CN108587958A - 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌，所述菌株保藏名称为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）W208，于2016年9月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.13006。同时还公开了所述的解淀粉芽孢杆菌在制备乙酰木聚糖酯酶中的应用以及在降解乙酰木聚糖中的应用。本发明提供的解淀粉芽孢杆菌W208能够产生乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶，并能高效地降解利用乙酰木聚糖，从而为木聚糖类半纤维素的利用与转化提供了新的途径；而且本发明提供的解淀粉芽孢杆菌W208与现有同类型的模式菌株相比，其能够产生更高浓度的乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶，其对乙酰木聚糖具有明显优于商业模式菌株的降解能力，能够更高效地降解乙酰木聚糖，具有较高的工业应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株解淀粉芽孢杆菌及其应用。
背景技术
半纤维素是植物细胞壁中仅次于纤维素的第二大可再生生物质资源，它的利用与转化对解决能源危机、温室效应等一系列全球问题有很大的促进作用。木聚糖是半纤维素的主要组成成分，约占植物细胞干重的15％～35％。它可以被降解为低聚木糖、木糖、木糖醇、乙醇、丙醇、丁醇等。传统工业中，降解木聚糖经常采用酸法或碱法，但酸、碱水解过程往往伴有副反应，产生较多的有毒物质，且产生的酸、碱废液会造成较大的环保压力。随着技术的进步，行业内的技术人员研发了降解木聚糖的新方法——酶法，且酶法以其温和、环保的优势正成为木聚糖降解的主要方式。木聚糖是一种杂合多聚糖，其主链由多个吡喃木糖基通过β-1,4木糖苷键相连，而大约80％的木聚糖含有侧链，如O-乙酰基、L-阿拉伯糖残基、阿魏酸和4-O-甲基-D-葡萄糖醛酸残基等。这些侧链基团是影响木聚糖被水解的因素之一，产生空间障碍，限制了主链降解酶同主链的接触。由于木聚糖的来源及其结构的复杂，其完全降解需要多种酶的协同作用来切开主链骨架及侧链，包括乙酰木聚糖酯酶、β-1,4内切木聚糖酶、β-D-木糖苷酶、α-L-阿拉伯呋喃糖酶、α-D-葡萄糖醛酸酶和阿魏酸酯酶等。在阔叶材中，被乙酸所酯化的木糖残基大约占50％，也就是说乙酰基的存在大大限制了木聚糖降解酶的作用。因此在木聚糖的生物降解过程中，对乙酰基的降解显得尤为重要。通过菌株发酵产生木聚糖酶进而对木聚糖降解已是本领域研究比较成熟的技术之一。目前，现有技术中已报道了部分芽孢杆菌可以产生木聚糖酶，但是对木聚糖尤其是乙酰木聚糖的降解能力普通较弱，因此研发对木聚糖尤其是乙酰木聚糖降解能力较强的菌株仍是行业内技术人员研究的热点，而且到目前为止现有技术中还没有报道过能够高效降解乙酰木聚糖的解淀粉芽孢杆菌的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一株解淀粉芽孢杆菌及其应用，开发了一株对木聚糖、尤其是对乙酰木聚糖降解能力较强的菌株，以解决乙酰木聚糖降解困难的问题，为木聚糖及乙酰木聚糖更好地降解和利用提供菌株选择。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一株解淀粉芽孢杆菌，所述菌株保藏名称为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)W208，于2016年9月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.13006。保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
本发明提供的解淀粉芽孢杆菌W208从福建省福州市晋安区寿山乡寿山村农田中含腐烂稻草的土壤分离得到，其菌落特征为：在LB固体培养基中培养48h后，菌落形状隆起、不光滑、不透明、呈乳白色、边缘呈树枝状；其形态特征为：菌体呈杆状，长为1.0～2.0μm，宽为0.3～0.6μm，有鞭毛，革兰氏染色为阳性；其生长的适合pH值为6.0～8.0，适合温度为30～40℃，在LB液体培养基中培养6h时开始进入对数生长期，24h时达到生长高峰而后进入稳定期，48h后进入衰亡期；其生理生化特征为：菌体能够在含葡萄糖、甘露糖、木糖、果糖、蔗糖、棉子糖、龙胆二糖、纤维二糖、麦芽糖、蜜二糖、乳糖、水苏糖、海藻糖、山梨醇、甘露醇、淀粉和明胶为碳源的培养基中生长；形成芽孢试验、氧化酶试验、接触酶试验和淀粉水解试验结果均为阳性；孢囊膨大试验结果为阴性；对利福霉素SV、林可霉素、氯化锂、亚碲酸钾、氨曲南、丁酸钠、D-丝氨酸、溴酸钠、1％乳酸钠、1％氯化钠、4％氯化钠、8％氯化钠敏感，对醋竹桃霉素、万古霉素、二甲胺四环素、四唑蓝、四唑紫、十四烷硫酸钠、萘啶酸不敏感。
本发明同时提供了利用所述的解淀粉芽孢杆菌制备乙酰木聚糖酯酶的用途，是指将所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)W208作为发酵菌株接种于液体培养基中进行液体发酵，制备乙酰木聚糖酯酶。所述液体培养基为LB液体培养基或发酵培养基。所述LB液体培养基包括：蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠10g/L，pH值为6.0～8.0，在121℃灭菌20min。所述发酵培养基包括：蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠10g/L，乙酰木聚糖3g/L，pH值为6.0～8.0，在121℃灭菌20min。液体发酵的温度30～40℃、pH值为6.0～8.0；采用LB液体培养基时，其液体发酵时间优选为：72h；采用发酵培养基时，其液体发酵时间优选为：48h。
由于本发明提供的解淀粉芽孢杆菌可以产生乙酰木聚糖酯酶，因此其可以在降解乙酰木聚糖中得到应用，具体应用方法包括以下步骤：
(a)制备种子液：挑取斜面保存的解淀粉芽孢杆菌W208，接种到LB液体培养基中30～40℃活化16～24h，得到种子液；
(b)制备发酵液：将解淀粉芽孢杆菌W208的种子液按体积比为1.5％的接种量分别接入LB液体培养基和发酵培养基中，在温度30～40℃、pH值为6.0～8.0的条件下发酵12～96h，得发酵液；
(c)将所述发酵液加入到乙酰木聚糖或含有乙酰木聚糖的材料中，温度30～40℃、pH值为6.0～8.0的条件下进行降解。
所述LB液体培养基包括：蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠10g/L，pH值为6.0～8.0，在121℃灭菌20min。
所述发酵培养基包括：蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠10g/L，乙酰木聚糖3g/L，pH值为6.0～8.0，在121℃灭菌20min。
本发明提供的解淀粉芽孢杆菌W208能够产生乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶，并能够高效降解利用乙酰木聚糖，从而为木聚糖类半纤维素的利用与转化提供了新的途径；而且本发明提供的解淀粉芽孢杆菌W208与现有同类型的模式菌株相比，其能够产生更高浓度的乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶，其对乙酰木聚糖具有明显优于商业模式菌株的降解能力，可以更高效地降解乙酰木聚糖，具有较高的工业应用价值。
附图说明
图1为解淀粉芽孢杆菌W208的菌落形态。
图2为解淀粉芽孢杆菌W208的扫描电镜图。
图3为解淀粉芽孢杆菌W208的革兰氏染色图。
图4为解淀粉芽孢杆菌W208生长的最适温度曲线。
图5为解淀粉芽孢杆菌W208生长的最适pH曲线。
图6为解淀粉芽孢杆菌W208的生长曲线图。
图7为乙酰木聚糖酯酶活力测定试验中对硝基苯酚的标准曲线。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，若未特别指明，实施例中的培养基及实验条件均为常规培养基和实验条件。实施例中所用的试验材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)W208的获得及鉴定
1、菌株分离
从福建省福州市晋安区寿山乡寿山村含腐烂稻草的农田采集土壤样品。称取5g土壤样品于灭菌离心管中，加入5倍体积无菌水，将土壤滤去，取滤液接种于LB平板培养基，在37℃下恒温培养，直至菌落出现，用接种针挑取边缘生长良好的细菌，接种于新的LB平板培养基上，待新接种的内生菌长成菌落后，再挑取其边缘的内生菌划线培养，如此反复得到纯化，直到得到单菌落，命名其为菌株W208。其中LB平板培养基包括：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L，琼脂15g/L，pH值为7.0，在121℃灭菌20min。
2、菌株鉴定
(1)菌落及菌体形态观察：将菌株W208在LB平板培养基上进行划线培养，在37℃恒温培养48h后，菌落形状隆起、不光滑、不透明、呈乳白色、边缘呈树枝状，菌落形态见图1。在扫描电子显微镜下观察，菌体呈杆状，长为1.0～2.0μm，宽为0.3～0.6μm，有鞭毛，其扫描电镜图为图2。进行革兰氏染色，其为阳性，革兰氏染色结果见图3。
(2)菌株W208的培养特征观察：将菌株W208按体积比1.5％的接种量分别接种于LB液体培养基中，置于不同温度下摇床培养24h，在15～45℃环境中的菌株能够生长，且30～40℃环境下的菌株生长最快，其最适生长曲线如图4所示；置于不同初始pH值环境下摇床培养24h，在pH值范围为3～9的环境中菌株能够生长，且在pH值为6～8的环境中生长最快，最适pH值生长曲线见图5。置于37℃、pH值为7.0的条件下摇床培养，于第0、2、4、6、8、10、12、24、36、48、60、72、96h取培养液于600nm波长下测定吸光值并绘制成生长曲线，见图6，在培养6h时开始进入对数生长期，到24h时达到生长高峰，24h后进入稳定期，稳定期达24h。其中LB液体培养基包括：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L，pH值为6.0～8.0，在121℃灭菌20min。
(3)菌株W208的生理生化特征：菌株W208能够在含葡萄糖、甘露糖、木糖、果糖、蔗糖、棉子糖、龙胆二糖、纤维二糖、麦芽糖、蜜二糖、乳糖、水苏糖、海藻糖、山梨醇、甘露醇、淀粉和明胶为碳源的培养基中生长；通过实验发现形成芽孢试验、氧化酶试验、接触酶试验和淀粉水解试验结果均为阳性，孢囊膨大试验结果为阴性，对利福霉素SV、林可霉素、氯化锂、亚碲酸钾、氨曲南、丁酸钠、D-丝氨酸、溴酸钠、1％乳酸钠、1％氯化钠、4％氯化钠、8％氯化钠敏感，对醋竹桃霉素、万古霉素、二甲胺四环素、四唑蓝、四唑紫、十四烷硫酸钠、萘啶酸不敏感，见表1。
表1菌株W208的生理生化特征
(4)菌株W208的分子生物学鉴定：采用细菌全基因组快速抽提试剂盒，提取菌株W208的全基因组，通过选用细菌16S rDNA通用引物27F和1492R进行PCR，然后测序分析。测序结果经BLAST比对，鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌，基因序列如SEQ ID NO:1，命名为：淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)W208，并于2016年9月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.13006。保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
实施例2淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)W208对乙酰木聚糖等的降解
(1)淀粉芽孢杆菌W208发酵液的制备：挑取斜面保存的解淀粉芽孢杆菌W208一环，接种到LB液体培养基中37℃活化16h得到种子液。将种子液按体积比为1.5％的接种量分别接入LB液体培养基和发酵培养基中，在温度37℃、pH值为6.5的条件下分别发酵12、24、48、72和96h，得淀粉芽孢杆菌W208发酵液，用细胞破碎仪将菌体裂解，离心，取上清液，检测其所含乙酰木聚糖酯酶、木聚糖酶活力、总糖浓度及还原糖的浓度。其中LB液体培养基包括：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L，pH值为6.0～8.0，在121℃灭菌20min；所述发酵培养基包括：蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠10g/L，乙酰木聚糖3g/L，pH值为6.0～8.0，在121℃灭菌20min。
(2)乙酰木聚糖酯酶活力测定：以对硝基苯酚醋酸酯为底物，用分光光度法测定淀粉芽孢杆菌W208发酵液的上清液水解产物中对硝基苯酚的吸光值。具体步骤：取40μL对硝基苯酚醋酸酯溶液(0.1M，用DMSO溶解)，与860μL磷酸盐缓冲液(pH为6.5，0.05M)混匀，加入100μL所述上清液，40℃下准确反应30min后加入3mL甲醇中止反应，再加2mL去离子水混匀，于410nm波长下测吸光值。以对硝基苯酚为标准品做上述反应的标准曲线，见图7，根据标准曲线回归方程计算所述淀粉芽孢杆菌W208发酵液的上清液的硝基苯酚浓度。一个酶活性单位(U)定义为上述反应每分钟产生1μmol对硝基苯酚所需的酶量。试验重复3次，结果以平均值±标准偏差表示。实验结果见表2。
(3)木聚糖酶活力测定：取200μL底物溶液于10mL试管中(注：底物溶液为质量体积比为0.1％的木聚糖溶液，溶剂：pH为5.5的0.05M磷酸盐缓冲液)，加入50μL所述上清液，充分混合后于40℃反应30min，反应结束后，加入100μL DNS溶液，在沸水浴中反应5min，立即放置于冰水混合物中，待冷却后补加蒸馏水650μL使反应终体系为1mL，于540nm波长下测定吸光值。另做反应对照管试验：在含200μL底物溶液的试管中先加100μL DNS溶液，然后加入50μL上述发酵液上清，沸水浴反应5min，立即放置于冰水混合物中，待冷却后补加蒸馏水650μL使反应终体系为1mL，于540nm波长下测定吸光值。以木糖为标准品做上述反应的标准曲线，根据标准曲线回归方程计算淀粉芽孢杆菌W208发酵液上清液的木糖浓度。一个酶活性单位(U)定义为上述反应中每分钟产生1μmol木糖所需的酶量。试验重复3次，结果以平均值±标准偏差表示。实验结果见表2。
(4)总糖浓度测定：取0.015mL上清液加0.985mL蒸馏水，加0.5mL 5％苯酚溶液和2.5mL浓硫酸溶液，混匀后立即流水冷却，于100℃水浴15min，立即流水冷却，静置10min，于490nm下测吸光值。以木糖为标准品做上述反应的标准曲线，根据标准曲线回归方程计算淀粉芽孢杆菌W208发酵液上清液的总糖(木糖当量)浓度。试验重复3次，结果以平均值±标准偏差表示，结果见表2。
(5)还原糖浓度测定：取0.05mL上清液加0.2mL蒸馏水充分混合，加入0.1mL DNS，沸水浴反应5min后，立即放置于冰水混合物中，充分冷却后，补加蒸馏水使反应终体系为1mL，于540nm下测吸光值。以木糖为标准品做上述反应的标准曲线，根据标准曲线回归方程计算淀粉芽孢杆菌W208发酵液的上清液的还原糖(木糖当量)浓度。试验重复3次，结果以平均值±标准偏差表示，结果见表2。
表2解淀粉芽孢杆菌W208发酵液的上清的乙酰木聚糖酯酶活力、木聚糖酶活力、总糖浓度及还原糖浓度
由表2的实验结果可知，以LB液体培养基培养解淀粉芽孢杆菌W208，随着培养时间的延长，乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶活力均呈先上升后下降的变化趋势，在第48h时，乙酰木聚糖酯酶活力达到最大，为21.47±1.56U/mL，在第72h时，木聚糖酶活力达到最大，为0.39±0.02U/mL，在培养第96h时，基本检测不到乙酰木聚糖酯酶活力，木聚糖酶活力也下降到0.25±0.02U/mL；以发酵培养基(LB液体培养基+3g/L乙酰木聚糖)培养解淀粉芽孢杆菌W208，随着培养时间的增加，乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶活力均呈先上升后下降的变化趋势，在第48h时，乙酰木聚糖酯酶活力达到最大，为28.93±1.94U/mL，其明显高于LB液体培养基中同时段的相应酶活，在第72h时，木聚糖酶活力达到最大，为0.57±0.03U/mL，明显高于LB液体培养基中同时段的相应酶活，在培养第96h时，乙酰木聚糖酯酶活力和木聚糖酶活力有所下降，分别为11.57±0.69U/mL和0.40±0.02U/mL，依然明显高于LB液体培养基中同时段的相应酶活。上述结果表明解淀粉芽孢杆菌W208在LB液体培养基和发酵培养基(LB液体培养基+3mg/mL乙酰木聚糖)中发酵培养均能产生乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶，且乙酰木聚糖的添加有利于解淀粉芽孢杆菌W208产酶活力的提升，且本发明的解淀粉芽孢杆菌W208产乙酰木聚糖酯酶活力和木聚糖酶活力均显著高于现有商业模式菌株。同时，对发酵液的总糖浓度进行检测，从表2的实验结果发现随着发酵时间的延长，解淀粉芽孢杆菌W208所在两种培养基的总糖含量均呈逐渐下降趋势，其中发酵培养基(LB液体培养基+3g/L乙酰木聚糖)的总糖含量从3.54±0.27mg/mL下降至0.88±0.09mg/mL，下降率达75.1％，说明解淀粉芽孢杆菌W208可以很好的降解和利用乙酰木聚糖；对发酵液的还原糖浓度进行检测，结果发现随着发酵时间的延长，解淀粉芽孢杆菌W208菌株所在发酵培养基的还原糖浓度均呈先上升后下降的变化趋势，说明解淀粉芽孢杆菌W208能够高效降解乙酰木聚糖产生的还原糖，且这些还原糖可被其利用，其对乙酰木聚糖的降解能力显著高于现有商业模式菌株。
对比例1
以现有技术中使用较为普遍的解淀粉芽孢杆菌BNCC132483(＝ATCC 23350)为例与本发明进行对比。解淀粉芽孢杆菌BNCC132483(＝ATCC 23350)购买自北京北纳创联生物技术研究院，该菌株目前主要用于农业和水产养殖中。
采用与本发明实施例2相同的方法及实验条件检验解淀粉芽孢杆菌BNCC132483发酵液的上清的乙酰木聚糖酯酶活力、木聚糖酶活力、总糖浓度及还原糖浓度。检测结果见表3。
表3解淀粉芽孢杆菌BNCC132483发酵液上清的乙酰木聚糖酯酶活力、木聚糖酶活力、总糖浓度及还原糖浓度
从表3的实验结果可以看出，以LB液体培养基培养解淀粉芽孢杆菌BNCC132483随着培养时间的延长，乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶活力均呈先上升后下降的变化趋势，在第48h时，乙酰木聚糖酯酶活力达到最大，仅为9.23±0.85U/mL，本发明保护的菌株是该菌株产乙酰木聚糖酯酶的2.33倍，在第72h时，木聚糖酶活力达到最大，仅为0.39±0.02U/mL，本发明保护的菌株是该菌株产木聚糖酶活力的2.05倍；而以发酵培养基(LB液体培养基+3g/L乙酰木聚糖)培养解淀粉芽孢杆菌W208，随着培养时间的增加，乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶活力同样呈先上升后下降的变化趋势，在第48h时，乙酰木聚糖酯酶活力达到最大，仅为10.15±0.86U/mL，本发明保护的菌株是该菌株产乙酰木聚糖酯酶的2.85倍，在第72h时，木聚糖酶活力达到最大，为0.26±0.02U/mL，同期本发明保护的菌株是该菌株产木聚糖酶活力的2.19倍。并对发酵液的总糖浓度进行检测时，解淀粉芽孢杆菌BNCC132483所在发酵培养基的总糖含量是从3.55±0.25mg/mL下降到2.40±0.05mg/mL，其下降率为32.4％，可以看出解淀粉芽孢杆菌BNCC132483对乙酰木聚糖的降解和利用能力远远低于本发明的菌株，且对发酵液的还原糖浓度进行检测，结果发现其发酵的各个时段所在发酵培养基的还原糖浓度均显著低于本发明的菌株，说明解淀粉芽孢杆菌W208较现有技术中普通解淀粉芽孢杆菌具有更好的降解乙酰木聚糖和降解木聚糖的性能。
可见，本发明提供的解淀粉芽孢杆菌W208与现有同类型的模式菌株相比，其能够产生更高浓度的乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶，其具有明显优于商业模式菌株的降解能力，可以更高效地降解乙酰木聚糖，具有较高的工业应用价值。
以上仅是本发明的若干个具体实施例。本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 福建省农业科学院农业工程技术研究所
<120> 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1369
<212> DNA
<213> 解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens
<400> 1
cgggtgttaa aactctcgtg gtgtgacggg cggtgtgtac aaggcccggg aacgtattca 60
ccgcggcatg ctgatccgcg attactagcg attccagctt cacgcagtcg agttgcagac 120
tgcgatccga actgagaaca gatttgtggg attggcttaa cctcgcggtt tcgctgccct 180
ttgttctgcc cattgtagca cgtgtgtagc ccaggtcata aggggcatga tgatttgacg 240
tcatccccac cttcctccgg tttgtcaccg gcagtcacct tagagtgccc aactgaatgc 300
tggcaactaa gatcaagggt tgcgctcgtt gcgggactta acccaacatc tcacgacacg 360
agctgacgac aaccatgcac cacctgtcac tctgcccccg aaggggacgt cctatctcta 420
ggattgtcag aggatgtcaa gacctggtaa ggttcttcgc gttgcttcga attaaaccac 480
atgctccacc gcttgtgcgg gcccccgtca attcctttga gtttcagtct tgcgaccgta 540
ctccccaggc ggagtgctta atgcgttagc tgcagcacta aggggcggaa accccctaac 600
acttagcact catcgtttac ggcgtggact accagggtat ctaatcctgt tcgctcccca 660
cgctttcgct cctcagcgtc agttacagac cagagagtcg ccttcgccac tggtgttcct 720
ccacatctct acgcatttca ccgctacacg tggaattcca ctctcctctt ctgcactcaa 780
gttccccagt ttccaatgac cctccccggt tgagccgggg gctttcacat cagacttaag 840
aaaccgcctg cgagcccttt acgcccaata attccggaca acgcttgcca cctacgtatt 900
accgcggctg ctggcacgta gttagccgtg gctttctggt taggtaccgt caaggtgccg 960
ccctatttga acggcacttg ttcttcccta acaacagagc tttacgatcc gaaaaccttc 1020
atcactcacg cggcgttgct ccgtcagact ttcgtccatt gcggaagatt ccctactgct 1080
gcctcccgta ggagtctggg ccgtgtctca gtcccagtgt ggccgatcac cctctcaggt 1140
cggctacgca tcgtcgcctt ggtgagccgt tacctcacca actagctaat gcgccgcggg 1200
tccatctgta agtggtagcc gaagccacct tttatgtctg aaccatgcgg ttcaaacaag 1260
catccggtat tagccccggt ttcccggagt tatcccagtc ttacaggcag gttacccacg 1320
tgttactcac ccgtccgccg ctaacatcag ggagcaagct cccatcttc 1369
Claims (8)
1.一株解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述菌株保藏名称为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）W208，于2016年9月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.13006。
2.根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述菌株的形态特征为：细胞形态呈杆状，长为1.0~2.0 μm，宽为0.3~0.6 μm，有鞭毛，革兰氏染色为阳性；在LB平板培养基上培养48 h后，菌落形状隆起、不光滑、不透明、呈乳白色、边缘呈树枝状；其生长的适合pH值为6.0~8.0，适合温度为30~40℃。
3.一种如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌在制备乙酰木聚糖酯酶中的应用。
4.根据权利要求3所述的解淀粉芽孢杆菌在制备乙酰木聚糖酯酶中的应用，以所述解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）W208作为发酵菌株进行液体发酵，制备乙酰木聚糖酯酶。
5.一种如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌在降解乙酰木聚糖中的应用。
6.根据权利要求5所述的解淀粉芽孢杆菌在降解乙酰木聚糖中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
（a）制备种子液：挑取斜面保存的解淀粉芽孢杆菌W208，接种到LB液体培养基中30~40℃活化16~24 h，得到种子液；
（b）制备发酵液：将所述种子液按体积比为1.5％的接种量分别接入LB液体培养基或发酵培养基中，在温度30~40℃、pH值为6.0~8.0的条件下发酵12~96 h，得发酵液；
（c）将所述发酵液加入到乙酰木聚糖或含有乙酰木聚糖的材料中，在温度30~40℃、pH值为6.0~8.0的条件下进行降解。
7.根据权利要求6所述的解淀粉芽孢杆菌在降解乙酰木聚糖中的应用，其特征在于，步骤（a）和（b）所述LB液体培养基中含有蛋白胨10 g/L、酵母膏5 g/L、氯化钠10 g/L，其pH值为6.0~8.0。
8.根据权利要求6或7所述的解淀粉芽孢杆菌在降解乙酰木聚糖中的应用，其特征在于，步骤（b）所述发酵培养基中含有蛋白胨10 g/L、酵母膏5 g/L、氯化钠10 g/L、乙酰木聚糖3 g/L，其pH值为6.0~8.0。
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Address after: 350003 No. 54, 247 North Road, Gulou District, Fujian, Fuzhou Patentee after: Fujian Academy of Agricultural Sciences Agricultural Product Processing Research Institute Address before: 350000 No. 54 North 247 Road, Fujian, Fuzhou Patentee before: INSTITUTE OF AGRICULTURAL ENGINEERING TECHNOLOGY, FUJIAN ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES |
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