CN103974710B

CN103974710B - 用于败血症的治疗和/或改善的药物

Info

Publication number: CN103974710B
Application number: CN201280055832.2A
Authority: CN
Inventors: 鹤田一寿; 青木喜和; 大泽宽; I·考尔
Original assignee: Asahi Kasei Pharma Corp
Current assignee: Asahi Kasei Pharma Corp
Priority date: 2011-11-15
Filing date: 2012-11-14
Publication date: 2016-07-06
Anticipated expiration: 2032-11-14
Also published as: KR101672108B1; HUE050698T2; BR112014011488A2; MX2014005895A; AU2012337838A1; IL232434B; US20130237482A1; KR20140095559A; IL232434A0; ZA201403494B; ES2795439T3; EP2781221A1; US20160331813A1; AU2012337838B2; JPWO2013073545A1; US20150157695A1; EP2781221A4; CA2854882A1; US8772239B2; EP2781221B1

Abstract

本发明涉及一种用于有效地治疗和/或改善重症败血症患者的败血症的药物，该药物含有血栓调节蛋白作为有效成分，该重症败血症患者具有1种以上的器官功能障碍，血浆样本的国际标准化比值(INR)的值为大于1.4的值。

Description

用于败血症的治疗和/或改善的药物

技术领域

本发明涉及用于治疗和/或改善重症败血症患者的败血症的药物。

背景技术

败血症是因感染所引起的全身炎症反应综合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome：SIRS)。即，被定义为除了存在感染外、还满足SIRS项目((1)体温>38℃或<36℃、(2)心率>90/分钟、(3)呼吸频率>20/分钟或PaCO2<32torr、(4)白细胞数>12,000/μL或<4000/μL或未成熟白细胞>10％)中的2项以上的病态。以往虽然强调了血液中的菌体的存在(菌血症，bacteremia)，但是该定义未必需要血培养阳性。在败血症中，呈器官功能障碍、器官灌注不足或低血压的状态被称为重症败血症(severesepsis)。器官灌注不足或灌注异常包括乳酸性酸中毒、少尿、意识模糊等。在重症败血症中，即使进行充分的输液负荷也持续低血压的情况被称为败血症性休克(septicshock)(非专利文献1)。在这些病态中所发现的循环衰竭被认为是因交感神经系统的机能失调或中性粒细胞等释放的介质所产生的，另外器官功能障碍被认为是因组织缺氧(恶性低氧，dysoxia)所产生的。

另一方面，已知血栓调节蛋白是如下的物质，其与凝血酶特异性地结合，具有抑制凝血酶的凝血活性的同时显著促进凝血酶的蛋白C活化能力的作用，已知其具有强大的凝血抑制作用。已知血栓调节蛋白延长通过凝血酶进行凝血的时间，抑制通过凝血酶进行的血小板凝集。蛋白C为在凝血纤溶系统中起到重要作用的维生素K依赖性的蛋白质，其通过凝血酶的作用活化，成为活化型蛋白C。已知该活化型蛋白C使凝血系统因子的活性型第V因子和活性型第VIII因子在生物体内失活，并且活化型蛋白C与具有血栓溶解作用的纤溶酶原激活剂的产生相关(非专利文献2)。因此，血栓调节蛋白促进通过该凝血酶进行的蛋白C的活化，作为抗凝血剂或血栓溶解剂是有用的，还存在有关说明血栓调节蛋白对伴随有凝血亢进的疾病的治疗、预防有效的动物实验的报告(非专利文献3)。

以往，血栓调节蛋白作为在以人为首的各种动物种的血管内皮细胞上表达的糖蛋白而被发现获得，然后成功进行了克隆。即，使用基因工程的方法，由人肺cDNA库中对含有信号肽的人血栓调节蛋白前体的基因进行克隆，然后对血栓调节蛋白的全部基因序列进行解析，解明了含有信号肽(通常举出18个氨基酸残基)的575个残基的氨基酸序列(专利文献1)。已知信号肽被切断的成熟的血栓调节蛋白从其成熟的肽的N末端一侧起，由N末端区域(第1～226位；认为信号肽为18个氨基酸残基时的位置表示，以下相同)、具有6个EGF样结构的区域(第227～462位)、O型糖链附加区域(第463～498位)、跨膜区域(第499～521位)以及细胞质内区域(第522～557位)这5个区域构成。作为具有与全长的血栓调节蛋白相同的活性的部分(即最小活性单元)，已知为具有6个EGF样结构的区域中的主要由从N末端一侧起第4、5、6个的EGF样结构形成的部分(非专利文献4)。

全长的血栓调节蛋白若不在表面活性剂的存在下则难以溶解，作为制剂必须添加表面活性剂，与此相对，已知存在一种即使不存在表面活性剂也可以顺利溶解的可溶性血栓调节蛋白。可溶性血栓调节蛋白制备成至少不含有跨膜区域的一部分或全部即可，例如，确认到仅由N末端区域、具有6个EGF样结构的区域和O型糖链附加区域这3个区域形成的(即，由序列号9的第19～516位的氨基酸序列形成的)可溶性血栓调节蛋白可以通过应用重组技术来得到，而且该重组可溶性血栓调节蛋白具有天然的血栓调节蛋白的活性(专利文献1)。作为其它的可溶性血栓调节蛋白的例子，有一些报告(专利文献2～9)。此外，作为天然型，举出了来源于人尿的可溶性血栓调节蛋白等(专利文献10、11)。

附带说一下，在基因中，正如很多例子中确认到的那样，通过自然的变异或获得时的变异，在人类中也发现了多样性的变异，目前已经确认到由上述575个残基的氨基酸序列形成的人血栓调节蛋白前体的第473位的氨基酸为Val的序列和为Ala的序列。在编码该氨基酸的碱基序列中，第1418位分别变异为T和C(非专利文献5)。但是，在活性和物性方面完全没有差异，可以判断两者实质上相同。

有报告指出，血栓调节蛋白在弥散性(泛发性)血管内凝血综合征(下文中有时称为DIC)的治疗中是有效的(非专利文献6)。作为血栓调节蛋白的用途，除了上述之外，例如，期待用于急性冠状动脉综合征(ACS)、血栓症、末梢血管闭塞症、闭塞性动脉硬化症、脉管炎、心脏手术继发的机能性障碍、脏器移植的并发症、心绞痛、短暂性脑缺血发作、妊娠中毒症、糖尿病、肝VOD(Liverveno-occlusivedisease；暴发性肝炎或骨髓移植后的肝静脉闭塞症)、深静脉血栓症(DVT；Deepvenousthrombosis)等、以及败血症或成人呼吸窘迫综合征(ARDS)的疾病的治疗和预防中(专利文献12)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开昭64-6219号公报

专利文献2：日本特开平5-213998号公报

专利文献3：日本特开平2-255699号公报

专利文献4：日本特开平3-133380号公报

专利文献5：日本特开平3-259084号公报

专利文献6：日本特开平4-210700号公报

专利文献7：国际公开WO92/00325号

专利文献8：国际公开WO92/03149号

专利文献9：国际公开WO93/15755号

专利文献10：日本特开平3-86900号公报

专利文献11：日本特开平3-218399号公报

专利文献12：国际公开WO2003/061687号

非专利文献

非专利文献1：AmericanColledgeofChestPhysicians,CHEST/101/6/JUNE,1992:1481-1483

非专利文献2：铃木宏治、医学のあゆみ(医学进展)1983；125:901

非专利文献3：GomiKetal.,Blood1990；75:1396-1399

非专利文献4：ZushiMetal.,JBiolChem1989；246:10351-10353

非专利文献5：WenDZetal.,Biochemistry1987；26:4350-4357

非专利文献6：S.M.Batesetal.,Br.J.ofPharmacol.,2005；144:1017-1028

发明内容

发明要解决的课题

本发明的课题在于提供用于有效地治疗和/或改善重症败血症患者的败血症的药物、或它们的方法。

用于解决课题的方案

公知的是，败血症患者的血浆样本的国际标准化比值(InternationalNormalizedRatio、下文中有时简称为“INR”)意味着凝血障碍(Coagulopathy)。例如，作为2003年的国际急救治疗医学会(CCM)中报告的凝血障碍的指标，提示了aPPT>60秒以及INR>1.5(Crit.CareMed.,2003；31:1250-1256)。但是，该INR值并未被临床试验等所验证，尚未作为明确的结果被确定。有文献报道了下述内容：实际上，在作为抗凝血剂的组织因子途径抑制因子Tifacogin(ティファコジン)的以重症败血症患者为对象的III期临床试验中，作为以INR>1.2的患者为主要对象实施的结果，INR≦1.2的患者组比INR>1.2的患者组效果更好(JAMA,July9,2003,Vol.290.No.2,P238-247)。另一方面报道了：在本临床试验的结果中，在INR>1.2的患者基团中，具有INR>1.5的患者比INR>1.2的患者效果高的倾向。而且，对于唯一在败血症的临床试验中显示出有效性的奇格瑞(Xigris)，大部分的对象患者(93.4％)也确认到凝血酶原时间(PT)的延长。

这样，在抗凝血剂对于败血症的治疗时，通过以伴随凝血障碍的患者为对象，可由一部分试验结果期待高效果，但是也得到了相反的结果等等，还很难说凝血障碍的定义已经确定。即，关于利用INR值如何规定对象患者而能得到良好的结果这一命题尚不明确，也不存在关于药剂对具有何种INR值的败血症患者特别有效的技术常识。关于INR值与治疗效果的关系，所了解的部分充其量不过是各药剂的个别情况。

在此背景下，本发明人着眼于抗凝血药中的血栓调节蛋白，就对于败血症的治疗和/或改善效果进行了深入研究。结果发现：在败血症患者中以具有1种以上的器官功能障碍的重症败血症患者(但是不包括仅具有肝脏或肾脏的器官功能障碍的败血症患者)为对象时，与无器官功能障碍的患者相比，意外地在患者的INR大于1.4的情况下能够更有效地治疗和/或改善败血症，即，关于血栓调节蛋白的败血症治疗和/或改善，在败血症患者中具有1种以上的器官功能障碍的重症败血症患者与INR>1.4之间具有本领域技术人员无法预测的特殊关系。此外，令人震惊的是，在INR大于1.4且为1.6以下的值的重症败血症患者中，具有血栓调节蛋白-安慰剂间的死亡率差超过15％这样的特别显著的效果，由此完成了本发明。考虑到目前作为唯一的败血症治疗剂在欧洲销售的奇格瑞(Xigris)所具有的药剂-安慰剂间的死亡率差为6％左右(N.Engl.J.Med.,Vol.344,No.10,March8,2001,P699-709)，死亡率差为15％的该数值是其约2.5倍左右大小的显著的数值，可知本发明的一个方式具有非常令人震惊的效果。

即，作为本发明，具体可以举出下述技术方案。

〔A1〕一种用于败血症的治疗和/或改善的药物，该药物含有血栓调节蛋白作为有效成分，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的国际标准化比值(INR)的值为大于1.4的值。

〔A1-2〕一种用于伴随凝血障碍的败血症的治疗和/或改善的药物，该药物含有血栓调节蛋白作为有效成分，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的国际标准化比值(INR)的值为大于1.4的值。

〔A2〕如上述〔A1〕或〔A1-2〕所述的药物，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的国际标准化比值(INR)的值为大于1.4且小于等于1.6的值。

〔A3〕如上述〔A1〕～〔A2〕的任一项所述的药物，其中，重症败血症患者为不包括仅具有肝脏或肾脏的器官功能障碍的败血症患者的重症败血症患者。

需要说明的是，如上述〔A1〕～〔A2〕那样引用的项目号以范围示出，该范围内配置有具有〔A1-2〕等分支号的项的情况下，意味着还引用了具有〔A1-2〕等分支号的项。下文中也相同。

〔A4〕如上述〔A1〕～〔A3〕的任一项所述的药物，其中，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有选自由肝脏、肾脏、呼吸器官和循环器官组成的组中的1种以上的器官功能障碍。

〔A5〕如上述〔A1〕～〔A4〕的任一项所述的药物，其中，该血栓调节蛋白为可溶性血栓调节蛋白。

〔A5-2〕如上述〔A1〕～〔A5〕的任一项所述的药物，其中，该血栓调节蛋白为具有下述(1)～(4)的性质的血栓调节蛋白，

(1)与凝血酶选择性地结合的作用；

(2)促进基于凝血酶的蛋白C的活化的作用；

(3)延长基于凝血酶的凝血时间的作用；和

(4)抑制基于凝血酶的血小板凝集的作用。

〔A5-3〕如上述〔A1〕～〔A5〕的任一项所述的药物，其中，该血栓调节蛋白为具有下述(1)～(5)的性质的可溶性血栓调节蛋白，

(1)与凝血酶选择性地结合的作用；

(2)促进基于凝血酶的蛋白C的活化的作用；

(3)延长基于凝血酶的凝血时间的作用；

(4)抑制基于凝血酶的血小板凝集的作用；和

(5)抗炎作用。

〔A6〕如上述〔A1〕～〔A5-3〕的任一项所述的药物，其中，该血栓调节蛋白为由转化细胞获得的肽，该转化细胞是通过将编码序列号9或序列号11中记载的氨基酸序列的DNA转染到宿主细胞中而制备的。

〔A7〕如上述〔A1〕～〔A6〕的任一项所述的药物，其中，该血栓调节蛋白为包含下述(i-1)或(i-2)中任意一个氨基酸序列的肽，该肽为具有血栓调节蛋白活性的肽，

(i-1)序列号9或序列号11的任一者中记载的氨基酸序列中的第19～516位的氨基酸序列；或

(i-2)上述(i-1)的氨基酸序列中取代、缺失或添加有1个或2个以上氨基酸的氨基酸序列。

〔A7-2〕如上述〔A1〕～〔A6〕的任一项所述的药物，其中，该可溶性血栓调节蛋白为：

(i)包含序列号9或序列号11的任一者中记载的氨基酸序列中的第367～480位的氨基酸序列、且包含下述(ii-1)或(ii-2)中任意一个氨基酸序列的肽，该肽为具有血栓调节蛋白活性的肽，

(ii-1)序列号9或序列号11的任一者中记载的氨基酸序列中的第19～244位的氨基酸序列；或

(ii-2)上述(ii-1)的氨基酸序列中取代、缺失或添加有1个或2个以上氨基酸的氨基酸序列。

〔A8〕如上述〔A1〕～〔A7-2〕的任一项所述的药物，其中，该血栓调节蛋白以0.005mg/kg～1mg/kg的给药量在5分钟以内静脉推注。

〔B1〕一种治疗和/或改善败血症的方法，该方法包括将血栓调节蛋白给药至重症败血症患者的工序，该重症败血症患者的血浆样本的国际标准化比值(INR)的值为大于1.4的值。

〔B1-2〕一种治疗和/或改善伴随凝血障碍的败血症的方法，该方法包括将血栓调节蛋白给药至重症败血症患者的工序，该重症败血症患者的血浆样本的国际标准化比值(INR)的值为大于1.4的值。

〔B2〕如上述〔B1〕或〔B1-2〕所述的方法，其中，该方法包括对重症败血症患者给药的工序，该重症败血症患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的国际标准化比值(INR)的值为大于1.4且小于等于1.6的值。

〔B3〕如上述〔B1〕～〔B2〕的任一项所述的方法，其中，重症败血症患者为不包括仅具有肝脏或肾脏的器官功能障碍的败血症患者的重症败血症患者。

〔B4〕如上述〔B1〕～〔B3〕的任一项所述的方法，其中，该方法包括对重症败血症患者给药的工序，该重症败血症患者具有选自由肝脏、肾脏、呼吸器官和循环器官组成的组中的1种以上的器官功能障碍。

〔B5〕如上述〔B1〕～〔B4〕的任一项所述的方法，其中，该血栓调节蛋白为可溶性血栓调节蛋白。

〔B6〕如上述〔B1〕～〔B5〕的任一项所述的方法，其中，该血栓调节蛋白为由转化细胞获得的肽，该转化细胞是通过将编码序列号9或序列号11中记载的氨基酸序列的DNA转染到宿主细胞中而制备的。

〔B7〕如上述〔B1〕～〔B6〕的任一项所述的方法，其中，该血栓调节蛋白为包含下述(i-1)或(i-2)中任意一个氨基酸序列的肽，该肽为具有血栓调节蛋白活性的肽，

〔B8〕如上述〔B1〕～〔B7〕的任一项所述的方法，其中，该血栓调节蛋白以0.005mg/kg～1mg/kg的给药量在5分钟以内静脉推注。

〔B8-2〕如上述〔B1〕～〔B8〕的任一项所述的方法，其中，该血栓调节蛋白为具有上述〔A5-2〕、〔A5-3〕或〔A7-2〕的任一项所述的特征的血栓调节蛋白。

〔B9〕血栓调节蛋白作为用于败血症的治疗和/或改善的药物的应用，其中，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的国际标准化比值(INR)的值为大于1.4的值。

〔B9-2〕如上述〔B9〕所述的应用，其中，该血栓调节蛋白为具有上述〔A5-2〕、〔A5-3〕或〔A7-2〕的任一项中所记载的特征的血栓调节蛋白。

〔B9-3〕如上述〔B9〕所述的应用，其具有上述〔A1〕～〔A8〕的任一项中所记载的特征。

〔C1〕一种用于弥散性血管内凝血综合征的治疗和/或改善的药物，该药物含有血栓调节蛋白作为有效成分，该药物用于施用于弥散性血管内凝血综合征患者，该弥散性血管内凝血综合征患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的国际标准化比值(INR)的值为大于1.4的值。

〔C2〕如上述〔C1〕所述的药物，其具有上述〔A1〕～〔A8〕的任一项所述的特征。

发明的效果

通过本发明的含有血栓调节蛋白的药物，能够有效地治疗和/或改善患者的血浆样本的INR为大于1.4的值的重症败血症患者的败血症。

具体实施方式

下面，关于几个优选方式(用于实施本发明的优选方式，以下在本说明书中有时简称为“实施方式”)，对本发明进行具体的说明，但是本发明的范围不限定于下述说明的特定方式。

本实施方式中的血栓调节蛋白已知具有(1)与凝血酶选择性地结合、(2)促进基于凝血酶的蛋白C的活化的作用。另外，优选通常可确认到：(3)延长基于凝血酶的凝血时间的作用；(4)抑制基于凝血酶的血小板凝集的作用；和/或(5)抗炎作用。有时将这些血栓调节蛋白所具有的作用称为血栓调节蛋白活性。

作为血栓调节蛋白活性，具有上述(1)和(2)的作用，优选进一步具有上述(1)～(4)的作用。另外，作为血栓调节蛋白活性，更优选具备全部(1)～(5)的作用。

血栓调节蛋白与凝血酶的结合作用例如可以通过以ThrombosisandHaemostasis199370(3):418-422或TheJournalofBiologicalChemistry1989Vol.264,No.9pp.4872-4876为代表的各种公知文献中记载的试验方法来进行确认。对于促进基于凝血酶的蛋白C的活化，例如可以通过以日本特开昭64-6219号公报为代表的各种公知文献中明确记载的试验方法来容易地确认促进蛋白C的活化的作用的活性量或其有无。此外，对于延长基于凝血酶的凝血时间的作用和/或抑制基于凝血酶的血小板凝集的作用也同样可以容易地确认。进一步，关于抗炎作用，例如可以通过以blood2008112:3361-3670、TheJournalofClinicalInvestigation20051155:1267-1274为代表的各种公知文献中记载的试验方法来进行确认。

作为本发明中的血栓调节蛋白没有特别限定，只要具有血栓调节蛋白活性即可，优选为在不存在表面活性剂的情况下可溶于水的可溶性血栓调节蛋白。作为可溶性血栓调节蛋白的溶解性的优选例子，可以举出对于水、例如注射用蒸馏水(在不存在曲拉通X-100或聚多卡醇等表面活性剂的情况下，通常在中性附近)为1mg/mL以上、或为10mg/mL以上，优选为15mg/mL以上、或为17mg/mL以上，进一步优选为20mg/mL以上、25mg/mL以上、或30mg/mL以上，特别优选为60mg/mL以上，在某些情况下可以分别举出80mg/mL以上、或100mg/mL以上。判断可溶性血栓调节蛋白是否得以溶解时，溶解后，在例如白色光源的正下方、约1000勒克司亮度的位置肉眼观察，将此时澄清、不含有能够清楚确认到的不溶性物质的情况理解为明显的指标。此外，也可以过滤确认有无残渣。

如上所示，血栓调节蛋白只要具有血栓调节蛋白活性则对其分子量即没有限定，作为分子量的上限，优选为100,000以下、更优选为90,000以下、进一步优选为80,000以下、特别优选为70,000以下，作为分子量的下限，进一步优选为50,000以上、特别优选为60,000以上。可溶性血栓调节蛋白的分子量可以利用测定蛋白质的分子量的常规方法容易地测定，优选利用质量分析法测定，更优选MALDI-TOF-MS法。为了获得目标范围的分子量的可溶性血栓调节蛋白，如后所述，可以如下获得：利用载体将编码可溶性血栓调节蛋白的DNA转染到宿主细胞而制备转化细胞，对该转化细胞进行培养而获得可溶性血栓调节蛋白，利用柱色谱等对该可溶性血栓调节蛋白进行分级，由此获得上述目标范围的分子量的可溶性血栓调节蛋白。

作为本发明中的血栓调节蛋白，优选包含在人类的血栓调节蛋白中作为血栓调节蛋白活性的中心部位已知的序列号1的第19～132位的氨基酸序列，只要包含序列号1的第19～132位的氨基酸序列，则不特别限定。该序列号1的第19～132位的氨基酸序列只要具有促进基于凝血酶的蛋白C的活化的作用、即血栓调节蛋白活性，则也可以发生自然或人工的变异，即可以在序列号1的第19～132位的氨基酸序列中取代、缺失、添加有一个或两个以上的氨基酸。对容许的变异程度没有特别限定，只要具有血栓调节蛋白活性即可，例如作为氨基酸序列，可以例示出50％以上的同源性、优选为70％以上的同源性、更优选为80％以上的同源性、进一步优选为90％以上的同源性、特别优选为95％以上的同源性、最优选为98％以上的同源性。将这样氨基酸序列中取代、缺失、添加有一个或两个以上氨基酸的氨基酸序列称为相同变异序列。对于这些变异，如后所述，可以使用通常的基因操作技术容易地获得。对血栓调节蛋白没有特别限定，只要具有上述序列、至少作为血栓调节蛋白整体具有与凝血酶选择性地结合而促进基于凝血酶的蛋白C的活化的作用即可，优选同时具有抗炎作用。

序列号3的序列为序列号1的第125位的氨基酸Val变异为Ala后的序列，作为本发明中的血栓调节蛋白，也优选包含序列号3的第19～132位的氨基酸序列。

如此地，对本发明中的血栓调节蛋白没有特别限定，只要包含序列号1或序列号3的第19～132位的序列、或至少具有上述序列的相同变异序列且至少具有血栓调节蛋白活性的肽序列即可，作为优选例，可以举出由序列号1或序列号3中的第19～132位或第17～132位的序列形成的肽，或由上述序列的相同变异序列形成的至少具有血栓调节蛋白活性的肽，更优选由序列号1或序列号3的第19～132位的序列形成的肽。此外，也存在更优选由序列号1或序列号3中的第19～132位或第17～132位的相同变异序列形成的至少具有血栓调节蛋白活性的肽的其它方式。

此外，作为本发明中的血栓调节蛋白的其它方式，优选包含序列号5的第19～480位的氨基酸序列，只要包含序列号5的第19～480位的氨基酸序列则不特别限定。该序列号5的第19～480位的氨基酸序列也可以为其相同变异序列，只要具有促进基于凝血酶的蛋白C的活化的作用、即血栓调节蛋白活性即可。

序列号7的序列为序列号5的第473位的氨基酸Val变异为Ala后的序列，作为本发明中的血栓调节蛋白，也优选包含序列号7的第19～480位的氨基酸序列。

如此地，对本发明中的血栓调节蛋白没有特别限定，只要包含序列号5或序列号7的第19～480位的序列、或至少具有上述序列的相同变异序列且至少具有血栓调节蛋白活性的肽序列即可，作为优选例，可以举出由序列号5或序列号7中的第19～480位或第17～480位的序列形成的肽，或由上述序列的相同变异序列形成的至少具有血栓调节蛋白活性的肽，更优选由序列号5或序列号7的第19～480位的序列形成的肽。此外，也存在更优选由序列号5或序列号7中的第19～480位或第17～480位的相同变异序列形成的至少具有血栓调节蛋白活性的肽的其它方式。

此外，作为本发明中的血栓调节蛋白的其它方式，优选包含序列号9的第19～515位的氨基酸序列，只要包含序列号9的第19～515位的氨基酸序列则不特别限定。该序列号9的第19～515位的氨基酸序列也可以为其相同变异序列，只要具有促进基于凝血酶的蛋白C的活化的作用、即血栓调节蛋白活性即可。

序列号11的序列为序列号9的第473位的氨基酸Val变异为Ala后的序列，作为本发明中的血栓调节蛋白，也优选包含序列号11的第19～515位的氨基酸序列。

如此地，对本发明中的血栓调节蛋白没有特别限定，只要包含序列号9或序列号11的第19～515位的序列、或至少具有上述序列的相同变异序列且至少具有血栓调节蛋白活性的肽序列即可，作为优选例，可以举出由序列号9或序列号11中的第19～516位、第19～515位、第17～516位或第17～515位的序列形成的肽，或由上述序列的相同变异序列形成的至少具有血栓调节蛋白活性的肽，特别优选由序列号9中的第19～516位、第19～515位、第17～516位或第17～515位的序列形成的肽。还可以举出它们的混合物作为优选的例子。此外，也存在特别优选由序列号11中的第19～516位、第19～515位、第17～516位或第17～515位的序列形成的肽的其它方式。还可以举出它们的混合物作为优选的例子。进一步地，还可以举出由上述序列的相同变异序列形成的至少具有血栓调节蛋白活性的肽作为优选的例子。血栓调节蛋白优选同时具有抗炎作用。

如上所述，具有相同变异序列的肽指的是成为对象的肽的氨基酸序列中可以取代、缺失、添加有一个以上(即一个或两个以上、进一步优选多个(例如1～20个、优选为1～10个、更优选为1～5个、特别优选为1～3个))氨基酸的肽。对容许的变异程度没有特别限定，只要具有血栓调节蛋白活性即可，例如作为氨基酸序列，可以例示出50％以上的同源性、优选为70％以上的同源性、更优选为80％以上的同源性、进一步优选为90％以上的同源性、特别优选为95％以上的同源性、最优选为98％以上的同源性。

进一步地，作为本发明的血栓调节蛋白，还可以举出日本特开昭64-6219号公报中的由序列号14(462个氨基酸残基)形成的肽、由序列号8(272个氨基酸残基)形成的肽、或由序列号6(236个氨基酸残基)形成的肽作为优选的例子。

对本发明中的血栓调节蛋白没有特别限定，只要是至少具有序列号1或序列号3的第19～132位的氨基酸序列的肽即可，其中优选至少具有序列号5或序列号7的第19～480位的氨基酸序列的肽，更优选至少具有序列号9或序列号11的第19～515位的氨基酸序列的肽。作为至少具有序列号9或序列号11的第19～515位的氨基酸序列的肽，可以举出由序列号9或序列号11各自中的第19～516位、第19～515位、第19～514位、第17～516位、第17～515位或第17～514位的序列形成的肽作为更优选的例子。此外，还可以举出由序列号9或序列号11各自中的第19～516位、第19～515位、第19～514位、第17～516位、第17～515位或第17～514位的序列形成的肽的针对序列号9或序列号11各自的混合物作为更优选的例子。

上述混合物的情况中，作为由序列号9或序列号11各自中的从第17位开始的肽与从第19位开始的肽的混合比例，可以例示出(30:70)～(50:50)，可以举出(35:65)～(45:55)作为优选的例子。

此外，作为序列号9或序列号11各自中的到第514位、第515位和第516位结束的肽的混合比例，可以例示出(0:0:100)～(0:90:10)，根据情况可以例示出(0:70:30)～(10:90:0)、(10:0:90)～(20:10:70)。

这些肽的混合比例可以通过常规方法求得。

需要说明的是，序列号1的第19～132位的序列相当于序列号9的第367～480位的序列，序列号5的第19～480位的序列相当于序列号9的第19～480位的序列。此外，序列号3的第19～132位的序列相当于序列号11的第367～480位的序列，序列号7的第19～480位的序列相当于序列号11的第19～480位的序列。进一步地，序列号1、3、5、7、9和11各自中的第1～18位的序列全部为相同的序列。

如后述那样，这些本发明中的血栓调节蛋白可以由转化细胞获得，该转化细胞是通过将编码这些肽的DNA(具体地说，为序列号2、序列号4、序列号6、序列号8、序列号10或序列号12等碱基序列)利用载体转染到宿主细胞中所制备的。

进一步地，这些肽具有上述氨基酸序列即可，可以附加有糖链或不附加糖链，对该点不特别限定。此外，在基因操作中，根据使用的宿主细胞的不同种类，糖链的种类、附加位置或附加的程度不同，可以任意使用。对于糖链的结合位置和种类，已知日本特开平11-341990号公报中记载的内容，对于本发明中的血栓调节蛋白有时也可以在相同的位置上附加相同的糖链。本实施方式的血栓调节蛋白上结合岩藻糖基双触角型与岩藻糖基三触角型两种N结合型糖链，其比例可以例示出(100:0)～(60:40)，优选为(95:5)～(60:40)，可以举出(90:10)～(70:30)作为更优选的例子。这些糖链的比例可以通过《生物化学実験法23糖蛋白質糖鎖研究法(生物化学实验法23糖蛋白糖链研究法)》、学会出版中心(1990年)等中记载的二维糖链图进行测定。进一步地，调查本实施方式的血栓调节蛋白的糖组成时，则检测出中性糖、氨基糖和唾液酸，相对于蛋白质含量，各自独立地以重量比计例示出1％～30％的比例，优选为2％～20％、更优选为5％～10％。这些糖含量可以通过《新生化学実験講座3糖質Ｉ糖タンパク質(上)(新生物化学实验讲座3糖质I糖蛋白(上))》、东京化学同人(1990年)中记载的方法(中性糖：苯酚-硫酸法、氨基糖：摩根-艾尔森法、唾液酸：高碘酸-间苯二酚法)进行测定。

如后述那样，血栓调节蛋白的获得并不限于通过基因操作来获得，但在通过基因操作来获得时，作为可以在表达时使用的信号序列，可以利用编码序列号9的第1～18位的氨基酸序列的碱基序列、编码序列号9的第1～16位的氨基酸序列的碱基序列、其它公知的信号序列(例如人组织型纤溶酶原激活剂的信号序列(国际公开88/9811号公报))。

将编码血栓调节蛋白的DNA序列导入到宿主细胞中时，优选将编码血栓调节蛋白的DNA序列引入载体(特别优选可以在动物细胞中表达的表达载体)中来导入的方法。表达载体指的是由启动子序列、对mRNA赋予核糖体结合部位的序列、编码欲表达的蛋白的DNA序列、剪接信号、转录结束的终止子序列、复制起始序列等构成的DNA分子，作为优选的动物细胞表达载体的例子，可以举出MulliganRC等人[ProcNatlAcadSciUSA1981；78:2072-2076]报告的pSV2-X、或HowleyPM等人[MethodsinEmzymology1983；101:387-402、AcademicPress]报告的pBP69T(69-6)等。此外，也存在引入能够在微生物中表达的表达载体中的其他方式。

作为可以在制备这些肽时使用的宿主细胞，可以举出动物细胞。作为动物细胞，可以举出中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、COS-1细胞、COS-7细胞、VERO(ATCCCCL-81)细胞、BHK细胞、源于狗肾的MDCK细胞、仓鼠AV-12-664细胞等，此外作为人源细胞，可以举出HeLa细胞、WI38细胞、人293细胞、PER.C6细胞。通常非常优选CHO细胞，在CHO细胞中，进一步优选二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷CHO细胞。

此外，在基因操作的过程或肽的制备过程中，也较多地使用大肠杆菌等微生物，优选使用适合各自的宿主-载体系统，在上述的宿主细胞中也可以选择适当的载体系统。在基因重组技术中使用的血栓调节蛋白的基因已经过克隆，而且利用基因重组技术的血栓调节蛋白的制造例已得到公开，另外还已知用于得到纯化品的纯化方法[日本特开昭64-6219号公报、日本特开平2-255699号公报、日本特开平5-213998号公报、日本特开平5-310787号公报、日本特开平7-155176号公报、JBiolChem1989；264:10351-10353]。因此，本发明中使用的血栓调节蛋白可以通过使用上述报告中记载的方法或依照其中记载的方法来制备。例如，在日本特开昭64-6219号公报中，公开了含有包含用于编码全长的血栓调节蛋白的DNA的质粒pSV2TMJ2的EscherichiacoliK-12strainDH5(ATCC保藏编号67283号)。此外，还可以使用将该菌株在生命研(现独立行政法人产业技术综合研究所特许生物保藏中心)再保藏的菌株(EscherichiacoliDH5/pSV2TMJ2)(FERMBP-5570)。可以以该用于编码全长的血栓调节蛋白的DNA作为原料，通过公知的基因操作技术，来制备本发明的血栓调节蛋白。

本实施方式中的血栓调节蛋白用现有公知的方法或依照现有公知的方法来制备即可，例如可以参考上述山本等人的方法[日本特开昭64-6219号公报]或日本特开平5-213998号公报。即，通过基因操作技术将人源的血栓调节蛋白基因制成例如编码序列号9的氨基酸序列的DNA后，也可以进一步根据需要进行改变。作为该改变，例如为了制成编码序列号11的氨基酸序列的DNA(具体地说是序列号12的碱基序列)，对编码序列号9的第473位的氨基酸的密码子(特别是序列号10的第1418位的碱基)根据ZollerMJ等人[MethodsinEnzymology1983；100:468-500、AcademicPress]的方法进行定点突变。例如，可以使用具有序列号13所示的碱基序列的变异用合成DNA来形成将序列号10的第1418位的碱基T转化为碱基C的DNA。

可以将如此制备的DNA导入例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中，制成转化细胞，进行适当选择，利用公知的方法由培养该细胞得到的培养液制备纯化的血栓调节蛋白。如上所述，优选将编码序列号9的氨基酸序列的DNA(序列号10)转染到上述宿主细胞中。

本实施方式中的血栓调节蛋白的生产方法不限于上述方法，例如也可以从尿、血液或其它体液等中提取纯化，或从生产血栓调节蛋白的组织或这些组织培养液等中提取纯化，或根据需要进一步通过蛋白分解酶进行切断处理。

在培养上述的转化细胞时，可以使用在通常的细胞培养中使用的培养基，优选事先利用各种培养基培养其转化细胞，选择最佳的培养基。例如，使用将MEM培养基、DMEM培养基、199培养基等公知的培养基作为基本培养基，进一步添加改良或各种培养基用的补充物而成的培养基即可。作为培养方法，可以举出在添加了血清的培养基中进行培养的血清培养、或在未添加血清的培养基中进行培养的无血清培养。对培养方法没有特别限定，优选无血清培养。

在血清培养中，向培养基中添加血清的情况下，优选牛血清。牛血清包括胎牛血清、新生小牛血清、小牛血清、成牛血清等，只要是适合于细胞培养的牛血清则可以使用任何一种。另一方面，在无血清培养中，所使用的无血清培养基可以使用市售的培养基。市售有适合于各种细胞的无血清培养基，例如对于CHO细胞，由Invitrogen社市售有CD-CHO、CHO-S-SFMII、CHO-III-PFM，由IrvineScientific社市售有ISCHO、ISCHO-CD培养基等。这些培养基可以直接使用，也可以添加改良或补充物来使用。进一步地，作为无血清培养基，可以例示出分别以5mg/L的方式添加了胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸的DMEM培养基。如此地，只要是能够产生本实施方式的血栓调节蛋白的培养基则没有特别限定。对培养方法没有特别限定，可以为分批培养、反复分批培养、补料分批培养、灌注培养等任意的培养法。

通过上述细胞培养方法制备本发明中的血栓调节蛋白时，有时通过蛋白质的翻译后修饰，会发现N末端氨基酸具有多样性。例如，有时序列号9中的第17位、18位、19位或22位的氨基酸会形成N末端。此外，例如像第22位的谷氨酸转换为焦谷氨酸那样，有时N末端氨基酸会被修饰。优选第17位或19位的氨基酸形成N末端，更优选第19位的氨基酸形成N末端。此外，还存在优选第17位的氨基酸形成N末端的其它方式。上述修饰或多样性等对于序列号11也可以举出同样的例子。

进一步地，使用具有序列号10的碱基序列的DNA制备可溶性血栓调节蛋白时，有时会发现C末端氨基酸的多样性，有时会制备出少1个氨基酸残基的肽。即，如第515位的氨基酸形成C末端、并且该第515位被酰胺化的情况那样，有时C末端氨基酸会被修饰。此外，还有时会制备出少2个氨基酸残基的肽。即，有时第514位的氨基酸形成C末端。因此，有可能制备N末端氨基酸和C末端氨基酸富有多样性的肽或它们的混合物。优选第515位的氨基酸或第516位的氨基酸形成C末端、更优选第516位的氨基酸形成C末端。此外，还存在优选第514位的氨基酸形成C末端的其它方式。以上的修饰或多样性等对于具有序列号12的碱基序列的DNA也是相同的。

通过上述方法得到的血栓调节蛋白有可能是N末端和C末端表现多样性的肽的混合物。具体地说，可以举出由序列号9中的第19～516位、第19～515位、第19～514位、第17～516位、第17～515位或第17～514位的序列形成的肽的混合物。

接着，对于从通过上述获得的培养上清液或培养物中分离纯化血栓调节蛋白的方法，可以根据公知的方法[堀尾武一编集、蛋白質·酵素の基礎実験法(蛋白质-酶的基础实验法)、1981]进行。例如，还优选使用固定有具有与血栓调节蛋白相反电荷的官能团的色谱载体、和利用血栓调节蛋白间的相互作用的离子交换色谱或吸附色谱。此外，还可以举出利用与血栓调节蛋白的特异性亲和性的亲和色谱作为优选的例子。作为吸附体的优选例子，可以举出利用血栓调节蛋白的配体即凝血酶或血栓调节蛋白的抗体的例子。作为该抗体，可以利用具有适当的性质或识别适当的表位的血栓调节蛋白的抗体，可以举出例如日本特公平5-42920号公报、日本特开昭64-45398号公报、日本特开平6-205692号公报等中记载的例子。此外，可以举出利用血栓调节蛋白的分子量大小的凝胶过滤色谱或超滤。而且，还可以举出固定有疏水性基团的色谱载体、和利用与血栓调节蛋白所具有的疏水性部位间的疏水键合的疏水性色谱。此外，作为吸附色谱还可以使用羟磷灰石作为载体，可以举出例如日本特开平9-110900号公报中记载的例子。这些方法可以适当组合。纯化的程度可以根据使用目的等选择，优选纯化至例如电泳(优选SDS-PAGE)的结果得到单一带，或分离出的纯化品的凝胶过滤HPLC或反相HPLC的结果形成单一的峰。当然，使用两种以上血栓调节蛋白时，优选实质上仅形成血栓调节蛋白的带，不要求形成单一的带。

若具体地例示出本发明中的纯化法，可以举出以血栓调节蛋白活性为指标进行纯化的方法，例如可以举出如下方法：通过离子交换柱的Q-琼脂糖FastFlow对培养上清液或培养物进行粗纯化，回收具有血栓调节蛋白活性的级分，接着利用亲和柱的DIP-凝血酶-琼脂糖(diisopropylphosphorylthrombinagarose)柱进行主纯化，回收血栓调节蛋白活性强的级分，浓缩回收级分，经过凝胶过滤以纯品的形式获得血栓调节蛋白活性级分[GomiKetal、Blood1990；75:1396-1399]。对于作为指标的血栓调节蛋白活性，可以举出例如基于凝血酶的蛋白C活化的促进活性。此外，如下例示出优选的纯化法。

选择与血栓调节蛋白具有良好的吸附条件的适当的离子交换树脂，进行离子交换色谱纯化。特别优选的例子是，使用经含有0.18mol/LNaCl的0.02mol/LTris盐酸缓冲液(pH7.4)平衡过的Q-琼脂糖FastFlow的方法。适当洗涤后，例如可以用含0.3mol/LNaCl的0.02mol/LTris盐酸缓冲液(pH7.4)洗脱，得到粗纯化品的血栓调节蛋白。

接着，例如可以将与血栓调节蛋白具有特异性亲和性的物质固定在树脂上进行亲和色谱纯化。作为优选的例子，可以举出DIP-凝血酶-琼脂糖柱的例子和抗血栓调节蛋白单克隆抗体柱的例子。DIP-凝血酶-琼脂糖柱预先用例如含有100mmol/LNaCl和0.5mmol/L氯化钙的20mmol/LTris盐酸缓冲液(pH7.4)平衡，填充上述粗纯化品，进行适当的洗涤，用例如含有1.0mol/LNaCl和0.5mmol/L氯化钙的20mmol/LTris盐酸缓冲液(pH7.4)洗脱，从而可以获得纯化品的血栓调节蛋白。此外，在抗血栓调节蛋白单克隆抗体柱中，可以例示出如下方法：使溶解有抗血栓调节蛋白单克隆抗体的含0.5mol/LNaCl的0.1mol/LNaHCO3缓冲液(pH8.3)与预先通过CNBr活化的琼脂糖4FF(GEHealthcareBio-Sciences公司)接触，预先用例如含0.3mol/LNaCl的20mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.3)对填充有琼脂糖4FF与抗血栓调节蛋白单克隆抗体偶联的树脂的柱进行平衡，适当洗涤后，用例如含0.3mol/LNaCl的100mmol/L甘氨酸盐酸缓冲液(pH3.0)洗脱。洗脱液用适当的缓冲液中和，也可以获得纯化品。

接着将得到的纯化品调整至pH3.5后，填充到用含0.3mol/LNaCl的100mmol/L甘氨酸盐酸缓冲液(pH3.5)平衡过的阳离子交换体(优选强阳离子交换体SP-琼脂糖FF(GEHealthcareBio-Sciences公司))中，用同一缓冲液洗涤得到非吸附级分。得到的级分用适当的缓冲液中和，可以获得高纯度纯化品。它们优选通过超滤进行浓缩。

进一步地，优选通过凝胶过滤进行缓冲液交换。例如，可以向用含50mmol/LNaCl的20mmol/L磷酸缓冲液(pH7.3)平衡过的SephacrylS-300柱或S-200柱中填充通过超滤浓缩的高纯度纯化品，用含50mmol/LNaCl的20mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.3)展开分离，确认基于凝血酶的蛋白C的活化的促进活性，回收活性级分，从而获得经缓冲液交换的高纯度纯化品。如此得到的高纯度纯化品为了提高安全性优选使用适当的病毒除去膜、例如Planova15N(旭化成医疗株式会社)进行过滤，然后可以通过超滤浓缩至目的浓度。优选最后通过无菌过滤膜进行过滤。

根据本发明，提供一种用于败血症的治疗和/或改善的药物，该药物含有血栓调节蛋白作为有效成分，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的国际标准化比值(INR)的值为大于1.4的值。

即，本实施方式中的用于败血症的治疗和/或改善的药物为用于重症败血症患者的败血症的治疗和/或改善的药物，该重症败血症患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的INR的值为大于1.4的值。

此外，同样地，提供用于降低患有重症败血症的人类患者的死亡可能性的药剂，患有重症败血症的人类患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的INR的值为大于1.4的值。

作为败血症的治疗的和/或改善，可以举出例如“防止由于败血症引起的患者的死亡”作为优选的效果之一。此外，也可以举出“防止由于败血症引起的患者的全身状态的恶化”作为优选的效果。

已知本实施方式中的败血症是如下的重度全身性感染症：以感染症、恶性肿瘤、肝硬化、肾功能衰竭、糖尿病、异常分娩等疾病；或留置导管、输液器具、透析、气管切开等针对创伤或疾病进行的治疗为起因，微生物从感染灶不断地或断续地侵入到血液中。若症状恶化，则诱发败血性休克，即由于急剧的血压降低、末梢循环功能衰竭诱发全身性的休克，从而由于肺、肾脏、肝脏、心脏、消化道、以及中枢神经系统等重要脏器的障碍导致死亡。此外，作为伴随败血症的并发症，会诱发DIC，或由于与中性粒细胞的活化和对肺实质的游走累积相伴的肺毛细血管障碍而诱发以肺间质的水肿、出血或急性呼吸功能衰竭为特征的成人呼吸窘迫综合征(ARDS)，预后变得非常差。

作为本实施方式中的败血症，是因感染所引起的全身炎症反应综合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome：SIRS)。即，除了感染的存在外，可以举出满足SIRS项目((1)体温>38℃或<36℃；(2)心率>90/分钟；3)呼吸频率>20/分钟或PaCO2<32torr；(4)白细胞数>12,000/μL或<4000/μL或未成熟白细胞>10％)中的2项以上的病态，基本上可以以该病态诊断为败血症。

作为败血症的诊断方法存在几种方法。这在LevyM.等人、Crit.Care.Med.、31:1250-1256中进行了总结。例如包括通过医生进行该诊断的方法或使用检查值等的方法。作为后者的例子，包括如下方法：在1)体温>38℃或<36℃；2)心率>90/分钟；3)呼吸频率>20/分钟或有必要进行人工呼吸；4)白细胞数>12000/μL或<4000/μL、或胚细胞>10％；这4项内，满足2项时诊断为SIRS，将被证明为或疑似为以微生物为病因的SIRS诊断为败血症[LaRosaS.,TheClevelandClinic的主页]。与此近似的方法在MembersoftheAmericanCollegeofChestPhysicians/SocietyofCriticalCareMedicineConsensusConference:CritCareMed、20、864-874(1992)中有记载。

作为败血症(sepsis)的状态，可以例示出例如菌血症、败血症(septicemia)、全身性炎症反应综合征(SIRS)、败血症(被证明为或疑似为以微生物为病因的SIRS)、重症败血症、败血症性休克、难治性败血症性休克或多脏器功能障碍(下文中有时称为MODS)(哈里逊内科学原著第15版124项P828-833MedicalSciencesInternational)。可以例示出上述各状态作为本发明的治疗剂和/或改善剂有效的症状。

作为败血症，只要是满足上述诊断基准的败血症则没有特别限定，优选伴随凝血障碍的败血症(sepsiswithcoagulopathy)。作为凝血障碍，只要是患者的血浆样本的INR大于1.2的状态则没有特别限定，优选大于1.3，更优选大于1.4。

作为菌血症，可以例示出确认到血液中存在细菌的状态，该细菌的存在是通过血液培养阳性来证明的。

作为败血症(septicemia)，可以例示出确认到血液中存在微生物或其它毒素的状态。

作为全身性炎症反应综合征(SIRS)，可以例示出如上所述处于DIC准备阶段的状态。

作为重症败血症，可以例示出伴随有代谢性酸中毒、器官灌注不足、急性脑病、少尿、低氧血症或弥散性血管内凝血等器官功能障碍或低血压的症状中的一种或两种以上的败血症。在败血症中，呈器官功能障碍、器官灌注不足或低血压的状态被称为重症败血症(severesepsis)。器官灌注不足或灌注异常包括乳酸性酸中毒、少尿、意识模糊等。在重症败血症中，即使进行充分的输液负荷也持续低血压的情况被称为败血症性休克(septicshock)。

作为本实施方式中的重症败血症，更具体地说如下所示。

作为败血症性休克，可以例示出低血压(血压为90mmHg以下或比通常的血压低40mmHg)下对通过补液进行的复苏法无反应、伴随有器官功能衰竭的败血症性休克。

作为难治性败血症性休克，可以例示出败血症性休克持续1小时以上、对补液升压剂无反应的难治性败血症性休克。

作为多器官功能障碍(MODS)，可以例示出存在1个以上器官的功能衰竭、为了保持内环境稳定需要医学介入的多器官功能障碍。

本实施方式中的INR是指定义凝血异常的检查指标。INR是指将凝血致活酶制剂的制造批次间的差异标准化的凝血酶原时间(prothrombintime、下文中有时简称为PT)，INR如下定义。

INR值＝(被测样本的凝血时间(秒)/对照样本的凝血时间(秒))^(ISI值)

式中，被测样本的凝血时间(秒)表示测定对象的血浆被测样本的PT。

另外，ISI表示国际敏感指数。

如上所述，本实施方式中的重症败血症可以例示出伴随有代谢性酸中毒、急性脑病、少尿、低氧血症或弥散性血管内凝血等器官功能障碍或低血压的症状中的一种或两种以上的败血症。重症指的是攸关生命的严重的病态。特别是作为重症败血症，可以举出具有1种以上的器官功能障碍的败血症。对器官功能障碍没有特别限定，只要是由于败血症而产生功能障碍的器官的功能障碍即可，优选对生命维持所必须的器官的功能障碍。作为1种以上的器官功能障碍，可以举出选自由循环器官障碍、呼吸器官障碍、肾功能障碍和肝功能障碍组成的组中的1种以上的器官功能障碍，优选为选自由呼吸器官障碍、循环器官障碍和肾功能障碍组成的组中的1种以上的器官功能障碍，更优选为选自由呼吸器官障碍和循环器官障碍组成的组中的1种以上的器官功能障碍。器官功能障碍的数量为1种以上即可，没有特别限定，有时优选为两种以上。特别是，优选同时具有呼吸器官障碍和循环器官障碍这两种器官功能障碍。

作为循环器官障碍，只要是作为循环器官障碍所通常已知的则没有特别限定，可以举出例如血压降低或休克。

作为呼吸器官障碍，只要是作为呼吸器官障碍所通常已知的则没有特别限定，可以举出例如低氧血症、急性肺损伤或呼吸困难。

作为肾功能障碍，只要是作为肾功能障碍所通常已知的则没有特别限定，可以举出例如肾功能障碍、少尿或肾功能衰竭。

作为肝功能障碍，只要是作为肝功能障碍所通常已知的则没有特别限定，可以举出例如肝功能障碍、黄疸或肝功能衰竭等。

这些各器官功能障碍如申请前公知出版物“敗血症の解明と治療戦略(败血症的解明和治疗战略)”(舟田久2006医药杂志社,p38～)、或“SurvivingSepsisCampaign:internationalguidelinesformanagementofseveresepsisandsepticshock2008.”(CritCareMed.2008Jan；36(1):296-327)等中所记载那样，一般是已知的。

需要说明的是，作为重症败血症患者，假定了由药物性器官功能障碍等不限定于败血症的原因所表现出来的可能性，因而优选不包括仅具有肝脏或肾脏的器官功能障碍的患者。此外，作为器官功能障碍的结果，已知产生了血小板减少症(Thrombocytopenia)。只要给与本实施方式中的药物的患者中的血小板数小于30万/μL则没有特别限定，优选小于20万/μL、进而优选小于15万/μL。

作为本实施方式中的败血症患者的血浆样本的INR的值，只要大于1.4则没有特别限定，在INR大于1.4的情况下，血栓调节蛋白对具有1种以上的器官功能障碍的败血症患者更加有效。作为INR的上限，可以例示出2.0以下、优选为1.9以下、更优选为1.8以下、进一步优选为1.7以下、特别优选为1.6以下。有时也优选为1.5以下。另外，有时优选不包括INR＝1.7。

需要说明的是，“INR大于1.4”有时也记为“INR>1.4”。

本实施方式中，DIC是如下的疾病或综合征：由于各种疾病中的组织障碍而流出大量的血管凝固促进物质，凝血系统的功能极度亢进，在全身的血管中产生小的血栓(形成微小血栓)，堵塞小的血管；同时由此使控制出血所必需的血小板或凝血因子被消耗而变得不足，结果引起止血异常。具体地说，由于形成血管内纤维蛋白，发现由于消耗性凝血纤溶障碍引起出血症状或由于形成微血栓引起器官功能衰竭症状。DIC有时也被称为弥散性血管内凝血综合征或泛发性血管内凝血综合征。

DIC的临床症状根据基础病症的种类不同而不同，作为DIC的诊断方法，除了观察出血症状、脏器症状之外，优选通过如下所述的几个检查值对DIC进行评分，达到某一定以上的评分时诊断为DIC。作为检查值，可以举出例如，血中的血小板数、经纤溶酶分解的纤维蛋白以及纤维蛋白原分解产物(下文中有时简称为FDP)浓度、D-二聚物浓度、纤维蛋白原浓度或凝血酶原时间等。此外，也可以不对DIC评分，由血小板降低、D-二聚物或FDP浓度升高等来诊断preDIC(中川雅夫，《播種性血管内凝固(DIC)診断基準の利用に関する調査報告(有关利用弥散性血管内凝血(DIC)诊断标准的调查报告)》厚生省特定疾患血液凝固异常症调查研究班，平成11年度研究报告书，1999:65-72；出口克已《DIC早期治療開始基準に関する試案について(关于有关DIC早期治疗开始标准的试行方案)》厚生省特定疾患血液凝固异常症调查研究班，平成11年度研究报告书，1999:73-77；中川克、辻肇，《DIC診断の現状-アンケート調査結果報告(DIC诊断的现状-问卷调查结果报告)》临床血液，1999，40:362-364)。

此外，本实施方式中，可以将患者血浆样本的INR的值大于1.2、优选大于1.3、更优选大于1.4的败血症患者称为广义的DIC患者，本实施方式中的用于败血症的治疗和/或改善的药物有时可以作为用于DIC的治疗和/或改善的药物使用。

本实施方式中的药物有时也可以针对DIC使用。败血症也被定位为由感染性的危重的临床侵袭所引起的SIRS，与以感染症为成因疾病的DIC存在密切的关系。败血症中经常并发DIC，有时也可以对这种并发有DIC的败血症患者使用本实施方式中的药物。即，本实施方式中的药物有时可以对患有或怀疑患有DIC或败血症中的任意一种或两种的患者使用。

本实施方式中的INR例如可以如下测定。即，在添加柠檬酸钠所得到的血浆(被测样本)中添加组织凝血致活酶、Ca²⁺，测定至凝固(纤维蛋白析出)为止的时间(PT)，用其秒数进行判定，按照与对照样本的相对比(活性率)进行评价。活性率通过“被测样本的凝血时间(秒)/对照样本的凝血时间(秒)”求得，由于所使用的组织凝血致活酶的敏感度不同，通过检查实施装置而产生检查值的差别。INR值是为了消除这样的差别而想出的，通过用经国际敏感度指数(InternationalsensitivityIndex、下文中有时简称为ISI)修正的INR值来评价PT，可以消除装备间差别而得到标准的结果。ISI表示与国际标准试样有多大的差异。ISI根据各组织凝血致活酶试剂而决定，附于试剂中。作为凝血致活酶试剂，可以例示出ThromborelS(注册商标：Sysmex社制造)、ThromboplastinC+(注册商标：Sysmex社制造)等，但不限定于这些。ThromborelS(注册商标)中使用人胎盘凝血致活酶(ISI值接近1.0)，ThromboplastinC+(注册商标)中使用兔脑凝血致活酶(ISI值为约1.8)。

组织凝血致活酶试剂被赋予ISI，INR值通过上述式1的计算式求出。

作为对照样本，只要是市售的正常人混合血浆则没有特别限定，可以使用例如可由Kojin-BioCo.,Ltd.或InternationalBioscienceInc.购入的市售正常人混合柠檬酸钠血浆等。

关于败血症的治疗，一般基于公知文献(SurvivingSepsisCampaign:Internationalguidelinesformanagementofseveresepsisandsepticshock:CritCareMed.200836296-327.,CritCareMed.200332(3)1250-56)进行下述基础治疗，有时会合用血栓调节蛋白与其它药剂，但合用不限定于这些药剂。

对于败血症性休克的患者，在中心静脉压(CVP)上升至目标值后还持续低血压的情况下，为了使平均血压至少上升至60mmHg，有时会给与多巴胺。并且，在多巴胺用量超过20μg/kg/分钟的情况下，有时会施予其它血管收缩剂(通常为去甲肾上腺素)。

为了治疗败血症的病原菌，一般使用抗生物质。对于抗生物质的选择，需要基于可疑的原因、临床状况、微生物的知识和与其特定的住院楼共通的感受性的图谱相关的知识、以及事先的培养检查结果等的有根据的推测。

败血症患者中的血糖值的彻底正常化会改善危重状态的患者的临床结果。

在使用抗生物质时，可以调查血液、体液或创伤部等样本，选择对病原菌有效的药剂。例如，在原因不明的败血症休克等中，有时一并给与庆大霉素或妥布霉素与第三代头孢菌素。而且在怀疑为耐性葡萄球菌或肠球菌的情况下，追加万古霉素。

一般通过胰岛素的持续静脉注射来调节给药量，以将血糖值保持为80mg/dL～110mg/dL(4.4mmol/L～6.1mmol/L)。

皮质类固醇疗法对败血症的治疗显示出效果，因而有时以补充剂量给药。

在死亡风险高的患者(APACHEII评分≧25、败血症导致的多器官功能衰竭、败血症休克、败血症导致的ARDS)中，在无禁忌症(出血等)的情况下，有时给与重组型活化蛋白C(rhAPC；Drotrecoginα)。

虽然对象患者被限定，但是有时以Hb7.0g/dL～9.0g/dL为目标用浓集红细胞输血。

败血症患者因肾功能衰竭导致红细胞生成障碍时，有时给与红细胞生成素(Erythropoietin(EPO))。

在重症败血症中，有时利用低剂量肝素或低分子肝素给药来进行DVT的预防给药。

本发明的药物含有载体。作为本发明中能够使用的载体，优选水溶性的载体，通常优选作为医药物的添加剂可容许的等渗剂、缓冲剂、增稠剂、表面活性剂、保存剂、防腐剂、无痛剂、pH调节剂等。例如，可以加入蔗糖、甘油等及其它无机盐的pH调节剂等作为添加剂而进行制备。进而根据需要，可以如日本特开平1-6219号公报和日本特开平6-321805号公报中所公开的那样添加氨基酸、盐类、糖质、表面活性剂、白蛋白、明胶等。对它们的添加方法没有特别限定，可以举出下述方法：在冷冻干燥的情况下，如通常所进行的那样，例如将含有选自免疫抑制剂、造血系统恶性肿瘤治疗剂中的至少一种的溶液与含有血栓调节蛋白的溶液进行混合，之后添加混合添加物的方法；或者预先将添加物混合到选自溶解于水、注射用蒸馏水或适当缓冲液中的免疫抑制剂、造血系统恶性肿瘤治疗剂中的至少1种中，之后添加混合含有血栓调节蛋白的溶液，利用该方法制备溶液，进行冷冻干燥的方法。本发明的药物为将各药物成分组合而成的药物的情况下，各药物优选通过适宜的制造方法添加载体而进行制造。作为本发明的药物，可以以注射液的形态提供，或者也可以以在使用时溶解冷冻干燥制剂后使用的形态提供。

在制剂化工序中，可以向安瓿或小瓶(Vial)中填充例如0.5mL～10mL的含有0.1mg～10mg的血栓调节蛋白、注射用水、以及添加剂的溶液，以水溶液注射用制剂的形式进行制备。另外，还可以例示出进行冷冻、在减压下干燥而以冷冻干燥制剂的形式进行制备的方法。

本发明的药物优选通过非经口给药法、例如静脉内给药、肌肉内给药、皮下给药等来进行给药。另外，还可以进行经口给药、直肠内给药、鼻内给药、舌下给药等。本发明的药物为将各药物成分组合而成的药物时，各药物成分优选通过适宜的给药方法进行给药。

静脉内给药时，可以举出一次性给予所需的量的方法(静脉推注)或滴注静脉内给药。

从给药时间短的方面考虑，优选一次性给予所需的量的方法(静脉推注)。特别是败血症的患者大多情况急迫，有时优选在短时间内给药。一次性给药时，用注射器给药所需的时间通常有变化，给药所需的时间根据给药的液体量不同而不同，可以例示出5分钟以下、优选为3分钟以下、更优选为2分钟以下、进一步优选为1分钟以下、特别优选为30秒以下。此外，对下限不特别限定，优选为1秒以上、更优选为5秒以上、进一步优选为10秒以上。对给药量不特别限定，只要是上述优选的给药量即可。另外，从容易将血栓调节蛋白的血药浓度保持恒定的方面考虑，优选滴注静脉内给药。

本发明中的药物的1天的给药量根据患者的年龄、体重、疾病的程度、给药途径等不同而不同，通常以血栓调节蛋白的量计，上限优选为20mg/kg以下、更优选为10mg/kg以下、进一步优选为5mg/kg以下、特别优选为2mg/kg以下、最优选为1mg/kg以下，下限优选为0.001mg/kg以上、更优选为0.005mg/kg以上、进一步优选为0.01mg/kg以上、特别优选为0.02mg/kg以上、最优选为0.05mg/kg以上。

静脉推注时，只要是上述优选的给药量则不特别限定，作为每1天给药量的上限，优选为1mg/kg以下、更优选为0.5mg/kg以下、进一步优选为0.1mg/kg以下、特别优选为0.08mg/kg以下、最优选为0.06mg/kg以下，作为下限，优选为0.005mg/kg以上、更优选为0.01mg/kg以上、进一步优选为0.02mg/kg以上、特别优选为0.04mg/kg以上。

对体重超过100kg的患者给药时，血液量与体重不成比例，从相对于体重的血液量相对降低的观点出发，有时优选以6mg的固定用量进行给药。

滴注静脉内给药时，只要是上述优选的给药量则不特别限定，作为每1天给药量的上限，优选为1mg/kg以下、更优选为0.5mg/kg以下、进一步优选为0.1mg/kg以下、特别优选为0.08mg/kg以下、最优选为0.06mg/kg以下，作为下限，优选为0.005mg/kg以上、更优选为0.01mg/kg以上、进一步优选为0.02mg/kg以上、特别优选为0.04mg/kg以上。

每1天给药1次或根据需要给药几次。对于给药间隔，可以2天～14天给药1次、优选2天～7天给药1次、进一步优选3天～5天给药1次。

[序列表的说明]

序列号1：用于生产TME456的基因所编码的氨基酸序列

序列号2：编码序列号1的氨基酸序列的碱基序列

序列号3：用于生产TME456M的基因所编码的氨基酸序列

序列号4：编码序列号3的氨基酸序列的碱基序列

序列号5：用于生产TMD12的基因所编码的氨基酸序列

序列号6：编码序列号5的氨基酸序列的碱基序列

序列号7：用于生产TMD12M的基因所编码的氨基酸序列

序列号8：编码序列号7的氨基酸序列的碱基序列

序列号9：用于生产TMD123的基因所编码的氨基酸序列

序列号10：编码序列号9的氨基酸序列的碱基序列

序列号11：用于生产TMD123M的基因所编码的氨基酸序列

序列号12：编码序列号11的氨基酸序列的碱基序列

序列号13：进行定点突变时使用的变异用合成DNA

实施例

下面，举出实施例和试验例对本发明进行具体的说明，但是本发明不受这些例子的任何限定。

试验例中使用的本发明的血栓调节蛋白是根据上述山本等人的方法(日本特开昭64-6219号中记载的方法)制备的。下面示出其制造例。需要说明的是，本次的制造例中得到的血栓调节蛋白通过使用了大鼠和猴的单次和反复静脉内给药试验、小鼠生殖试验、局部刺激性试验、安全性药理试验、病毒灭活试验等确认了其安全性。

[制造例1]

<血栓调节蛋白的获得>

通过上述方法获得血栓调节蛋白，即，将编码序列号9的氨基酸序列的DNA(具体地说，是序列号10的碱基序列)转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中，用上述常规方法的纯化法从该转化细胞的培养液中获得以含50mmol/LNaCl的20mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.3)回收了活性级分的高纯度纯化品。进一步利用超滤进行浓缩，获得11.0mg/mL的血栓调节蛋白(本说明书中有时简称为TMD123)溶液。

<聚山梨酸酯溶液制备>

在玻璃烧杯中量取0.39g聚山梨酸酯80，加入注射用水30mL进行溶解。

<药液制备和填充>

在5L的不锈钢制容器中加入上述得到的TMD123溶液2239mL(以可溶性血栓调节蛋白的蛋白质量计相当于24.63g。其中过量加入5％)。进一步地，加入上述得到的聚山梨酸酯溶液，加入氯化钠27.9g。加入注射用水600mL并进行搅拌。添加1mol/L盐酸溶液，将pH调节为6.0。进一步加入注射用水至总量为3940g，均匀地混合搅拌。将该药液用孔径为0.22μm的过滤器(Millipore制造MCGL10S)过滤灭菌。将滤液分别以1.1g填充到安瓿中，得到TMD123制剂。

[制造例2]

将编码序列号11的氨基酸序列的DNA(具体地说，是序列号12的碱基序列)转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中，用上述常规方法的纯化法从该转化细胞的培养液中获得经纯化的血栓调节蛋白(本说明书中有时简称为TMD123M)溶液，通过与上述相同的方法获得TMD123M制剂。

[制造例3]

将编码序列号1的氨基酸序列的DNA(具体地说，是序列号2的碱基序列)转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中，用上述常规方法的纯化法从该转化细胞的培养液中获得经纯化的血栓调节蛋白(本说明书中有时简称为TME456)，通过与上述相同的方法获得TME456制剂。

[制造例4]

将编码序列号3的氨基酸序列的DNA(具体地说，是序列号4的碱基序列)转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中，用上述常规方法的纯化法从该转化细胞的培养液中获得经纯化的血栓调节蛋白(以下有时简称为TME456M)，通过与上述相同的方法获得TME456M制剂。

[制造例5]

将编码序列号5的氨基酸序列的DNA(具体地说，是序列号6的碱基序列)转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中，用上述常规方法的纯化法从该转化细胞的培养液中获得经纯化的血栓调节蛋白(本说明书中有时简称为TMD12)，通过与上述相同的方法获得TMD12制剂。

[制造例6]

将编码序列号7的氨基酸序列的DNA(具体地说，是序列号8的碱基序列)转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中，用上述常规方法的纯化法从该转化细胞的培养液中获得经纯化的血栓调节蛋白(以下有时简称为TMD12M)，通过与上述相同的方法获得TMD12M制剂。

[制造例7]安慰剂制剂的制备

<聚山梨酸酯溶液制备>

在玻璃烧杯中量取0.4g聚山梨酸酯80，加入注射用水30mL进行溶解。

<药液制备和填充>

在5L的不锈钢制容器中加入注射用水2000mL。进一步地，加入上述得到的聚山梨酸酯溶液。进一步加入注射用水至总量为4000g，均匀地混合搅拌。将该药液用孔径为0.22μm的过滤器(Millipore制造MCGL10S)过滤灭菌。将滤液分别以1.1g填充到安瓿中，得到安慰剂制剂。

[实施例1]

<试验方法>

将根据制造例1制造的TMD-123用作血栓调节蛋白，以败血症以及患DIC的患者为对象进行随机双盲安慰剂(Placebo)对象的试验。对象患者数的总数为750例，其中，给与了试验药的患者为741例(TMD-123给药组370例、安慰剂给药组371例)，由此实施试验。TMD-123以0.06mg/kg的用量1天1次进行6天连续静脉推注。作为安慰剂，使用根据制造例7所制备的安慰剂。

需要说明的是，对于体重超过100kg的患者，为了抑制过量给药所导致的副作用表现，一律以6mg的固定用量1天1次进行6天连续静脉推注。

试验药给药前的患者的血浆中INR值根据上述式1中记载的方法进行测定。

另外，从对象患者中除去仅具有肝脏或肾脏的器官功能障碍的患者。这是因为，在仅具有肝脏或肾脏的器官功能障碍的患者中，假定了由药物性器官功能障碍等不限定于败血症的原因而表现出器官功能障碍的可能性。

确认了给药开始后第28天的转换期(転帰)，计算出各患者组的死亡率(Mortality)。

此外，以差值(Difference)的方式计算出TMD-123与安慰剂间的死亡率差。

<试验结果>

在不具有器官功能障碍的败血症患者中，在试验药给药前的血浆中INR值为INR>1.5的患者中，给与TMD-123时的死亡率与给与安慰剂时的死亡率之差(死亡率差：Difference)最大(6.1％)，在INR>1.6的患者中死亡率差其次(4.5％)。在INR>1.4的患者中死亡率差为1.7％左右，并未绝对地或相对地显示出那么高的死亡率差(表1)。

即，由表1可知，INR下限值的极大处于1.5～1.6之间，INR的下限值为1.5～1.6之外时，死亡率差极端降低。

与之相对，在具有1种以上选自由循环器官障碍、呼吸器官障碍、肾功能障碍和肝功能障碍组成的组中的器官功能障碍的重症败血症患者中，在INR>1.4(而不是INR>1.5)的患者中死亡率差最大(9.7％)，与其它INR下限值相比绝对地或相对地显示出高死亡率差(表2)。此外，从整体上来看，在具有1种以上选自由循环器官障碍、呼吸器官障碍、肾功能障碍和肝功能障碍组成的组中的器官功能障碍的重症败血症患者中，与不具有器官功能障碍的败血症患者相比，TMD-123与安慰剂间的死亡率差大。(前者：5.4％、后者：-1.1％)

此外，在具有1种以上选自由循环器官障碍、呼吸器官障碍、肾功能障碍和肝功能障碍组成的组中的器官功能障碍的重症败血症患者中，在1.4<INR≦1.6的患者中死亡率差为16.0％，绝对地显示出显著的值(表3)。由表3可知，对于其它所有的INR上限值，死亡率差均为10～12％之间，相对地显示出突出的高死亡率差。

另一方面，在不具有器官功能障碍的患者中，仅仅在某部分观察到相对突出的倾向，所得到的死亡率差也最多为7.1％(1.4<INR≦1.7的患者组)(表4)。

【表1】

【表2】

【表3】

【表4】

工业实用性

本发明的含有血栓调节蛋白的药物作为能够有效地治疗和/或改善重症败血症患者(患者的血浆样本的INR为大于1.4的值)的败血症的药物有用。

Claims

1.血栓调节蛋白在制备用于败血症的治疗和/或改善的药物中的应用，该药物含有血栓调节蛋白作为有效成分，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的国际标准化比值INR的值为大于1.4的值。

2.如权利要求1所述的应用，其中，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的国际标准化比值INR的值为大于1.4且小于等于1.6的值。

3.如权利要求1或2所述的应用，其中，重症败血症患者为不包括仅具有肝脏或肾脏的器官功能障碍的败血症患者的重症败血症患者。

4.如权利要求1所述的应用，其中，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有选自由肝脏、肾脏、呼吸器官和循环器官组成的组中的1种以上的器官功能障碍。

5.如权利要求1或4所述的应用，其中，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有选自由呼吸器官和循环器官组成的组中的1种以上的器官功能障碍。

6.如权利要求1或4所述的应用，其中，该血栓调节蛋白为可溶性血栓调节蛋白。

7.如权利要求1或4所述的应用，其中，该血栓调节蛋白为由转化细胞获得的肽，该转化细胞是通过将编码序列号9或序列号11中记载的氨基酸序列的DNA转染到宿主细胞中而制备的。

8.如权利要求1或4所述的应用，其中，该血栓调节蛋白为下述(i-1)的氨基酸序列的肽，该肽为具有血栓调节蛋白活性的肽，

(i-1)序列号9或序列号11的任一者中记载的氨基酸序列中的第19～516位的氨基酸序列。

9.如权利要求1或4所述的应用，其中，该血栓调节蛋白以0.005mg/kg～1mg/kg的给药量在5分钟以内静脉推注。

10.如权利要求1或4所述的应用，其中，败血症是伴随凝血障碍的重症败血症。

11.如权利要求4所述的应用，其中，该循环器官的功能障碍是休克。

12.如权利要求1或4所述的应用，其中，该器官功能障碍由败血症引起。

13.如权利要求1或4所述的应用，其中，该药物用于施用于重症败血症患者，其中，不包括国际标准化比值INR的值为1.7的患者。

14.如权利要求1或4所述的应用，其中，该血栓调节蛋白用于向患者静脉内给药。

15.血栓调节蛋白在制备用于减少败血症患者的死亡率的药物中的应用，该药物含有血栓调节蛋白作为有效成分，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的国际标准化比值INR的值为大于1.4的值。

16.如权利要求15所述的应用，其中，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有1种以上的器官功能障碍，患者的血浆样本的国际标准化比值INR的值为大于1.4且小于等于1.6的值。

17.如权利要求15或16所述的应用，其中，重症败血症患者为不包括仅具有肝脏或肾脏的器官功能障碍的败血症患者的重症败血症患者。

18.如权利要求15所述的应用，其中，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有选自由肝脏、肾脏、呼吸器官和循环器官组成的组中的1种以上的器官功能障碍。

19.如权利要求15或18所述的应用，其中，该药物用于施用于重症败血症患者，该重症败血症患者具有选自由呼吸器官和循环器官组成的组中的1种以上的器官功能障碍。

20.如权利要求15或18所述的应用，其中，该血栓调节蛋白为可溶性血栓调节蛋白。

21.如权利要求15或18所述的应用，其中，该血栓调节蛋白为由转化细胞获得的肽，该转化细胞是通过将编码序列号9或序列号11中记载的氨基酸序列的DNA转染到宿主细胞中而制备的。

22.如权利要求15或18所述的应用，其中，该血栓调节蛋白为下述(i-1)的氨基酸序列的肽，该肽为具有血栓调节蛋白活性的肽，

23.如权利要求15或18所述的应用，其中，该血栓调节蛋白以0.005mg/kg～1mg/kg的给药量在5分钟以内静脉推注。

24.如权利要求15或18所述的应用，其中，败血症是伴随凝血障碍的重症败血症。

25.如权利要求18所述的应用，其中，该循环器官功能障碍是休克。

26.如权利要求15或18所述的应用，其中，该器官功能障碍由败血症引起。

27.如权利要求15或18所述的应用，其中，该药物用于施用于重症败血症患者，其中，不包括国际标准化比值INR的值为1.7的患者。

28.如权利要求15或18所述的应用，其中，该血栓调节蛋白用于向患者静脉内给药。