CN104067130B - 肾上腺髓质素测定与用于确定成熟肾上腺髓质素的方法 - Google Patents

肾上腺髓质素测定与用于确定成熟肾上腺髓质素的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104067130B
CN104067130B CN201280066354.5A CN201280066354A CN104067130B CN 104067130 B CN104067130 B CN 104067130B CN 201280066354 A CN201280066354 A CN 201280066354A CN 104067130 B CN104067130 B CN 104067130B
Authority
CN
China
Prior art keywords
adm
adrenomedullin
purposes
gly
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201280066354.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104067130A (zh
Inventor
安德里亚斯·伯格曼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Si Fuyingao Tektronix Ltd
Original Assignee
Si Fuyingao Tektronix Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Si Fuyingao Tektronix Ltd filed Critical Si Fuyingao Tektronix Ltd
Publication of CN104067130A publication Critical patent/CN104067130A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104067130B publication Critical patent/CN104067130B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A61K38/1725—Complement proteins, e.g. anaphylatoxin, C3a or C5a
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
    • G01N2800/7095—Inflammation

Abstract

本发明的主题为用于败血症患者的治疗随访的体外方法，其中利用包含两种结合部分的测定来确定所述败血症患者的体液样品中成熟ADM1‑52和/或成熟ADM1‑52‑Gly的浓度，所述两种结合部分结合成熟ADM1‑52和/或成熟ADM1‑52‑Gly，即氨基酸21‑52‑氨基SEQ ID No.1或氨基酸21‑52‑Gly SEQ ID No.2，中两个不同的区域，其中每一个所述区域包含至少4个或5个氨基酸。本发明的主题还为测定与校准方法。

Description

肾上腺髓质素测定与用于确定成熟肾上腺髓质素的方法
本发明的主题为用于败血症患者的治疗随访的体外方法，其中利用包含两种结合部分的测定确定所述败血症患者的体液样品中成熟ADM1-52和/或成熟ADM1-52-Gly的浓度，所述两种结合部分结合成熟ADM1-52和/或成熟ADM1-52-Gly区域，即氨基酸21-52-氨基SEQ ID No.1或氨基酸21-52-Gly SEQ ID No.2，中两个不同的区域，其中每一个所述区域包含至少4个或5个氨基酸。
本发明的主题还为测定与校准方法。
在Kitamura等(参阅1；数值基于参考文献附表)中首次描述了肾上腺髓质素(ADM)肽，其为包含52个氨基酸的新的降低血压的肽，该肽已自人嗜铬细胞瘤中分离出来。同一年，也描述了编码包含185个氨基酸的前体肽的cDNA和这一前体肽的完整的氨基酸序列。前体肽，特别是包含在N末端处的21个氨基酸的信号序列，被称为“肾上腺髓质素前体原”(pre-proADM)。pre-proADM包含185个氨基酸并且具有SEQ ID No:3的序列。成熟ADM显示于SEQ ID No.4中而成熟ADM-Gly显示于SEQ ID No.5中。
肽肾上腺髓质素(ADM)为包含52个氨基酸(SEQ ID No:2)的肽，并且包含pre-proADM的95-146氨基酸肽，肾上腺髓质素通过蛋白水解裂解自pre-proADM形成。迄今为止，基本上只有很少的pre-proADM裂解中所形成的肽片段的片段被更准确地表征，尤其是，生理活性肽肾上腺髓质素(ADM)和“PAMP”，包含在pre-proADM中信号肽的21氨基酸之后的20个氨基酸(22-41)的肽。对ADM和PAMP而言，还已发现并且更为详尽地研究了其生理活性亚片段。1993年ADM的发现与表征引发了强烈的研究活动和潮水般的出版物，最近以各种综述概括了这些结果，在本说明书的上下文中，参考文献尤其是出自期刊“肽(Peptides)”的文章致力于ADM(Peptides22(2001))，特别是(2)和(3)。另一综述为(4)。在目前的科学研究界，尤其ADM可被认为是多功能的调节肽。它以通过甘氨酸所延伸的非活性的形式被释放到血液循环中(5)。也存在特异性针对ADM的结合蛋白(6)并且可能也调节ADM的作用。
目前研究中最重要的ADM及PAMP的那些生理效应为影响血压的效应。因此，ADM为有效的血管舒张剂，可能它降低血压的效应与ADMC末端部分中的特别的肽片段有关。
还已发现上述的自pre-proADM形成的另一生理活性肽PAMP同样地显示出降低血压的效应，尽管看起来它具有不同于ADM的作用机制(参阅上述的综述(3)和(4)，以及(7)、(8)或(9)和(10))。
还已发现在许多病理状态下可以在血液循环和其他体液中测量到的ADM的浓度显著地高于在健康对照人群中发现的浓度。因此，患有充血性心力衰竭、心肌梗塞、肾脏疾病、高血压病症、糖尿病、休克急性期和败血症及败血性休克的患者中ADM水平显著地增加，尽管程度不同。在一些所述的病理状态中PAMP浓度也增加，但是血浆水平相对于ADM下降((3)；1702页)。
还已知将在败血症或败血性休克中观察到异常高的ADM浓度(参阅(3)和(11)、(12)、(13)、(14)和(15))。这发现与典型的血液动力学改变有关，所述典型的血液动力学改变被称为患有败血症和其他严重的综合征，诸如例如SIRS患者病程的典型现象。
尽管推测ADM和PAMP形成于同一前体肽，pre-proADM(SEQ ID No:3)，其中对应这些肽的氨基酸序列以等摩尔量的局部肽存在，生物体液中可测的ADM与PAMP浓度明显地不同。这是没有什么异常的。
因此，同一前体肽的不同的裂解产物的可测浓度可能是不同的，例如，因为它们是不同的竞争性裂解途径的结果，例如在不同的病理状态下，不同的竞争性裂解途径导致不同的前体肽碎裂并因此导致不同的裂解产物。前体肽中所含的某些局部肽可形成为游离肽，或可以不形成，和/或不同的肽以不同的方式和不同的量形成。即使认为只有单一的裂解途径用于处理前体肽，并且因此所有裂解产物都源于同一个前体肽而且必须以等摩尔量形成自身，生物体液中可测的不同局部肽和片段的稳态浓度可能非常不同，即，例如，当单独个体以不同的速率形成和/或在各自的生物体液中具有不同的个体稳定性(寿命)时，或如果基于不同的裂解机制和/或以不同的裂解速率将它们从血液循环中移除。
肾上腺髓质素在败血症发展期间((16)、(17))和许多急性的及慢性的疾病((18)、(4))中发挥了关键作用。
ADM在败血症和败血症后果预后((19)、(14)、(11))中是升高的。对早期监测治疗成功或失败而言，败血症治疗随访为基本上尚未满足的临床需求。
目前没有适用于常规诊断的ADM测定。当前可用的用于测定成熟ADM的测试的敏感性太低。因此，需要高血浆量用于分析。而且，目前可用的测定显示出与预分析局限性有关的稳定性，例如，需要通过抑肽酶稳定样品((20)、(21))。加之，一些ADM测定在测量前需要大量的样品制备(11)。
本发明的目标为提供适合作为直接测量成熟ADM的常规方法，适用于标准的自动化实验室和即时护理技术。
令人惊奇地，结果表明此类测定可用于败血症患者的治疗随访。
本发明的主题为用于败血症患者的治疗随访的体外方法，其中利用包含两种结合部分的测定确定所述败血症患者的体液样品中成熟ADM1-52和/或成熟ADM1-52-Gly的浓度，所述两种结合部分结合成熟ADM1-52和/或成熟ADM1-52-Gly区域，即氨基酸21-52-氨基SEQ ID No.1或氨基酸21-52-Gly SEQ ID No.2，中两个不同的区域，其中每一个所述区域包含至少4个或5个氨基酸。
在本发明的一实施方案中，主题为用于败血症患者治疗随访的体外方法，其中所述结合部分中的一种结合成熟ADM和/或成熟ADM1-52-Gly下列序列中所包含的区域：
ADM21-32:CTVQKLAHQIYQ(SEQ ID No.6)
并且其中所述这些结合部分中的另一种结合成熟ADM和/或成熟ADM1-52-Gly下列序列中所包含的区域：
ADM42-52:APRSKISPQGY(SEQ ID No.7)
在本发明的一实施方案中，所述测定的测定敏感性能够定量健康人的ADM，其为<10pg/ml,优选地<40pg/ml并且更优选地<70pg/ml。
在本发明的一实施方案中，所述结合部分显示出与成熟ADM和/或成熟ADM1-52-Gly结合亲合力至少107M-1,优选108M-1,优选的亲合力大于109M-1,最优选的大于1010M-1。本领域的技术人员已知可以考虑通过应用更高剂量的化合物来弥补较低的亲合力，并且这种测量不会导致超出本发明的范围。
为测定肾上腺髓质素抗体的亲合力，借助于无标记的表面等离子共振技术利用Biacore2000系统(GE Healthcare Europe GmbH,弗赖堡,德国)测定肾上腺髓质素结合固体化抗体的动力学。根据制造说明书(小鼠抗体捕获试剂盒，GE Healthcare)，利用高密度共价地接合至CM5感应器表面的抗小鼠Fc抗体进行抗体的可逆固定(22)。
在本发明的一实施方案中，所述结合部分选自抗肾上腺髓质素抗体，或结合ADM的抗ADM抗体片段，或结合肾上腺髓质素的非Ig骨架。
治疗随访意为治疗开始后至少一次测定样品中的ADM成熟1-52(SEQ ID No.4)和/或成熟ADM1-52-Gly(SEQ ID No.5)的浓度，优选多于一次，优选两次或一天一次。
在本发明的一实施方案中，可称为POC-测试(即时护理)，即允许不需要全自动测定系统的情况下，在靠近患者小于1小时内进行测试的测试技术。这种技术的一实例为免疫色谱测试技术。
在本发明的一实施方案中，此类测定为夹心免疫测定，利用任何种类的包括但不限于酶标记、化学发光标记、电化学发光标记的检测技术，优选全自动测定。在本发明的一实施方案中，此类测定为酶标记的夹心测定。自动或全自动测定的实例包括用于下列系统中的一种的测定：RocheAbbottSiemensBrahmsBiomerieuxAlere
各种各样的免疫测定是已知的并且可用于本发明的测定和方法，这些包括：放射免疫测定(“RIA”)、均质酶倍增免疫测定(“EMIT”)、酶联免疫吸附测定(“ELISA”)、酶蛋白再活化免疫测定(“ARIS”)、试纸免疫测定以及免疫色谱测定。
在本发明的一实施方案中，标记至少所述两种结合部分中的一种以便于检测。
优选的检测方法包括各种形式的免疫测定，诸如例如放射免疫测定(RIA)、化学发光与荧光免疫测定、酶联免疫测定(ELISA)、基于Luminex的珠阵列、蛋白质微阵列测定以及快速检验形式，诸如例如免疫色谱带试验。
在一优选的实施方案中，所述标记选自化学发光标记、酶标记、荧光标记、放射碘标记。
测定可以为同种的或异种的测定，竞争性的与非竞争性的测定。在一实施方案中，测定为夹心测定的形式，其为非竞争性的免疫测定，其中待被检测和/或定量的分子与第一抗体和第二抗体结合。第一抗体可与固相结合，例如珠、孔或其他容器的表面、芯片或带，并且第二抗体为例如被染料、放射性同位素、或再活化的或催化活化部分标记的抗体。然后通过适当的方法测量与分析物结合的标记抗体的量。已确立涉及“夹心测定”的通常组合与程序并且为本领域技术人员所知(23)。
在另一实施方案中，测定包括两种捕获分子，优选二者都以液体反应混合物中分散体存在的抗体，其中第一标记组分连接到第一捕获分子，其中所述第一标记组分为基于荧光-或化学发光淬火或扩增的标记系统的一部分，并且所述标识系统的第二标记组分连接到第二捕获分子，从而一旦这两种捕获分子与分析物结合，就会产生可测的信号，该信号允许检测包含样品的溶液中成形的夹心复合物。
在另一实施方案中，所述标记系统包含与荧光染料或化学发光染料，特别是青色素型的染料组合的稀土穴状化合物或稀土螯合物。
在本发明的上下文中，基于荧光的测定包括染料的使用，例如该染料可选自包含FAM(5-或6-羧基荧光素)、VIC、NED、荧光素、异硫氰酸荧光素(FITC)、IRD-700/800，花青染料，诸如CY3、CY5、CY3.5、CY5.5、Cy7、Xanthen、6-羰基-2’,4’,7’,4,7-六氟荧光素(HEX)、TET、6-羰基-4’,5’-二氯-2’,7’-二甲氧基荧光素(JOE)、N,N,N’,N’-四甲基-6-羧基若丹明(TAMRA)、6-羰基-X-若丹明(ROX)、5-羧基若丹明-6G(R6G5)、6-羧基若丹明-6G(RG6)、若丹明、若丹明绿、若丹明红、若丹明110、BODIPY染料诸如BODIPY TMR、俄勒冈绿、香豆素诸如伞形酮、苯甲亚胺诸如赫斯特33258；菲啶，诸如德克萨斯红、雅基马黄、Alexa Fluor、PET、溴化乙锭、吖啶染料、卡唑染料、吩恶嗪染料、紫菜碱染料、聚甲炔染料等。
在本发明的上下文中，基于化学发光的测定包括染料的使用，基于(24)中所述的化学发光物质的物理原理。优选的化学发光染料为吖啶酯。
如本文所提及的，“测定”或“诊断测定”可以为诊断学领域内所应用的任何类型。此类测定可以基于待被检测的分析物与一个或多个具有某种亲合力的捕获探针结合。就捕获分子与靶分子或目的分子之间的相互作用而言，亲合力常数优选大于108M-1。
在本发明的上下文中，“结合部分分子”为可用于自样品中结合靶分子或目的分子，即分析物(即在本发明PCT及其片段的上下文中)的分子。因此结合部分分子必须在空间上和诸如表面电荷、疏水性、亲水性、Lewis供体和/或受体的存在或缺失的表面特征方面，形成足以特异地结合靶分子或目的分子的某种形状。因此，例如可通过离子键、范德华键、π-π键、σ-π键、疏水键或氢键相互作用或两种或多种以上所提及的捕获分子与靶分子或目的分子之间相互作用的组合介导结合。在本发明的上下文中，例如结合部分分子选自核酸分子、碳水化合物分子、PNA分子、蛋白、抗体、肽或糖蛋白。优选地，结合部分分子为抗体，包括其具有与靶分子或目的分子充分亲合力的片段，并且包括重组抗体或重组抗体片段，以及以化学方法和/或生物化学方法修饰的所述抗体的衍生物或衍生自具有至少12个氨基酸长度的其变体链的片段。
化学发光标记可为吖啶酯标记、涉及异鲁米诺标记的类固醇标记等。
酶标记可为乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CPK)、碱性磷酸酶、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶等。
在本发明的一实施方案中，至少所述两种结合部分中的一种与如磁性粒子和聚苯乙烯表面的固相结合。
在本发明的一实施方案中，样品中所测量的成熟ADM1-52和/或成熟ADM1-52-Gly浓度为血浆或血液中10-500pg/ml的范围。
用所述的ADM测定检测本发明的ADM水平。以上提及的值在其他ADM测定中可能是不同的，这取决于它们的校准方式。因此考虑到校准差异，以上提及的值应要求此类不同的校准ADM测定。可以通过经由它们的正常范围(健康群体)关联和调整校准ADM测定。可选地，市场上可购的对照样品可用于不同的校准调整(ICI Diagnostics,柏林,德国)。用所述的ADM测定，已检测到正常人群的中位数为24.7pg/mL。
在本发明的一实施方案中，应用阈值，从而阈值以上的值表示患者对治疗无响应或响应差，而低于所述阈值的值表示患者对治疗响应。
在本发明的一实施方案中，应用60-80pg/ml的阈值，优选70pg/ml。
在本发明的一实施方案中，所述样品选自人枸橼酸血浆、肝素血浆、EDTA血浆、全血。
在本发明的一实施方案中，直接测量提取的所述样品而不需要任何进一步的样品制备。
在本发明的一实施方案中，在全自动设备上进行所述方法。RocheAbbottSiemensBrahmsBiomerieuxAlere
在本发明的一实施方案中，在至少两种样品中检测成熟ADM1-52和/或成熟ADM1-52-Gly，其中所述样品在不同的时间点取自所述败血症患者。可在治疗期间一天一次地采取所述样品。可应用描述使用其他生物标记的此类诊断方案，例如(25)和(26)。
在本发明的一实施方案中，所测的样品体积小于或等于50μl。
本发明的用于败血症患者治疗随访的体外方法可与其它临床和/或实验室参数和/或临床评分，诸如例如Apache2评分、SOFA评分或其他，或评分中所含的一个或多个参数组合。利用标准的统计工具可连续地或间断地组合变量/参数。
本发明的主题还为用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly和/或肾上腺髓质素-Gly的测定，其中所述样品包含两种结合部分，所述两种结合部分结合成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly区域，即氨基酸21-52-氨基SEQ ID No.1或成熟肾上腺髓质素的氨基酸21-52-Gly SEQ ID No.2，中两个不同的区域，其中每一个所述区域包含至少4个或5个氨基酸，并且其中所述测定不是人工包被管吖啶酯(coated-tube-Akridiniumester)夹心测定。
本发明的主题还为用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly的测定，其中所述样品包含两种结合部分，所述两种结合部分结合成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly区域，即氨基酸21-52-氨基SEQ ID No.1或成熟肾上腺髓质素的氨基酸21-52-Gly SEQ ID No.2，中两个不同的区域，其中每一个所述区域包含至少4个或5个氨基酸，并且其中所述测定是人工包被管吖啶酯(coated-tube-Akridiniumester)夹心测定，且其中所述结合部分中的一种为结合SEQ ID No.4的抗体，其中所述结合部分中的另一种为结合SEQ ID No.7(APRSKISPQGY-CO-NH2)的抗体。
在本发明用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly测定的一实施方案中，所述结合部分中的一种结合成熟ADM的下列序列中所包含的区域：
CTVQKLAHQIYQ(SEQ ID No.6)
并且其中所述这些结合部分中的另一种结合成熟ADM的下列序列中所包含的区域：
APRSKISPQGY(SEQ ID No.7)
在本发明用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly测定的一实施方案中，所述测定的测定敏感性能够定量健康人的ADM并且<10pg/ml，优选<40pg/ml并且更优选<70pg/ml。
在本发明用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly测定的一实施方案中，所述结合部分显示出与成熟ADM和/或成熟ADM1-52-Gly结合亲合力至少107M-1,优选108M-1,优选的亲合常数大于109M-1,最优选的大于1010M-1。本领域的技术人员已知可以考虑通过应用更高剂量的化合物来弥补较低的亲合力，并且这种测量不会导致超出本发明的范围。结合亲合力可如以上所述地检测。
在本发明用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly测定的一实施方案中，所述结合部分选自抗肾上腺髓质素抗体，或结合ADM的抗ADM抗体片段，或结合肾上腺髓质素的非Ig骨架
在本发明用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly测定的一实施方案中，此类测定为夹心测定，优选全自动测定。它可为全自动的或人工的ELISA。它可为所谓的PCT测试(即时护理)。自动的或全自动的测试的实例包括可用于下列系统中的一种的测定：RocheAbbottSiemensBrahmsBiomerieuxAlere以上提供了测试形式的实例。
在本发明用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly测定的一实施方案中，至少标记所述两种结合部分中的一种以便于检测。以上提供了标记的实例。
在本发明用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly测定的一实施方案中，所述两种结合部分中的至少一种与固相结合。以上提供了固相的实例。
在本发明用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly测定的一实施方案中，所述标记选自化学发光标记、酶标记、荧光标记、放射碘标记。
本发明的另一主题为包含本发明的测试的试剂盒，其中所述测定的组分可包含在一个或多个容器中。
本发明的另一主题为校准本发明的测定的方法，其中，使用优选抗体的结合部分，其与成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly氨基酸1-16(SEQ ID No.8)内至少5个氨基酸的区域结合。所述结合部分可为与成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly氨基酸1-16(SEQ ID No.8)内至少5个氨基酸的区域结合的抗体或抗体片段或非Ig骨架。
在本发明校准测定的方法的一实施方案中，所述N末端抗体或片段或骨架识别成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly的N末端并且与其结合。这种方法在另一优选的实施方案中，如果ADM的N末端为游离的，所述抗ADM抗体或抗-肾上腺髓质素抗体片段或非Ig骨架只与成熟ADM的序列内的区域结合。在所述实施方案中，如果所述序列包含在pro-ADM内，抗ADM抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或非Ig骨架不与成熟ADM的序列内的区域结合。
本发明适用于校准测定的抗体为满足ADM吸附特性的此类结合部分。此类结合部分还必须与检测测定中所用的结合部分相兼容，例如，ELISA情况下所述结合部分不应干扰标记的结合部分与固相结合部分的结合。
本方法和测定适于常规应用。在大多数的情况下常规应用要求所需的样品体积不应超过50μl。常规应用还要求分析前处理保持在最小限度或为零(常规样品的使用，如EDTA血浆、枸橼酸血浆)。分析前要求必须适合临床常规：最小的分析稳定性(>90％再现)应在室温下至少2小时。
本发明的抗体为特异性结合抗原的蛋白，其包括一个或多个基本上由免疫球蛋白基因所编码的多肽。公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α(Ig A)、γ(IgG1,IgG2,IgG3,IgG4)、δ(IgD)、ε(IgE)和μ(IgM)恒定区基因，及无数免疫球蛋白可变区基因。全长的免疫球蛋白轻链通常为大约25Kd或214个氨基酸的长度。全长的免疫球蛋白重链通常为大约50Kd或446个氨基酸的长度。轻链由NH2末端处可变区基因(大约110个氨基酸的长度)和COOH末端处κ或λ恒定区基因所编码。相似地，重链由可变区基因(大约116个氨基酸的长度)和其它恒定区基因中的一种编码。
抗体的基础结构单元通常为由两对相同的免疫球蛋白链组成的四聚体，每对具有一条轻链和一条重链。在每对中，轻链与重链可变区与抗原结合，恒定区介导效应功能。免疫球蛋白还以各种其他的形式存在，例如包括Fv、Fab和(Fab’)2，及双功能杂合抗体与单链((27),(28),(29),(30),(31))。免疫球蛋白轻链或重链可变区包括被三个高变区中断的骨架区，也称为互补决定区(CDR)见(32)。如以上所示，CDR主要负责结合抗原表位。免疫复合体为特异地结合抗原的抗体，诸如单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体、或功能抗体片段。
嵌合抗体为通常通过基因工程自属于不同种类的免疫球蛋白可变区和恒定区基因构建它的轻链和重链基因的抗体。例如，小鼠单克隆抗体来源的基因的可变节段可以连接到人恒定节段，诸如κ与γ1或γ3。在一实例中，因此治疗性嵌合抗体为杂交蛋白，其由来自小鼠抗体的可变的或抗原结合结构域和来自人抗体的不变或效应结构域组成，尽管可以使用其他哺乳动物种类，或可以通过分子技术产生可变区。本领域中熟知制造嵌合抗体的方法，例如参阅(33)。“人源化”免疫球蛋白为免疫球蛋白，其包括人骨架区和一个或多个来源于非人类(诸如小鼠、大鼠或合成的)的CDRs免疫球蛋白。提供CDR的非人源免疫球蛋白称为“供体”并且提供骨架的人免疫球蛋白称为“受体”。在一实施方案中，所有CDR都来自于人源化免疫球蛋白中的供体免疫球蛋白。恒定区不必须存在，但是如果它们存在，它们必须基本上与人免疫球蛋白恒定区是同一的，即，至少大约85-90％，诸如大约95％或更多同一的。因此，所有人源化免疫球蛋白的部分，除了可能地CDR之外，都基本上与对应的天然人免疫球蛋白序列的部分是同一的。“人源化抗体”为包含人源化轻链和人源化重链免疫球蛋白的抗体。作为提供CDR的供体抗体，人源化抗体与相同的抗原结合。人源化免疫球蛋白或抗体的受体骨架可具有有限数量的被取自供体骨架的氨基酸取代的取代基。人源化或其他单克隆抗体可以具有额外的保守的氨基酸取代基，所述保守的氨基酸取代基基本上对抗原结合或其他免疫球蛋白功能没有影响。示例性保守取代基为诸如gly,ala；val,ile,leu；asp,glu；asn,gln；ser,thr；lys,arg；和phe,tyr那些。借助于基因工程可以构建人源化免疫球蛋白(例如参见(34))。人抗体为其中轻链和重链基因都为人来源的抗体。可以利用本领域中已知的方法产生人抗体。可以通过使分泌目的抗体的人类B细胞无限增殖来产生人抗体。例如可以通过EBV感染或通过将人类B细胞与骨髓瘤或杂交瘤细胞融合以产生三源杂交瘤细胞，实现无限增殖化。人抗体也可以通过噬菌体展示方法(例如参阅(35),(36),(37)，其通过引用并入本文)产生，或选自人组合的单克隆抗体文库(参阅Morphosys网站)。也可以通过利用携带人免疫球蛋白基因的转基因动物制备人抗体(例如参阅(38)和(39)，其通过引用并入本文)。
因此，ADM抗体可具有本领域中已知的形式。实例为人抗体、单克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体。在一优选的实施方案中，本发明的抗体为重组产生的抗体，例如如IgG，典型的全长免疫球蛋白，或包含至少重链和/或轻链的F可变域的抗体片段，例如如化学接合的抗体(片段抗原结合)，包括但不限于包括Fab微抗体的Fab-片段、单链Fab抗体、带有附加表位的单价的Fab抗体、例如Fab-V5Sx2；与CH3结构域二聚化的二价的Fab抗体(微抗体)；二价的Fab或多价的Fab，例如经由异源性结构域辅助下多聚化而形成，例如经由dHLX结构域的二聚化，例如Fab-dHLX-FSx2；F(ab‘)2-片段、scFv片段、多聚化的多价体或/和多特异性的scFv片段、二价的和/或双特异的双抗体、(双特异的T细胞衔接器)、三功能性的抗体、多价抗体、例如来自与G不同的类别；单一域抗体，例如衍生于骆驼科或鱼类免疫球蛋白的纳米抗体以及许多其他的。
除了抗ADM抗体之外，其他生物聚合物骨架为本领域中熟知的以复合靶分子并且已用于高靶标特异性生物聚合物的产生。实例为适配子、镜像异构体、anticalin和芋螺毒素。
在一优选的实施方案中，ADM抗体形式选自Fv片段、scFv片段、Fab片段、scFab片段、(Fab)2片段化scFv-Fc融合蛋白。在另一优选的实施方案中，抗体形式选自scFab片段、Fab片段、scFv片段及其生物利用度优化的接合物，诸如PEG化的片段。最优选的形式之一为scFab形式。
非Ig骨架可为蛋白骨架并且可用作抗体模拟物，因为它们能够结合配体或抗原。非Ig骨架可选自基于四连接素的非Ig骨架(例如(40)中所述)、纤连蛋白骨架(例如(41)中所述)；基于脂质运载蛋白的骨架((例如(42)中所述)；泛素蛋白骨架(例如(43)中所述)、转移骨架(例如(44)中所述)、蛋白A骨架(例如(45)中所述)、基于锚蛋白重复序列的骨架(例如(46)中所述)，优选微蛋白微蛋白形成胱氨酸结)骨架(例如(47)中所述)、基于FynSH3结构域的骨架(例如(48)中所述)、基于EGFR-A-结构域的骨架(例如(49)中所述)以及基于Kunitz结构域的骨架(例如(59)中所述)。
在另一优选的实施方案中，抗ADM抗体或结合ADM的抗体片段为单特异性抗体。单特异性抗体为对相同抗原都具有亲合力的抗体。单克隆抗体为单特异性的，但是除了自普通生殖细胞产生它们之外还可以通过其他的方式产生单特异性抗体。
在本发明一优选的实施方案中，可如下所述的产生本发明的抗体：用100μg ADM-肽-BSA-接合物(乳化于100μl完全弗氏佐剂)在第0天与14天和用50μg在第21天与28天(100μl不完全弗氏佐剂中)免疫Balb/c小鼠。在进行融合试验前3天，动物接受溶于100μl盐水中的50μg接合物，给予一次腹膜内注射和一次静脉内注射。
在37℃下，用1ml50％聚乙二醇使来自免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0的细胞融合30秒。洗涤后，将细胞接种于96孔细胞培养平板中。通过生长于HAT培养基[添加了20％胎牛血清和HAT补充物的RPMI1640培养基]中挑选杂交克隆。两周后用HT培养基代替HAT培养基持续3次细胞传代然后返回到正常的细胞培养基。
融合后3周针对抗原特异的IgG抗体初次筛选细胞培养上清液。将测试阳性的微量细胞培养转移到24孔平板中用以增殖。再测试后，利用有限稀释技术克隆及再克隆挑选的培养物并且检测同种型(还参阅(51)和(52))。
可借助于噬菌体展示根据下列程序产生抗体：人类天然抗体基因文库HAL7/8用于分离抗肾上腺髓质素肽的重组单链F-可变域(scFv)。利用包括使用经由两种不同的间隔区将含有生物素标签的肽连接到肾上腺髓质素肽序列的筛选策略来筛选抗体基因文库。利用非特异性结合抗原和链霉亲和素结合抗原的筛选轮的混合用于使非特异的结合部分的背景最小化。来自于第三轮筛选的洗脱噬菌体已用于传代表达单克隆scFv的大肠杆菌(E.coli)菌株。来自于这些克隆株的培养物的上清液已直接地用于抗原ELISA检测。(53)和(54)。
根据下列程序进行鼠抗体的人源化：对小鼠来源的抗体的人源化而言，针对框架区(FR)与互补决定区(CDR)和抗原的结构相互作用分析抗体序列。基于结构模拟，挑选适当的人源的FR并且将小鼠CDR序列移植到人FR。CDR或FR的氨基酸序列中的变异可能会被引入到恢复结构的相互作用，这可通过将种类转换为FR序列而消除。可通过利用噬菌体展示文库的随机方法或经由通过分子模拟所引导的直接方法(55)达到这种结构相互作用的回复。
抗体的研发
我们研发了结合hADM的N末端、中间区域和C末端部分的小鼠单克隆抗体并且检测它们的亲合常数(表1)。
用于免疫作用的肽
JPT肽技术股份有限公司(柏林，德国)提供了肽。利用Sulfo-SMCC交联方法将肽接合到BSA。根据制造说明书进行交联程序(Thermo Fisher/Pierce)。
实施例1
抗体的产生与它们亲合常数的检测
根据下列的方法产生小鼠抗体：用100μg肽-BSA-接合物在第0天和14天(乳化于100μl完全弗氏佐剂)及用50μg(100μl不完全弗氏佐剂中)在第21天和28天免疫Balb/c小鼠。进行融合试验之前三天，动物接受溶于100μl盐水中的50μg接合物，给予一次腹膜内注射和一次静脉内注射。
在37℃下，用1ml50％聚乙二醇使来自免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0的细胞融合30秒。洗涤后，将细胞接种于96孔细胞培养平板中。通过生长于HAT培养基[添加了20％胎牛血清和HAT补充物的RPMI1640培养基]中挑选杂交克隆。两周后用HT培养基代替HAT培养基持续3次细胞传代然后返回到正常的细胞培养基。
融合后3周针对抗原特异的IgG抗体初次筛选细胞培养上清液。将测试阳性的微量细胞培养转移到24孔平板中用以增殖。再测试后，利用有限稀释技术克隆及再克隆挑选的培养物并且检测同种型。((51)和(52))。
表1：
单克隆抗体的产生
经由标准的抗体产生方法(56)产生抗体并且经由蛋白A纯化。基于SDS凝胶电泳分析，抗体纯度为>95％。
亲合常数
为检测抗体对肾上腺髓质素的亲和力，利用Biacore2000系统(GE Healthcare欧洲股份有限公司,弗莱堡,德国)借助于无标记的表面等离子共振检测肾上腺髓质素与固定化抗体结合的动力学。根据制造说明书(小鼠抗体捕获试剂盒；GE Healthcare)，利用高密度地共价接合CM5感应器表面的抗小鼠Fc抗体，进行抗体的可逆性固定化。(22)。
标记程序(示踪物):将100μg(100μl)抗体(PBS中1mg/ml，pH7.4)与10μl吖啶NHS-酯(Akridinium NHS-ester)(1mg/ml的乙腈溶液，InVent股份有限公司,德国)(57)混合，并且在室温下孵育20分钟。通过SEC400-5(Bio-Rad Laboratories,Inc.,USA)上的凝胶过滤HPLC纯化标记的CT-H。将纯化的标记的抗体在(300mmol/L磷酸钾,100mmol/LNaCl,10mmol/L Na-EDTA,5g/L牛血清白蛋白,pH7.0)中稀释。最终的浓度为标记的化合物(大约20ng标记的抗体)的大约800.000相对光单位(RLU)/200μl。通过利用AutoLumatLB953(Berthold Technologies GmbH&Co.KG)检测吖啶酯(Akridiniumester)化学发光。
固相：用抗体((1.5μg抗体/0.3mL100mmol/L NaCl,50mmol/L TRIS/HCl,pH7.8)包被(室温下18小时)聚苯乙烯管(Greiner Bio-One International AG,奥地利)。用5％牛血清白蛋白封闭后，用PBS、pH7.4洗涤管，并且真空干燥。
校准物：利用50mM Tris/HCl,250mM NaCl,0,2％Triton X-100,0.5％BSA,20tabs/L蛋白酶完全的蛋白酶抑制剂Cocktail Tablets(Roche AG)；pH7.8线性地稀释合成的人ADM(Bachem,瑞士)。使用前校准物储存于-20℃。
实施例2
产生高信噪比的抗体组合的检测
hADM免疫测定：
用移液器吸取50μl样品(或校准物)至包被管中，在添加标记的第二抗体(200μl)之后，在室温下孵育管2小时。通过用洗涤溶液(20mM PBS,pH7.4,0.1％Triton X-100)洗涤5次去除未结合的示踪物。
通过使用LB953检测管结合的化学发光。
所有抗体都用于夹心免疫测定，作为包被管和标记的抗体并且在下列的变异中组合(表2)：
如下面所述的hADM免疫测定进行孵育。结果显示为特异信号(为10ng/ml ADM)/背景信号(没有ADM的样品)的比率。
表2：
令人惊奇地，我们发现MR-ADM与CT-ADM作为组合的组合物有最高的信噪比。
随后，我们使用这一抗体-组合用于进一步的研究。我们将MR-ADM用作固相抗体而CT-ADM作为标记的抗体。典型的剂量/信号曲线显示于图1中。测定的分析敏感性(10次循环的平均值，无ADM样品+2SD)为2pg ADM/ml。
实施例3
人肾上腺髓质素的稳定性：
将人ADM稀释于人枸橼酸血浆(n＝5,最终浓度为10ng ADM/ml)中并且在24℃下孵育。在所选的时间点时，将等分试样冷冻于-20℃下。样品融化后，通过使用以上所述的hADM免疫测定即刻定量样品hADM。
表3 显示了24℃下人血浆中hADM的稳定性
令人惊奇地，在夹心免疫测定中使用抗体组合MR-ADM与CT-ADM时，分析物的预分析稳定性为高的(只有平均0.9％/小时的免疫反应损失)。与此相反，使用其他测定方法，据报道血浆半衰期只有22分钟(Hinson2000)。因为医院常规中取样到分析的时间小于2小时，所用的ADM检测方法适用于常规诊断。值得注意的是不需要任何非常规样品添加剂(如Aprotinin,(20))以达到可接受的ADM-免疫反应稳定性。
实施例4
校准物-制备的再现性
我们发现制备针对ADM测定的高变异(平均CV8.5％,参见表4)的结果。这可能是由于塑料和玻璃表面对hADM的高吸收所致(也参见(58)。通过添加去垢剂(高达1％TritonX100或1％Tween20)、蛋白(达到5％BSA)及高离子强度(达到1M Nacl)或其组合只能稍微地减轻这种影响。令人惊奇地，如果将多余的抗ADM抗体(10ug/ml)添加到校准物稀释缓冲液，ADM测定校准物-制备的回复和再现性大为改善至<1％制备间CV(表4)。
幸运地，N末端抗体的存在不影响通过MR-与C末端抗体的组合所产生的ADM-信号(图11)。
表4：
校准物的制备间变异。
如以上所述的用或不用10ug/ml NT-ADM-抗体制备ADM测定校准物。变异系数来自于5次独立的制备运行。利用以上所述的ADM测定检测校准物。s/n-r＝信号与噪声的比率。
对所有下列的研究而言，我们使用ADM测定，基于校准物，在10ug/ml NT-ADM抗体存在的情况下制备，并且10ug/ml NT-ADM抗体作为示踪物缓冲液中的补充。
实施例5
敏感性
测定敏感性的目标为完全地覆盖健康个体的ADM浓度。
健康个体的ADM浓度：
利用ADM测定测量健康个体(n＝100，平均年龄56岁)。中位数值为24.7pg/ml，最低值为11pg/ml并且第99位百分位数为43pg/ml。因为测定敏感性为2pg/ml，利用所述的ADM测定，所有健康个体100％都是可检测的(参见图2)。
实施例6
临床研究
符合败血症定义(59)的101例ED患者随后住院(平均5天的住院治疗)并且接受了标准的护理治疗。EDTA-血浆产生于第1天(ED呈现)并且在住院期间每天取样。将样品冷冻用于下一步的ADM测量的时间小于4小时。
患者特征总结于表5中
表5
住院期间所有患者的26.7％死亡，这被看作是治疗不响应者，所有患者的73.3％幸存于败血症，这被看作是治疗响应者。
所有患有败血症患者的66％具有非正常的ADM值>43pg/ml(第99位百分位数)，这表明ADM不是感染的标志物。
临床研究的结果
初始的ADM是高度预后的。
我们将初始的ADM值与医院死亡率关联并且比较ADM与APACHE2败血症评分(参见(60)。ADM对败血症后果是高度预后的并且与APACHE2评分是可比较的。如果组合ADM与APACHE就有有重大意义的补充信息(图4)。
治疗监测中的ADM
基于护理治疗的标准治疗患者(表5)。平均的住院时间为5天。住院中每天测量ADM(第1天＝入院时间)并且与住院死亡率相互关联(表6)。住院期间改变的ADM和在这期间的变化改善了52％预后值，在第5天从初始的Chi219.2到29.2。
利用70pg/ml ADM的简单阈值模型，对起始ADM浓度>70pg/ml和在住院期间仍然>70pg/ml(治疗不响应者)的患者而言，显示了68％死亡风险。全部时间ADM值<70pg/ml或从>70pg/ml发展到<70pg/ml的患者具有只有11％的死亡率(治疗良好/治疗响应者)，并且ADM值>70pg/ml并且在住院治疗期间将他们的ADM浓度降低到值<70pg/ml的患者具有0％死亡率。住院治疗期间没有患者从<70pg/ml发展到>70pg/ml。对所有患者而言，产生响应者/不响应者信息所需要的时间为大约1天。住院期间对治疗响应的>70pg/ml的患者通过ADM需要大约2天来提示治疗成功。
表6
文献
(1)Kitamura,K.,et al.,"Adrenomedullin:A Novel Hypotensive PeptideIsolated From Human Pheochromocytoma",Biochemical and Biophysical ResearchCommunications,Vol.192(2),pp.553-560(1993).
(2)Editorial,Takahashi,K.,"Adrenomedullin:from a pheochromocytoma tothe eyes",Peptides,Vol.22,p.1691(2001).
(3)Eto,T.,"A review of the biological properties and clinicalimplications of adrenomedullin and proadrenomedullin N-terminal20peptide(PAMP),hypotensive and vasodilating peptides",Peptides,Vol.22,pp.1693-1711(2001).
(4)Hinson,et al.,"Adrenomedullin,a Multifunctional RegulatoryPeptide",Endocrine Reviews,Vol.21(2),pp.138-167(2000).
(5)Kitamura,K.,et al.,"The intermediate form of glycine-extendedadrenomedullin is the major circulating molecular form in human plasma",Biochem.Biophys.Res.Commun.,Vol.244(2),pp.551-555(1998).Abstract Only.
(6)Pio,R.,et al.,"Complement Factor H is a Serum-binding Protein forAdrenomedulli,and the Resulting Complex Modulates the Bioactivities of BothPartners",The Journal of Biological Chemistry,Vol.276(15),pp.12292-12300(2001).
(7)Kuwasako,K.,et al.,"Purification and characterization of PAMP-12(PAMP-20)in porcine adrenal medulla as a major endogenous biologically activepeptide",FEBS Lett,Vol.414(1),pp.105-110(1997).Abstract Only.
(8)Kuwasaki,K.,et al.,"Increased plasma proadrenomedullin N-terminal20peptide in patients with essential hypertension",Ann.Clin.Biochem.,Vol.36(Pt.5),pp.622-628(1999).Abstract Only.
(9)Tsuruda,T.,et al.,"Secretion of proadrenomedullin N-terminal20peptide from cultured neonatal rat cardiac cells",Life Sci.,Vol.69(2),pp.239-245(2001).Abstract Only.
(10)EP 0 622 458 A2
(11)Hirata,et al.,"Increased Circulating Adrenomedullin,a NovelVasodilatory Peptide,in Sepsis",Journal of Clinical Endocrinology andMetabolism,Vol.81(4),pp.1449-1453(1996).
(12)Ehlenz,K.,et al.,"High levels of circulating adrenomedullin insevere illness:Correlation with C-reactive protein and evidence against theadrenal medulla as site of origin",Exp Clin Endocrinol Diabetes,Vol.105,pp.156-162(1997).
(13)Tomoda,Y.,et al.,"Regulation of adrenomedullin secretion fromcultured cells",Peptides,Vol.22,pp.1783-1794(2001).
(14)Ueda,S.,et al.,"Increased Plasma Levels of Adrenomedullin inPatients with Systemic Inflammatory Response Syndrome",Am.J.Respir.Crit.CareMed.,Vol.160,pp.132-136(1999).
(15)Wang,P.,"Andrenomedullin and cardiovascular responses in sepsis",Peptides,Vol.22,pp.1835-1840(2001).
(16)Wang1998
(17)Wang1998Arch Surg,Itoh,2007
(18)Parlapiano,C.,et al.；“Adrenomedulin assay and its clinicalsignificance”,European Review for Medical and Pharmacological Sciences,1999；3:53-61
(19)Hirata2007
(20)Ohta1999
(21)Kitamura1994
(22)Lorenz et al.,“Functional Antibodies Targeting IsaA ofStaphylococcus aureus Augment Host Immune Response and Open New Perspectivesfor Antibacterial Therapy“；Antimicrob Agents Chemother.2011January；55(1):165–173.
(23)The Immunoassay Handbook,Ed.David Wild,Elsevier LTD,Oxford；3rded.(May2005),ISBN-13:978-0080445267；Hultschig C et al.,Curr Opin ChemBiol.2006Feb；10(1):4-10.PMID:16376134
(24)Kirk-Othmer,Encyclopedia of chemical technology,4th ed.,executiveeditor,J.I.Kroschwitz；editor,M.Howe-Grant,John Wiley&Sons,1993,vol.15,p.518-562,incorporated herein by reference,including citations on pages551-562.
(25)Schuetz P,et al.PCT follow up measurement for monitoringantibiotic treatment success；8Cochrane Database Syst Rev.2012Sep12；9:CD007498.Procalcitonin to initiate or discontinue antibiotics in acuterespiratory tract infections.
(26)Christ-Crain M,et al.“Procalcitonin guidance of antibiotictherapy in community-acquired pneumonia:a randomized trial”Am J Respir CritCare Med.2006Jul1；174(1):84-93.Epub2006Apr7.
(27)Lanzavecchia et al.,Eur.J.Immunol.17:105,1987；
(28)Huston et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,85:5879-5883,1988；
(29)Bird et al.,Science242:423-426,1988；
(30)Hood et al.,Immunology,Benjamin,N.Y.,2nd ed.,1984；
(31)Hunkapiller and Hood,Nature323:15-16,1986)
(32)E.Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Department of Health and Human Services,1983
(33)U.S.Patent No.5,807,715.
(34)U.S.Patent No.5,585,089
(35)Dower et al.,PCT Publication No.WO91/17271；
(36)McCafferty et al.,PCT Publication No.WO92/001047；
(37)Winter,PCT Publication No.WO92/20791
(38)Lonberg et al.,PCT Publication No.WO93/12227；and
(39)Kucherlapati,PCT Publication No.WO91/10741,
(40)US2010/0028995
(41)EP1266025；
(42)WO2011/154420
(43)WO2011/073214
(44)US2004/0023334
(45)EP2231860
(46)WO2010/060748
(47)EP2314308
(48)WO2011/023685
(49)WO2005/040229
(50)EP1941867
(51)Lane,R.D.(1985).A short-duration polyethylene glycolfusiontechnique for increasing production of monoclonal antibody-secretinghybridomas.J.Immunol.Meth.81:223-228；
(52)Ziegler,B.et al.(1996)Glutamate decarboxylase(GAD)is notdetectable on the surface of rat islet cells examined by cytofluorometry andcomplement-dependent antibody-mediated cytotoxicity of monoclonal GADantibodies,Horm.Metab.Res.28:11-15).
(53)Hust,M.,et al.2011.A human scFv antibody generation pipeline forproteome research.Journal of Biotechnology152,159–170；
(54)Schütte,M.,et al.2009.Identification of a putative Crf splicevariant and generation of recombinant antibodies for the specific detectionof Aspergillus fumigatus.PLoS One4,e6625)
(55)Almagro JC,Fransson J.,2008.Humanization of antibodies.FrontBiosci.2008Jan1；13:1619-33.
(56)Marx et al.,Monoclonal Antibody Prodcution,ATLA25,121,1997
(57)EP 0 353 971
(58)Lewis,L.,et al.,"Adrenomedullin(I-52)measured in human plasma byradioimmunoassay:plasma concentration,adsorption,and storage",ClinicalChemistry,Vol.44(3),pp.571-577(1998).
(59)Crit Care Med.2008Jan；36(1):296-327.
(60)Knaus et al.,1985,2001
附图描述
图1显示了典型的hADM剂量/响应曲线，利用MR-ADM作为固相抗体和CT-ADM作为标记抗体。
图2：利用ADM测定测量健康个体(n＝100，平均年龄56岁)。中位数值为24.7pg/ml，最低值为11pg/ml并且第99位百分位数为43pg/ml。因为测定敏感性为2pg/ml，利用所述的ADM测定，所有健康个体100％都是可检测的。
图3：住院死亡率的预测-来自于逻辑回归的结果。
图4：住院死亡率的预测-ADM独立于Apache并且提供了额外的预后信息。
图5-10：单独患者的ADM-动力学。
图5和图6：幸存者，ED展示(第1天)和住院期间ADM<70pg/ml。ADM提示良好治疗的患者。
图7和图8：幸存者，ADM在ED展示(第一天)时高于70pg/ml并且在住院治疗期间降低到值低于70pg/ml(治疗响应者)。
图9和图10：已故的患者，ADM在ED展示(第一天)时高于70pg/ml并且在住院治疗期间没有降低到值低于70pg/ml(治疗不响应者)。
图11：在N末端抗体存在和缺失的情况下ADM测定。如以上所述的进行ADM测定。A)参考曲线B)在NT-ADM抗体(10μg/ml,3.33μg/测试)存在的情况下。NT-ADM抗体的添加不影响ADM测定。
序列
SEQ ID No.1:ADM21-52
CTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGY-CONH2
SEQ ID No.2:ADM21-52-Gly
CTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGYG
SEQ ID No.3:PreProADM
MKLVSVALMYLGSLAFLGADTARLDVASEFRKKWNKWALSRGKRELRMSSSYPTGLADVKAGPAQTLIRPQDMKGASRSPEDSSPDAARIRVKRYRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGYGRRRRRSLPEAGPGRTLVSSKPQAHGAPAPPSGSAPHFL
SEQ ID No.4:ADM1-52
YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGY-CONH2
SEQ ID No.5:ADM1-52-Gly
YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGYG
SEQ ID No.6:ADM21-32
CTVQKLAHQIYQ
SEQ ID No.7:ADM42-52
APRSKISPQGY
SEQ ID No.8:ADM1-16-Gly(氨基酸)
YRQSMNNFQGLRSFGC

Claims (51)

1.两种结合部分在制备用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly和/或肾上腺髓质素-Gly的试剂中的用途，其中所述两种结合部分选自抗肾上腺髓质素抗体，或结合ADM的抗ADM抗体片段，或结合肾上腺髓质素的非Ig骨架，所述两种结合部分结合SEQ ID No.1所示的氨基酸21-52-氨基或SEQ ID No.2所示的氨基酸21-52-Gly中两个不同的区域，其中每一个所述区域包含至少4个或5个氨基酸，并且其中所述试剂不用于人工包被管吖啶酯夹心测定。
2.两种结合部分在制备用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly和/或肾上腺髓质素-Gly的试剂中的用途，其中所述两种结合部分选自抗肾上腺髓质素抗体，或结合ADM的抗ADM抗体片段，或结合肾上腺髓质素的非Ig骨架，所述两种结合部分结合SEQ ID No.1所示的氨基酸21-52-氨基或SEQ ID No.2所示的氨基酸21-52-Gly中两个不同的区域，其中每一个所述区域包含至少4个或5个氨基酸，并且其中所述试剂用于人工包被管吖啶酯夹心测定，且其中所述结合部分中的一种为结合SEQ ID No.6CTVQKLAHQIYQ的抗体，其中所述结合部分中的另一种为结合SEQ ID No.7APRSKISPQGY-CO-NH2的抗体。
3.如权利要求1所述的用途，其中所述结合部分中的一种与SEQ ID No.4所示的成熟ADM和/或成熟ADM 1-52-Gly的序列中所含的区域结合，并且其中所述这些结合部分中的另一种与成熟ADM和/或SEQ ID No.5所示的成熟ADM 1-52-Gly的序列中所含的区域结合。
4.如权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述试剂的测定敏感性能够定量健康个体的ADM，为<10pg/ml。
5.如权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述试剂的测定敏感性能够定量健康个体的ADM，为<40pg/ml。
6.如权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述试剂的测定敏感性能够定量健康个体的ADM，为<70pg/ml。
7.如权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述结合部分展示了至少107M-1的与肾上腺髓质素的结合亲合力。
8.如权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述结合部分选自抗肾上腺髓质素抗体，或结合ADM的抗ADM抗体片段，或结合肾上腺髓质素的非Ig骨架。
9.如权利要求1或3所述的用途，其中所述试剂用于夹心测定。
10.如权利要求9所述的用途，其中所述试剂用于全自动测定。
11.如权利要求1-3中任一项所述的用途，其中标记所述两种结合部分中的至少一种以便于检测。
12.如权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述两种结合部分中的至少一种与固相结合。
13.如权利要求11所述的用途，其中所述标记选自化学发光标记、酶标记、荧光标记、放射性碘标记。
14.用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly和/或肾上腺髓质素-Gly的试剂盒，其包含两种结合部分，所述两种结合部分选自抗肾上腺髓质素抗体，或结合ADM的抗ADM抗体片段，或结合肾上腺髓质素的非Ig骨架，所述两种结合部分结合SEQ IDNo.1所示的氨基酸21-52-氨基或SEQ ID No.2所示的氨基酸21-52-Gly中两个不同的区域，其中每一个所述区域包含至少4个或5个氨基酸，并且其中所述试剂盒不用于人工包被管吖啶酯夹心测定，且所述试剂盒的组分可包含在一个或多个容器内。
15.如权利要求14所述的试剂盒，其中所述结合部分中的一种与SEQ ID No.4所示的成熟ADM和/或成熟ADM 1-52-Gly的序列中所含的区域结合，并且其中所述这些结合部分中的另一种与成熟ADM和/或SEQ ID No.5所示的成熟ADM 1-52-Gly的序列中所含的区域结合。
16.用于检测样品中成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly和/或肾上腺髓质素-Gly的试剂盒，其包含两种结合部分，所述两种结合部分选自抗肾上腺髓质素抗体，或结合ADM的抗ADM抗体片段，或结合肾上腺髓质素的非Ig骨架，所述两种结合部分结合SEQ IDNo.1所示的氨基酸21-52-氨基或SEQ ID No.2所示的氨基酸21-52-Gly中两个不同的区域，其中每一个所述区域包含至少4个或5个氨基酸，并且其中所述试剂盒用于人工包被管吖啶酯夹心测定，且其中所述结合部分中的一种为结合SEQ ID No.6CTVQKLAHQIYQ的抗体，其中所述结合部分中的另一种为结合SEQ ID No.7APRSKISPQGY-CO-NH2的抗体。
17.如权利要求14-16中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒的测定敏感性能够定量健康个体的ADM，为<10pg/ml。
18.如权利要求14-16中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒的测定敏感性能够定量健康个体的ADM，为<40pg/ml。
19.如权利要求14-16中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒的测定敏感性能够定量健康个体的ADM，为<70pg/ml。
20.如权利要求14-16中任一项所述的试剂盒，其中所述结合部分展示了至少107M-1的与肾上腺髓质素的结合亲合力。
21.如权利要求14-16中任一项所述的试剂盒，其中所述结合部分选自抗肾上腺髓质素抗体，或结合ADM的抗ADM抗体片段，或结合肾上腺髓质素的非Ig骨架。
22.如权利要求14或15所述的试剂盒，其中所述试剂盒用于夹心测定。
23.如权利要求22所述的试剂盒，其中所述试剂盒用于全自动测定。
24.如权利要求14-16中任一项所述的试剂盒，其中标记所述两种结合部分中的至少一种以便于检测。
25.如权利要求24所述的试剂盒，其中所述标记选自化学发光标记、酶标记、荧光标记、放射性碘标记。
26.如权利要求14-16中任一项所述的试剂盒，其中所述两种结合部分中的至少一种与固相结合。
27.如权利要求14-16中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包含与成熟肾上腺髓质素和/或SEQ ID No.8所示的肾上腺髓质素-Gly氨基酸1-16内至少5个氨基酸的区域结合的结合部分。
28.如权利要求27所述的试剂盒，其中所述结合部分识别成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly的N末端并与其结合。
29.结合部分在制备用于校准权利要求14-28中任一项所述的试剂盒的试剂中的用途，其中所述结合部分与成熟肾上腺髓质素和/或SEQ ID No.8所示的肾上腺髓质素-Gly氨基酸1-16内至少5个氨基酸的区域结合。
30.如权利要求29所述的用途，其中所述结合部分识别成熟肾上腺髓质素和/或肾上腺髓质素-Gly的N末端并与其结合。
31.两种结合部分在制备用于疑似患有败血症的患者的治疗随访的试剂盒中的用途，其中利用包含所述两种结合部分的测定来确定所述败血症患者的体液样品中成熟ADM 1-52和/或成熟ADM 1-52-Gly的浓度，所述两种结合部分选自抗肾上腺髓质素抗体，或结合ADM的抗ADM抗体片段，或结合肾上腺髓质素的非Ig骨架，所述两种结合部分结合SEQ IDNo.1所示的氨基酸21-52-氨基或SEQ ID No.2所示的氨基酸21-52-Gly中两个不同的区域，且其中每一个所述区域包含至少4个或5个氨基酸。
32.如权利要求31所述的用途，其中所述结合部分中的一种与SEQ ID No.4所示的成熟ADM和/或成熟ADM 1-52-Gly的序列中所含的区域结合，并且其中所述这些结合部分中的另一种与成熟ADM和/或SEQ ID No.5所示的成熟ADM 1-52-Gly的序列中所含的区域结合。
33.如权利要求31或32所述的用途，其中所述测定的测定敏感性能够定量健康个体的ADM，为<10pg/ml。
34.如权利要求31或32所述的用途，其中所述测定的测定敏感性能够定量健康个体的ADM，为<40pg/ml。
35.如权利要求31或32所述的用途，其中所述测定的测定敏感性能够定量健康个体的ADM，为<70pg/ml。
36.如权利要求31或32所述的用途，其中所述结合部分展示了至少107M-1的与成熟ADM和/或成熟ADM 1-52-Gly的结合亲合力。
37.如权利要求31或32所述的用途，其中所述结合部分选自抗肾上腺髓质素抗体，或结合ADM的抗ADM抗体片段，或结合肾上腺髓质素的非Ig骨架。
38.如权利要求31或32所述的用途，其中所述测定为夹心测定。
39.如权利要求38所述的用途，其中所述测定为全自动测定。
40.如权利要求31或32所述的用途，其中标记所述两种结合部分中的至少一种以便于检测。
41.如权利要求31或32所述的用途，其中所述两种结合部分中的至少一种与固相结合。
42.如权利要求40所述的用途，其中所述标记选自化学发光标记、酶标记、荧光标记、放射性碘标记。
43.如权利要求31或32所述的用途，其中样品中所测的所述成熟ADM 1-52和/或成熟ADM 1-52-Gly的浓度在10-500pg/ml的范围。
44.如权利要求31或32所述的用途，其中应用阈值，从而所述阈值以上的值表示患者对所述治疗无响应或响应差，而低于所述阈值的值表示患者对所述治疗响应。
45.如权利要求31或32所述的用途，其中应用60-80pg/ml的阈值。
46.如权利要求45所述的用途，其中应用70pg/ml的阈值。
47.如权利要求31或32所述的用途，其中所述样品选自人枸橼酸血浆、肝素血浆、EDTA血浆、全血。
48.如权利要求47所述的用途，其中直接测量采取的所述样品而没有任何进一步的样品制备。
49.如权利要求31或32所述的用途，其中所述测定在全自动设备上进行。
50.如权利要求31或32所述的用途，其中在至少两种样品中检测所述成熟ADM 1-52和/或成熟ADM 1-52-Gly，其中所述样品在不同时间点取自所述败血症患者。
51.如权利要求31或32所述的用途，其中所测的所述样品的体积为小于或等于50μl。
CN201280066354.5A 2011-11-16 2012-11-16 肾上腺髓质素测定与用于确定成熟肾上腺髓质素的方法 Active CN104067130B (zh)

Applications Claiming Priority (23)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11189452 2011-11-16
EP11189448.1 2011-11-16
EP11189447 2011-11-16
EP11189449 2011-11-16
EP11189447.3 2011-11-16
EP11189452.3 2011-11-16
EP11189450.7 2011-11-16
EP11189448 2011-11-16
EP11189449.9 2011-11-16
EP11189450 2011-11-16
EP12160014 2012-03-16
EP12160017 2012-03-16
EP12160016.7 2012-03-16
EP12160016 2012-03-16
EP12160018.3 2012-03-16
EP12160018 2012-03-16
EP12160015 2012-03-16
EP12160017.5 2012-03-16
EP12160015.9 2012-03-16
EP12160014.2 2012-03-16
EP12186449.0 2012-09-27
EP12186449 2012-09-27
PCT/EP2012/072928 WO2013072509A1 (en) 2011-11-16 2012-11-16 Adrenomedullin assays and methods for determining mature adrenomedullin

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104067130A CN104067130A (zh) 2014-09-24
CN104067130B true CN104067130B (zh) 2017-02-22

Family

ID=47148677

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280066354.5A Active CN104067130B (zh) 2011-11-16 2012-11-16 肾上腺髓质素测定与用于确定成熟肾上腺髓质素的方法

Country Status (16)

Country Link
US (3) US9140696B2 (zh)
EP (1) EP2780717B1 (zh)
JP (1) JP6336911B2 (zh)
CN (1) CN104067130B (zh)
DK (1) DK2780717T3 (zh)
ES (1) ES2617211T3 (zh)
HK (1) HK1202624A1 (zh)
HR (1) HRP20170427T1 (zh)
HU (1) HUE032648T2 (zh)
MY (5) MY192113A (zh)
PL (1) PL2780717T3 (zh)
PT (1) PT2780717T (zh)
RS (1) RS55804B1 (zh)
RU (1) RU2657517C2 (zh)
SI (1) SI2780717T1 (zh)
WO (1) WO2013072509A1 (zh)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140328853A1 (en) 2011-11-16 2014-11-06 Adrenomed Ag Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for prevention or reduction of organ dysfunction or organ failure in a patient having a chronic or acute disease or acute condition
PL2780370T3 (pl) 2011-11-16 2020-01-31 Adrenomed Ag Przeciwciało przeciwko adrenomedulinie (adm) lub fragment przeciwciała przeciwko adp lub szkielet przeciwko adm inny niż ig do zastosowania do stabilizacji krążenia w terapii ostrej choroby lub ostrego stanu pacjenta
PT2780371T (pt) 2011-11-16 2019-01-30 Adrenomed Ag Anticorpo anti-adrenomedulina (adm) ou fragmento de anticorpo anti-adm ou uma estrutura não ig anti-adm para a regulação do equilíbrio de fluidos num doente com uma doença aguda ou crónica
KR101548284B1 (ko) 2014-05-23 2015-08-28 주식회사 나노엔텍 신규한 시료 내 검출대상물의 검출방법 및 그를 이용한 검출키트
US20180348235A1 (en) * 2015-11-27 2018-12-06 B.R.A.H.M.S Gmbh MR-proADM as marker for the extracellular volume status of a subject
CA3033102A1 (en) * 2016-08-09 2018-02-15 B.R.A.H.M.S Gmbh Histones and/or proadm as markers indicating organ dysfunction
EP3309550A1 (en) * 2016-10-12 2018-04-18 sphingotec GmbH Method for the detection of apolipoprotein e4
CN110167962A (zh) * 2016-12-16 2019-08-23 艾德里诺医药公司 用于干预和治疗需要的患者的充血的抗肾上腺髓质素(ADM)抗体或抗ADM抗体片段或抗ADM非Ig支架
JP6862963B2 (ja) * 2017-03-17 2021-04-21 東ソー株式会社 ペプチドの吸着抑制剤
WO2018216580A1 (ja) * 2017-05-22 2018-11-29 東ソー株式会社 アドレノメデュリン濃度変動による予後予測の情報提供方法及びその試薬
EP3682236A1 (en) * 2017-09-13 2020-07-22 B.R.A.H.M.S GmbH Proadrenomedullin as indicator for renal replacement therapy in critically ill patients
EP3854414A1 (en) * 2017-09-25 2021-07-28 AdrenoMed AG Anti-adrenomedullin (adm) binder for use in therapy or prevention of symptoms of illness
WO2019077082A1 (en) 2017-10-18 2019-04-25 Adrenomed Ag SURVEILLANCE OF THERAPY UNDER TREATMENT WITH ANTI-ADRENOMEDULIN BINDER (ADM)
SG11202006686SA (en) * 2018-02-08 2020-08-28 Sphingotec Gmbh Adrenomedullin (adm) for diagnosis and/or prediction of dementia and anti-adrenomedullin binder for use in therapy or prevention of dementia
EP3760640A4 (en) * 2018-02-27 2021-11-17 Shimadzu Corporation ANTIBODIES SPECIFICALLY RECOGNIZING THE N-TERMINAL END OF APP669-X, AND METHOD OF IMMUNOLOGICAL ASSAY
WO2019167128A1 (ja) * 2018-02-27 2019-09-06 株式会社 島津製作所 サンドイッチ型免疫測定法
EP3608673A1 (en) * 2018-08-08 2020-02-12 B.R.A.H.M.S GmbH Pro-adm for prognosing the risk of a medical condition requiring hospitalization in patients with symptoms of infectious disease
US20220137071A1 (en) * 2019-03-01 2022-05-05 Shimadzu Corporation Method and kit for measuring app669-711
CN110470771B (zh) * 2019-09-05 2021-06-01 清华大学 一种评价转基因植物食用安全性的方法

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
AU634716B2 (en) 1988-08-01 1993-03-04 Ciba Corning Diagnostics Corp. Method for detection of an analyte using acridinium esters and liposomes
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DE69120146T2 (de) 1990-01-12 1996-12-12 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
DK0585287T3 (da) 1990-07-10 2000-04-17 Cambridge Antibody Tech Fremgangsmåde til fremstilling af specifikke bindingsparelementer
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
WO1993012227A1 (en) 1991-12-17 1993-06-24 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
JP2774769B2 (ja) 1993-04-26 1998-07-09 賢治 寒川 アドレノメデュリン
WO1997007214A1 (en) * 1995-08-18 1997-02-27 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Functional role of adrenomedullin (am) and the gene-related product (pamp) in human pathology and physiology
CA2242308A1 (en) 1997-12-08 1999-06-08 Smithkline Beecham Laboratoires Pharmaceutiques Novel compounds
DE19847690A1 (de) 1998-10-15 2000-04-20 Brahms Diagnostica Gmbh Verfahren und Substanzen für die Diagnose und Therapie von Sepsis und sepsisähnlichen systemischen Infektionen
US6818418B1 (en) 1998-12-10 2004-11-16 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
EP1214600B1 (en) 1999-09-10 2005-12-21 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Determination of adrenomedullin-binding proteins
DE60235416D1 (de) 2001-05-04 2010-04-01 Biosite Inc Diagnostische Marker der akuten koronaren Syndrome und ihre Verwendungen
RU2209071C2 (ru) * 2001-08-08 2003-07-27 Ростовский НИИ акушерства и педиатрии Способ лечения сепсиса у детей
BR0212256A (pt) 2001-08-30 2004-08-31 Biorexis Pharmaceutical Corp Proteìnas de fusão de transferrina modificadas
US6864237B2 (en) 2002-05-17 2005-03-08 Ping Wang Treatment of shock using adrenomedullin and adrenomedullin binding protein-1
JP2005534647A (ja) 2002-06-07 2005-11-17 ダイアックス、コープ 失血の予防及び軽減
DE10316583A1 (de) 2003-04-10 2004-10-28 B.R.A.H.M.S Aktiengesellschaft Bestimmung eines midregionalen Proadrenomedullin-Teilpeptids in biologischen Flüssigkeiten zu diagnostischen Zwecken, sowie Immunoassays für die Durchführung einer solchen Bestimmung
EP1620734A1 (en) 2003-04-25 2006-02-01 Genova Ltd. Secreted polypeptide species reduced cardiovascular disorders
US6884781B2 (en) * 2003-05-16 2005-04-26 Ping Wang Treatment of shock using adrenomedullin binding protein-1
CA2537668A1 (en) * 2003-09-29 2005-04-14 Biosite Incorporated Methods and compositions for the diagnosis of sepsis
CA2543360A1 (en) 2003-10-24 2005-05-06 Joost A. Kolkman Ldl receptor class a and egf domain monomers and multimers
US20100028995A1 (en) 2004-02-23 2010-02-04 Anaphore, Inc. Tetranectin Trimerizing Polypeptides
EP1800131A2 (en) 2004-09-09 2007-06-27 Bayer HealthCare AG Diagnostics and therapeutics for diseases associated with adrenomedullin receptor (amdr)
US8278262B2 (en) 2004-09-21 2012-10-02 Biontech Ag Use of microproteins as tryptase inhibitors
US9829494B2 (en) 2005-12-01 2017-11-28 Adrenomed Ag Methods of treatment using ADM antibodies
US7993832B2 (en) * 2006-08-14 2011-08-09 Xdx, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring the status of transplant rejection and immune disorders
ATE527353T1 (de) 2007-12-19 2011-10-15 Affibody Ab Pdgf-bindendes polypeptid aus protein a
EP2358746B1 (en) 2008-11-03 2020-09-16 Molecular Partners AG Binding proteins inhibiting the vegf-a receptor interaction
CN102869678A (zh) 2009-08-27 2013-01-09 科瓦根股份公司 Il-17结合化合物及其医药用途
CA2778871C (en) 2009-12-14 2017-08-01 Scil Proteins Gmbh Modified ubiquitin proteins having a specific binding activity for the extradomain b of fibronectin
DE102010040035A1 (de) 2010-03-04 2011-09-08 Robert Bosch Gmbh Verbesserungen der Rückwärts-Analyse zur Bestimmung von Fehlermaskierungsfaktoren
WO2011154420A2 (en) 2010-06-08 2011-12-15 Pieris Ag Tear lipocalin muteins binding il-4 r alpha
FR2964103B1 (fr) * 2010-08-30 2018-11-23 Universite D'aix-Marseille Anticorps se liant a l'adrenomedulline et aux recepteurs de l'adrenomedulline et leurs utilisations comme medicament

Also Published As

Publication number Publication date
EP2780717B1 (en) 2016-12-21
CN104067130A (zh) 2014-09-24
US20140322824A1 (en) 2014-10-30
HK1202624A1 (zh) 2015-10-02
MY174894A (en) 2020-05-20
MY178654A (en) 2020-10-20
DK2780717T3 (en) 2017-02-13
PL2780717T3 (pl) 2017-06-30
JP2014533827A (ja) 2014-12-15
ES2617211T3 (es) 2017-06-15
RU2014123987A (ru) 2015-12-27
EP2780717A1 (en) 2014-09-24
JP6336911B2 (ja) 2018-06-06
RS55804B1 (sr) 2017-08-31
US9304127B2 (en) 2016-04-05
US9140696B2 (en) 2015-09-22
RU2657517C2 (ru) 2018-06-14
MY175997A (en) 2020-07-20
HRP20170427T1 (hr) 2017-06-16
MY192113A (en) 2022-07-28
MY174877A (en) 2020-05-20
US9535060B2 (en) 2017-01-03
US20130195875A1 (en) 2013-08-01
HUE032648T2 (en) 2017-10-30
SI2780717T1 (sl) 2017-05-31
PT2780717T (pt) 2017-02-16
WO2013072509A1 (en) 2013-05-23
US20130195874A1 (en) 2013-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104067130B (zh) 肾上腺髓质素测定与用于确定成熟肾上腺髓质素的方法
JP6820399B2 (ja) 血圧降下治療をガイドするアドレノメジュリン
US20220268761A1 (en) Therapy monitoring under treatment with an anti-adrenomedullin (adm) binder
US20240085438A1 (en) Adrenomedullin assays and methods for determining mature andrendomedullin
CN109716136A (zh) 肾上腺髓质素用于评估急性心力衰竭患者的充血
KR20120064072A (ko) 콜라겐 네오에피토프 항체
US20230104578A1 (en) Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for use in therapy or prevention of shock
JP5770092B2 (ja) ヒトｈｉｇ１ポリペプチドに対するモノクローナル抗体
JP6407990B2 (ja) アウグリン免疫学的検定
RU2776811C2 (ru) Мониторинг терапии при лечении связывающим веществом против адреномедуллина (adm)
WO2024023369A1 (en) Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for use in therapy or prevention of shock
JP2003274946A (ja) 肝細胞増殖因子活性化因子阻害因子−１に対する抗体とその用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1202624

Country of ref document: HK

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1202624

Country of ref document: HK