CN113718005A - 一种高活性玉米降血压肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高活性玉米降血压肽的制备方法，包括以下步骤；S1、首先将恒温振荡器、压力蒸汽灭菌器和300ml锥形瓶等工作设备放置在洁净室内，然后取出制作完成的基础培养基、种子培养基、和基础发酵培养基放置在洁净室内待用；S2、取出50ml基础培养基放置在其中一个300ml的锥形瓶内，等待使用，再取出50ml种子培养基放置再另一个300ml的锥形瓶内，等待使用，然后再取出一定量的基础发酵培养基配合相应的蒸馏水配置出10％浓度的基础发酵培养基。本发明利用发酵可以一次性的完成大量玉米多肽的制备工作，同时可以通过连续发酵进行短时间多次制备工作，极大的方便了用户进行高活性玉米降血压肽的大批量工业生产活动。
Description
技术领域
本发明涉及生化技术领域，尤其涉及一种高活性玉米降血压肽的制备方法。
背景技术
来源于食品的降血压肽是一类能够降低人体血压的小分子多肽的总称。一般具有活性的降血压肽的分子量在1000以下，通常是由蛋白酶在比较温和的情况下水解蛋白质获得。由于其降血压效果明显且对正常血压无影响、无副作用等优点，已成为研究的热点，高活性玉米多肽就是一种十分好的降血压肽。
在对高活性玉米多肽进行制备时，当今社会多采用酶法，但是这种方法受环境因素的影响较大，成本高且制备量较少，十分的不适用于大批量的工业操作。
为此，我们提出一种高活性玉米降血压肽的制备方法来解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中问题，而提出的一种高活性玉米降血压肽的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种高活性玉米降血压肽的制备方法，包括以下步骤；
S1、首先将恒温振荡器、压力蒸汽灭菌器和300ml锥形瓶等工作设备放置在洁净室内，然后取出制作完成的基础培养基、种子培养基、和基础发酵培养基放置在洁净室内待用；
S2、取出50ml基础培养基放置在其中一个300ml的锥形瓶内，等待使用，再取出50ml种子培养基放置再另一个300ml的锥形瓶内，等待使用，然后再取出一定量的基础发酵培养基配合相应的蒸馏水配置出10％浓度的基础发酵培养基，并将这些10％浓度的基础发酵培养基放置在另外一个300ml的锥瓶中待用；
S3、接着便可以用用接种环挑取枯草芽孢杆菌的菌种接种于装有50ml基础培养基的300ml锥形瓶中，在37℃，160r/min条件下振荡培养9-17h后，将此菌液按4％的接种量接种于装有50ml种子培养基的300ml锥形瓶中，在34℃，190r/min条件下振荡培养一定时间后，按2％-10％的接种量接入含10％基础发酵培养基的300ml锥形瓶中，接着在25℃-42℃，PH值为6.5-9.0的条件下，160r/min振荡培养24小时；
S4、然后便可以将培养完成的菌液倒入相应的发酵设备内，同时加入适量的碱性蛋白酶，然后再将适量的玉米蛋白粉也倒入此发酵设备内，在发酵接近结束时，向300ml锥形瓶内加入适量的麦芽用于去除苦味，然后等待发酵工作的完成，待发酵工作完成后便可以顺利的得到相应的玉米多肽，然后便可以向发酵设备内加入适量的营养液，并再次将适量的玉米蛋白粉也倒入此发酵设备内进行再次发酵，接着便可以重复上述步骤进行连续发酵工作；
S5、在发发酵工作即将完成时，配置茚三酮显色试剂，在配置茚三酮显色试剂时，需要先配置相应的显色剂、干燥甘氨酸以及40％乙醇，配置显色剂即称取茚三酮0.25g，果糖0.15g，Na2HPO45g，KH2PO43g,定溶至50ml，现配现用，配置干燥甘氨酸将甘氨酸放入干净的称量瓶中，于105℃烘箱中烘干2小时后取出，置于干燥器中冷却后称重，再烘1小时，又冷却后称重，重复此操作，直到前后两次质量差不超过2mg即算恒重，配置40％乙醇即将40ml乙醇加上60ml蒸馏水，混匀即可，待三种材料配置完成后，便可以配合蒸馏水以及相应的操作完成茚三酮显色试剂；
S6、然后等到发酵工作完成后，便可以蛋白质水解度检测试验，具体操作方式为，先取出发酵酶解液10ul于10ml试管中,用蒸馏水补足2ml，做茆三酮显色反应，继而得到发酵酶解液的-NH2浓度，再称取玉米蛋白粉50mg,用蒸馏水定容至50ml,取此溶液0.5ml放于试管中，用蒸馏水补足2ml做茆三酮显色反应，得到蛋白质中的游离-NH2浓度，这样一来一对比便可以得到蛋白质的水解量，继而便可以知道玉米多肽的生成量。
优选的，所述基础培养基是由牛肉膏0.3％、蛋白胨1％、NaC10.5％配置而成的pH值在7.2～7.4之间的培养基。
优选的，所述种子培养基是由葡萄糖2％、大豆蛋白胨3.6％、MgS040.15％、K2HPO40.28％、KH2PO40.28％、CaC120.003％配置而成的pH值8.0的培养基。
优选的，所述基础发酵培养基是由葡萄糖2％，蛋白胨1.9％，十二烷基磺酸钠0.12％，MgSO40.18％，MnSO40.32％配置而成的培养基。
优选的，所述玉米蛋白粉是由玉米湿法生产淀粉过程中形成的副产物，即玉米黄粉经研磨机中研磨出来得精细粉末。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明利用发酵的方式，在配置完成相应的菌液后，可以一次性的大批量水解玉米蛋白质粉，继而得到大量的高活性玉米多肽，极大的方便了用户进行大批量工业生产，接着向发酵设备内重复添加营养液和玉米蛋白粉，便可以在短时间内利用菌液进行连续发酵工作，进一步的提高了玉米多肽的产量。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例一
一种高活性玉米降血压肽的制备方法，包括以下步骤；
S1、首先将恒温振荡器、压力蒸汽灭菌器和300ml锥形瓶等工作设备放置在洁净室内，然后取出制作完成的基础培养基，所述基础培养基是由牛肉膏0.3％、蛋白胨1％、NaC10.5％配置而成的pH值在7.2～7.4之间的培养基、种子培养基，所述种子培养基是由葡萄糖2％、大豆蛋白胨3.6％、MgS040.15％、K2HPO40.28％、KH2PO40.28％、CaC120.003％配置而成的pH值8.0的培养基、和基础发酵培养基，所述基础发酵培养基是由葡萄糖2％，蛋白胨1.9％，十二烷基磺酸钠0.12％，MgSO40.18％，MnSO40.32％配置而成的培养基，放置在洁净室内待用；
S2、取出50ml基础培养基放置在其中一个300ml的锥形瓶内，等待使用，再取出50ml种子培养基放置再另一个300ml的锥形瓶内，等待使用，然后再取出一定量的基础发酵培养基配合相应的蒸馏水配置出10％浓度的基础发酵培养基，并将这些10％浓度的基础发酵培养基放置在另外一个300ml的锥瓶中待用；
S3、接着便可以用用接种环挑取枯草芽孢杆菌的菌种接种于装有50ml基础培养基的300ml锥形瓶中，在37℃，160r/min条件下振荡培养9-17h后，将此菌液按4％的接种量接种于装有50ml种子培养基的300ml锥形瓶中，在34℃，190r/min条件下振荡培养一定时间后，按2％-10％的接种量接入含10％基础发酵培养基的300ml锥形瓶中，在25℃-42℃，PH值为6.5-9.0的条件下，160r/min振荡培养24小时；
S4、然后便可以将培养完成的菌液倒入相应的发酵设备内，同时加入适量的碱性蛋白酶，发酵初期蛋白的水解度较低，加入适量的碱性蛋白酶可以有效的提高发酵水解速度，继而提高玉米多肽的制备速度，然后再将适量的玉米蛋白粉也倒入此发酵设备内，玉米蛋白粉是由玉米湿法生产淀粉过程中形成的副产物，即玉米黄粉经研磨机中研磨出来得精细粉末，在发酵接近结束时，向300ml锥形瓶内加入适量的麦芽用于去除苦味，麦芽为灭菌后的麦芽汁，大麦发芽后氨肽酶和羧肽酶的酶活力增长1.5～2.5倍。氨肽酶和羧肽酶等外切蛋白酶具有降低酶解物苦味的作用，这样便提高了玉米多肽的制备质量，然后等待发酵工作的完成，待发酵工作完成后便可以顺利的得到相应的玉米多肽，然后便可以向发酵设备内加入适量的营养液，并再次将适量的玉米蛋白粉也倒入此发酵设备内进行再次发酵，接着便可以重复上述步骤进行连续发酵工作，这样的短时间连续发酵极大的提高了玉米多肽的工业制备数量，继而使得整个方法可以更方便用户进行大批量玉米多肽的工业生产；
S5、在发发酵工作即将完成时，配置茚三酮显色试剂，在配置茚三酮显色试剂时，需要先配置相应的显色剂、干燥甘氨酸以及40％乙醇，配置显色剂即称取茚三酮0.25g，果糖0.15g，Na2HPO45g，KH2PO43g,定溶至50ml，现配现用，配置干燥甘氨酸将甘氨酸放入干净的称量瓶中，于105℃烘箱中烘干2小时后取出，置于干燥器中冷却后称重，再烘1小时，又冷却后称重，重复此操作，直到前后两次质量差不超过2mg即算恒重，配置40％乙醇即将40ml乙醇加上60ml蒸馏水，混匀即可，待三种材料配置完成后，便可以配合蒸馏水以及相应的操作完成茚三酮显色试剂；
S6、然后等到发酵工作完成后，便可以蛋白质水解度检测试验，具体操作方式为，先取出发酵酶解液10ul于10ml试管中,用蒸馏水补足2ml，做茆三酮显色反应，继而得到发酵酶解液的-NH2浓度，再称取玉米蛋白粉50mg,用蒸馏水定容至50ml,取此溶液0.5ml放于试管中，用蒸馏水补足2ml做茆三酮显色反应，得到蛋白质中的游离-NH2浓度，这样一来一对比便可以得到蛋白质的水解量，继而便可以知道玉米多肽的生成量。
实施例二
一种高活性玉米降血压肽的制备方法，包括以下步骤；
S1、首先将恒温振荡器、压力蒸汽灭菌器和300ml锥形瓶等工作设备放置在洁净室内，然后取出制作完成的基础培养基，所述基础培养基是由牛肉膏0.3％、蛋白胨1％、NaC10.5％配置而成的pH值在7.2～7.4之间的培养基、种子培养基，所述种子培养基是由葡萄糖2％、大豆蛋白胨3.6％、MgS040.15％、K2HPO40.28％、KH2PO40.28％、CaC120.003％配置而成的pH值8.0的培养基、和基础发酵培养基，所述基础发酵培养基是由葡萄糖2％，蛋白胨1.9％，十二烷基磺酸钠0.12％，MgSO40.18％，MnSO40.32％配置而成的培养基，放置在洁净室内待用；
S2、取出50ml基础培养基放置在其中一个300ml的锥形瓶内，等待使用，再取出50ml种子培养基放置再另一个300ml的锥形瓶内，等待使用，然后再取出一定量的基础发酵培养基配合相应的蒸馏水配置出10％浓度的基础发酵培养基，并将这些10％浓度的基础发酵培养基放置在另外一个300ml的锥瓶中待用；
S3、接着便可以用用接种环挑取枯草芽孢杆菌的菌种接种于装有50ml基础培养基的300ml锥形瓶中，在37℃，160r/min条件下振荡培养9h后，将此菌液按4％的接种量接种于装有50ml种子培养基的300ml锥形瓶中，在34℃，190r/min条件下振荡培养一定时间后，按2％的接种量接入含10％基础发酵培养基的300ml锥形瓶中，在25℃，PH值为6.5的条件下，160r/min振荡培养24小时；
S4、然后便可以将培养完成的菌液倒入相应的发酵设备内，同时加入适量的碱性蛋白酶，发酵初期蛋白的水解度较低，加入适量的碱性蛋白酶可以有效的提高发酵水解速度，继而提高玉米多肽的制备速度，然后再将适量的玉米蛋白粉也倒入此发酵设备内，玉米蛋白粉是由玉米湿法生产淀粉过程中形成的副产物，即玉米黄粉经研磨机中研磨出来得精细粉末，在发酵接近结束时，向300ml锥形瓶内加入适量的麦芽用于去除苦味，麦芽为灭菌后的麦芽汁，大麦发芽后氨肽酶和羧肽酶的酶活力增长1.5～2.5倍。氨肽酶和羧肽酶等外切蛋白酶具有降低酶解物苦味的作用，这样便提高了玉米多肽的制备质量，然后等待发酵工作的完成，待发酵工作完成后便可以顺利的得到相应的玉米多肽，然后便可以向发酵设备内加入适量的营养液，并再次将适量的玉米蛋白粉也倒入此发酵设备内进行再次发酵，接着便可以重复上述步骤进行连续发酵工作，这样的短时间连续发酵极大的提高了玉米多肽的工业制备数量，继而使得整个方法可以更方便用户进行大批量玉米多肽的工业生产；
S5、在发发酵工作即将完成时，配置茚三酮显色试剂，在配置茚三酮显色试剂时，需要先配置相应的显色剂、干燥甘氨酸以及40％乙醇，配置显色剂即称取茚三酮0.25g，果糖0.15g，Na2HPO45g，KH2PO43g,定溶至50ml，现配现用，配置干燥甘氨酸将甘氨酸放入干净的称量瓶中，于105℃烘箱中烘干2小时后取出，置于干燥器中冷却后称重，再烘1小时，又冷却后称重，重复此操作，直到前后两次质量差不超过2mg即算恒重，配置40％乙醇即将40ml乙醇加上60ml蒸馏水，混匀即可，待三种材料配置完成后，便可以配合蒸馏水以及相应的操作完成茚三酮显色试剂；
S6、然后等到发酵工作完成后，便可以蛋白质水解度检测试验，具体操作方式为，先取出发酵酶解液10ul于10ml试管中,用蒸馏水补足2ml，做茆三酮显色反应，继而得到发酵酶解液的-NH2浓度，再称取玉米蛋白粉50mg,用蒸馏水定容至50ml,取此溶液0.5ml放于试管中，用蒸馏水补足2ml做茆三酮显色反应，得到蛋白质中的游离-NH2浓度，这样一来一对比便可以得到蛋白质的水解量，继而便可以知道玉米多肽的生成量。
实施例三
一种高活性玉米降血压肽的制备方法，包括以下步骤；
S1、首先将恒温振荡器、压力蒸汽灭菌器和300ml锥形瓶等工作设备放置在洁净室内，然后取出制作完成的基础培养基，所述基础培养基是由牛肉膏0.3％、蛋白胨1％、NaC10.5％配置而成的pH值在7.2～7.4之间的培养基、种子培养基，所述种子培养基是由葡萄糖2％、大豆蛋白胨3.6％、MgS040.15％、K2HPO40.28％、KH2PO40.28％、CaC120.003％配置而成的pH值8.0的培养基、和基础发酵培养基，所述基础发酵培养基是由葡萄糖2％，蛋白胨1.9％，十二烷基磺酸钠0.12％，MgSO40.18％，MnSO40.32％配置而成的培养基，放置在洁净室内待用；
S2、取出50ml基础培养基放置在其中一个300ml的锥形瓶内，等待使用，再取出50ml种子培养基放置再另一个300ml的锥形瓶内，等待使用，然后再取出一定量的基础发酵培养基配合相应的蒸馏水配置出10％浓度的基础发酵培养基，并将这些10％浓度的基础发酵培养基放置在另外一个300ml的锥瓶中待用；
S3、接着便可以用用接种环挑取枯草芽孢杆菌的菌种接种于装有50ml基础培养基的300ml锥形瓶中，在37℃，160r/min条件下振荡培养13h后，将此菌液按4％的接种量接种于装有50ml种子培养基的300ml锥形瓶中，在34℃，190r/min条件下振荡培养一定时间后，按6％的接种量接入含10％基础发酵培养基的300ml锥形瓶中，在33℃，PH值为7.5的条件下，160r/min振荡培养24小时；
S4、然后便可以将培养完成的菌液倒入相应的发酵设备内，同时加入适量的碱性蛋白酶，发酵初期蛋白的水解度较低，加入适量的碱性蛋白酶可以有效的提高发酵水解速度，继而提高玉米多肽的制备速度，然后再将适量的玉米蛋白粉也倒入此发酵设备内，玉米蛋白粉是由玉米湿法生产淀粉过程中形成的副产物，即玉米黄粉经研磨机中研磨出来得精细粉末，在发酵接近结束时，向300ml锥形瓶内加入适量的麦芽用于去除苦味，麦芽为灭菌后的麦芽汁，大麦发芽后氨肽酶和羧肽酶的酶活力增长1.5～2.5倍。氨肽酶和羧肽酶等外切蛋白酶具有降低酶解物苦味的作用，这样便提高了玉米多肽的制备质量，然后等待发酵工作的完成，待发酵工作完成后便可以顺利的得到相应的玉米多肽，然后便可以向发酵设备内加入适量的营养液，并再次将适量的玉米蛋白粉也倒入此发酵设备内进行再次发酵，接着便可以重复上述步骤进行连续发酵工作，这样的短时间连续发酵极大的提高了玉米多肽的工业制备数量，继而使得整个方法可以更方便用户进行大批量玉米多肽的工业生产；
S5、在发发酵工作即将完成时，配置茚三酮显色试剂，在配置茚三酮显色试剂时，需要先配置相应的显色剂、干燥甘氨酸以及40％乙醇，配置显色剂即称取茚三酮0.25g，果糖0.15g，Na2HPO45g，KH2PO43g,定溶至50ml，现配现用，配置干燥甘氨酸将甘氨酸放入干净的称量瓶中，于105℃烘箱中烘干2小时后取出，置于干燥器中冷却后称重，再烘1小时，又冷却后称重，重复此操作，直到前后两次质量差不超过2mg即算恒重，配置40％乙醇即将40ml乙醇加上60ml蒸馏水，混匀即可，待三种材料配置完成后，便可以配合蒸馏水以及相应的操作完成茚三酮显色试剂；
S6、然后等到发酵工作完成后，便可以蛋白质水解度检测试验，具体操作方式为，先取出发酵酶解液10ul于10ml试管中,用蒸馏水补足2ml，做茆三酮显色反应，继而得到发酵酶解液的-NH2浓度，再称取玉米蛋白粉50mg,用蒸馏水定容至50ml,取此溶液0.5ml放于试管中，用蒸馏水补足2ml做茆三酮显色反应，得到蛋白质中的游离-NH2浓度，这样一来一对比便可以得到蛋白质的水解量，继而便可以知道玉米多肽的生成量。
实施例四
一种高活性玉米降血压肽的制备方法，包括以下步骤；
S1、首先将恒温振荡器、压力蒸汽灭菌器和300ml锥形瓶等工作设备放置在洁净室内，然后取出制作完成的基础培养基，所述基础培养基是由牛肉膏0.3％、蛋白胨1％、NaC10.5％配置而成的pH值在7.2～7.4之间的培养基、种子培养基，所述种子培养基是由葡萄糖2％、大豆蛋白胨3.6％、MgS040.15％、K2HPO40.28％、KH2PO40.28％、CaC120.003％配置而成的pH值8.0的培养基、和基础发酵培养基，所述基础发酵培养基是由葡萄糖2％，蛋白胨1.9％，十二烷基磺酸钠0.12％，MgSO40.18％，MnSO40.32％配置而成的培养基，放置在洁净室内待用；
S2、取出50ml基础培养基放置在其中一个300ml的锥形瓶内，等待使用，再取出50ml种子培养基放置再另一个300ml的锥形瓶内，等待使用，然后再取出一定量的基础发酵培养基配合相应的蒸馏水配置出10％浓度的基础发酵培养基，并将这些10％浓度的基础发酵培养基放置在另外一个300ml的锥瓶中待用；
S3、接着便可以用用接种环挑取枯草芽孢杆菌的菌种接种于装有50ml基础培养基的300ml锥形瓶中，在37℃，160r/min条件下振荡培养17h后，将此菌液按4％的接种量接种于装有50ml种子培养基的300ml锥形瓶中，在34℃，190r/min条件下振荡培养一定时间后，按10％的接种量接入含10％基础发酵培养基的300ml锥形瓶中，在42℃，PH值为9.0的条件下，160r/min振荡培养24小时；
S4、然后便可以将培养完成的菌液倒入相应的发酵设备内，同时加入适量的碱性蛋白酶，发酵初期蛋白的水解度较低，加入适量的碱性蛋白酶可以有效的提高发酵水解速度，继而提高玉米多肽的制备速度，然后再将适量的玉米蛋白粉也倒入此发酵设备内，玉米蛋白粉是由玉米湿法生产淀粉过程中形成的副产物，即玉米黄粉经研磨机中研磨出来得精细粉末，在发酵接近结束时，向300ml锥形瓶内加入适量的麦芽用于去除苦味，麦芽为灭菌后的麦芽汁，大麦发芽后氨肽酶和羧肽酶的酶活力增长1.5～2.5倍。氨肽酶和羧肽酶等外切蛋白酶具有降低酶解物苦味的作用，这样便提高了玉米多肽的制备质量，然后等待发酵工作的完成，待发酵工作完成后便可以顺利的得到相应的玉米多肽，然后便可以向发酵设备内加入适量的营养液，并再次将适量的玉米蛋白粉也倒入此发酵设备内进行再次发酵，接着便可以重复上述步骤进行连续发酵工作，这样的短时间连续发酵极大的提高了玉米多肽的工业制备数量，继而使得整个方法可以更方便用户进行大批量玉米多肽的工业生产；
S5、在发发酵工作即将完成时，配置茚三酮显色试剂，在配置茚三酮显色试剂时，需要先配置相应的显色剂、干燥甘氨酸以及40％乙醇，配置显色剂即称取茚三酮0.25g，果糖0.15g，Na2HPO45g，KH2PO43g,定溶至50ml，现配现用，配置干燥甘氨酸将甘氨酸放入干净的称量瓶中，于105℃烘箱中烘干2小时后取出，置于干燥器中冷却后称重，再烘1小时，又冷却后称重，重复此操作，直到前后两次质量差不超过2mg即算恒重，配置40％乙醇即将40ml乙醇加上60ml蒸馏水，混匀即可，待三种材料配置完成后，便可以配合蒸馏水以及相应的操作完成茚三酮显色试剂；
S6、然后等到发酵工作完成后，便可以蛋白质水解度检测试验，具体操作方式为，先取出发酵酶解液10ul于10ml试管中,用蒸馏水补足2ml，做茆三酮显色反应，继而得到发酵酶解液的-NH2浓度，再称取玉米蛋白粉50mg,用蒸馏水定容至50ml,取此溶液0.5ml放于试管中，用蒸馏水补足2ml做茆三酮显色反应，得到蛋白质中的游离-NH2浓度，这样一来一对比便可以得到蛋白质的水解量，继而便可以知道玉米多肽的生成量。
本发明中，用户可以一次性的配置大量的发酵菌液，然后将菌液倒入相应的发酵罐内，接着将大批量的研磨后的玉米蛋白粉倒入到相应的发酵罐内，便可以轻松的等到发酵完成，继而得到大量的高活性玉米多肽，极大的方便了用户进行大批量的高活性玉米降血压肽生产活动，极大的方便了用户使用，接着向发酵罐内加入营养液用于菌类生长，并再次添加玉米蛋白粉，这样便可以进行再次发酵，重复上述步骤便可以通过连续发酵在短时间内得到大量的玉米多肽，极大的方便了用户进行玉米多肽的大批量工业生产工作。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种高活性玉米降血压肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤；
S1、首先将恒温振荡器、压力蒸汽灭菌器和300ml锥形瓶等工作设备放置在洁净室内，然后取出制作完成的基础培养基、种子培养基、和基础发酵培养基放置在洁净室内待用；
S2、取出50ml基础培养基放置在其中一个300ml的锥形瓶内，等待使用，再取出50ml种子培养基放置再另一个300ml的锥形瓶内，等待使用，然后再取出一定量的基础发酵培养基配合相应的蒸馏水配置出10％浓度的基础发酵培养基，并将这些10％浓度的基础发酵培养基放置在另外一个300ml的锥瓶中待用；
S3、接着便可以用接种环挑取枯草芽孢杆菌的菌种接种于装有50ml基础培养基的300ml锥形瓶中，在37℃，160r/min条件下振荡培养9-17h后，将此菌液按4％的接种量接种于装有50ml种子培养基的300ml锥形瓶中，在34℃，190r/min条件下振荡培养一定时间后，按2％-10％的接种量接入含10％基础发酵培养基的300ml锥形瓶中，在25℃-42℃，PH值为6.5-9.0的条件下，160r/min振荡培养24小时；
S4、然后便可以将培养完成的菌液倒入相应的发酵设备内，同时加入适量的碱性蛋白酶，然后再将适量的玉米蛋白粉也倒入此发酵设备内，在发酵接近结束时，向300ml锥形瓶内加入适量的麦芽用于去除苦味，然后等待发酵工作的完成，待发酵工作完成后便可以顺利的得到相应的玉米多肽，然后便可以向发酵设备内加入适量的营养液，并再次将适量的玉米蛋白粉也倒入此发酵设备内进行再次发酵，接着便可以重复上述步骤进行连续发酵工作；
S5、在发发酵工作即将完成时，配置茚三酮显色试剂，在配置茚三酮显色试剂时，需要先配置相应的显色剂、干燥甘氨酸以及40％乙醇，配置显色剂即称取茚三酮0.25g，果糖0.15g，Na2HPO45g，KH2PO43g,定溶至50ml，现配现用，配置干燥甘氨酸将甘氨酸放入干净的称量瓶中，于105℃烘箱中烘干2小时后取出，置于干燥器中冷却后称重，再烘1小时，又冷却后称重，重复此操作，直到前后两次质量差不超过2mg即算恒重，配置40％乙醇即将40ml乙醇加上60ml蒸馏水，混匀即可，待三种材料配置完成后，便可以配合蒸馏水以及相应的操作完成茚三酮显色试剂；
S6、然后等到发酵工作完成后，便可以蛋白质水解度检测试验，具体操作方式为，先取出发酵酶解液10ul于10ml试管中,用蒸馏水补足2ml，做茆三酮显色反应，继而得到发酵酶解液的-NH2浓度，再称取玉米蛋白粉50mg,用蒸馏水定容至50ml,取此溶液0.5ml放于试管中，用蒸馏水补足2ml做茆三酮显色反应，得到蛋白质中的游离-NH2浓度，这样一来一对比便可以得到蛋白质的水解量，继而便可以知道玉米多肽的生成量。
2.根据权利要求1所述的，其特征在于，所述基础培养基是由牛肉膏0.3％、蛋白胨1％、NaC10.5％配置而成的pH值在7.2～7.4之间的培养基。
3.根据权利要求1所述的，其特征在于，所述种子培养基是由葡萄糖2％、大豆蛋白胨3.6％、MgS040.15％、K2HPO40.28％、KH2PO40.28％、CaC120.003％配置而成的pH值8.0的培养基。
4.根据权利要求1所述的，其特征在于，所述基础发酵培养基是由葡萄糖2％，蛋白胨1.9％，十二烷基磺酸钠0.12％，MgSO40.18％，MnSO40.32％配置而成的培养基。
5.根据权利要求1所述的，其特征在于，所述玉米蛋白粉是由玉米湿法生产淀粉过程中形成的副产物，即玉米黄粉经研磨机中研磨出来得精细粉末。
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2021
- 2021-09-27 CN CN202111135063.4A patent/CN113718005A/zh active Pending
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