧化肽的方法及其产品
CN102488137A (zh) * 2011-11-16 2012-06-13 江南大学 一种枯草芽孢杆菌氨肽酶在风味功能性营养米制备工艺中的应用
CN102517367A (zh) * 2011-12-15 2012-06-27 河南科技大学 利用猪皮制备胶原蛋白抗氧化肽的方法
CN103103242A (zh) * 2013-01-11 2013-05-15 广西大学 一种抗氧化活性肽及其制备方法
CN103478441A (zh) * 2013-07-29 2014-01-01 长沙学院 一种大米活性菌肽鱼饲料及其应用

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104543396A (zh) * 2015-01-13 2015-04-29 香红星 一种采用固态发酵生产大米多肽的方法
CN104962493A (zh) * 2015-06-24 2015-10-07 贵州大学 水解米渣蛋白的枯草芽孢杆菌hp90的发酵培养基及培养方法
CN105361168A (zh) * 2015-12-02 2016-03-02 绥化学院 一种复合型抗氧化肽及制备方法
CN105506039B (zh) * 2016-02-01 2019-05-21 浙江工业大学 米曲霉发酵虾壳制备抗氧化肽的方法
CN105506039A (zh) * 2016-02-01 2016-04-20 浙江工业大学 米曲霉发酵虾壳制备抗氧化肽的方法
CN105821101A (zh) * 2016-06-01 2016-08-03 中南林业科技大学 一种发酵制备米渣蛋白抗氧化活性肽的方法
CN107440929A (zh) * 2017-07-06 2017-12-08 长沙湘资生物科技有限公司 一种含小肽‑锶的美白护肤产品
CN109337775A (zh) * 2018-11-15 2019-02-15 安徽省领航动物保健品有限责任公司 一种桂花竹叶香酒
CN109554428A (zh) * 2019-01-28 2019-04-02 江南大学 一种发酵法高效制备低苦味抗氧化玉米低聚肽的方法
CN110812302A (zh) * 2019-10-31 2020-02-21 山东花物堂生物科技有限公司 一种护肤品用大米发酵产物的制备方法
CN112195212A (zh) * 2020-10-15 2021-01-08 华中农业大学 一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法
CN113475672A (zh) * 2021-07-08 2021-10-08 北京工商大学 一种大米发酵物、大米发酵抗氧化肽及制备方法
CN113718005A (zh) * 2021-09-27 2021-11-30 齐齐哈尔易翔食品有限公司 一种高活性玉米降血压肽的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN104087638B (zh) 2017-06-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104087638A (zh) 一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法
CN104382159B (zh) 一种利用黄酒糟制备乳酸发酵饮料的方法
CN102356912B (zh) 一种益生菌发酵米乳的制备方法
CN104996722A (zh) 一种多菌种两步联合发酵饲料的方法
CN108034599B (zh) 一株源自白酒酿造体系的高效合成γ-氨基丁酸的短乳杆菌
CN102559552B (zh) 一种高产γ-氨基丁酸的生产方法及应用
CN105039453A (zh) 一种具有提高的抗氧化性的米糠多糖的制备方法及应用
CN103602651A (zh) 一种纳豆激酶生产方法
CN103300147B (zh) 采用两步法制作具有血管紧张素转化酶抑制活性发酵乳的方法
CN107156808A (zh) 一种枸杞酵素的制备方法
CN107475233A (zh) 一种用豆腐黄浆水生产纳豆激酶的方法
CN103805660B (zh) 一种利用廉价原料生产乳酸链球菌素的方法
CN109699812A (zh) 固态发酵生产饲用酿酒酵母-植物乳杆菌混合产品的方法
CN103952447B (zh) 一种利用厌氧条件下发酵生产丁二酸的方法
CN102517188B (zh) 一种在酿造过程中产生异麦芽低聚糖的黄酒小曲的制备方法
Furuta et al. Utilization of fermented barley extract obtained from a by-product of barley shochu for nisin production
CN102453679A (zh) 一种用于生物发酵的发酵液及其制备方法
CN103224973A (zh) 一种发酵虾头制备活性物质、甲壳素和有机酸钙的方法
CN100526470C (zh) 一种功能性甜味剂d-塔格糖的制备方法
CN103392920A (zh) 一种大豆皮的发酵方法
CN101003819A (zh) 一种枯草杆菌糖化餐厨垃圾发酵生产乳酸的方法
CN100403928C (zh) 酶法膏状腐乳的制造方法
CN107058449A (zh) 一种餐厨垃圾解淀粉芽孢杆菌与鼠李糖乳杆菌混合发酵产乳酸的方法
CN104711208B (zh) 一种具有高的淀粉分解能力的乳酸菌
CN110760458B (zh) 一种用于发酵的复合功能菌剂

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20160706

Address after: 410128 East Lake Furong district, Hunan,, Hunan Agricultural University

Applicant after: Hunan Agricultural University

Address before: 410128, No.1, Nongda Road, Furong district, Hunan, Changsha

Applicant before: Orient Science & Technology College of Hunan Agricultural University

GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20220527

Address after: 410000 No. 2328, Hongxing Building, No. 517, Section 2, Xiangfu East Road, Yuhua District, Changsha City, Hunan Province

Patentee after: Changsha zhishengyuan Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 410128 Furong district, Changsha, East Lake, Hunan, Hunan Agricultural University

Patentee before: Hunan Agricultural University

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20230830

Address after: Room 905, 9th Floor, Research Building, No. 19 Longyuan 1st Road, Longping High tech Park, Furong District, Changsha City, Hunan Province, 410125

Patentee after: Hunan Zhishengyuan Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 410000 No. 2328, Hongxing Building, No. 517, Section 2, Xiangfu East Road, Yuhua District, Changsha City, Hunan Province

Patentee before: Changsha zhishengyuan Biotechnology Co.,Ltd.