CN105994938A - 一种复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法 - Google Patents

Abstract

一种复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法属生物饲料技术领域，本发明包括下列步骤：1.选过40目筛的玉米蛋白粉作为发酵原料；2.制备活菌数为1.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/ml的复合菌发酵种子液；3.将复合菌发酵种子液按6％接入玉米蛋白粉中，含水量为50％，自然pH值，混匀后得发酵基础料；4.将发酵基础料按40‑50cm厚度摊铺在发酵池底，发酵池温度保持在30～35℃，厌氧发酵72‑96h，得到发酵玉米蛋白粉；5.将发酵玉米蛋白粉在温度为50～55℃下烘干，降至室温，即得复合菌固态发酵玉米蛋白粉成品；本发明能将玉米蛋白大分子降解为小肽和游离氨基酸等，并有效去除苦味，提高适口性，可作为一种优质的蛋白质饲料资源，在饲料中添加能显著提高动物的免疫机能。

Description

一种复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法

技术领域

本发明属生物饲料技术领域，具体涉及一种复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法。

背景技术

玉米蛋白粉又称玉米黄粉，其外观呈金黄色颗粒状，有玉米发酵的特殊气味，难溶于水。玉米蛋白粉的蛋白含量高达55％以上，淀粉15％，脂肪7％，纤维含量极低，仅为2％，但是氨基酸组成极不平衡，其中亮氨酸含量较高(15.1％)，但是色氨酸(1.2％)和蛋氨酸(1.8％)含量较低，再加上玉米蛋白粉本身含有苦味适口性差，造成了在动物饲料中的应用程度很低。

目前，常用的玉米蛋白粉处理方法有酶解法和微生物发酵法。酶解法主要是利用细胞产生的具有专一性的生物催化剂，对玉米蛋白粉进行水解得到玉米肽，但是酶解法成本高，反应体系中反应过程难以控制，易造成各批次间产品分子组成的差异，而且反应结束后，需改变水解条件或热处理钝化酶，进而降低酶的利用率，增加生产成本，产品的转化率较低。微生物发酵处理玉米蛋白粉，主要依靠微生物分泌的蛋白酶系，将大分子的玉米蛋白降解成小肽、游离氨基酸等，在降解蛋白质的同时，也产生了大量的有益菌、有机酸等次级代谢产物，能够有效去除苦味，降低抗营养因子。发酵玉米蛋白粉作为一种优质的蛋白质来源，具有促进肠道发育，刺激和诱导小肠绒毛刷状缘分泌消化酶，促进畜禽生长，提高饲料利用率，增强机体的免疫机能等优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能将玉米蛋白大分子降解为小肽和游离氨基酸等、有效去除苦味、提高适口性，且能显著提高动物机体免疫机能的复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制备方法。

本发明的一种复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法，包括下列步骤：

1.1选取过40目筛的玉米蛋白粉作为发酵原料；

1.2制备活菌数为1.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/ml的复合菌发酵种子液，包括下列步骤：

1.2.1将番茄汁20mL、酵母提取物5g、牛肉膏10g、乳糖20g、葡萄糖2g、K₂HPO₄2g、吐温801g、乙酸钠5g、水1000ml，pH值7.0，作为乳酸菌液体培养基；

1.2.2用无菌吸管吸取步骤1.2.1所得的乳酸菌液体培养基，滴入装有乳酸菌冻干粉的瓶中，乳酸菌液体培养基和乳酸菌冻干粉的比例为1：10，按100次/min振荡，得到呈悬浮状的乳酸菌液；

1.2.3用无菌吸管吸取步骤1.2.2所得的全部乳酸菌悬浮液，移植到MRS固体培养基中，37℃培养36～48h，然后接种到MRS斜面培养基上，斜面培养36～48h，再接种到步骤1.2.1的液体培养基中，进行振荡频率为160次/min的摇瓶培养12～24h，得到活菌数为1.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/ml的乳酸菌发酵种子液；所述MRS固体培养基的配方为：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母粉10g、K₂HPO₄2g、柠檬酸二胺2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温-801mL、MgSO₄.7H₂O 0.25g、H₂O 1000mL，琼脂20g。

1.2.4将马铃薯200g/l、葡萄糖20g/l、水1000ml，作为黑曲霉液体培养基；

1.2.5用无菌吸管吸取步骤1.2.4所得的黑曲霉液体培养基，滴入装有黑曲霉冻干粉的瓶中，黑曲霉液体培养基和黑曲霉冻干粉的比例为1：10，按100次/min振荡得到呈悬浮状的黑曲霉菌液；

1.2.6用无菌吸管吸取步骤1.2.5所得的全部黑曲霉悬浮液，移植到察氏琼脂固体培养基中，在30℃培养72h，然后接种到察氏琼脂斜面培养基上，斜面培养72h，再接种到步骤1.2.4的黑曲霉液体培养基中，进行振荡频率100次/min的摇瓶培养72～96h，得到活菌数为1.0×10⁸～1.0×10⁹个/ml的黑曲霉发酵种子液；所述察氏琼脂固体培养基的配方为：硝酸钠3.0g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、蔗糖30.0g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。

1.2.7将马铃薯200g/l、葡萄糖20g/l、水1000ml，作为酵母菌液体培养基；

1.2.8用无菌吸管吸取步骤1.2.7所得的酵母菌液体培养基，滴入装有酵母菌冻干粉的瓶中，酵母菌液体培养基和酵母菌冻干粉的比例为1：10，按120次/min振荡，得到呈悬浮状的酵母菌液；

1.2.9用无菌吸管吸取步骤1.2.8所得的全部酵母菌悬浮液，移植到麦芽汁琼脂固体培养基中，在30℃培养36～48h，然后接种到麦芽汁琼脂斜面培养基上，斜面培养36～48h，再接种到步骤1.2.7的液体培养基中，进行振荡频率为120次/min的摇瓶培养24～36h，得到活菌数为1.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/ml的酵母菌发酵种子液；所述麦芽汁琼脂固体培养基的配方为：麦芽汁150mL、琼脂3g、自然pH值。

1.2.10将步骤1.2.3所得的乳酸菌发酵种子液、步骤1.2.6所得的黑曲霉发酵种子液和步骤1.2.9所得的酵母菌发酵种子液按体积比1:1:1混合，按5～10％的接菌量接种到100L装有复合菌发酵种子液培养基的种子罐中，培养72～96h，得到活菌数为1.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/ml的复合菌发酵种子液，所述复合菌发酵种子液以5～10％的接菌量接种到100L种子罐中，是指发酵罐的装液量为发酵罐体积的70％，接菌量指的是这70％的5～10％；所述的复合菌发酵种子液培养基配方为：蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCL 5g、KH₂PO₄0.036g、MgSO₄0.05g、NaH₂PO₄0.107g、CaCl₂0.0002g、ZnCl₂0.014g、FeSO₄0.0002g、水1000ml。

1.3将步骤1.2制备的复合菌发酵种子液按6％(v/w)接入步骤1.1的玉米蛋白粉中，调整含水量为50％，自然pH值，混合均匀后得到发酵基础料；

1.4将步骤1.3所得的发酵基础料按40-50cm的厚度摊铺在发酵池底，发酵池温度保持在30～35℃，厌氧发酵72～96h，得到发酵玉米蛋白粉；

1.5将步骤1.4所得的发酵玉米蛋白粉在温度为50～55℃下烘干；

1.6待步骤1.5的发酵玉米蛋白粉降至室温，即得复合菌固态发酵玉米蛋白粉成品。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1.玉米蛋白粉在乳酸菌、黑曲霉及酵母菌的复合发酵下，产生的各种蛋白酶类能够有效地将玉米蛋白大分子降解为小肽和游离氨基酸等，并有效去除苦味，提高适口性，从而成为一种优质的蛋白质饲料资源；

2.在饲料中添加能够显著提高动物机体的免疫机能。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明提供的复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法进行详细的说明。

实施例1

参照本实施例的复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制做方法，它包括以下具体步骤：

(1)发酵原料的制备

选取过40目筛(0.42mm)的玉米蛋白粉作为发酵原料。

(2)复合菌发酵种子液的制备

用无菌吸管吸取适宜的液体培养基，滴入乳酸菌冻干粉保存瓶中，轻轻振荡，使冻干菌体呈悬浮状，吸取全部菌悬液，移植于MRS固体培养基中，在37℃培养36h后，接种到MRS斜面培养基上，斜面培养36h后，接种到液体培养基中，摇瓶培养12h，得到活菌数为1.0×10⁸的种子液；用无菌吸管吸取适宜的液体培养基，滴入装有黑曲霉冻干粉的瓶中，振荡使冻干菌体呈悬浮状，用无菌吸管吸取全部悬浮液，移植到察氏琼脂固体培养基中，在30℃培养72h，然后接种到察氏琼脂斜面培养基上，斜面培养72h，再接种到液体培养基中，进行振荡频率100次/min的摇瓶培养72h，得到活菌数为1.0×10⁸个/ml的黑曲霉发酵种子液；用无菌吸管吸取适宜的液体培养基，滴入装有酵母菌冻干粉的瓶中，振荡使冻干菌体呈悬浮状，用无菌吸管吸取全部悬浮液，移植到麦芽汁琼脂固体培养基中，在30℃培养36h，然后接种到麦芽汁琼脂斜面培养基上，斜面培养36h，再接种到液体培养基中，进行振荡频率为120次/min的摇瓶培养24h，得到活菌数为1.0×10⁸cfu/ml的酵母菌发酵种子液；将制得的乳酸菌发酵种子液、黑曲霉发酵种子液及酵母菌发酵种子液按照体积比1:1:1混合，按5-10％的接菌量接种到100L复合菌种子罐中，培养72h，得到活菌数为1.0×10⁸cfu/ml的复合菌发酵种子液。

(3)发酵

将上述制备的复合发酵种子液按6％(v/w)接种到玉米蛋白粉中，调整含水量为50％，pH值自然，混合均匀后得到发酵基础料；接种后的发酵基础料按厚度40cm，均匀的摊铺在发酵池底，发酵池温度保持在30℃，搅拌均匀后，厌氧发酵72h，得到发酵玉米蛋白粉。

(4)烘干

发酵后的产物全部移入流化床中进行烘干，烘干温度控制在50℃，待烘干后的产物降至室温后，即得发酵玉米蛋白粉成品。

实施例2

参照本实施例的复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制做方法，它包括以下具体步骤：

(1)发酵原料的制备

选取过40目筛(0.42mm)的玉米蛋白粉作为发酵原料。

(2)复合菌发酵种子液的制备

用无菌吸管吸取适宜的液体培养基，滴入乳酸菌冻干粉保存瓶中，轻轻振荡，使冻干菌体呈悬浮状，吸取全部菌悬液，移植于MRS固体培养基中，在37℃培养42h后，接种到MRS斜面培养基上，斜面培养42h后，接种到液体培养基中，摇瓶培养18h，得到活菌数为5.0×10⁸的种子液；用无菌吸管吸取适宜的液体培养基，滴入装有黑曲霉冻干粉的瓶中，振荡使冻干菌体呈悬浮状，用无菌吸管吸取全部悬浮液，移植到察氏琼脂固体培养基中，在30℃培养84h，然后接种到察氏琼脂斜面培养基上，斜面培养84h，再接种到液体培养基中，进行振荡频率100次/min的摇瓶培养84h，得到活菌数为5.0×10⁸个/ml的黑曲霉发酵种子液；用无菌吸管吸取适宜的液体培养基，滴入装有酵母菌冻干粉的瓶中，振荡使冻干菌体呈悬浮状，用无菌吸管吸取全部悬浮液，移植到麦芽汁琼脂固体培养基中，在30℃培养42h，然后接种到麦芽汁琼脂斜面培养基上，斜面培养42h，再接种到液体培养基中，进行振荡频率为120次/min的摇瓶培养30h，得到活菌数为5.0×10⁸cfu/ml的酵母菌发酵种子液；将制得的乳酸菌发酵种子液、黑曲霉发酵种子液及酵母菌发酵种子液按照体积比1:1:1混合，按7％的接菌量接种到100L复合菌种子罐中，培养84h，得到活菌数为5.0×10⁸cfu/ml的复合菌发酵种子液。

(3)发酵

将上述制备的复合发酵种子液按6％(v/w)接种到玉米蛋白粉中，调整含水量为50％，pH值自然，混合均匀后得到发酵基础料；接种后的发酵基础料按厚度45cm，均匀的摊铺在发酵池底，发酵池温度保持在32℃，搅拌均匀后，厌氧发酵84h，得到发酵玉米蛋白粉。

(4)烘干

发酵后的产物全部移入流化床中进行烘干，烘干温度控制在53℃，待烘干后的产物降至室温后，即得发酵玉米蛋白粉成品。

实施例3

参照本实施例的复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制做方法，包括以下具体步骤：

(1)发酵原料的制备

选取过40目筛(0.42mm)的玉米蛋白粉作为发酵原料

(2)复合菌发酵种子液的制备

用无菌吸管吸取适宜的液体培养基，滴入乳酸菌冻干粉保存瓶中，轻轻振荡，使冻干菌体呈悬浮状，吸取全部菌悬液，移植于MRS固体培养基中，在37℃培养48h后，接种到MRS斜面培养基上，斜面培养48h后，接种到液体培养基中，摇瓶培养24h，得到活菌数为1.0×10⁹的种子液；用无菌吸管吸取适宜的液体培养基，滴入装有黑曲霉冻干粉的瓶中，振荡使冻干菌体呈悬浮状，用无菌吸管吸取全部悬浮液，移植到察氏琼脂固体培养基中，在30℃培养96h，然后接种到察氏琼脂斜面培养基上，斜面培养96h，再接种到液体培养基中，进行振荡频率100次/min的摇瓶培养96h，得到活菌数为1.0×10⁹个/ml的黑曲霉发酵种子液；用无菌吸管吸取适宜的液体培养基，滴入装有酵母菌冻干粉的瓶中，振荡使冻干菌体呈悬浮状，用无菌吸管吸取全部悬浮液，移植到麦芽汁琼脂固体培养基中，在30℃培养48h，然后接种到麦芽汁琼脂斜面培养基上，斜面培养48h，再接种到液体培养基中，进行振荡频率为120次/min的摇瓶培养30h，得到活菌数为1.0×10⁹cfu/ml的酵母菌发酵种子液；将制得的乳酸菌发酵种子液、黑曲霉发酵种子液及酵母菌发酵种子液按照体积比1:1:1混合，按10％的接菌量接种到100L复合菌种子罐中，培养96h，得到活菌数为1.0×10⁹cfu/ml的复合菌发酵种子液。

(3)发酵

将上述制备的复合发酵种子液按6％(v/w)接种到玉米蛋白粉中，调整含水量为50％，pH值自然，混合均匀后得到发酵基础料；接种后的发酵基础料按厚度50cm均匀的摊铺在发酵池底，发酵池温度保持在35℃，搅拌均匀后，厌氧发酵96h，得到发酵玉米蛋白粉。

(4)烘干

发酵后的产物全部移入流化床中进行烘干，烘干温度控制在55℃，待烘干后的产物降至室温后，即得发酵玉米成品。

通过以下试验数据，可以体现采用本发明制作的复合菌固态发酵玉米蛋白粉的实际应用效果：

一、复合菌固态发酵对玉米蛋白粉营养成分及氨基酸组成的含量

1、材料与方法

玉米蛋白粉(市售)，乳酸菌、黑曲霉及酵母菌为吉林省农业科学院畜牧分院动物营养研究所自主保藏。

MRS固体培养基(乳酸菌的培养基)的配方为：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母粉10g、K₂HPO₄2g、柠檬酸二胺2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温-801mL、MgSO₄.7H₂O 0.25g、H₂O 1000mL，琼脂20g。

麦芽汁琼脂固体培养基(酵母菌的培养基)的配方为：麦芽汁150mL、琼脂3g、pH自然(约6.4)。

察氏琼脂固体培养基(黑曲霉的培养基)的配方为：硝酸钠3.0g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、蔗糖30.0g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。

PDA液体培养基(酵母菌、黑曲霉的培养基)的配方为：马铃薯200g/l、葡萄糖20g/l、水1000ml，121℃条件灭菌，。

乳酸菌液体培养基(乳酸菌的培养基)的配方为：番茄汁20mL、酵母提取物5g、牛肉膏10g、乳糖20g、葡萄糖2g、k₂HPO₄2g、2g吐温801g、乙酸钠5g、水1000ml，pH 7.0，121℃条件灭菌。

复合菌发酵种子液培养基的配方为：蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCL 5g，KH₂PO₄0.036g，MgSO₄0.05g，NaH₂PO₄0.107g，CaCl₂0.0002g，ZnCl₂0.014g，FeSO₄0.0002g，水1000ml，121℃条件灭菌。

2.发酵样品制备及测定指标

按照本发明的发酵方法，将玉米蛋白粉密闭发酵96h。发酵结束后取样，于50～55℃烘干备测。测定指标有：粗蛋白、肽得率、总糖、还原糖和氨基酸。

3.结果与分析

复合微生物发酵对玉米蛋白粉营养成分及氨基酸组成的影响见表1和2。发酵后粗蛋白和还原糖含量分别提高13％和8.36倍，总糖含量降低36％，多肽得率增加2.07倍。

表1复合微生物发酵对玉米蛋白粉营养成分的影响

复合菌发酵玉米蛋白粉对氨基酸组成影响较大，发酵后总必需氨基酸和总氨基酸含量分别增加13％和12％，各必需氨基酸组成均有不同程度增加，其中苯丙氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸增加比例较大，分别比未发酵时提高12.5％、8.5％、13.6％、11.9％和25.4％；同样发酵对非必需氨基酸组成也有较大影响，脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、组氨酸和精氨酸发酵后分别增加10.9％、12.8％、16.1％、13.3％、11.3％、12.0％、12.1％和10.1％。

表2复合微生物发酵对玉米蛋白粉氨基酸组成的影响

二、复合菌发酵玉米蛋白粉对肉仔鸡生长性能、脏器指数、肠道微生物及抗氧化能力的影响

为了进一步证明复合菌固态发酵玉米蛋白粉的饲喂效果，开展了对肉仔鸡的饲喂试验。

1、材料与方法

复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制备，按照本发明的发酵方法，将玉米蛋白粉密闭发酵96h，发酵结束后于50～55℃烘干备用。

试验设计：选取7日龄肉仔鸡150只，随机分为3组，每组10个重复，每个重复5只，公母各占1/2，重复之间体重接近。对照组饲喂不添加发酵玉米蛋白粉的基础饲粮，其为参照美国NRC(1994)营养需要配制的粉状配合饲料、基础饲粮组成及营养水平见表3。试验组饲喂在基础饲粮中分别添加5％和10％的发酵玉米蛋白粉的试验饲粮。试验期56d。肉仔鸡自由采食，充足饮水，按正常免疫程序进行免疫接种。

表3饲粮组成及营养水平(风干基础)

¹⁾预混料为每千克饲粮提供：VA 8 000 IU、VB₁4mg、VB₂3.6mg、VB₅40mg、VB₆4mg、VB₁₂0.02mg、VD₃3 000 IU、VE 20 IU、VK₃2mg、生物素0.15mg、叶酸1.0mg、D-泛酸11mg、烟酸10mg、抗氧化剂100mg、Cu 10mg、Fe 80mg、Mn 80mg、Zn 75mg、I 0.40mg、Se 0.30mg。

样品采集与制备：分别于第28天和第56天称重结束后，每重复按平均体重选取1只鸡，颈部采血后，迅速4000r/min离心10min，取适量血清，于-20℃条件下密封保存，备测。同时，进行屠宰试验，记录活体重与胴体重后，立即无菌解剖并摘取肝脏，胸腺、肾脏、法氏囊，除去血液，滤纸吸干，称重，计算脏器指数。

取1g肝脏组织，加9倍冰生理盐水，剪碎，置玻璃匀浆器中破碎，制成10％的组织匀浆液，2000r/min离心15min，取上清液于-20℃条件下保存，备测肝脏抗氧化指标。

检测指标：每周测定各组肉仔鸡采食量、体增重，计算的平均日采食量(g/d)、平均日增重(g/d)和料重比(日采食量/日体增重)。

器官指数(mg/g)＝(器官重量mg/体重g)

盲肠内容物细菌数量的分析：无菌条件下取盲肠食糜0.5g于无菌试管内，加入4.5mL无菌生理盐水，稀释度为10^-1，漩涡混匀后，静置10min后，吸取上清100μL于900μL无菌生理盐水的无菌离心管中，此时稀释梯度为10^-2，以此类推，进行梯度稀释，直至10^-7。在无菌环境下取100μL，用涂布棒均匀涂在4种培养基上，培养基及培养条件见表4。每个稀释度重复3次。恒温培养箱进行培养，对菌落进行计数，最终的结果用每克内容物所含菌落数进行表示(lgcfu/g)。

表4肠道微生物的培养方法

血清和肝脏抗氧化指标：血清和肝脏T-SOD、GSH-Px、MDA及蛋白含量均用Specord S600紫外可见光光度计进行测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所；血清抑制羟自由基能力和抗超氧阴离子自由基活力测定试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所，测定方法严格按照试剂盒说明书要求操作。

2.结果与分析

2.1复合菌发酵玉米蛋白粉对肉仔鸡生长性能的影响

由表5可知，日粮中添加发酵玉米蛋白粉对肉仔鸡的平均日增重、日采食量及料重比等生长性能指标的影响差异不显著(P＞0.05)。

表5复合微生物发酵玉米蛋白粉对肉仔鸡生长性能的影响

注:同行上标相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

2.2复合微生物发酵玉米蛋白粉对肉仔鸡脏器指数的影响

从表中可以看出，肉鸡日粮中添加发酵玉米蛋白粉，对肉鸡的脏器指数有显著影响。在28日龄时，试验2组肉鸡的肝脏指数显著高于对照组(P＜0.05)，肾脏指数和法氏囊指数极显著高于对照组(P＜0.01)，但是试验1组与对照组差异不显著(P>0.05)；在56日龄时，试验2组肉鸡的肾脏和胸腺指数极显著高于对照组(P＜0.01)，但是肝脏和法氏囊指数差异不显著(P>0.05)。

表6复合微生物发酵玉米蛋白粉对肉仔鸡脏器指数的影响

注:同行上标相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

2.3复合微生物发酵玉米蛋白粉对肉仔鸡盲肠微生物的影响

从表中可以看出，肉鸡日粮中添加发酵玉米蛋白粉，能够明显减少肉鸡肠道中有害菌的数量，增加有益菌的数量。试验2组与对照组相比，28日龄时肉鸡盲肠中大肠杆菌的数量显著减少(P<0.01)；沙门氏菌的数量也呈现降低趋势，但是差异不显著(P>0.05)；试验组肉鸡肠道中乳酸杆菌的数量相较于对照组有显著提高(P＜0.01)，双歧杆菌的数量呈现上升趋势，差异不显著(P>0.05)。

表7复合微生物发酵玉米蛋白粉对肉仔鸡肠道菌群的影响(lgcfu/g)

注:同行上标相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

2.4复合微生物发酵玉米蛋白粉对肉仔鸡抗氧化能力的影响

2.4.1复合微生物发酵玉米蛋白粉对肉仔鸡血液抗氧化能力的影响

从表中可以看出，肉鸡日粮中添加发酵玉米蛋白粉，对28日龄肉鸡血清中的SOD和GSH-Px活性有一定影响，但差异不显著(P＞0.05)，能够显著降低MDA含量(P＜0.01)；56日龄时试验2组GSH-Px活性极显著(P＜0.01)高于对照组；试验组组肉鸡的血清中对自由基抑制及清除能力明显高于对照组(P＜0.01)；说明饲喂发酵玉米蛋白粉能显著增强肉鸡的抗氧化能力。

表8发酵产物对肉鸡血清抗氧化能力的影响

注:同行上标相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

2.4.2复合微生物发酵玉米蛋白粉对肉仔鸡肝脏抗氧化能力的影响

从表中可以看出，日粮中添加发酵玉米蛋白粉对肉鸡肝脏中T-SOD及MDA的含量有显著影响。28日龄时，试验组与对照组相比，T-SOD活力显著提高(P＜0.05)，试验组的MDA含量明显低于对照组(P＜0.01)，试验1和2两组间MDA含量无显著差异(P＞0.05)。

表9发酵产物对肉鸡肝脏抗氧化能力的影响

注:同行上标相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

3结论

玉米蛋白粉经复合菌固态发酵后，可显著提高蛋白质含量，并将大分子的植物蛋白降解成氨基酸。通过在肉仔鸡的试验证明，添加发酵玉米蛋白粉可显著提高肉鸡的免疫器官指数，降低肠道有害菌，增加有益菌数量，具有益生功能，并且能够显著提高机体的抗氧化能力。

Claims (5)

1.一种复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法，其特征在于包括下列步骤：

1.1选取过40目筛的玉米蛋白粉作为发酵原料；

1.2制备活菌数为1.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/ml的复合菌发酵种子液，包括下列步骤：

1.2.1将番茄汁20mL、酵母提取物5g、牛肉膏10g、乳糖20g、葡萄糖2g、K₂HPO₄2g、吐温801g、乙酸钠5g、水1000ml，pH值7.0，作为乳酸菌液体培养基；

1.2.2用无菌吸管吸取步骤1.2.1所得的乳酸菌液体培养基，滴入装有乳酸菌冻干粉的瓶中，乳酸菌液体培养基和乳酸菌冻干粉的比例为1：10，按100次/min振荡，得到呈悬浮状的乳酸菌液；

1.2.3用无菌吸管吸取步骤1.2.2所得的全部乳酸菌悬浮液，移植到MRS固体培养基中，37℃培养36～48h，然后接种到MRS斜面培养基上，斜面培养36～48h，再接种到步骤1.2.1的液体培养基中，进行振荡频率为160次/min的摇瓶培养12～24h，得到活菌数为1.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/ml的乳酸菌发酵种子液；

1.2.4将马铃薯200g/l、葡萄糖20g/l、水1000ml，作为黑曲霉液体培养基；

1.2.5用无菌吸管吸取步骤1.2.4所得的黑曲霉液体培养基，滴入装有黑曲霉冻干粉的瓶中，黑曲霉液体培养基和黑曲霉冻干粉的比例为1：10，按100次/min振荡得到呈悬浮状的黑曲霉菌液；

1.2.6用无菌吸管吸取步骤1.2.5所得的全部黑曲霉悬浮液，移植到察氏琼脂固体培养基中，在30℃培养72h，然后接种到察氏琼脂斜面培养基上，斜面培养72h，再接种到步骤1.2.4的黑曲霉液体培养基中，进行振荡频率100次/min的摇瓶培养72～96h，得到活菌数为1.0×10⁸～1.0×10⁹个/ml的黑曲霉发酵种子液；

1.2.7将马铃薯200g/l、葡萄糖20g/l、水1000ml，作为酵母菌液体培养基；

1.2.8用无菌吸管吸取步骤1.2.7所得的酵母菌液体培养基，滴入装有酵母菌冻干粉的瓶中，酵母菌液体培养基和酵母菌冻干粉的比例为1：10，按120次/min振荡，得到呈悬浮状的酵母菌液；

1.2.9用无菌吸管吸取步骤1.2.8所得的全部酵母菌悬浮液，移植到麦芽汁琼脂固体培养基中，在30℃培养36～48h，然后接种到麦芽汁琼脂斜面培养基上，斜面培养36～48h，再接种到步骤1.2.7的液体培养基中，进行振荡频率为120次/min的摇瓶培养24～36h，得到活菌数为1.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/ml的酵母菌发酵种子液；

1.2.10将步骤1.2.3所得的乳酸菌发酵种子液、步骤1.2.6所得的黑曲霉发酵种子液和步骤1.2.9所得的酵母菌发酵种子液按体积比1:1:1混合，按5～10％的接菌量接种到100L装有复合菌发酵种子液培养基的种子罐中，培养72～96h，得到活菌数为1.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/ml的复合菌发酵种子液，所述复合菌发酵种子液以5～10％的接菌量接种到100L种子罐中，是指发酵罐的装液量为发酵罐体积的70％，接菌量指的是这70％的5～10％；

1.3将步骤1.2制备的复合菌发酵种子液按6％(v/w)接入步骤1.1的玉米蛋白粉中，调整含水量为50％，自然pH值，混合均匀后得到发酵基础料；

1.4将步骤1.3所得的发酵基础料按40-50cm的厚度摊铺在发酵池底，发酵池温度保持在30～35℃，厌氧发酵72～96h，得到发酵玉米蛋白粉；

1.5将步骤1.4所得的发酵玉米蛋白粉在温度为50～55℃下烘干；

1.6待步骤1.5的发酵玉米蛋白粉降至室温，即得复合菌固态发酵玉米蛋白粉成品。

2.按权利要求1所述的复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法，其特征在于步骤1.2.3所述MRS固体培养基的配方为：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母粉10g、K₂HPO₄ 2g、柠檬酸二胺2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温-801mL、MgSO₄.7H₂O 0.25g、H₂O 1000mL，琼脂20g。

3.按权利要求1所述的复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法，其特征在于步骤1.2.6所述察氏琼脂固体培养基的配方为：硝酸钠3.0g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、蔗糖30.0g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。

4.按权利要求1所述的复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法，其特征在于步骤1.2.9所述麦芽汁琼脂固体培养基的配方为：麦芽汁150mL、琼脂3g、自然pH值。

5.按权利要求1所述的复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法，其特征在于步骤1.2.10所述的复合菌发酵种子液培养基配方为：蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCL 5g、KH₂PO₄0.036g、MgSO₄ 0.05g、NaH₂PO₄ 0.107g、CaCl₂ 0.0002g、ZnCl₂ 0.014g、FeSO₄ 0.0002g、水1000ml。