RU2087532C1 - Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий - Google Patents
Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий Download PDFInfo
- Publication number
- RU2087532C1 RU2087532C1 RU94023024/13A RU94023024A RU2087532C1 RU 2087532 C1 RU2087532 C1 RU 2087532C1 RU 94023024/13 A RU94023024/13 A RU 94023024/13A RU 94023024 A RU94023024 A RU 94023024A RU 2087532 C1 RU2087532 C1 RU 2087532C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- agar
- medium
- water
- whey
- clarified
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Использование: биотехнология, медицинская микробиология и может быть использовано в производстве эубиотических препаратов и бифидосодержащих продуктов питания. Сущность изобретения: питательная среда в качестве основы содержит молочную сыворотку, осветленную последовательной обработкой обезжиренного молока кислотой и щелочью, и дрожжевой автолизат сухой или жидкий и дополнительно натрий фосфорнокислый однозамещенный двуводный, аммоний хлористый и магний сернокислый семиводный, при следующем соотношении компонентов (мас.%): молочная сыворотка осветленная - 7,5 - 10,0, лактоза - 0,3 -0,5, дрожжевой автолизат сухой или жидкий - 0,2 -0,3 и 2,0 - 3,0, D,L-цистеин - 0,05 - 0,1, NaH2PO4 • 2H2O - 0,7 - 0,8, NH4Cl - 0,1 - 0,15, MgSO4•7H2O - 0,015 - 0,020, агар-агар - 0,075 - 0,080, вода - остальное, pH 7,2 - 7,4.
Description
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в производстве эубиотических препаратов и бифидосодержащих продуктов питания.
Эубиотики предназначены для восстановления нормальной микрофлоры хозяина, поврежденной под влиянием различных неблагоприятных факторов внешней и внутренней среды. В комплексе мер для коррекции микрофлоры ведущая роль принадлежит введению в организм эубиотиков, в частности биологических бактерийных препаратов на основе бифидобактерий, и бифидосодержащих продуктов питания. Возрастающая потребность в подобных препаратах и продуктах питания обусловливает необходимость разработки новых эффективных и недорогих производственных питательных сред для накопления биомассы бифидобактерий. Производственные питательные среды должны обеспечивать высокую скорость размножения бактерий наряду с минимальной продолжительностью их ростового цикла для получения высокой концентрации жизнеспособных микробных клеток в единице объема питательной среды (не менее 108 КОЕ/мл). Сырье для приготовления таких сред должно быть доступным, недорогим, технологически целесообразным.
В настоящее время для накопления биомассы бифидобактерий используют питательные среды различного состава. Основой их служат гидролизаты и экстракты растительного и животного происхождения: среда Блаурокк на основе печеночного отвара, кукурузно-лактозная среда на основе кукурузного экстракта, среды на основе мясного экстракта.
Наиболее близкой к заявляемой является гидролизатно-молочная среда - ГМ-среда [1] содержащая гидролизат обрата, NaCl, лактозу, L-цистеин солянокислый, пептон, агар-агар и воду. Гидролизатно-молочную питательную среду готовят следующим образом. Приготовление гидролизованного молока.
Обычное или восстановленное обезжиренное молоко (обрат) доводят до кипения и кипятят 2 мин, охлаждают до 14oC, устанавливают pH 7,9 10 - 20%-ным раствором NaOH.
Добавляют панкреатин из расчета 1 г/дм3, предварительно разведенный в небольшом количестве нагретой до 44oC воды, размешивают и ставят в термостат на 40o С под ватной пробкой. В течение первых двух часов перемешивание и коррекцию pH до 7,9 проводят каждые 30 мин, в следующие два часа через каждый час. Через 4 ч от начала гидролиза добавляют 1 2% хлороформа, закрывают резиновой пробкой и ставят в термостат. Через 4 ч доводят pH до 4,4 30%-ным раствором уксусной кислоты, кипятят, помешивая, не менее 15 мин, фильтруют через бумажный фильтр. Готовый гидролизат должен содержать 200 300 мг% аминного азота.
Приготовление ГМ-среды.
Разводят гидролизованное молоко питьевой водой в соотношении 1:1. В небольшом количестве разведенного гидролизата расплавляют агар в количестве 2,5 г на 1 дм3 приготовляемой среды. К остальному количеству гидролизата добавляют 28 г пептона и 3,5 г хлористого натрия, смесь нагревают до температуры 80oC, после чего соединяют с расплавленным агаром. В смеси устанавливают pH 7,5, кипятят в течение 15 мин, дают отстояться, сливают с осадка, не фильтруя, доливают горячей дистиллированной водой до заданного объема и добавляют в нее 10,0 г лактозы и 0,15 г солянокислого цистина. Среду заливают в пробирки высоким столбиком 10 см3 и стерилизуют при температуре 112oC в течение 30 мин с предварительным подогревом автоклава паром в течение 30 мин. pH готовой среды 7,1 7,3.
ГМ-среда широко используется в России и других странах СНГ для наращивания биомассы бифидобактерий как в производстве бифидумбактерина сухого, так и кисломолочного. Эта среда обеспечивает получение бифидобактерий в концентрации 108 109 КОЕ/мл. Она достаточно проста в изготовлении. Вместе с тем, ГМ-среда имеет ряд недостатков. Основной из них - медленный рост бифидобактерий. Так, при выращивании на этой среде бифидобактерии достигают максимума концентрации к 18 24 ч культивирования.
Цель изобретения сокращение продолжительности роста бифидобактерий.
Поставленная цель достигается тем, что в качестве питательной основы используют молочную сыворотку, осветленную последовательной обработкой обезжиренного молока кислотой и щелочью, при следующем соотношении компонентов (мас.):
Молочная сыворотка осветленная 7,5 10,0
Лактоза 0,3 0,5
Дрожжевой автолизат сухой 0,2-0,3
или жидкий 2,0 3,0
D,L-цистеин 0,05 0,1
NaH2PO4 x 2H2O 0,7 0,8
NH4Cl 0,1 0,15
MgSO4•7H2O 0,015 0,020
Агар-агар 0,075 0,080
Вода остальное
pH 7,2 7,4
где для получения сбалансированной по составу питательной среды осветленную молочную сыворотку и дрожжевой автолизат используют в качестве питательной основы, лактозу источника углерода, цистеин редуцирующего вещества NaH2PO4•2H2O источника фосфора, NH4Cl источника азота, MgSO4• 7H2O источника магния.
Молочная сыворотка осветленная 7,5 10,0
Лактоза 0,3 0,5
Дрожжевой автолизат сухой 0,2-0,3
или жидкий 2,0 3,0
D,L-цистеин 0,05 0,1
NaH2PO4 x 2H2O 0,7 0,8
NH4Cl 0,1 0,15
MgSO4•7H2O 0,015 0,020
Агар-агар 0,075 0,080
Вода остальное
pH 7,2 7,4
где для получения сбалансированной по составу питательной среды осветленную молочную сыворотку и дрожжевой автолизат используют в качестве питательной основы, лактозу источника углерода, цистеин редуцирующего вещества NaH2PO4•2H2O источника фосфора, NH4Cl источника азота, MgSO4• 7H2O источника магния.
Известно использование молочной сыворотки в качестве комплексного обогатителя питательных сред, однако в составе питательных сред для культивирования бифидобактерий молочную сыворотку и, в частности, осветленную молочную сыворотку не использовали. Осветленная молочная сыворотка позволяет получить прозрачную питательную среду, обеспечивающую отсутствие осадка при выращивании бифидобактерий, получение биомассы бифидобактерий, свободной от компонентов среды. Прозрачность среды позволяет осуществлять визуальный контроль чистоты культуры и может быть использована также для исследовательских целей.
Предлагаемая агаризованная дрожже-молочно-солевая среда (АДМС) обладает высокими ростовыми качествами. Наращивание биомассы бифидобактерий до концентрации 109 КОЕ/мл на этой среде происходит в течение 7 8 ч против 18 24 ч при использовании ГМ-среды. Кроме того, в отличие от ГМ-среды, предлагаемая среда может заготавливаться впрок в виде концентрированных растворов.
Пример 1. Приготовление осветленной сыворотки.
1 л обезжиренного молока закисляют 20%-ной соляной кислотой до pH 4,0 - 4,5, кипятят 5 10 мин и удаляют осадок фильтрованием или центрифугированием (3000 об. мин 10 минут). В полученный фильтрат (центрифугат) вносят 20%-ный раствор гидроксида натрия до pH 9,0 9,5. Кипятят 5 10 мин и удаляют флокулят таким же способом. Молочную сыворотку нейтрализуют 20%-ной соляной кислотой до pH 7,2 7,4. Объем доводят водой до 1 л. При необходимости длительного хранения осветленную сыворотку автоклавируют при 0,5 атм в течение 30 мин.
Приготовление концентрированного раствора "А".
В 1 л осветленной молочной сыворотки вносят 5,0 г лактозы и 3 г сухого автолизата дрожжей, растворяют их, доводят pH до 7,2 7,4 с помощью 20%-ного раствора гидроксида натрия. Раствор кипятят 5 10 мин, разливают во флаконы и стерилизуют при 0,5 атм 30 мин.
Приготовление концентрированного раствора "Б".
В 0,9 л дистиллированной воды растворяют 78 г натрия фосфата однозамещенного двуводного, 10 г аммония хлористого, 2 г магния сульфата 7-водного, 10 г D,L-цистеина. Затем доводят pH раствора до 7,2 7,4 с помощью гранулированного калия гидроксида и вносят 7,5 г агар-агара. Смесь кипятят до расплавления агара, разливают во флаконы и автоклавируют при 0,5 1 атм. 30 мин.
Приготовление агаризованной дрожже-молочно-солевой среды (АДМС).
Смешивают равные объемы растворов "А" и "Б" (по 1 части) с 8 частями воды и стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 мин.
Готовая среда имеет светло-желтый цвет с коричневым оттенком (за счет частичной карамелизации лактозы), совершенно прозрачна.
Пример 2.
Использование питательной среды АДМС для наращивания биомассы бифидобактерий B.bifidum 791.
Разливают среду АДМС по 10 мл в два ряда пробирок (диаметр 12 мм, 20 пробирок в ряду) и стерилизуют при 0,5 атм. 30 мин. Затем в каждую пробирку первого ряда вносят по 0,1 мл суточной культуры бифидобактерий на АДМС. В пробирки второго ряда таким же способом засевают по 1 мл той же культуры. Оба ряда пробирок помещают в водяной ультратермостат при 37oC и через каждый час вынимают по одной пробирке для измерения оптической плотности культуры на фотоэлектрокалориметре с красным светофильтром. После достижения культурами стационарной фазы роста (максимальной неизменяющейся оптической плотности) строят график зависимости "Оптическая плотность время", а также определяют концентрацию живых бактерий в 1 мл среды путем титрования. В случае разведения посевной дозы на АДМС в 100 раз стационарная фаза роста культуры наступает через 15 ч. Разведение в 10 раз такой же результат дает через 7 8 ч. При этом концентрация клеток составляет 3 4•109 КОЕ/мл. На ГМ-среде при 10-кратном разведении посевной дозы культура достигала стационарной фазы роста только к 20 часу культивирования.
Таким образом, агаризованная дрожже-молочно-солевая среда (АДМС) обладает более высокими ростовыми качествами для бифидобактерий, чем ГМ-среда. Она обеспечивает сокращение времени культивирования бифидобактерий и к тому же не содержит дорогостоящего и дефицитного препарата панкреатина.
Claims (1)
- Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий, содержащая питательную основу, источник углерода лактозу, редуцирующее вещество - D,L-цистеин, агар-агар и воду, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы она содержит молочную сыворотку, осветленную последовательной обработкой обезжиренного молока кислотой и щелочью, и дрожжевой автолизат сухой или жидкий, и дополнительно натрий фосфорнокислый однозамещенный двуводный, аммоний хлористый и магний сернокислый семиводный, при следующем соотношении компонентов, мас.Молочная сыворотка осветленная 7,5 10,0
Дрожжевой автолизат сухой 0,2 0,3
или жидкий 2,0 3,0
Лактоза 0,3 0,5
D,L-цистеин 0,05 0,1
Натрий фосфорнокислый однозамещенный двуводный 0,7 0,8
Аммоний хлористый 0,1 0,15
Магний сернокислый семиводный 0,015-0,020
Агар-агар 0,075 0,080
Вода Остальноек
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU94023024/13A RU2087532C1 (ru) | 1994-06-15 | 1994-06-15 | Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU94023024/13A RU2087532C1 (ru) | 1994-06-15 | 1994-06-15 | Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU94023024A RU94023024A (ru) | 1996-02-20 |
RU2087532C1 true RU2087532C1 (ru) | 1997-08-20 |
Family
ID=20157348
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU94023024/13A RU2087532C1 (ru) | 1994-06-15 | 1994-06-15 | Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2087532C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2496865C1 (ru) * | 2012-02-27 | 2013-10-27 | Открытое акционерное общество "Микролактофлора" | Способ приготовления бактериального препарата ацидофильных культур |
RU2646163C1 (ru) * | 2016-10-14 | 2018-03-01 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко | Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур |
RU2757137C1 (ru) * | 2020-06-04 | 2021-10-11 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина» (ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА) | Способ производства ростовой среды с содержанием нанофильтрата творожной сыворотки, предназначенной для выращивания пробиотических культур |
-
1994
- 1994-06-15 RU RU94023024/13A patent/RU2087532C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
СанПИН 42-123-49-40-88 п.5.2.7.2. Гидролизатно-молочная среда. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2496865C1 (ru) * | 2012-02-27 | 2013-10-27 | Открытое акционерное общество "Микролактофлора" | Способ приготовления бактериального препарата ацидофильных культур |
RU2646163C1 (ru) * | 2016-10-14 | 2018-03-01 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко | Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур |
RU2757137C1 (ru) * | 2020-06-04 | 2021-10-11 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина» (ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА) | Способ производства ростовой среды с содержанием нанофильтрата творожной сыворотки, предназначенной для выращивания пробиотических культур |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Gladstone | The nutrition of Staphylococcus aureus; nitrogen requirements | |
DE2656160A1 (de) | Lebensfaehige bifidobakterien enthaltendes, fermentiertes milchprodukt und verfahren zu seiner herstellung | |
US4544637A (en) | Culture media from clarified diary whey lactose permeates | |
RU2087532C1 (ru) | Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий | |
CN109880874A (zh) | 一种大米活性肽的制备方法、大米活性肽及其应用 | |
RU2580028C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования бруцелл | |
RU2261909C1 (ru) | КОНСОРЦИУМ БИФИДОБАКТЕРИЙ Bifidobacterium bifidum 791-МБ, Bifidobacterium longum В 379М-МБ, Bifidobacterium adolescentis Г-7513- МБ, Bifidobacterium infantis 73-15-МБ, Bifidobacterium breve 79-119-МБ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КИСЛО-МОЛОЧНЫХ, НЕФЕРМЕНТИРОВАННЫХ ПРОДУКТОВ, БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК, БИФИДОСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ, КОСМЕТИЧЕСКИХ И ГИГИЕНИЧЕСКИХ СРЕДСТВ | |
RU2415923C1 (ru) | Способ получения ферментативного гидролизата из свежей белокочанной капусты и питательная среда для культивирования лактобактерий на его основе | |
RU2317326C1 (ru) | Штамм bifidobacterium longum po-6, используемый для получения кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, заквасок, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов | |
CN104351338A (zh) | 一种茶树菇酸奶的制备方法 | |
CN108300739B (zh) | 一种用于l-苹果酸的分离方法 | |
RU2169472C2 (ru) | Способ получения бактериальной закваски для кисломолочного продукта | |
SU526660A1 (ru) | Штамм N 806-продуцент 2 кето- гулоной кислоты | |
RU2314341C1 (ru) | Штамм bifidobacterium longum гв-15, используемый для получения кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, заквасок, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов | |
RU2061037C1 (ru) | Питательная среда для наращивания биомассы бифидобактерий и лактобактерий | |
RU2052253C1 (ru) | Способ получения бактериальной закваски для кисломолочного продукта | |
RU2295249C2 (ru) | Способ получения гидролизата сои | |
CN109943507A (zh) | 一种兽用a型产气荚膜梭菌类毒素的制备方法及其应用 | |
US20160002694A1 (en) | Culture medium for growth of recombinant proteins | |
EA000283B1 (ru) | Консорциум бифидобактерий bifidobacterium bifidum 791, b.longum b379m, b.breve 79-119, b.infantis 73-15, b.adolescentis г7513 для приготовления кисломолочных продуктов лечебно-диетического питания, неферментированных пищевых продуктов и бактерийных препаратов | |
RU2170023C2 (ru) | Штамм lactobacillus acidophilus а-91, используемый для приготовления кисломолочных продуктов, штамм lactobacillus acidophilus h-91, используемый для приготовления кисломолочных продуктов, закваска для приготовления кисломолочных продуктов и препарат, способствующий адаптации организма к неблагоприятным внешним воздействиям | |
RU2163131C2 (ru) | Способ получения композиции энтерогс для терапевтических целей и производства препарата лечебно-диетического питания бифилакт | |
CN1059924C (zh) | 沙苑子发酵液的制备方法 | |
RU2280465C2 (ru) | Способ приготовления пробиотика | |
CN109053881A (zh) | 一种特异性卵黄多克隆抗体及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060616 |