RU2646163C1 - Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур - Google Patents
Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур Download PDFInfo
- Publication number
- RU2646163C1 RU2646163C1 RU2016140511A RU2016140511A RU2646163C1 RU 2646163 C1 RU2646163 C1 RU 2646163C1 RU 2016140511 A RU2016140511 A RU 2016140511A RU 2016140511 A RU2016140511 A RU 2016140511A RU 2646163 C1 RU2646163 C1 RU 2646163C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hydrolyzate
- medium
- nutrient medium
- water
- preparing
- Prior art date
Links
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims abstract description 8
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims abstract description 10
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 235000013322 soy milk Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 9
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- 241001468229 Bifidobacterium thermophilum Species 0.000 description 4
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 4
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 4
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 2
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- FBEHFRAORPEGFH-UHFFFAOYSA-N Allyxycarb Chemical compound CNC(=O)OC1=CC(C)=C(N(CC=C)CC=C)C(C)=C1 FBEHFRAORPEGFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 102220547770 Inducible T-cell costimulator_A23L_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 1
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N lactulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N 0.000 description 1
- 229960000511 lactulose Drugs 0.000 description 1
- PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N lactulose keto form Natural products OCC(=O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур предусматривает получение соевого гидролизата из расчета 24-48 г сухого соевого молока на 1 л воды гидролизом с помощью пепсина в течение 48 ч с получением гидролизата. Полученный гидролизат подвергают фильтрации и стерилизации с последующим добавлением пептона, глюкозы и воды в заданном соотношении компонентов с получением питательной среды. Питательную среду нагревают, охлаждают, фильтруют, устанавливают рН среды в пределах 6,8-7,0 и стерилизуют при заданных параметрах. Изобретение позволяет упростить способ приготовления питательной среды. 4 пр.
Description
Предлагаемое изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к способам получения ростовой среды для молочнокислых бактерий, и может быть использовано в производстве лечебно-профилактических и лечебных препаратов.
В настоящее время в России идет активная разработка и внедрение безопасных, эффективных пробиотических препаратов при выращивании сельскохозяйственных животных и получении продукции животноводства. Пробиотики назначают для восстановления облигатной микрофлоры после длительного лечения антибиотиками и сульфаниламидными препаратами, терапии при гастритах, энтеритах, колитах. Пробиотики, нормализуя микрофлору кишечника животных, подавляют развитие кишечной палочки и гнилостных бактерий. Продукты жизнедеятельности молочнокислых бактерий благотворно влияют на секреторную деятельность желудочно-кишечного тракта, возбуждают аппетит, повышают усвояемость корма. Важное значение имеет также среда, на которой культивируют бактерии.
На данном этапе питательная среда должна быть достаточно бюджетной для производства, иметь низкую стоимость, включать все основные компоненты, соответствующие потребностям бактерий. Культивирование в такой среде должно способствовать, как минимум, сохранению пробиотических свойств микроорганизмов, обеспечивать достаточно длительное хранение при поддержании определенной массы жизнеспособных микроорганизмов, не требовать особенных условий хранения.
Известен способ получения питательной среды на основе печеночного настоя. Для ее приготовления к 1000 мл дистиллированной воды добавляют пептон, хлористый натрий, глюкозу, дрожжевой экстракт и печеночный настой. Смесь нагревают до кипения. После охлаждения фильтруют через ватно-марлевый фильтр и устанавливают рН-6,8. Среду стерилизуют автоклавированием при 1 атм. 30 минут. Среда имеет соломенный цвет с серо-белым осадком, легко разбивающимся при встряхивании. Количество жизнеспособных микробных клеток не менее 1⋅107(КОЕ), млн/см3.
Известен способ приготовления гидролизатной среды на основе гидролизата белкового компонента, включающий ферментативный гидролиз, смешивание с уксусной кислотой, кипячение, фильтрацию, разведение, введение в гидролизат стабилизирующих добавок, стерилизацию полученной гидролизатной среды, введение суточной культуры микроорганизмов, их культивирование. При этом ферментативный гидролиз проводят в два этапа, один в кислой среде с использованием пепсина, другой - в щелочной среде с использованием панкреатина с концентрацией 5-10 г/л. Выход гидролизата, из которого готовят гидролизатную среду, составляет не менее 82 об. %, а содержание аминокислот 2,2-2,5 г/л. В качестве стабилизирующих добавок, количество которых составляет не менее 0,59 об.%, используют агар-агар в количестве 0,8-2,0 г/л, NaCl - 2,0-5,0 г/л, лактулозу или лактозу - 0,15-15,0 г/л, пептон - 2,5-15,0 г/л, цистин или цистеин солянокислый - 0,15-0,5 г/л, аскорбиновую кислоту - 0,3-0,5 г/л. В качестве белкового компонента для приготовления гидролизатной среды может быть использована смесь компонентов животного и растительного происхождения (1).
За прототип мы взяли наиболее близкий к заявляемому техническому решению по совокупности существенных признаков и достигаемому результату способ, предусматривающий приготовление питательной среды на основе ферментативного гидролизата белкового компонента с использованием соевоевого молока, а в качестве фермента для гидролиза - пепсин(2).
Соевое молоко готовят путем разведения сухого соевого порошка в воде согласно рецептуре, обычная концентрация составляет 7,5% (75 грамм на 1 литр воды) с последующим отстаиванием, процеживанием и кипячением. После охлаждения до 38-40°C доводят pH молока до 1,3-4,5, после вышеуказанной коррекции pH в соевое молоко вносят пепсин, проводят термостатирование молока при 37 град. С в течение 4 часов, при этом в процессе гидролиза происходит сдвиг pH в щелочную сторону на 0,2. При проведении гидролиза при pH ниже 4,5 после его окончания pH корректируют раствором NaOH (20%) до 4,5. Получаемый гидролизат представляет собой однородную мутную жидкость с небольшим количеством осаждающихся на дне белесоватых хлопьев и со специфическим запахом и вкусом соевого молока. Отстоявшийся гидролизат сливают с осадка, разводят дистиллированной водой 1:1, добавляют агар-агар, расплавляют, вносят хлористый натрий, пептон, нагревают до 80 град. С. Далее устанавливают pH питательной среды 7,5-7,6, кипятят в течение 15 мин, отстаивают, сливают с осадка, доводят горячей дистиллированной водой до исходного объема, добавляют лактозу, аскорбиновую кислоту в количестве 0,5 г/л. В среду вносят 5% маточной культуры бифидобактерий, и/или лактобактерий, и/или молочнокислых стрептококков и проводят культивирование бактерий путем термостатирования в течение 18 час. Исследования проб полученной маточной бактериальной культуры показали полное отсутствие посторонней микрофлоры как сразу после окончания культивирования, так и спустя 30 суток, при этом титр на гидролизатно-соевоей среде составил до 10×107 микробных клеток в 1 мл среды и не менялся в течение всего периода хранения закваски (30 суток). Не менялась также и морфология клеток.
Недостатком данного способа является сложность приготовления, длительность приготовления, ограниченный срок хранения.
В задачу наших исследований входило открытие нового способа создания питательной среды для выращивания пробиотических культур, обеспечивающей длительное сохранение микробной массы в жизнеспособном состоянии, дешевой в производстве.
Наша задача решается тем, что количество сухого соевого порошка вносимого сокращается до 24,0-28,0 грамм против обычной концентрации 75 грамм на 1 литр воды. Термостатирование под воздействием фермента пепсина длится в течении 48 часов, обеспечивая более полный гидролиз белков.
Через 48 часов гидролизат фильтруют через ватно-марлевый фильтр и автоклавируют при 1 атмосфере в течение часа. Готовый гидролизат используют для приготовления ростовой среды. Для ее приготовления к фильтрованной воде добавляют пептон, глюкозу и соевый гидролизат. Смесь нагревают до кипения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH-метром 6,8-7,0. Среду стерилизуют автоклавированием при 1 атм. 30 минут. Культуры пробиотических микроорганизмов высевают в ростовую среду из расчета соотношения культуры и ростовой среды 1:20. Культивируют 24 часа. КОЕ/г после культивирования составляет не менее 1×109ед. Данный способ обеспечивает более полный гидролиз белков, срок хранения среды увеличивается до 6 месяцев в закрытом флаконе.
Изобретение иллюстрируют следующие примеры.
Пример 1: приготовление питательной среды в оптимальных параметрах.
Сухое соевое молоко 24 г разводят в 1 литре фильтрованной воды. Воду подогревают до 45-50°C и постоянно помешивают, до получения однородной жидкости. После охлаждения смеси до 37°C в нее вносят пепсин и помещают в термостат. Через 48 часов полученный гидролизат фильтруют через ватно-марлевый фильтр и автоклавируют при 1 атмосфере в течение часа. Далее готовят гидролизно-соевую среду. Для этого к 1000 мл фильтрованной воды добавляют 1 г пептона, 10 г глюкозы и 120,0 мл соевого гидролизата. Смесь нагревают до кипячения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH 6,8-7,0. Среду стерилизуют при 1 атм. 30 мин. Среда готова для использования.
Пример 2: приготовление питательной среды в оптимальных параметрах.
Сухое соевое молоко 28 г разводят в 1 литре фильтрованной воды. Воду подогревают до 45-50°C и постоянно помешивают, до получения однородной жидкости. Охлаждают смесь до 37°C, вносят пепсин и термостатируют. Через 48 часов полученный гидролизат фильтруют и автоклавируют при 1 атмосфере в течение часа. Готовят гидролизно-соевую среду. Для этого к 1000 мл фильтрованной воды добавляют 1 г пептона, 10 г глюкозы и 120,0 мл соевого гидролизата. Смесь доводят до кипения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH 6,8-7,0. Среду стерилизуют при 1 атм. 30 мин. Среда готова для использования.
Пример 3: приготовление питательной среды с экспозицией гидролиза сои менее 48 часов.
Сухое соевое молоко 25 г разводят в 1 литре фильтрованной воды. Воду подогревают до 45-50°C и постоянно помешивают, до получения однородной жидкости. После охлаждения смеси до 37 в нее вносят пепсин и помещают в термостат. Через 40 часов полученный гидролизат фильтруют через ватно-марлевый фильтр и автоклавируют при 1 атмосфере в течение часа. Далее готовят гидролизно-соевую среду. Для этого к 1000 мл фильтрованной воды добавляют 1 г пептона, 10 г глюкозы и 120,0 мл соевого гидролизата. Смесь нагревают до кипячения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH 6,8-7,0. Среду стерилизуют при 1 атм. 30 мин. В среду, готовую для использования, засевают посевной материал, состоящий из производственных штаммов: Bifidobacterium thermophilum тп-87, Lactobacillus acidofilus, Lactobacillus plantarum, Lactococcus lactissubsp.diacetilactis, Bacillus subtillus из расчета 1:20 (посевной материал \ гидролизно-соевая среда). Получена конечная концентрация: 0,4×109 м.клеток в мл, меньшая, чем с оптимальными параметрами.
Пример 4: приготовление питательной среды со снижением pH до 6,7.
Сухое соевое молоко 25 г разводят в 1 литре фильтрованной воды. Воду подогревают до 45-50°C и постоянно помешивают, до получения однородной жидкости. После охлаждения смеси до 37°C в нее вносят пепсин и помещают в термостат. Через 48 часов полученный гидролизат фильтруют через ватно-марлевый фильтр и автоклавируют при 1 атмосфере в течение часа. Далее готовят гидролизно-соевую среду. Для этого к 1000 мл фильтрованной воды добавляют 1 г пептона, 10 г глюкозы и 120,0 мл соевого гидролизата. Смесь нагревают до кипячения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH 6,7. Среду стерилизуют при 1 атм. 30 мин. В среду, готовую для использования засевают посевной материал, состоящий из производственных штаммов: Bifidobacterium thermophilum тп-87, Lactobacillus acidofilus, Lactobacillus plantarum, Lactococcus lactissubsp.diacetilactis, Bacillus subtillus из расчета 1:20 (посевной материал \ гидролизно-соевая среда). В серии посевов получены конечные концентрации: от 1×106 до 1,4×107 м.клеток в мл, меньшие, чем при использовании оптимальных параметров.
Для проверки количества жизнеспособных микробных клеток после 7 месяцев хранения культуры были высеяны на элективные питательные среды методом серийных разведений. Рост отмечен до 9 разведений:
Bifidobacterium thermophilum тп-87 - 7×109 КОЕ/г
Lactobacillus acidofilus - 1×109 КОЕ/г
Lactobacillus plantarum - 4×109 КОЕ/г
Lactococcus lactis subsp.diacetilactis - 2×109 КОЕ/г
Bacillussubtillus - 1×108 КОЕ/г
Через 12 месяцев хранения образцы были повторно высеяны на элективные питательные среды, методом серийных разведений, количество их снизилось:
Bifidobacterium thermophilum тп-87 - 4×107 КОЕ/г
Lactobacillus acidofilus - 1×105 КОЕ/г
Lactobacillus plantarum - 1×109 КОЕ/г
Lactococcuslactissubsp.diacetilactis - 1×107 КОЕ/г
Bacillussubtillus - 1×105 КОЕ/г
При определении pH установлено значительное его снижение и превышение допустимой нормы - до 4,2. В результате проведенных исследований было принято решение установить срок годности среды 6 месяцев со дня изготовления.
Список литературы
1. Патент РФ №2207019. «Биологически активная добавка к пище и способ ее приготовления», МПК A23L 1/30, A23J 3/04, A23J 3/14, A23J 3/34, C12N 1/20, A23C 9/12, опубл. 27.06.2003 г.
2. Патент РФ №2087532 «Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий», МПК C12N 1/20, A61K 35/74, A23C 9/12 опубл. 20.08.97 г.
Claims (1)
- Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур, предусматривающий получение соевого гидролизата из расчета 24-28 г сухого соевого молока на 1 л воды гидролизом с помощью пепсина в течение 48 часов, фильтрацию гидролизата, его стерилизацию в течение 1 часа при 1 атм и добавление его в количестве 120 мл к смеси 1г пептона, 10 г глюкозы и 1л воды, нагревание до кипения, охлаждение, фильтрацию и установление рН в пределах 6,8-7,0 с последующей стерилизацией готовой среды при 1 атм в течение 30 мин.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016140511A RU2646163C1 (ru) | 2016-10-14 | 2016-10-14 | Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016140511A RU2646163C1 (ru) | 2016-10-14 | 2016-10-14 | Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2646163C1 true RU2646163C1 (ru) | 2018-03-01 |
Family
ID=61568582
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016140511A RU2646163C1 (ru) | 2016-10-14 | 2016-10-14 | Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2646163C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2685886C1 (ru) * | 2018-04-19 | 2019-04-23 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Дальневосточный научно-исследовательский институт механизации и электрификации сельского хозяйства (ФГБНУ ДальНИИМЭСХ) | Способ получения кормового соево-кукурузного субстрата, предназначенного для выращивания пробиотических кормовых культур |
| RU2757137C1 (ru) * | 2020-06-04 | 2021-10-11 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина» (ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА) | Способ производства ростовой среды с содержанием нанофильтрата творожной сыворотки, предназначенной для выращивания пробиотических культур |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2087532C1 (ru) * | 1994-06-15 | 1997-08-20 | Акционерное общество "Русский йогурт" | Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий |
| RU2169472C2 (ru) * | 2000-06-19 | 2001-06-27 | Цинберг Марк Беньяминович | Способ получения бактериальной закваски для кисломолочного продукта |
| RU2169763C1 (ru) * | 2000-06-26 | 2001-06-27 | Дочернее Государственное Унитарное Экспериментально-Производственное Предприятие "Вектор-Биальгам" Гнц Вб "Вектор" | Молочная питательная среда для получения жидкого концентрата бифидобактерий |
| RU2295249C2 (ru) * | 2005-05-13 | 2007-03-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения гидролизата сои |
-
2016
- 2016-10-14 RU RU2016140511A patent/RU2646163C1/ru active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2087532C1 (ru) * | 1994-06-15 | 1997-08-20 | Акционерное общество "Русский йогурт" | Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий |
| RU2169472C2 (ru) * | 2000-06-19 | 2001-06-27 | Цинберг Марк Беньяминович | Способ получения бактериальной закваски для кисломолочного продукта |
| RU2169763C1 (ru) * | 2000-06-26 | 2001-06-27 | Дочернее Государственное Унитарное Экспериментально-Производственное Предприятие "Вектор-Биальгам" Гнц Вб "Вектор" | Молочная питательная среда для получения жидкого концентрата бифидобактерий |
| RU2295249C2 (ru) * | 2005-05-13 | 2007-03-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения гидролизата сои |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2685886C1 (ru) * | 2018-04-19 | 2019-04-23 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Дальневосточный научно-исследовательский институт механизации и электрификации сельского хозяйства (ФГБНУ ДальНИИМЭСХ) | Способ получения кормового соево-кукурузного субстрата, предназначенного для выращивания пробиотических кормовых культур |
| RU2757137C1 (ru) * | 2020-06-04 | 2021-10-11 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина» (ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА) | Способ производства ростовой среды с содержанием нанофильтрата творожной сыворотки, предназначенной для выращивания пробиотических культур |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103109930B (zh) | 一种添加丝胶抗冻肽的果味益生菌酸奶片及其制备方法 | |
| EP2647694B1 (en) | Dead lactobacillus biomass for antimicrobial use and a production method therefor | |
| RU2412612C1 (ru) | Способ получения пробиотической кормовой добавки ферм км для сельскохозяйственных животных и птицы | |
| CN106222158B (zh) | 一种包埋乳酸杆菌的微胶囊制备方法 | |
| RU2646163C1 (ru) | Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур | |
| RU2261909C1 (ru) | КОНСОРЦИУМ БИФИДОБАКТЕРИЙ Bifidobacterium bifidum 791-МБ, Bifidobacterium longum В 379М-МБ, Bifidobacterium adolescentis Г-7513- МБ, Bifidobacterium infantis 73-15-МБ, Bifidobacterium breve 79-119-МБ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КИСЛО-МОЛОЧНЫХ, НЕФЕРМЕНТИРОВАННЫХ ПРОДУКТОВ, БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК, БИФИДОСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ, КОСМЕТИЧЕСКИХ И ГИГИЕНИЧЕСКИХ СРЕДСТВ | |
| RU2441907C1 (ru) | Способ приготовления лечебно-профилактического препарата из живых штаммов микроорганизмов лакто- и бифидобактерий "lb-комплекс л" | |
| CN106617095A (zh) | 一种阿胶益生菌口服液及其制备方法 | |
| KR102004204B1 (ko) | 안정성이 증진된 유산균 및 이의 제조방법 | |
| RU2475535C1 (ru) | Способ получения пробиотического препарата лактоамиловорина | |
| RU2605626C2 (ru) | Способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью | |
| CN114921383A (zh) | 一种具有清除胆固醇功能的益生菌制剂及其制备方法 | |
| JP3587536B2 (ja) | カルシウム補強剤及びその製造方法 | |
| JP6330237B2 (ja) | ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地、ラクトバチルス属乳酸菌の培養方法及びラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法 | |
| RU2757137C1 (ru) | Способ производства ростовой среды с содержанием нанофильтрата творожной сыворотки, предназначенной для выращивания пробиотических культур | |
| CN108464509B (zh) | 新型发酵乳酸杆菌在食品领域中的应用 | |
| RU2524117C1 (ru) | Штамм бактерий lactobacillus acidophilus используемый для приготовления кисломолочного продукта | |
| RU2169472C2 (ru) | Способ получения бактериальной закваски для кисломолочного продукта | |
| CN105994938A (zh) | 一种复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法 | |
| RU2261907C1 (ru) | ШТАММ БИФИДОБАКТЕРИЙ Bifidobacterium longum B 379М-МБ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КИСЛО-МОЛОЧНЫХ, НЕФЕРМЕНТИРОВАННЫХ ПРОДУКТОВ, БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК, БИФИДОСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ, КОСМЕТИЧЕСКИХ И ГИГИЕНИЧЕСКИХ СРЕДСТВ | |
| RU2366699C2 (ru) | Способ получения биомассы бифидобактерий | |
| RU2752891C1 (ru) | Консорциум бифидобактерий, используемый для приготовления бифидосодержащих продуктов, и штаммы, входящие в состав консорциума | |
| CN1057296A (zh) | 一种生产乳酸菌素的方法 | |
| RU2758880C1 (ru) | Способ получения биопрепарата для коррекции метаболизма у поросят-сосунов | |
| RU2261906C1 (ru) | ШТАММ БИФИДОБАКТЕРИЙ Bifidobacterium infantis 73-15-МБ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КИСЛО-МОЛОЧНЫХ, НЕФЕРМЕНТИРОВАННЫХ ПРОДУКТОВ, БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК, БИФИДОСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ, КОСМЕТИЧЕСКИХ И ГИГИЕНИЧЕСКИХ СРЕДСТВ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner |