CN104013578B - 一种帕潘立酮衍生物缓释微球制剂及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种帕潘立酮衍生物缓释微球制剂及制备方法，利用疏水性脂肪酸酯做生物缓释微球制剂的添加剂，通过改变微球结构、微球中药物结晶度和分布，解决了帕潘立酮衍生物在制备微球时，不能平稳缓释一月的问题。药物能缓慢、平稳释放一个月、一个半月甚至两个月以上，大大减少用药次数，提高药物的生物利用度和治疗效果，降低毒副作用，从而极大地减轻广大患者的痛苦，提高其生活质量。

Description

一种帕潘立酮衍生物缓释微球制剂及制备方法

技术领域

本发明公开一种帕潘立酮衍生物缓释微球制剂，同时还提供了一类该帕潘立酮衍生物缓释微球制剂的添加剂及微球制备方法，属于医学制药技术领域。

背景技术：

由于精神分裂症需长期给药，病人顺应性差，两周或一月注射一次的缓释微球制剂在治疗此类疾病时显示了很大的优势。帕潘立酮在二氯甲烷中溶解度较低，很难通过乳化挥发法制备其较高载药量的聚乳酸羟基乙酸（PLGA）微球，从而无法制备其两周或一个月注射一次的PLGA微球制剂。本发明中涉及的帕潘立酮衍生物体内迅速代谢为帕潘立酮来达到治疗作用。这些衍生物脂溶性较高，适合采用O/W乳化挥发法制备其PLGA微球。然而，PLGA在体内代谢较快，在载药量较高时导致微球体内崩解加速，大部分药物在快速释放期释放，从而开发一月注射一次的微球制剂存在较大困难。

如果将帕潘立酮衍生物制备成微球制剂主要存在着以下技术障碍：微球需具备较高载药量已达到单次注射后能缓释一月左右；载药量较高时，通过常规的增加PLGA粘度和链长的方法很难达到一月左右的缓慢稳定释放；需要一种添加剂来改变微球的结构和药物状态，从而改变释放行为。已有报道的微球添加剂主要为脂肪酸，理论上能与微球中含N原子药物成盐而增加药物扩散阻力，从而达到提高缓释的目的。然而帕潘立酮中N原子的空间位阻较大，不能与脂肪酸成盐，故涉及了“疏水性脂肪酸酯”的使用，一般用于食品添加剂和片剂的添加剂，但在制备缓释微球制剂中未见报道。

发明内容：

本发明提供一种帕潘立酮衍生物缓释微球制剂，药物能缓慢、平稳释放一个月、一个半月甚至两个月以上，大大减少用药次数，提高药物的生物利用度和治疗效果，降低毒副作用，从而极大地减轻广大患者的痛苦，提高其生活质量。

本发明进一步提供了疏水性脂肪酸酯为帕潘立酮衍生物缓释微球制剂的添加剂，通过改变微球结构、微球中药物结晶度和分布，解决了帕潘立酮衍生物在制备微球时，不能平稳缓释一月的问题。

发明涉及包含通式（Ⅰ）帕潘立酮衍生物、其光学对映异构体或外消旋体、其药学上可接受的各种盐类。手性中心(*)可以是R或S或RS(外消旋混合物)；R为含1至20个C原子的烷氧基或含6至20个C原子的芳香基或芳香烷氧基。

（Ⅱ）

3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯，简称 H5。

(Ⅲ）

3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基正戊氧基甲酸酯，简称H6。

本发明公开的一种帕潘立酮衍生物缓释微球制剂，其特征在于是由以下原料按重量份数比制成的：

帕潘立酮衍生物1%-60%，疏水性脂肪酸酯0.1% - 10%，余量为生物可降解药用高分子辅料。

本发明还公开了一种帕潘立酮衍生物缓释微球制剂的三种制备方法，具体步骤如下：

第一种：首先，使用具有足够挥发性、低沸点水不溶有机溶剂把帕潘立酮衍生物、疏水性脂肪酸酯和生物可降解药用高分子辅料溶解配制成有机相，其中有机溶剂与生物可降解药用高分子辅料的重量份数比为100：4-100：60。其次，将药用水溶性高分子溶解于水中配制成水相，药用水溶性高分子与水的重量份数比为0.1：100-15：100。最后，将有机相注入到水相中，有机相与水相体积比为1：4-1：500，并均质乳化以形成乳剂，然后挥发掉有机溶剂，孔径25μm-250μm筛过滤、去离子水洗涤和干燥得到缓释微球制剂。

第二种：用具有足够挥发性、低沸点水不溶有机溶剂把帕潘立酮衍生物、疏水性脂肪酸酯和生物可降解药用高分子辅料溶解，其中有机溶剂与生物可降解药用高分子辅料的重量份数比为100：4-100：60。并采用喷雾干燥法制得微球制剂。

第三种：用具有足够挥发性、低沸点水不溶有机溶剂把帕潘立酮衍生物、疏水性脂肪酸酯和生物可降解药用高分子辅料溶解，其中有机溶剂与生物可降解药用高分子辅料的重量份数比为100：4-100：6。并采用喷雾干燥法将它们喷入到另一种不溶解生物可降解药用高分子辅料的有机溶剂中，经萃取、过滤、洗涤和干燥得到缓释微球制剂。

本发明所述的疏水性脂肪酸酯选自：棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯的一种或两者的混合（混合比例0：100-100:0），疏水性脂肪酸酯总添加量占微球重量比优选2%-4%。

本发明中所述的聚丙交酯-乙交酯是丙交酯和乙交酯聚合比为95:5-5:95，优选为25:75-75:25。

生物可降解药用高分子辅料包括但不限于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚3-羟基丁酸酯、聚内酯、聚酸酐、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯、聚丙烯萄聚糖、聚乳酸-聚乙二醇、聚羟乙酸-聚乙二醇等。其分子量为2,000 - 1,000,000道尔顿。

本发明的缓释微球中，只要能够实现缓释的目的，帕潘利酮衍生物的含量没有特别限制，但是从保证足够长时间的有效血药浓度的缓释效果和保证缓释效果的平衡角度来说，优选帕潘利酮衍生物占微球的1-60%(w/w)， 再优选10-50%(w/w)，更优选20-40%(w/w)；生物可降解药用高分子辅料占40-99 %(w/w)，优选50-90 %(w/w)，更优选60-80%(w/w)。如果帕潘立酮衍生物含量过低，要保持合适的药物血液浓度，必须增加微球的注射量，这将增加患者的痛苦；反之，药物含量过高，则有可能不能保证药物平稳释放，可能造成副作用的发生。

本发明所述的帕潘立酮衍生物的缓释微球，从保持一定时效、生物降解性和注射入体内后不影响血液循环来看，粒径应当处于5-250μm之间。粒径过小，有可能阻塞毛细血管，影响微循环；粒径过大，增加注射时患者的痛苦。

以上操作中，帕潘立酮衍生物、疏水性脂肪酸酯和生物可降解药用高分子辅料如前所述。有机溶剂从操作角度应为具有足够挥发性、低残留的低沸点有机溶剂，具体说明如二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、以及由它们所组成的混合溶剂等。配制水相的药用水溶性高分子包括聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、聚乙烯基吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠等，但不仅限于此。

在配制有机相时，帕潘立酮衍生物和生物可降解药用高分子辅料在有机溶剂中的含量只要有机溶剂能够溶解，就没有限制，不过从可行浓度及粘度的平衡和少用有机溶剂的角度出发，优选浓度为4-60%(w/v)，再优选10-50%(w/v)。在用聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、聚乙烯基吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠配制水相时，其浓度没有特别限制，但根据其在水中的溶解度，在水相中的含量优选0.01-15.0% (w/v)，再优选0.05-10.0%(w/v)，更优选0.1-5%(w/v)。在将有机相注入水相并剧烈搅拌以形成微乳时，有机相和水相的体积比应足以使有机相在水相中充分分散以形成足够细的粒度和均匀度的微球，但是如果水相过多，后处理复杂，成本提高，从以上角度出发，有机相与水相的体积比大致为1:4-1:500，优选为1:10–1:200。

也可以采用喷雾干燥法制备微球。当采用喷雾干燥法制备帕潘立酮衍生物的缓释微球时，是用有机溶剂把帕潘立酮衍生物和可生物降解的药用辅料充分溶解配制成有机溶液；过滤，以常规喷雾干燥法制成微球。在必要的情况下，也可以按照常规方法对微球进行水洗，分级等后处理，然后分装。

也可以采用喷雾萃取法制备微球，当采用喷雾萃取法制备帕潘立酮衍生物微球时，是以有机溶剂把帕潘立酮衍生物和可生物降解的药用高分子辅料充分溶解配制成有机溶液，将其喷雾至一有机非溶剂或水中，经萃取而制成微球，在必要的情况下，也可按照常规方法对微球进行水洗，分级等的处理，然后分装。

溶剂挥发法和喷雾干燥法相比，从制成的微球的粒径均匀度和操作简便性等来说，优选喷雾干燥法。从降低初始释放的角度来说，优选溶剂挥发法。

本发明所述的添加疏水性脂肪酸酯微球制备后，经过粒径分级或者如果粒径足够均匀的话也可以不分级，清洗、干燥后按照规定剂量分装，可以制成粉针剂注射剂，使用时就地配成注射剂。粉针剂可以是直接由上述微球制成，使用前用注射用生理盐水均匀混悬，制成注射液。也可以在微球中混配规定量的等渗用盐、甘露醇、葡萄糖等，使用前在其中加入规定量的注射用纯水，制成注射液。或者可以先按照注射用量将微球混悬后冻干，使用前再复水。本发明所述的治疗精神疾病的方法是采用上述的帕潘立酮衍生物的注射液给予需要上述治疗的患者来进行的。给药方式只要是可以使用注射剂的，可以不拘使用。例如肌肉注射、皮下注射、皮内注射、腹内注射等。从给药方便角度来说，优选肌肉注射给药及皮下注射给药。

本发明所述的添加疏水性脂肪酸酯缓释微球剂的给药剂量，以H5微球为例，对于体重60kg的患者，每次注射量为5 - 200mg，每周或数周注射一次。具体可以根据患者的年龄、体重、疾病状况等实际情况加以适当变化。

采用本发明的添加疏水性脂肪酸酯的缓释微球，可以实现药物的缓慢释放1个月以上。虽不拘于已有理论，但可以认为本发明的缓释机理是疏水性脂肪改变了微球的结构和药物晶态，药物更趋近于微球核心，且微球表面形成致密壳结构限制了药物的扩散，因此释药速率降低，可以实现以较低成本和较低剂量达到治疗目的，减小毒副作用，可以以例如不少于一月的间隔注射给药。因此有望极大地改善精神疾病患者的生活质量，同时减少每日按时定量给药所需花费的人力物力。

本发明的积极效果在于：利用疏水性脂肪酸酯做生物缓释微球制剂的添加剂，通过改变微球结构、微球中药物结晶度和分布，解决了帕潘立酮衍生物在制备微球时释药周期短，无法平稳缓释一月的问题。药物能缓慢、平稳释放一个月、一个半月甚至两个月以上，大大减少用药次数，提高药物治疗效果，降低毒副作用，从而极大地减轻广大患者的痛苦，提高其生活质量。

附图说明：

图1实施例1-6所得的缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图；

图2实施例7-11所得的缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图；

图3实施例12所得的缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图；

图4实施例13所得的缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图；

图5实施例14所得的缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图；

图6实施例15和16所得的缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图；

图7实施例17和18所得的缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图；

图8实施例19和20所得的缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图；

图9实施例1，9，20所得的缓释微球DSC实验图谱；

图10 实施例1所得的缓释微球不同深度荧光显微镜结果图；

图11实施例9所得的缓释微球不同深度荧光显微镜结果图；。

图12实施例1和9所得的缓释微球在比格犬体内药时曲线。

具体实施方式

以下将通过实施例来进一步说明本发明所述的帕潘立酮衍生物的微球的制备方法和缓释效果，但以下实施例不对本发明构成任何限制。

以下实施例中微球的粒径采用本领域技术人员熟悉的L2000型全自动激光粒度仪（Beckman coulter公司）测定。含量采用高效液相色谱法（HPLC）测定，方法按照文献方法，例如可以按照如现代应用药学杂志，1993，10（1），51-52；中国医药工业杂志，1999，30（8），363-365等所公开者。血药浓度测定采用LC-MS-MS法，例如可以按照药物分析杂志，2005，25(7)，795-798所公开。

实施例1

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）和2.04g 75257E PLGA，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 -2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药26%的微球，包埋率87.56%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图1；缓释微球DSC实验图谱图见图9；缓释微球荧光显微镜结果图见图10；缓释微球在比格犬体内药时曲线见图12。

实施例2

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA和34.2μl棕榈酸异丙酯，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药25.82%的微球，包埋率86.05%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图1。

实施例3

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA和68.2μl棕榈酸异丙酯，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药26.79%的微球，包埋率89.30%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图1。

实施例4

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA和102.6μl棕榈酸异丙酯，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药25.82%的微球，包埋率86.05%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图1。

实施例5

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA和102.6μl棕榈酸异丙酯和136.8μl棕榈酸异丙酯，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药27.82%的微球，包埋率92.73%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图1。

实施例6

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA和171μl棕榈酸异丙酯，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药25.84%的微球，包埋率86.13%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图1。

实施例7

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA和0.0291g硬脂酸丁酯，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药26.37%的微球，包埋率87.88%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图2。

实施例8

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA和0.0582g硬脂酸丁酯，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药27.11%的微球，包埋率90.36%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图2。

实施例9

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA和0.0873g硬脂酸丁酯，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药26.37%的微球，包埋率87.91%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图2；缓释微球DSC实验图谱图见图9；缓释微球荧光显微镜结果图见图11；缓释微球在比格犬体内药时曲线见图12。

实施例10

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA和0.1164g硬脂酸丁酯，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药27.04%的微球，包埋率90.14%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图2。

实施例11

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA和0.1455g硬脂酸丁酯，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药26.72%的微球，包埋率89.07%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图2。

实施例12

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA、0.0437g硬脂酸丁酯和51.3μl棕榈酸异丙酯，将上述称取物质加入到13.60ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药26.62%的微球，包埋率93.07%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图3。

实施例13

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基正戊氧基甲酸酯（见结构式Ⅲ）、2.04g 75257E PLGA和102.6μl棕榈酸异丙酯，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药25.82%的微球，包埋率86.05%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图4。

实施例14

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基正戊氧基甲酸酯（见结构式Ⅲ）、2.04g 75257E PLGA和0.0873g硬脂酸丁酯，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药26.37%的微球，包埋率87.91%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图5。

实施例15

称取0.21g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、1.20 g5050 5E PLGA和0.0437g硬脂酸丁酯，将上述称取物溶于200ml二氯甲烷中，采用常规喷雾干燥法制备得含药15%，粒径为1-100μm的微球。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图6。

实施例16

称取0.21 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、1.20 g5050 5E PLGA和0.0437g硬脂酸丁酯，将上述称取物溶于100ml二氯甲烷中，搅拌至充分溶解，采用喷雾萃取法制备得含药15%，粒径为1-100μm的微球。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图6。

实施例17

称取0.21g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基正戊氧基甲酸酯（见结构式Ⅲ）、1.20 g5050 5E PLGA和0.0437硬脂酸丁酯，将上述称取物溶于200ml二氯甲烷中，采用常规喷雾干燥法制备得含药15%，粒径为1-100μm的微球。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图7。

实施例18

称取0.21g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基正戊氧基甲酸酯（见结构式Ⅲ）、1.20 g5050 5E PLGA和0.0437硬脂酸丁酯，将上述称取物溶于100ml二氯甲烷中，搅拌至充分溶解，采用喷雾萃取法制备得含药15%，粒径为1-100μm的微球。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图7。

实施例19

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA和0.0291g硬脂酸，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药25.87%的微球，包埋率86.23%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图8。

实施例20

称取0.8743 g 3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯（见结构式Ⅱ）、2.04g 75257E PLGA和0.0873g硬脂酸，将上述称取物质加入到13.60 ml二氯甲烷中溶解，在均质（1200 - 2400rpm）条件下将其注射入1700ml 含0.5%PVA（w/w）的水溶液中，保持上述均质条件5分钟，然后以搅拌速度1200rpm挥发溶剂4 小时，用孔径25μm和125μm筛过滤，用蒸馏水洗微球三次，冻干。制备得含药26.05%的微球，包埋率86.83%，测得粒径为1-200μm。缓释微球在模拟释放液中的累积释放率的折线图见图8；缓释微球DSC实验图谱图见图9。

实验例：

通过O/W制备的添加棕榈酸异丙酯的H5微球的体外释放试验，采用实施例1-6的微球，通过模拟体内条件进行释放试验，见附图1。

通过O/W制备的添加硬脂酸丁酯的H5微球的体外释放试验，采用实施例1，7-11的微球，通过模拟体内条件进行释放试验，见附图2。

通过O/W制备的添加硬脂酸丁酯和棕榈酸异丙酯的H5微球的体外释放试验，采用实施例12的微球，通过模拟体内条件进行释放试验，见附图3。

通过O/W制备的添加棕榈酸异丙酯的H6微球的体外释放试验，采用实施例13的微球，通过模拟体内条件进行释放试验，见附图4。

通过O/W制备的添加硬脂酸丁酯的H6微球的体外释放试验，采用实施例14的微球，通过模拟体内条件进行释放试验，见附图5。

通过喷雾干燥和喷雾萃取方法制备的添加硬脂酸丁酯的H5微球的体外释放试验，采用实施例15，16的微球，通过模拟体内条件进行释放试验，见附图6。

通过喷雾干燥和喷雾萃取方法制备的添加硬脂酸丁酯的H6微球的体外释放试验，采用实施例17，18的微球，通过模拟体内条件进行释放试验，见附图7。

通过O/W制备的添加硬脂酸的H5微球的体外释放试验，采用实施例19和20的微球，通过模拟体内条件进行释放试验，说明微球中添加硬脂酸并无缓释效果，见附图8。

H5微球的DSC实验，考察实施例1，9，20的微球，通过比较图谱差异，可以得出结论填加一定量3%硬脂酸丁酯可以使药物结晶度增加，而添加3%硬脂酸微球中药物结晶度无变化。另外，可以发现硬脂酸丁酯熔化峰，说明部分酯发生了聚集，见附图9。

H5微球的不同深度荧光检测实验，采用实施例1和9，考察硬脂酸丁酯酯是否会影响药物分布，可以得出结论添加硬脂酸丁酯是药物分布更趋于微球球心，见附图10和图11。

H5微球的比格犬体内实验，采用实施例1和9，可以得出结论，添加硬脂酸丁酯微球体内释放周期较未添加硬脂酸丁酯微球变长，见附图12。

根据本发明人等的研究，采用一定pH值（pH 7.4）的缓冲溶液（磷酸钠缓冲溶液），药物释放行为与体内类似，因此虽然其环境与人体内环境不完全相同，但是大致认为可以表现体内的释放模式。

实验仪器：恒温振荡器、离心机。

实验条件：温度：37±0.5℃，转速：100rpm。

实验方法：精密称取实验样品约1㎎，置于容积为50 ml的具盖塑料离心管中，加35ml释放介质（pH=7.4磷酸钠缓冲溶液）置于恒温振荡器中，保持一定的温度和转速，按时取样。

取样方法：离心管在5000 rpm条件下离心3min，精确吸取20 ml溶液，同时向离心管中再补加20ml的释放介质，取出液用HPLC检测。

取样时间点（天）：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、34、36、38、40，42，46，50，54，58，62，66，70，74，78其中第0天是指给药当天的给药前的药物浓度。

Claims (4)

1.一种帕潘立酮衍生物缓释微球制剂，其特征在于是由以下原料按重量份数比制成的：

1%-60%帕潘立酮衍生物，0.1% - 10% 疏水性脂肪酸酯，余量为生物可降解药用高分子辅料；

所述的疏水性脂肪酸酯选自硬脂酸丁酯或棕榈酸异丙酯的一种；疏水性脂肪酸酯总添加量占微球重量比为2%-4%；

所述的生物可降解药用高分子辅料选自聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚己内酯、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物其中的一种或其中两种以上的混合物，其分子量在3,000-500,000道尔顿之间；

所述的帕潘立酮衍生物为3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基异丁氧基甲酸酯或3-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基}-2-甲基-4-氧代-6,7,8,9-四氢-吡啶并[1,2-α]嘧啶-9-基正戊氧基甲酸酯。

2.根据权利要求1所述的一种帕潘立酮衍生物缓释微球制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

使用具有足够挥发性、低沸点水不溶有机溶剂把帕潘立酮衍生物、疏水性脂肪酸酯和生物可降解药用高分子辅料溶解配制成有机相，其中有机溶剂与生物可降解药用高分子辅料的重量份数比为100：4-100：60；

将药用水溶性高分子溶解于水中配制成水相，药用水溶性高分子与水的重量份数比为0.1：100-15：100；

将有机相注入到水相中，有机相与水相体积比为1：4-1：500，并均质乳化以形成乳剂，然后挥发掉有机溶剂，孔径25μm-250μm筛过滤、去离子水洗涤和干燥得到缓释微球制剂。

3.根据权利要求1所述的一种帕潘立酮衍生物缓释微球制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

用具有足够挥发性、低沸点水不溶有机溶剂把帕潘立酮衍生物、疏水性脂肪酸酯和生物可降解药用高分子辅料溶解，其中有机溶剂与生物可降解药用高分子辅料的重量份数比为100：4-100：60；采用喷雾干燥法制得微球制剂。

4.根据权利要求1所述的一种帕潘立酮衍生物缓释微球制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

用具有挥发性、低沸点水不溶有机溶剂把帕潘立酮衍生物、疏水性脂肪酸酯和生物可降解药用高分子辅料溶解，其中有机溶剂与生物可降解药用高分子辅料的重量份数比为100：4-100：6；采用喷雾干燥法将它们喷入到另一种不溶解生物可降解药用高分子辅料的有机溶剂中，经萃取、过滤、洗涤和干燥得到缓释微球制剂。