CN104034570A - 一种海蜇石蜡切片制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种海蜇石蜡切片制备方法，步骤包括：原料的处理与固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与染色。本发明建立适用于不同海蜇原料的固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及染色等步骤方法。建立了中性缓冲甲醛固定液与酒精醋酸甲醛混合固定液相结合的二次固定方法，并对常规酒精醋酸甲醛混合固定液配方进行调整，缩短了脱水时间，提高了制片效率；建立了适宜于海蜇的浸蜡时间和温度控制条件。本发明克服海蜇石蜡切片制备过程中组织变形问题，获得了理想的石蜡组织块和染色效果，本发明适用于海蜇这种含水量较高，富含胶原蛋白的海产品石蜡切片的制作，为海蜇在加工过程中品质的监控提供了组织形态学支撑。

Description

一种海蜇石蜡切片制备方法

技术领域

本发明涉及到一种石蜡切片的制备方法，具体而言，是一种适用于多种海蜇原料的石蜡切片的方法。

背景技术

海蜇是一种可食用的大型水母，属无脊椎动物腔肠动物门，世界已记录的海蜇属有海蜇、黄斑海蜇、棒状海蜇和疣突海蜇。

海蜇营养丰富，干基中含有较高的蛋白质及钙、磷、碘、铁等无机盐和维生素等营养成分，除中国食用海蜇外，海蜇食品还深受日本、泰国等东亚及东南亚地区的欢迎。海蜇是我国渔业传统捕捞对象，我国海蜇品质好，产量高，2012年全国海蜇养殖产量63790吨，海洋捕捞量为206885吨，其中辽宁省养殖和捕捞量分别为42602吨和28797吨，养殖产量位于全国之首，捕捞产量仅次于山东和广西位于全国第三，除内销外，还大量出口到日本、韩国、美国等地，具有极高的经济价值。

海蜇含水量极高，收获期短，一般在温度较高的8-9月，如果处理不及时极易腐败变质，因此目前海蜇除鲜食外，主要以“三矾二盐”的传统加工模式制成半干盐渍品出售，深加工产品的种类极少。由于海蜇主要由水和胶原类物质构成，因此海蜇在加工过程中发生的组织形态的改变，可能是由于海蜇胶原类物质的特性及其内部组织结构的改变所引起的。

组织学切片技术广泛应用于组织形态的观察，在食品加工领域，与传统的感官评价、质构学相结合，研究食品在加工过程中微观形态与其品质的关系。海蜇自身含水量高，组织软、受热易收缩等因素限制了其浸蜡和包埋效果，制作石蜡切片较为困难。因此，目前对海蜇形态学观察多采用冰冻切片技术，应用石蜡切片技术研究海蜇组织形态的研究较少。如中国海洋大学的孟飞等研究海蜇及热加工过程中相应指标的变化(孟飞，赵雪，高昕，等.加热条件下海蜇伞部物性学参数的变化[J].食品工业科技，2010.31(2)：142:144.孟飞，张朝辉，赵雪，等.加热条件下沙蛰组织构造和流变学特性的变化[J].水产学报，2010,34(10)：1606-1608.)，日本学者Hiromi K等同样利用冰冻切片，并结合扫描电镜显微技术，对盐渍海蜇浸水脱盐过程中组织结构的变化进行了研究(Kimura H,Haruo M,the late Takahide S,et al.Structural Change of SaltedJellyfish during Cooking[J].Nippon Suisan Gakkaishi,1991,57(1):85-90.)

冰冻切片技术的步骤相对较少，耗时短，所用试剂少，但是切片样品不适合长期保存，尤其是盐渍海蜇原料含盐量较高，受盐的影响其冰冻切片更加困难。石蜡切片技术虽然耗时长，步骤多，但是包埋后的组织块可长期保存，反复切片观察，不像冰冻切片必须在规定时间内切完，并且适用于大多数样品。

发明内容

本发明的目在于针对海蜇石蜡切片制作过程中存在的问题，提供一种适用于海蜇原料组成和组织结构特点，能够真实呈现海蜇形态的石蜡切片方法，并提供相应的效果较好的染色方法。本发明适用于海蜇这种含水量较高，富含胶原蛋白的海产品石蜡切片的制作，为海蜇在加工过程中品质的监控提供了组织形态学支撑。

为了达到上述目的，本发明提供一种海蜇石蜡切片制备方法，包括如下步骤：

S1、取材：取海蜇伞，切成条状或块状；

S2、二次固定：

先用中性缓冲甲醛固定液对步骤S1所得海蜇伞进行固定，修块后，用酒精醋酸甲醛混合固定液再次对所述海蜇伞进行固定；

S3、所述海蜇伞利用乙醇和二甲苯进行脱水和透明；

S4、透蜡与包埋；

S5、切片、展片、烘片；

S6、脱蜡复水；

S7、染色与封片：采用苦味酸-酸性复红染色法染色，选用中性树胶封片。

优选方式下，步骤S2所述中性缓冲甲醛固定液配方：35～40％甲醛120ml+双蒸水880ml+磷酸二氢钠4.5g+磷酸氢二钠6.39g。步骤S2所述酒精醋酸甲醛混合固定液配方:70％乙醇850ml+35～40％甲醛100ml+冰醋酸50ml。

优选方式下，步骤S7所述苦味酸-酸性复红配制：以1g酸性复红溶解到100ml水中的比例得酸性复红溶液，以1.2g苦味酸溶解到100ml水中的比例得苦味酸溶液；用时，以苦味酸溶液：酸性复红溶液为19:1混合使用。此外，所述苦味酸-酸性复红染色法染色之前选用苏木精染细胞核，所述铁苏木精配方：甲液为苏木精1g+95％酒精100ml；乙液为29％FeCl₃4ml+25％盐酸1ml；用时，甲液、乙液1:1现用现配。

一种针对新鲜海蜇的优选实施方式，本发明方法包括如下步骤：

S1、取海上现场打捞的新鲜海蜇，分割，取伞，切成约2×2cm～6×6cm组织块；

S2、步骤S1所得组织块放入中性缓冲甲醛固定液，4℃固定8～10h，进行修块0.5×0.5×0.5cm；4℃下用酒精醋酸甲醛混合固定液再固定10～12h；

S3、步骤S2所得组织块多次放入乙醇和二甲苯中进行脱水和透明，具体如下：

浓度80％的乙醇2～4h→90％乙醇1～1.5h→95％乙醇1～1.5h→100％乙醇30～45min→100％乙醇30～45min→浓度1/3的二甲苯30～40min→1/2二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min；

S4、步骤S3所得组织块放入二甲苯：石蜡为1:1的混合物中30min～1h、58～60℃全石蜡30min～1h浸2次、取出包埋盒，报纸包好放入4℃冷却30min；取出冷却后的蜡块，包埋机包埋，包埋好的石蜡块，放在冷台上冷却1h；

S5、对步骤S4所得石蜡块进行切片，厚度为0.6um，所得切片放入30％乙醇浸泡10～20s、40～45℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上，37～40℃烘片30min；

S6、脱蜡复水：将步骤S5所得组织片与全二甲苯一起放入60℃烘箱预热20～30min后取出，多次放入二甲苯和乙醇中进行脱蜡复水，具体流程：全二甲苯10min→全二甲苯8min→2/3二甲苯5min→1/2二甲苯5min→1/3二甲苯分别5min→100％乙醇2～3min→100％乙醇2～3min→95％乙醇2～3min→90％乙醇2～3min→80％乙醇2～3min→70％乙醇2～3min→60％乙醇2～3min→50％乙醇2～3min→双蒸水3～5min；

S7、染色与封片：采用苦味酸-酸性复红染色方法，其中，铁苏木精染色2min、苦味酸-酸性复红染色6～8min,中性树胶封片。

一种针对盐渍海蜇的优选实施方式，本发明方法包括如下步骤：

S1、取盐渍2-3个月水分含量在50～64％之间的盐渍成熟的海蜇伞，洗去表面盐分，切成1×4cm～3×6cm长条；

S2、步骤S1所得组织块放入中性缓冲甲醛固定液，室温固定6～8h，进行修块0.5×0.5×0.5cm；室温，用酒精醋酸甲醛混合固定液再固定6～8h；

S3、步骤S2所得组织块多次放入乙醇和二甲苯中进行脱水和透明，具体如下：

浓度80％的乙醇2～4h→90％乙醇1～1.5h→95％乙醇1～1.5h→100％乙醇30～45min→100％乙醇30～45min→浓度1/3二甲苯30～40min→1/2二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min；

S4、步骤S3所得组织块放入1:1二甲苯：石蜡30min～1h、58～60℃全石蜡30min～1h浸2次、取出包埋盒，报纸包好放入4℃冷却30min；取出冷却后的蜡块，包埋机包埋，包埋好的石蜡块，放在冷台上冷却1h；

S5、步骤S4所得石蜡块切片，厚度为0.6um，切片放入30％乙醇浸泡10～20s、40～45℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上，37～40℃烘片30min；

S6、脱蜡复水：将切好的组织片与全二甲苯一起放入60℃烘箱预热20～30min后取出，放入梯度浓度的二甲苯和乙醇中进行脱蜡复水，具体流程如下：全二甲苯10min→全二甲苯8min→2/3二甲苯5min→1/2二甲苯5min→1/3二甲苯分别5min→100％乙醇2～3min→100％乙醇2～3min→95％乙醇2～3min→90％乙醇2～3min→80％乙醇2～3min→70％乙醇2～3min→60％乙醇2～3min→50％乙醇2～3min→双蒸水3～5min；

S7、染色与封片：采用苦味酸-酸性复红染色方法，其中，铁苏木精染色2min、苦味酸-酸性复红染色6～8min,中性树胶封片。

一种针对盐渍海蜇采用脱水法的优选实施方式，本发明方法包括如下步骤：

S1、取盐渍海蜇伞切成1×4cm～3×6cm长条；料液比1:8～1:10，清水浸泡6～12小时，换水3～6次；

S2、步骤S1所得组织块放入中性缓冲甲醛固定液，室温固定6～8h,进行修块0.5×0.5×0.5cm；室温，酒精醋酸甲醛混合固定液再固定8～10h；

S3、步骤S2所得组织块放入不同浓度的乙醇和二甲苯中进行脱水和透明，具体如下：

浓度80％乙醇2～4h→90％乙醇1～1.5h→95％乙醇1～1.5h→100％乙醇30～45min→100％乙醇30～45min→浓度1/3二甲苯30～40min→1/2二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min；

S4、步骤S3所得组织块放入1:1二甲苯：石蜡30min-1h、58～60℃全石蜡30min～1h浸2次、取出包埋盒，报纸包好放入4℃冷却30min；取出冷却后的蜡块，包埋机包埋，包埋好的石蜡块，放在冷台上冷却1h；

S5、步骤S4所得石蜡块切片，厚度为0.6um，切片放入30％乙醇浸泡10～20s、40～45℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上，37～40℃烘片30min；

S6、脱蜡复水：将切好的组织片与全二甲苯一起放入60℃烘箱预热20-30min后取出，放入梯度浓度的二甲苯和乙醇中进行脱蜡复水，具体流程如下：全二甲苯10min→全二甲苯8min→2/3二甲苯5min→1/2二甲苯5min→1/3二甲苯分别5min→100％乙醇2～3min→100％乙醇2～3min→95％乙醇2～3min→90％乙醇2～3min→80％乙醇2～3min→70％乙醇2～3min→60％乙醇2～3min→50％乙醇2～3min→双蒸水3～5min；

S7、染色与封片：采用苦味酸-酸性复红染色方法，其中，铁苏木精染色2min、苦味酸-酸性复红染色6～8min,中性树胶封片。

此外，本发明所涉及的浓度均为质量百分比浓度。

本发明针对于海蜇原料的特殊性，在传统石蜡切片的基础上，改进相应的处理步骤和技术，建立适用于多种海蜇原料的石蜡切片制备技术，建立海蜇组织形态学研究方法，为其在加工过程中品质的控制提供理论支撑。

本发明的技术创新在于：

1.建立了适用于多种海蜇原料石蜡切片的制备方法和染色方法。

2.建立了适用于海蜇原料的二次固定技术。将初步取样的新鲜海蜇快速固定到中性缓冲甲醛固定液中，减少新鲜海蜇因失水而变形，二次修块后放入兼有固定和脱水作用的酒精醋酸甲醛混合固定液中进行二次固定，固定后取出，不需要流失冲洗，直接放入80％乙醇中进行脱水，缩短了石蜡制备时间，且具有良好效果。

3.针对海蜇原料的特点对酒精醋酸甲醛混合固定液配方进行了适当调整。常规酒精醋酸甲醛混合固定液中乙醇通常为无水或浓度为95％方便快速的固定兼脱水，但易使海蜇这种含水量较多的样品发生组织快速收缩，因此，通过对60％、70％、80％、90％、95％、100％乙醇浓度梯度考察，调整乙醇浓度为70％时，组织无明显收缩，固定效果理想。

4.浸完蜡的组织，放在4℃冰箱冷却，使蜡块迅速变硬，便于后续的组织包埋。

5.建立了苦味酸-酸性复红染色最适比例为19:1。胶原纤维为红色，肌原纤维为黄色，颜色鲜明，纤维形态清晰，染色效果理想。

附图说明

图1为本发明实施例1新鲜海蜇伞切片的示意图；

其中，图1(A)为外伞；图1(B)为中胶层；图1(C)为红衣层。

图2为本发明实施例2盐渍海蜇伞切片的示意图；

其中，图2(A)为外伞；图2(B)为中胶层；图2(C)为红衣层。

图3为本发明实施例3脱盐海蜇伞切片的示意图；

其中，图3(A)为外伞；图3(B)为中胶层；图3(C)为红衣层。

具体实施方式

实施例1：

1.取材与固定

打捞上的新鲜海蜇，马上进行分割，洗去伞体表明的粘液等杂质，切成4×4cm组织块，快速放入中性缓冲甲醛固定液4℃固定10h后，取出修成0.5×0.5×0.5cm组织块，放入包埋盒中,酒精醋酸甲醛混合固定液4℃再固定12h。

2.脱水与透明

固定后组织从固定液中取出，放入不同浓度乙醇和二甲苯溶液中进行梯度脱水和透明，具体步骤如下：

80％乙醇3h→90％乙醇1.5h→95％乙醇1h→100％乙醇45min→100％乙醇45min→1/3二甲苯30min→1/2二甲苯40min→全二甲苯30min→全二甲苯30min。

3.透蜡与包埋:

经过步骤2完全脱水和透明的组织块放入1:1二甲苯：石蜡30min、58-60℃全石蜡30min浸2次、取出包埋盒，报纸包好放入4℃冷却30min。取出冷却后的蜡块，LECIA RM2245包埋机正常包埋，包埋好的蜡块，放在冷台上冷却1h。

4.切片、展片、烘片：

经过步骤3包埋好的石蜡块用切片机进行切片，切片厚度为0.6um，切片放入30％乙醇浸泡15s、42℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上，37℃烘片30min。

5.脱蜡复水

将切好的组织片与全二甲苯一起放入60℃烘箱预热30min后取出，放入不同浓度的二甲苯和乙醇中进行脱蜡复水，具体流程如下：

全二甲苯10min→全二甲苯8min→2/3二甲苯5min→1/2二甲苯5min→1/3二甲苯5min→100％乙醇3min→100％乙醇3min→95％乙醇3min→90％乙醇3min→80％乙醇3min→70％乙醇3min→60％乙醇3min→50％乙醇3min→双蒸水3min。

6.染色与封片采用苦味酸-酸性复红染方法

其中铁苏木精染色2min、苦味酸-酸性复红染色8min,中性树胶封片。7.OlympusD72显微镜放大200倍观察，拍照，切片效果见(附图1)。

实施例2：

1.取材与固定

从盐渍池中取出盐渍海蜇伞，清水洗净伞体表面的盐，切成1.5×4cm长条,中性缓冲甲醛固定液室温固定8h，取出修块0.5×0.5×0.5cm放入包埋盒,酒精醋酸甲醛混合固定液4℃再固定8h。

2.脱水与透明

固定后组织从固定液中取出，放入不同浓度乙醇和二甲苯溶液中进行梯度脱水和透明，具体流程如下：

80％乙醇2h→90％乙醇1.5h→95％乙醇1h→100％乙醇30min→100％乙醇30min→1/3二甲苯30min→1/2二甲苯40min→全二甲苯30min→全二甲苯30min。

3.透蜡与包埋:

经过步骤2处理的组织块放入1:1二甲苯：石蜡1h、58-60℃全石蜡45min浸2次、取出包埋盒，报纸包好放入4℃冷却30min。取出冷却后的蜡块，LECIARM2245包埋机正常包埋，包埋好的蜡块，放在冷台上冷却1h。

4.切片、展片、烘片：

经过步骤3处理的石蜡块用切片机进行切片，切片厚度为0.6um，切片放入30％乙醇浸泡10s、40℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上，37℃烘片30min。

5.脱蜡复水同实施例1步骤5

6.染色与封片采用苦味酸-酸性复红染色方法

其中铁苏木精染色2min、19:1苦味酸-酸性复红染色6min,所有染液现用现配，中性树胶封片。

7.OlympusD72显微镜放大200倍观察，拍照，切片效果见(附图2)。

实施例3：

1.取材与固定

盐渍海蜇伞切成1.5×4cm长条，料液比1:10，清水浸泡6小时，每2h换水一次，放入中性缓冲甲醛固定液，室温固定8h后取出进行修块0.5×0.5×0.5cm放入酒精醋酸甲醛混合固定液室温再固定8h。

2.脱水与透明

固定后组织，进行梯度脱水和透明，具体步骤同实施例1步骤2。

3.透蜡与包埋:

经过步骤2处理的组织块放入1:1二甲苯：石蜡浸40min、58-60℃全石蜡30min浸2次、取出包埋盒，报纸包好放入4℃冷却30min。取出冷却后的蜡块，LECIA RM2245包埋机正常包埋，包埋好的蜡块，放在冷台上冷却1h。

4.切片、展片、烘片：

经过步骤3处理的石蜡块用切片机进行切片，切片厚度为0.6um，切片放入30％乙醇浸泡20s、45℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上，37℃烘片30min。

5.脱蜡复水同实例1步骤5

6.染色与封片采用苦味酸-酸性复红染色方法

同实施例1步骤6

7.OlympusD72显微镜放大200倍观察，拍照，切片效果见(附图3)。

根据上述三种实施例，本发明方法总体而言包括如下步骤：

1.海蜇原料的预处理和取材

海蜇原料可以是新鲜海蜇、盐渍海蜇、脱盐海蜇。

①新鲜海蜇：海上打捞的新鲜海蜇立即分割，取伞，切成约4×4cm组织块。

②盐渍海蜇：从盐渍池中取出盐渍成熟的海蜇伞，洗去表面盐分，切成1.5×4cm长条。

③脱盐海蜇：盐渍海蜇伞切成1.5×4cm长条，料液比1:8-1:10，清水浸泡6-12小时，期间换水3-6次。

2.二次固定技术

中性缓冲甲醛固定液与酒精醋酸甲醛混合固定液互相配合使用。

①新鲜海蜇：处理后的原料，立即放入中性缓冲甲醛固定液，4℃固定8～10h，再次进行修块0.5×0.5×0.5cm，然后于4℃,酒精醋酸甲醛固定液再固定10～12h。

②盐渍海蜇：处理后的原料，放入中性缓冲甲醛固定液，室温固定6～8h，再次进行修块0.5×0.5×0.5cm，然后于室温，酒精醋酸甲醛固定液再固定6～8h。

③脱盐海蜇：处理后的原料，放入中性缓冲甲醛固定液，室温固定6～8h,进再次行修块0.5×0.5×0.5cm，然后于室温，酒精醋酸甲醛固定液再固定8～10h。

3.脱水与透明

经过步骤2中①、②、③固定后的样品，从固定液中取出，放入不同浓度的乙醇和二甲苯中进行脱水和透明，具体流程如下：

80％乙醇2h·4h→90％乙醇1～1.5h→95％乙醇1·1.5h→100％乙醇→30～45min→100％乙醇30～45min→1/3二甲苯30～40min→1/2二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min。

4.浸蜡与包埋

经过步骤3处理后的完全脱水透明的组织块放入1:1二甲苯：石蜡30min～1h、58-60℃全石蜡30min-1h浸2次、取出包埋盒，报纸包好放入4℃冷却30min。取出冷却后的蜡块，包埋机正常包埋，包埋好的蜡块，放在冷台上冷却1h。

5.切片、展片、烘片

包埋好的石蜡块用切片机进行切片，切片厚度为0.6um，切片放入30％乙醇10～20s、40～45℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上，37～40℃烘片30min。

6.脱蜡复水

将切好的组织片与全二甲苯一起放入60℃烘箱预热20～30min后取出，放入不同浓度的二甲苯和乙醇中进行脱蜡复水，具体流程如下：

全二甲苯10min→全二甲苯8min→2/3二甲苯5min→1/2二甲苯5min→1/3二甲苯分别5min→100％乙醇2-3min→100％乙醇2～3min→95％乙醇2～3min→90％乙醇2～3min→80％乙醇2～3min→70％乙醇2～3min→60％乙醇2～3min→50％乙醇2～3min→双蒸水3～5min。

7.染色与封片

采用苦味酸-酸性复红染色方法，其中铁苏木精染色2min、苦味酸-酸性复红染色6～8min,所有染液现用现配，中性树胶封片。

上述方法中，中性缓冲甲醛固定液配方：35～40％甲醛120ml+双蒸水880ml+磷酸二氢钠4.5g+磷酸氢二钠6.39g。酒精醋酸甲醛混合固定液配方:70％乙醇850ml+35～40％甲醛100ml+冰醋酸50ml。

以1g酸性复红溶解到100ml水中的比例得酸性复红溶液，以1.2g苦味酸溶解到100ml水中的比例得饱和苦味酸溶液；用时，以饱和苦味酸溶液：酸性复红溶液为19:1混合使用。此外，所述苦味酸-酸性复红染色法染色之前选用苏木精染细胞核，所述铁苏木精配方：甲液为苏木精1g+95％酒精100ml；乙液为29％FeCl₃4ml+25％盐酸1ml；用时，甲液、乙液1:1现用现配。

本发明公开了一种海蜇石蜡切片制备方法，步骤包括：原料的处理与固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与染色。本发明建立适用于不同海蜇原料的固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及染色等步骤方法。建立了中性缓冲甲醛固定液与酒精醋酸甲醛混合固定液相结合的二次固定方法，并对常规酒精醋酸甲醛混合固定液配方进行调整，缩短了脱水时间，提高了制片效率；建立了适宜于海蜇的浸蜡时间和温度控制条件。本发明克服海蜇石蜡切片制备过程中组织变形问题，获得了理想的石蜡组织块和染色效果，本发明适用于海蜇这种含水量较高，富含胶原蛋白的海产品石蜡切片的制作，为海蜇在加工过程中品质的监控提供了组织形态学支撑。

Claims (7)

1.一种海蜇石蜡切片制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、取材：取海蜇伞，切成条状或块状；

S2、二次固定：先用中性缓冲甲醛固定液对步骤S1所得海蜇伞进行固定，修块后，用酒精醋酸甲醛混合固定液再次对所述海蜇伞进行固定；

S3、所述海蜇伞利用乙醇和二甲苯进行脱水和透明；

S4、透蜡与包埋；

S5、切片、展片、烘片；

S6、脱蜡复水；

S7、染色与封片：采用苦味酸-酸性复红染色法染色，选用中性树胶封片。

2.根据权利要求1所述海蜇石蜡切片制备方法，其特征在于，步骤S2所述中性缓冲甲醛固定液配方：35～40％甲醛120ml+双蒸水880ml+磷酸二氢钠4.5g+磷酸氢二钠6.39g。

3.根据权利要求1所述海蜇石蜡切片制备方法，其特征在于，步骤S2所述酒精醋酸甲醛混合固定液配方:70％乙醇850ml+35～40％甲醛100ml+冰醋酸50ml。

4.根据权利要求1所述海蜇石蜡切片制备方法，其特征在于，步骤S7所述苦味酸-酸性复红配制：以1g酸性复红溶解到100ml水中的比例得酸性复红溶液，以1.2g苦味酸溶解到100ml水中的比例得苦味酸溶液；用时，以苦味酸溶液：酸性复红溶液为19:1混合使用；

所述苦味酸-酸性复红染色法染色之前选用苏木精染细胞核，所述铁苏木精配方：甲液为苏木精1g+95％酒精100ml；乙液为29％FeCl₃4ml+25％盐酸1ml；用时，甲液、乙液1:1现用现配。

5.根据权利要求1～4任一所述海蜇石蜡切片制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、取海上现场打捞的新鲜海蜇，分割，取伞，切成约2×2cm～6×6cm组织块；

S2、步骤S1所得组织块放入中性缓冲甲醛固定液，4℃固定8～10h，进行修块0.5×0.5×0.5cm；4℃下用酒精醋酸甲醛混合固定液再固定10～12h；

S3、步骤S2所得组织块多次放入乙醇和二甲苯中进行脱水和透明，具体如下：

浓度80％的乙醇2～4h→90％乙醇1～1.5h→95％乙醇1～1.5h→100％乙醇30～45min→100％乙醇30～45min→浓度1/3的二甲苯30～40min→1/2二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min；

S4、步骤S3所得组织块放入二甲苯：石蜡为1:1的混合物中30min～1h、58～60℃全石蜡30min～1h浸2次、取出包埋盒，报纸包好放入4℃冷却30min；取出冷却后的蜡块，包埋机包埋，包埋好的石蜡块，放在冷台上冷却1h；

S5、对步骤S4所得石蜡块进行切片，厚度为0.6um，所得切片放入30％乙醇浸泡10～20s、40～45℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上，37～40℃烘片30min；

S6、脱蜡复水：将步骤S5所得组织片与全二甲苯一起放入60℃烘箱预热20～30min后取出，多次放入二甲苯和乙醇中进行脱蜡复水，具体流程：全二甲苯10min→全二甲苯8min→2/3二甲苯5min→1/2二甲苯5min→1/3二甲苯分别5min→100％乙醇2～3min→100％乙醇2～3min→95％乙醇2～3min→90％乙醇2～3min→80％乙醇2～3min→70％乙醇2～3min→60％乙醇2～3min→50％乙醇2～3min→双蒸水3～5min；

S7、染色与封片：采用苦味酸-酸性复红染色方法，其中，铁苏木精染色2min、苦味酸-酸性复红染色6～8min,中性树胶封片。

6.根据权利要求1～4任一所述海蜇石蜡切片制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、取盐渍2～3个月水分含量在50～64％之间的盐渍成熟的海蜇伞，洗去表面盐分，切成1×4cm～3×6cm长条；

S2、步骤S1所得组织块放入中性缓冲甲醛固定液，室温固定6～8h，进行修块0.5×0.5×0.5cm；室温，用酒精醋酸甲醛混合固定液再固定6～8h；

S3、步骤S2所得组织块多次放入乙醇和二甲苯中进行脱水和透明，具体如下：

浓度80％的乙醇2～4h→90％乙醇1～1.5h→95％乙醇1～1.5h→100％乙醇30～45min→100％乙醇30～45min→浓度1/3二甲苯30～40min→1/2二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min；

S4、步骤S3所得组织块放入1:1二甲苯：石蜡30min～1h、58～60℃全石蜡30min～1h浸2次、取出包埋盒，报纸包好放入4℃冷却30min；取出冷却后的蜡块，包埋机包埋，包埋好的石蜡块，放在冷台上冷却1h；

S5、步骤S4所得石蜡块切片，厚度为0.6um，切片放入30％乙醇浸泡10～20s、40～45℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上，37～40℃烘片30min；

S6、脱蜡复水：将切好的组织片与全二甲苯一起放入60℃烘箱预热20～30min后取出，放入梯度浓度的二甲苯和乙醇中进行脱蜡复水，具体流程如下：全二甲苯10min→全二甲苯8min→2/3二甲苯5min→1/2二甲苯5min→1/3二甲苯分别5min→100％乙醇2～3min→100％乙醇2～3min→95％乙醇2～3min→90％乙醇2～3min→80％乙醇2～3min→70％乙醇2～3min→60％乙醇2～3min→50％乙醇2～3min→双蒸水3～5min；

S7、染色与封片：采用苦味酸-酸性复红染色方法，其中，铁苏木精染色2min、苦味酸-酸性复红染色6-8min,中性树胶封片。

7.根据权利要求1～4任一所述海蜇石蜡切片制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、取盐渍海蜇伞切成1×4cm～3×6cm长条；料液比1:8～1:10，清水浸泡6～12小时，换水3～6次；

S2、步骤S1所得组织块放入中性缓冲甲醛固定液，室温固定6～8h,进行修块0.5×0.5×0.5cm；室温，酒精醋酸甲醛混合固定液再固定8～10h；

S3、步骤S2所得组织块放入不同浓度的乙醇和二甲苯中进行脱水和透明，具体如下：

浓度80％乙醇2～4h→90％乙醇1～1.5h→95％乙醇1～1.5h→100％乙醇30～45min→100％乙醇30～45min→浓度1/3二甲苯30～40min→1/2二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min→全二甲苯30～40min；

S4、步骤S3所得组织块放入1:1二甲苯：石蜡30min-1h、58～60℃全石蜡30min～1h浸2次、取出包埋盒，报纸包好放入4℃冷却30min；取出冷却后的蜡块，包埋机包埋，包埋好的石蜡块，放在冷台上冷却1h；

S5、步骤S4所得石蜡块切片，厚度为0.6um，切片放入30％乙醇浸泡10～20s、40～45℃展片、贴片于事先粘有粘片剂的载玻片上，37～40℃烘片30min；

S6、脱蜡复水：将切好的组织片与全二甲苯一起放入60℃烘箱预热20-30min后取出，放入梯度浓度的二甲苯和乙醇中进行脱蜡复水，具体流程如下：全二甲苯10min→全二甲苯8min→2/3二甲苯5min→1/2二甲苯5min→1/3二甲苯分别5min→100％乙醇2～3min→100％乙醇2～3min→95％乙醇2～3min→90％乙醇2～3min→80％乙醇2～3min→70％乙醇2～3min→60％乙醇2～3min→50％乙醇2～3min→双蒸水3～5min；

S7、染色与封片：采用苦味酸-酸性复红染色方法，其中，铁苏木精染色2min、苦味酸-酸性复红染色6～8min,中性树胶封片。